PH0331 SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用手册

SDS-PAGE操作方法SDS-PAGE教程1 SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS （十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4 g去污剂结合。

当分子量在15 KDa 到200 KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K –bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

SDS-PAGE [Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。

如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature 上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。

现在我们在实验室进行的SDS-PAGE 试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。

你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide各种组分名称体积(mL)或质量(g) 备注30%Acr-Bis(29:1) 100 mL 实验室配制时用量(100 mL)29% Acrylamide(丙烯酰胺) 29 g 29.2 g1% BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 1 g 0.8 g将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml 温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。

各项检验操作注意事项一.SDS-PAGE操作及注意事项1.制胶按如下配方制备分离胶和浓缩胶4%浓缩胶（3ml）10%分离胶（4ml）AB-3 0.25mLAB-6 0.8mL3×gel buffer 0.75mL 1.335mL50%甘油(v/v) 0.64mLH2O 2mL 1.235mL10%APS(w/v) 22.5uL 20uLTEMED 2.25Ul 2uL注意事项：（1）配制前先将两块玻璃板夹紧，可以先试漏。

首先配置分离胶，用水封，静置40min 后，将水吸干，再注入浓缩胶，插上梳子，注意要避免梳孔出现气泡。

（2）在加入APS（10%过硫酸铵）和TENED后要尽快将胶注入，防止其凝固后无法注入玻璃板内。

2. 电泳注意事项：（1）制样：取40uL待测样，加入10uL5×SDS PEGE loading buffer，混匀后煮沸10min （电磁炉1000W），制好的样放至室温后，放4℃保存，待电泳。

（2）电泳：在电泳槽底部加入阳极缓冲液，将制好的胶连同装置放入电泳槽中，在两块胶之间注入阴极缓冲液。

取2uL Marker注入胶孔中作为参照，再一次取5uL样品缓慢注入胶孔中，调整电压800-100V。

待溴酚蓝从浓缩胶进入分离胶后，电压加至120-155V。

继续电泳直到溴酚蓝抵达分离胶底部，断开电源。

小心撬开玻璃板，除去浓缩胶，取出分离胶，加入R250考马斯亮蓝染色40min，再用脱色液脱色。

3. 溶液的配制：（1）正极缓冲液Anode buffer(1×)：12.114gTris加少量ddH2O溶解后，用HCL调PH至8.9，最后用容量瓶定容至500mL，4℃保存。

（2）负极缓冲液Cathode buffer (1×)：6.057gTris+8.96gTricine+0.5SDS加入少量ddH2O 溶解后，定容至500mL，4℃保存。

