肺癌患者p16基因检测的研究进展

探讨MCM5、p16蛋白在肺腺癌组织中表达的改变及其在癌发生发展中的作用摘要：目的：检测微小染色体维持蛋白5（mcm5）、p16蛋白在肺腺癌组织中表达的改变及其在癌发生发展中的作用。

方法：采用免疫组织化学sp法检测60例肺腺癌、30例支肺脓肿等非癌病变旁正常肺组织中mcm5、p16蛋白的表达情况。

结果：60例肺腺癌组织中mcm5蛋白的阳性表达率为100%，与正常对照组的表达差异有高度显著性（p0.05）。

mcm5与p16蛋白的表达与肺腺癌的年龄、肿瘤大小、组织学类型及tnm分期无关（p>0.05）。

mcm5蛋白的阳性表达与p16的表达呈负相关（r=-0.4920，p70%为（+++）。

1.4 统计学方法。

应用spss10.0统计学软件对所得数据行x2检验、秩和检验和spearman等级相关分析。

2 结果2.1 mcm5、p16蛋白在肺组织中的表达情况。

mcm5蛋白在肺腺癌组织中阳性表达呈棕黄色且定位于细胞核，灶状或弥漫性分布；而正常肺组织中仅在各级支气管上皮偶见个别或小灶状细胞核阳性表达，但阳性数0.05）。

mcm5和p16蛋白的表达均与肺腺癌的性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、tnm分期无关（p>0.05）。

2.3 肺腺癌mcm5与p16表达的相互关系。

在p16（-）标本中mcm5（+）者共17例，p16（+）而mcm5（+）者43例。

经统计学处理，mcm5蛋白的阳性表达与p16的表达呈负相关（r=-0.4920，p3 讨论细胞周期调控异常是肿瘤发生的内在原因，在细胞周期中，g1/s的调控点是细胞内外信号经过传递、整合到细胞核，对细胞的增殖进行调控的关键点，它的异常与肿瘤的发生、发展关系密切[3]。

细胞增殖调控异常与肿瘤的发生关系密切，而肿瘤细胞增殖活性与肿瘤生物学行为更是密切相关，是用于反映肿瘤良恶性及恶性程度的重要指征。

mcm蛋白与细胞周期密切相关，是启动真核细胞dna 复制、调控细胞由g1期进入s期的关键蛋白，其本质是一种核蛋白复合物，目前发现mcm2～7等6种，它们是一组在序列上高度同源、功能上密切相关的蛋白，在静止/分化细胞中mcm蛋白不表达，而在增殖/肿瘤细胞中高表达，是近年来发现的一种较好地反映细胞增殖活性的新指标。

肺癌KRAS突变基因检测手段及其重要性肺癌在我国的发病率和死亡率均呈不断上升趋势的恶性肿瘤之一，大约有15%的患者在首次就诊时伴有恶性胸腔积液即胸水，一些肺部良性疾病如肺结核、肺炎等也可伴有胸水，所以区分胸水的性质具有十分重要的意义。

胸水癌细胞学检查是临床上鉴别良恶性胸水最可靠的方法，具有很高的特异性，但阳性率较低，所以临床上良恶性胸水的鉴别诊断仍存在一些困难。

近年研究表明p16基因和KRAS基因突变均与肺癌有关。

Ras基因是常见的癌基因，包括三种：KRAS，HRAS和NRAS，大约30%的人类肿瘤细胞中出现RAS基因突变，其中KRAS基因对人类癌症影响最大。

KRAS基因与一些肿瘤的发病机理和预后相关，主要以结直肠癌、肺癌和胰腺癌的突变率比较高。

KRAS基因突变发生在肿瘤恶变的早期，并且原发灶和转移灶的KRAS基因高度保持一致。

其中与肺癌关系最为密切的是KRAS。

KRAS基因位于12号染色体上，其主要功能是编码P21蛋白，P21蛋白与GTP结合时细胞内信号转导系统开放，P21蛋白具有GTP酶活性，可水解GTP为GDP，P21转而与GDP结合而失活，细胞内信号转导系统关闭。

当ras基因突变后，GTP酶减弱，水解GTP为GDP的作用受抑制，P21持续与GTP结合，细胞内信号转导系统持续开放，细胞无休止地分裂和增殖，导致细胞转化和恶变。

KRAS基因突变的热点位于第1外显子的12、13位密码子和第二外显子的61位密码子，其中以12位密码子突变率最高。

目前全球唯一在研的直接抑制RAS基因的小分子靶向药物安卓健已进入FDA二期临床试验。

探讨p16和KRAS基因在良恶性胸水细胞中的突变情况及对肺癌的诊断作用。

方法：研究组为54例伴有恶性胸水的肺癌患者，对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他炎性胸膜炎患者。