（3）凝胶缓冲液Gel buffer (3×)：36.342gTris+0.3gSDS加ddH2O定容至100mL，HCL调PH=8.45，过滤4℃保存。

Tricine-SDS-PAGE具体步骤有篇Nature的protocal，我们试验室的Tricine-SDS-PAGE就是参照其做的。

Tricine sds page.pdf (209.29k)Tricine-sds-page一.试剂及缓冲液AB-3 浓缩胶: 9.6g丙烯酰胺0.3g甲叉双丙烯酰胺溶于20ml 水.(49.5%T,3%Cmixture)AB-6 分离胶: 9.3g丙烯酰胺0.6g甲叉双丙烯酰胺溶于20ml水.(49.5%T,6%Cmixture)凝胶缓冲液: 1X 2.422gTris 0.02gSDS溶于20ml水,HCL调节pH=8.45.样品缓冲液:1X 12%SDS,6%mercaptoethanol,30%glycerol,0.05%coomassie blue G-250,150mMTris\HCL(pH=7.0)阴极缓冲液: 1X 1.0MTris 1.0MTricine 1%SDS pH约8.25,基本不用调.阳极缓冲液: 1X 1.0MTris 0.225MHCL pH=8.9, HCL调节.固定液: 250ml甲醇,50ml冰醋酸, 0.05mol醋酸铵加水定容500ml.( 0.7mm,30min)染色液: 0.025%考马斯亮蓝G-250 10%冰醋酸. ( 0.7mm,60min) 脱色液: 10%冰醋酸. ( 0.7mm,2h或者过夜)二.配胶: 0.07×14×14cm 两块胶的用量.(一) Separating gel 16%gel1. AB-6: 5ml2.凝胶缓冲液: 5ml3.Glycerol: 1.5g4.上述加水至15ml5.10%APS 50ul6.TEMED 5ul(二)Spacer gel 10%gel1. AB-3: 600ul2.凝胶缓冲液:1ml3.Glycerol: 0.3g4.上述加水至3ml5.10%APS 15ul6.TEMED 1.5ul(三)Stacking gel 4%gel1. AB-3: 500 ul2.凝胶缓冲液: 1.5ml3.上述加水至6ml4.10%APS 45ul5.TEMED 4.5ul三.注意:1.电压:进入分离胶之前30V,之后100 V,在跑至分离胶底部之前可以调至200V.注意温度不能超过35~40℃.2.本实验适合小蛋白、多肽的分离.1~100kD.3. Spacer gel 10%gel的用途是为了使1~5 kD的小分子得到更好的分离.是否配制,按照自己需要.4. 这是我做了半年摸索出的条件.效果非常好.用它已经很好地分离出我的目标宝贝.和大家一起分享.以下是详细说明书：Tricine/Polyacrylamide Gel ElectrophoresisUsed for pilin processing analysis but generally useful for resolution of small (15-35 Kdal) proteins of similar size.SeeStrom, M. S., D. N. Nunn, and S. Lory. 1993. A single bifunctional enzyme, PilD, catalyzes cleavage and N-methylation of proteins belonging to the type IV pilin family. Proc. Natl. Acad.Sci., 90:2404-2408.orStrom, M. S., and S. Lory. 1992. Kinetics and sequence specificity of processing of prepilin by PilD, the Type IV leader peptidase of Pseudomonas aeruginosa. J. Bacteriol. 174:7345-7351.Original citation: Schagger, H. and G. von Jagow. 1987. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166: 368-379.Reagents:Anode Buffer ( ): 200 mM Tris pH 8.9 (can dilute from 10X stock)Cathode Buffer (-): 100 mM Tris/100 mM Tricine/0.1% SDS (no need to pH, but will be ~8.25) these can be made as 10X stocks and diluted before useGel Buffer: 3.0 M Tris, pH 8.45/0.3% SDSNote: the pH's given for the anode and gel buffers are essentialStacking acrylamide: 48% acrylamide/1.5% bis-acrylamide Separating acrylamide: 46.5% acrylamide/1.5% bis-acrylamideSample buffer: (add equal volume to sample), for 20 ml:5 ml 0.5 M Tris, pH 6.84 ml 20% SDS1 ml 2-mercaptoethanol4 ml 50% glycerol0.004 g bromophenol blue6 ml waterFor each minigel (Hoeffer "Mighty Small" or BioRad "MiniProtean-II"--scale up as required):1. Separating gel:15% gel2 ml separating acrylamide2 ml gel buffer2 ml 50% glycerol10% gel1.22 ml separating acrylamide2 ml gel buffer2 ml 50% glycerol0.78 ml waterpolymerize with 75 ul 10% APS and 7.5 ul TEMED2. Stacking gel:0.25 ml stacking acrylamide0.75 ml gel buffer2.0 ml water20 ul 10% APS2 ul TEMEDPolymerize both the stacking and separating gels at the same time (I used small disposable tubes), and pour stacking gel directly onto the separating gel (pour carefully but quickly--they won't mix but the separating gel polymerizes within 2-3 minutes). Make each separating gel mixture separately and add TEMED and APS right before pouring. Multiple stacking gel mixtures can be made in the same tube, but you have around 10 minutes before these start to polymerize too.Sample loading and electrophoresis:For the minigels, 5-10 ul per well gives best results. Layer the samples in the well very carefully, and be sure to flush out any unpolymerized acrylamide before loading.Electrophorese at 25-35 mA (constant current) per gel in minigel setup. Foam will appear on the top (cathode), and additional cathode buffer may have to be added during the run.好东西我的Tricine-SDS-PAGE电泳图，在大分子处有条带，在小分子处无条带，是什么原因1、可能分离胶浓度太小，把胶的浓度加大，跑的时候电压小点2、小分子蛋白含量少，可以加大蛋白上样量谢谢luhao82 ，我再按你的建议试试，但是我都是按你的步骤做的啊。

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书产品货号：SK6010储存条件：Acr-Bis溶液2-8℃储存，其它常温储存。

有效期2年。

产品组成：Components SK6010-50SK6010-250保存条件30%Acr-Bis(29:1)100ml500ml2-8℃分离胶缓冲液100ml500ml RT浓缩胶缓冲液50ml250ml RTAPS（过硫酸铵）5×0.1g5×0.5g RT TEMED1ml5ml RT/避光说明书1份注意：过硫酸铵（APS）为固体粉末，使用前配制成10%APS溶液（0.1g APS加1ml双蒸水；0.5g APS 加5ml双蒸水）。

APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存两周，-20℃能保存半年。

产品简介：本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全部试剂，只需自备蒸馏水，即可制备各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷、安全、实惠。

本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS，使用时无需另外加入，分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置2-8℃可能出现絮状，为SDS析出，常温下放置一会溶液恢复澄清，可继续使用。

因为制备凝胶浓度不同，本品只给出大概制胶数量。

操作步骤：根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

一、灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表3）1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。

3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使凝胶表面保持平整。

SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 (SDS-PAGE Gel kit) B1027描述：本产品提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制高质量的各种浓度的变性PAGE胶，方便，快捷。

本试剂盒至少可以配制30块常规大小的PAGE 胶，并且其中的分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS，使用时无需另外加入。

产品名称包装保存条件30%Acr-Bis（29:1）100 ml 2-8℃避光分离胶缓冲液80 ml 室温浓缩胶缓冲液25 ml 室温APS（过硫酸铵）0.5 g 室温TEMED1 ml 室温、避光*试剂盒中提供的APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS（0.5 g APS加入5 ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。

操作步骤：根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围参考附表1。

1．灌制分离胶（试剂使用量参考附表2）（1）参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

（2）将不同体积的30%Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。

（3）加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。

（4）将分离胶溶液灌入凝胶玻璃槽中，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，用于压平液面。

（5）静置30-60min，至分离胶凝固。

2．灌制浓缩胶（试剂使用量参考附表3）（1）去除覆盖在分离胶上的水层，并用滤纸吸干，水份吸不干，可能会导致浓缩胶和分离胶分开。

（2）将不同体积的30%Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯中混合。

（3）加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。

（4）将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，插入样品梳，避免产生气泡，静置20-30min，直至浓缩胶聚合。

（5）待凝胶聚合后，小心拔下梳子，以免破坏加样孔。

产品货号：S6171S, S6171产品规格：10 gels, 125 gels储存条件：A-D组分4℃保存，E组分-20℃保存，有效期见外包装。

产品组分产品介绍PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）采用预混液形式的配方，制胶时只需加入改良型促凝剂即可，方便快捷。

上层胶为彩色（紫色）凝胶，便于点样。

本产品制备的凝胶也可用于非变性PAGE胶电泳实验。

本试剂盒配备改良型促凝剂，无TEMED刺激性气味，稳定性好、催化效果佳，制备一块或多块凝胶仅需二十分钟左右。

为方便取用，已开盖的改良型促凝剂可置于4℃保存至少3个月。

制胶数量（125 gels）：125块（0.75 mm）；＞90块（1.00 mm）；＞60块（1.50 mm）实验步骤1. 根据需要制备的凝胶厚度，取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，混匀；加入相应体积的改良型促凝剂，混匀。

2. 立即将配制好的下层胶注入玻璃板内，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可，加入适量水或无水乙醇液封，待下层胶凝固，约10-15 min（当液封溶液和胶之间可见明显分界线时，说明胶已凝固），倒去上层溶液。