常规抽取胸水，提取胸水细胞DNA，采用PCR-SSCP方法，分别对p16基因和KRAS基因第1、2外显子进行突变分析。

老年肺癌诊断水平研究进展摘要】在流行病学中老年人肺癌是指在年龄65岁以上的人群中发生的肺癌，在肿瘤学中通常是指70岁以上的老年人发生的肺癌。

其发病率和死亡率较青年人群高，由于老年人生理的特殊性，肺癌的症状表现不明显，误诊和漏诊的情况也时有发生，延误了患者最佳的治疗时机。

本文对肺癌的常用诊断方法进行总结分析，以期找到最适宜的检查手段以减少老年人肺癌误诊漏诊的发生。

【关键词】老年肺癌诊断方法【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）02-0158-03随着社会人口老年化，老年肺癌的发病率逐年增加。

75.0%的老年肺癌患者吸烟指数＞400，吸烟时间越长肺癌发病率和死亡率越高。

老年肺癌中晚期肺癌患者约占80.0%，其中多数伴有免疫功能缺陷。

有文献报道, 患者从首次出现症状到就诊的平均时间为26.4 d, 而就诊到明确诊断的时间平均达71. 8 d, 这是指所有肺癌而言[1]。

老年肺癌患者，由于这一人群的年龄较大，具有特殊的生理，如临床表现不典型，多种疾病同时并存，容易发生并发症，病程进展快，药物不良反应多，不良生活习惯影响病情，病史采集困难而且参考价值较小，病程长恢复慢。

肺癌的发病率与年龄呈正相关，受到年龄的影响使疾病在早期不能轻易发现而被忽视，错过最佳治疗时机，对老年人的生存质量产生很大影响。

一、老年肺癌误诊漏诊的数据资料根据从CNKI数据库里搜集1991年至2009年的与老年肺癌误诊漏诊相关的文献，包括短篇报道、病例分析和误诊分析等类型的文献共152篇，见表1：表1经统计，在剩余的118篇文献中有报道的老年肺癌误诊病例有5051例，其中肺癌与肺结核并存而导致肺癌误诊漏诊的病例有879例，2004年至2009年的文献中报道的误诊病例就有1167例。

见表2：表2此外，文献中对于误诊时间的记录也缺乏规范，51篇文献缺少误诊时间的记载，其余文献中显示误诊时间几日至几年不等，最长时间可达3年以上。

P16基因甲基化检测在肺癌早期诊断中的应用研究发表时间：2014-05-22T15:57:09.750Z 来源：《中外健康文摘》2013年第46期供稿作者：张继华李晓张毅蔡远玲高明周云春[导读] 随着分子技术的发展，利用外周血血清、痰、支气管肺泡灌洗液、组织等标本检测肺癌的早期分子事件已经成为研究热点[14]。

张继华李晓张毅蔡远玲高明周云春 (云南省玉溪市人民医院 653100)【摘要】目的采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测NSCLC患者p16基因的甲基化状态，探讨p16基因甲基化与肺癌发病的关系以及其对肺癌的早期诊断价值。

方法实验分两阶段进行。

结果 A组患者四种标本中P16基因甲基化率分别为50%，46.43%，51.79%，53.57%；B组2例COPD合并吸烟患者支气管肺泡灌洗液，1例痰标本中检测到P16基因甲基化；C组健康对照者标本中均未检测到P16基因甲基化。

D组患者四种标本中P16基因甲基化率分别为48.27%， 50.00%，56.89%(33/58) ，58.60%。

结论肺癌患者四种标本中P16基因甲基化率明显高于非肺癌患者及健康人，而非肺癌患者（包括慢阻肺病人）和健康人甲基化率无明显差别，检测p16基因甲基化可用于肺癌的早期诊断及筛查。

【关键词】DNA甲基化肺泡灌洗液血清肺癌【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）46-0067-02肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，与30年前相比，我国肺癌死亡率上升了465%[1]，肺癌的早期诊断对改善预后至关重要，因此，在我国积极探索发展肺癌的早期诊断研究具有非常重要的现实意义，DNA甲基化水平变化的检测对肿瘤的早期诊断、疗效观察及预后判断提供非常有价值的信息[2]。