注：1）溶液配制体积是过量的，可留少许于管中，便于观察凝胶状态；2）室温较低时，凝固速度较慢，需适当延长凝胶时间。

3. 根据需要制备的凝胶厚度，取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，混匀；加入相应体积的改良型促凝剂，混匀。

4. 立即将配制好的上层胶注入玻璃板中，插入梳子，待上层胶凝固（5-10 min）拔出梳子。

凝胶配制如下：注：1）尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液；2）推荐电泳条件：150V，约50 min 或200 V，约35 min。

注意事项1. 本产品制备的上层凝胶对样品没有浓缩效应，类似于预制胶，与传统PAGE胶相比，蛋白条带分离效果更好，小分子蛋白（比如10 kDa）也可以清晰地分离开，且蛋白条带更窄更锐利。

2. 改良型促凝剂的用量可根据个人习惯和经验调整，加入较多的促凝剂可以加速凝胶，反之亦然。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)实验原理和操作步骤实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。

该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中.SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比.在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。

蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。

试剂和器材：试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml):0。

6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10％的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1％溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。

可在4℃保存数周,或在－20℃保存数月。

2。

凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0。

8g，加重蒸水溶解后,定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月.3。

pH8。

9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8。

9，定容至100ml，4℃保存。

4。

pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解，调pH6。

7，定容至100ml，4℃保存.5。

TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8。

3后，用蒸馏水定容至1000ml。

置4℃保存，临用前稀释10倍。

8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7。

5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml,搅拌1小时,小孔滤纸过滤。

器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。

实验操作（一）样品制备将蛋白质样品与5X样品缓冲液（20ul＋5ul)在一个Eppendorf 管中混合。

凯基SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒(TEMED替代物)
说明书修订日期：2020.11.23 Cat Number：KGP113
Store at 4℃for 12 months，避光
For Research Use Only(科研专用)
一、试剂盒说明
凯基SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE凝胶。

本试剂盒约可配制50块常规大小的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

三、操作步骤
1．根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
2. 按照如下表格配制SDS-PAGE 的分离胶：
3. 按照如下表格配制SDS-PAGE 的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)
1. 过硫酸铵配制成10%溶液后，应尽快用完并-20℃保存，若4℃放置则不要超过一个星期。

尽量现配现用。

2. TEMED替代物使用后请盖紧瓶盖，并保证避光保存。

另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可
通过适当调节TEMED替代物的用量（加倍使用可以节省1/3左右的时间，建议凝胶时间保证在30min以上，有助于SDS-PAGE检测的效果），控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

3. 温度较低时，下层胶缓冲液(4X)和上层胶缓冲液(4X)中的SDS 可能析出。

需水浴温育，并在完全溶解和混匀后使用。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书Cat.No：Lot No：原理：本技术中，待分离的样品在有SDS-PAGE和还原剂的存在下通过加热而变性并被去污剂所包被。

SDS可使蛋白质带上大量的负电荷，其带电荷的多少正好与多肽的长度成正比。

聚丙烯酰胺凝胶上样后，在高电压的作用下，蛋白组分向正极（阳极）迁移。

由于所有的蛋白所带的负电荷与其分子大小成正比，因而蛋白就仅仅根据其分子量的大小不同而被分离—凝胶的分子筛效应。

蛋白质的分子量就可以通过与标准蛋白的凝胶迁移率进行比对而得到。

凝胶电泳后，特定的凝胶条带可以通过染色而观察到，并且可通过被动扩散或电洗脱从凝胶上进行回收。

两种最常用的染色方法是考马斯亮蓝法和银染法，这两种方法的蛋白条带检测灵敏度可分别达到50ng和5ng。

由于考马斯亮蓝法使用简便，并可以对收集的蛋白带作进一步分析，因而较为常用。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳应用范围：1）蛋白质纯度的分析；2）蛋白质分子量的测定；3）蛋白质浓度的测定；4）蛋白质水解的分析；5）免疫沉淀蛋白的鉴定；6）免疫印迹的第一步；7）蛋白质修饰的鉴定；8）分离和浓缩用于产生抗体的抗体的抗原；9）分离放射性标记的蛋白质。

试剂盒组成：1．30%预制聚丙烯酰胺胶（4℃保存）200ml2．1.5M TrisCl（PH=8.8）200ml3．1.0M TrisCl（PH=6.8）50ml4．10%SDS 30ml5．10%过硫酸铵（4℃保存）30ml6．去离子水250ml7．TEMED（4℃闭光保存！）1ml8．5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液250 ml9．考马斯亮蓝染色剂50ml10. 考马斯亮蓝脱色剂250ml5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液用时以去离子水1：4稀释，配成1×-甘氨酸电泳缓冲液工作液。

凝胶的配制：（1）将玻璃板安装固定好切误把玻璃弄坏（2）进行分离胶的配制（3）加入TEMED后立即混匀内容物倒入到固定好的玻璃板中，同时留出灌注浓缩胶所需空间（梳子的齿长再加0.5cm）再在胶液面上小心注入一层水（约2—3mm高）以排除气泡和阻止氧气进入凝胶溶液。

Tricine-sds-page一.试剂及缓冲液AB-3 浓缩胶: 9.6g丙烯酰胺0.3g甲叉双丙烯酰胺溶于20ml水.(49.5%T,3%Cmixture) T代表丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的总质量浓度百分比；C代表交联度百分比。

AB-6 浓缩胶: 9.3g丙烯酰胺0.6g甲叉双丙烯酰胺溶于20ml水. (49.5%T,6%Cmixture)凝胶缓冲液（1X ）：2.422gTris 0.02gSDS溶于20ml水,HCL调节pH=8.45.样品缓冲液（4X ）：12%SDS,6%mercaptoethanol(v/v),30%glycerol(wt/v),0.05%coomassie blue G-250,150mMTris\HCL(pH=7.0)阴极缓冲液(1X，内槽缓冲液): 0.1MTris,0.1MTricine, 0.1%SDS ,pH约8.25,基本不用调.阳极缓冲液(1X，外槽缓冲液): 0.1MTris, 0.0225MHCL, pH=8.9, HCL调节.固定液: 250ml甲醇,50ml冰醋酸, 0.05mol醋酸铵加水定容500ml.( 0.7mm,30min) 即50%甲醇，10%冰醋酸，100mM醋酸铵。

染色液: 0.025%考马斯亮蓝G-250，10%冰醋酸. ( 0.7mm,60min)脱色液: 10%冰醋酸. ( 0.7mm,2h或者过夜)二.配胶: 0.07×14×14cm 两块胶的用量.(一) Separating gel 16%gel1. AB-6: 5ml2.凝胶缓冲液: 5ml3.Glycerol: 1.5g4.上述加水至15ml5.10%APS 50ul6.TEMED 5ul(二)Spacer gel 10%gel1. AB-3: 600ul2.凝胶缓冲液:1ml3.Glycerol: 0.3g4.上述加水至3ml5.10%APS 15ul6.TEMED 1.5ul(三)Stacking gel 4%gel1. AB-3: 500 ul2.凝胶缓冲液: 1.5ml3.上述加水至6ml4.10%APS 45ul5.TEMED 4.5ul三.注意:1.电压:进入分离胶之前30V,之后100 V,在跑至分离胶底部之前可以调至200V.注意温度不能超过35~40℃.2.本实验适合小蛋白、多肽的分离.1~100kD.3. Spacer gel 10%gel的用途是为了使1~5 kD的小分子得到更好的分离.是否配制,按照自己需要.操作步骤：1 样品准备2 将样品与上样buffer混合，37度孵育15min3 上样4 开始电泳，起始电压30V，待进入分离胶后调至100V5 固定液孵育：孵育时间为0.7mm10%的胶15min，0.7mm16%30min，1.6mm16%60min。