DNA甲基化与肿瘤的发生密切相关,甲基化可导致抑癌基因、生长调节基因启动子区域的高甲基化，是癌症发生的重要机制[3]。

肺癌分子靶向药物治疗的研究进展分子靶向治疗是指针对参与肿瘤发生、发展过程的细胞信号转导和其他生物学途径的治疗手段，具有高效和低不良反应的特点。

随着近年来肿瘤相关研究的不断进步，在恶性肿瘤的个体化治疗和靶向治疗方面取得了令人瞩目的进展。

本文主要针对肺癌的分子靶向治疗研究进展进行概括总结。

标签：肺癌；血管内皮生长因子受体；表皮生长因子受体；肿瘤干细胞；肿瘤抑制基因肺癌是当前发病率和死亡率最高的肿瘤之一，80%以上患者就诊时已处于晚期，失去手术机会。

目前，肿瘤化疗已经处于治疗瓶颈，毒副反应大，有效率低，5年生存率不足15%。

近年来发展起来的靶向治疗，具备高效、低副反应等特点，已成为目前肺癌治疗的研究热点。

其作用靶点包括细胞内信号转导通道中重要的蛋白质、酶、细胞表面的生长因子受体，而广义的分子靶点则包括参与肿瘤细胞分化、凋亡、迁移、浸润、淋巴结转移、全身转移等过程的从DNA到蛋白酶水平的任何亚细胞分子。

1 血管内皮生成因子（VEGF）VEGF是一种细胞因子，它能诱导内皮细胞增生、蛋白酶的表达、抗内皮细胞凋亡和细胞重组，最终形成毛细血管。

在病理血管生成方面，它还能增强血管的通透性，形成不成熟的血管网络。

血管上皮生长因子能够刺激血管内皮细胞的增生，在大多数人体肿瘤组织中，VEGF的表达大大高于其他正常组织[1]。

研究证实贝伐单抗以VEGF作为靶点，具有一定的抗肿瘤作用[2]。

VEGF家族包含6个生长因子（VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E以及胎盘生长因子）和3个受体（VEGFR-1、VEGFR-2（KDR/FIk.1）和VEGFR-3）。

VEGF 的过度表达与肿瘤进展及不良预后相关。

目前针对VEGF途径的治疗包括抗VEGF单克隆抗体和VEGFR-TKI两大类。

1.1贝伐单抗（Bevacizumab）Bevacizumab即重组人抗VEGF单克隆抗体，可与VEGFR结合，阻断肿瘤血管的细胞信号转导，抑制肿瘤血管生长，抑制肿瘤细胞。

胸水p16基因纯合性缺失的检测及临床应用价值肺癌是治愈率低和致死率高的呼吸系统肿瘤疾病，其发病率和死亡率逐年急剧上升且具有性别差异，对人类生命健康造成严重威胁。

肺癌的发病原因主要是吸烟、电离辐射、职业与环境接触、大气污染、遗传因素和既往肺部慢性感染。

其临床表现主要包括局部症状、全身症状、肺外症状、侵润和转移症状，其中局部症状有咳嗽、胸痛、胸闷、气急、咯血和声音嘶哑，而咳嗽是最常见的局部症状，也是肺癌的首发症状。

由于缺乏有效的早期诊断方法，40%以上的患者在诊断时病灶已发生转移，经过传统的治疗方法效果也差强人意，尤其是小细胞肺癌患者5年生存率不足5%。

因此，如何对伴有胸水的肺癌患者进行准确检测，成为了医学热点。

p16基因又称为MTS1基因，于1994年被Kamb 等发现的一种新的抗癌基因，它是细胞周期中的一种基本基因，其作用是直接参与细胞周期的调控，对细胞增殖和分裂进行负调节。

目前，经研究发现有细胞周期刹车装置之称的p16基因，在人类肿瘤细胞中出现纯合性缺失的现象，同时经临床研究证实很多癌症的形成都与p16基因的缺失和突变有关。

因此，对p16基因进行纯合性缺失的检测具有重要的临床意义。

将该院2010年12月—2014年6月收治的患者为研究对象，采用胸水p16基因纯合性缺失的检测肺癌收到了较好的效果，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料将该院收治的伴有胸水的肺癌患者176例，随机分为两组，其中对照组88例，男61例，女27例，年龄41～75岁，平均年龄58岁；PCR组88例，男62例，女26例；年龄42～74岁，平均年龄58岁。

两组在年龄和性别方面差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 治疗方法1.2.1 对照组在征得患者同意的情况下，对患者的穿刺部位通过超声定位后，协助患者采取合适的体位，局部消毒和麻醉后，进行常规的胸腔穿刺。

其具体步骤如下：用左手食指和中指将穿刺部位的皮肤固定，右手调整穿刺针的三通活栓装置，使其与胸腔处于关闭状态后，在麻醉处将穿刺针缓缓刺入，若针锋的抵抗感突然消失时，则调整三通活栓使其与胸腔相通，进行抽取胸水，抽取结束方可拔出穿刺针。