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微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法,重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片;二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物,一个细胞就是一个个体;细菌的基本形态有3种：球状,杆状和螺旋状,分别称为球菌、杆菌、螺旋菌;球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等;杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等,是细菌中种类最多的;螺旋菌分为弧菌和螺菌;除此之外,还有一些特殊形态的细菌;2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等;荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质,具有抗干燥、抗吞噬和附着作用;鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体,具有运动功能,在菌体上的着生位置、数目因菌种而异;菌毛又称纤毛是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬,且数量较多的丝状体,与细菌吸附或性结合有关;芽孢又称内生孢子,是某些细菌生长到一定阶段,在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体,具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性;3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位,是一种管状细丝;可伸长并产生许多分枝,许多分枝的菌丝相互交织在一起,就叫菌丝体;根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝;为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要,许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态,这些特化的形态称为菌丝变态;比如吸器、假根、子实体;4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些,但仍属于单细胞生物;链霉菌是典型的放线菌,其细胞呈丝状分枝,菌丝直径很小,在营养生长阶段,菌丝内无隔,故一般呈多核的细胞状态;当其孢子落在固体基质表面并发芽后,就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展,形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝,同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝,这就是气生菌丝;不久,大部分气生菌丝成熟,分化成孢子丝,并通过横隔分裂方式,产生成串的分生孢子;5．微生物菌落菌落是在固体培养基上内以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团;细菌的菌落有其自己的特征,一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等;不同形态、生理类型的细菌,在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映;三、实验器材普通光学显微镜Nikon YS-100,镜油,镜头纸,擦镜液；微生物装片15张,分为细菌、霉菌、放线菌、酵母菌等几类；微生物单菌落划线平板6块,分别为大肠杆菌、酵母、泾阳链霉菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、产黄青霉;四、 实验步骤1． 调节显微镜,观察微生物装片,选择其中6张手绘微生物形态； 2． 选择另外6张通过数字摄影系统拍照； 3． 观察6块菌落平板特征； 4． 整理仪器,清洁桌面; 注：本人所在35号台的显微镜不能进行数字摄影,故照片是在3号台显微镜下观察得到的;手绘图在两台显微镜观察下各有3张;五、 实验结果1． 数字摄影照片图1a bc d分生孢子 小梗 梗基 分生孢子梗接合孢子孢子囊梗分生孢子顶囊孢子囊e2．手绘图照片图2f接合孢子芽孢子图1. 微生物显微观察电子照片,摄于3号显微镜;a青霉,10×40倍观察；b黑根霉,10×40倍观察；c曲霉,10×40倍观察；d毛霉,10×40倍观察；e接合孢子,10×40倍观察；f酵母菌,10×100倍观察;各菌种的主要特征标注在图上;a b3． 菌落特征表1表1 . 单菌落划线平板特征描述菌落名称 含水状态 外观状态 透明度 颜色 边缘情况 大肠杆菌 略湿 圆形、光滑、凸起 半透明 双面乳白 整齐 酵母菌 湿润 圆形、光滑、凸起 不透明 正面：乳白 反面：黄褐 整齐 枯草杆菌湿润不规则、粗糙、扁平半透明双面黄褐波状c de f图2. 微生物装片手绘图;a 螺菌,放大10×100倍；b 巨大芽孢杆菌,放大10×100倍；c 褐色固氮菌,放大10×100倍；d 枯草杆菌,放大10×100倍；e 放线菌,放大10×100倍；f 苏云金杆菌,放大10×100倍;六、讨论本次实验最大的收获在于熟悉了油镜的使用和清洁;过去虽让做过不少使用显微镜的生物实验,但是因为观察的都是比较大的动植物细胞,没有机会练习油镜的使用;这次观察的都是个体非常小的微生物,真菌还可以在低倍镜下观察,但是细菌、放线菌必须使用油镜观察;即使这样,八叠菌、金黄色葡萄球菌等形体极小的菌种仍然不能清楚地看到单个菌体,这也是这次没有对它们进行绘图或是摄影的原因;注意,转换到100×物镜后,禁止使用粗准焦螺旋,细准焦螺旋也要慢慢调节,否则极易打碎装片;螺菌装片是为了观察鞭毛的,但是因为没有对装片进行过特殊染色,鞭毛非常不容易看到,必须将孔径光阑调到很小,同时降低聚光灯亮度,才能提高视野的对比度;能够隐约地衬出鞭毛,绘图时一定仔细观察;如经媒介剂加粗再染色,将更容易观察;本周的3个实验遗传、细胞、微生物内容非常相似,都是通过显微镜观察生物样本,之后进行手绘图片,而且所用的显微镜型号相同;希望以后可以整合类似资源,对同一项技能没必要3门同时上的课都训练;可否考虑对此部分上联合绪论课,讲解光学显微镜使用、手绘生物图方法,单独授课时则侧重讲需要重点观察的样本特征;这样同学们对3门实验尤其是一周中上的最后一门会有更大的兴趣;最后,感谢原先坐在3号台的同学,摄影结束后与我交换坐位,使我也能够对标本进行正常的数字摄影;七、参考资料陈金春、陈国强,微生物学实验指导,清华大学出版社,2005年。
原核微生物形态的观察
一、实验目的
1.学习并掌握显微镜的使用方法；
2.掌握原核微生物形态观察的基本方法；
3.观察细菌、放线菌的基本形态。
二、实验材料和用具
1.细菌三型涂片、炭疽芽孢杆菌涂片（示芽孢）、枯草芽孢杆菌涂片（示芽孢）、破伤风梭菌涂片（示芽孢）、褐球固氮菌涂片（示荚膜）、化脓链球菌、放线菌装片
2.显微镜、擦镜纸
三、操作步骤
1.将装片置于显微镜的载物台上，用低倍镜找到所要观察的菌体，调节粗准焦螺旋至物像清晰；
2.旋转物镜转换器，用中倍镜观察并调节粗准焦螺旋至物像清晰；
3.旋转物镜转换器，用高倍镜观察，同时调节细准焦螺旋至物像清晰。
四、实验报告
结果：
1.绘图:
将你所观察到的细菌三型涂片、褐球固氮菌涂片、破伤风梭菌、放线菌涂片中的菌体形态描绘出来，并标出破伤风梭菌中芽孢的位置及褐球固氮菌中荚膜的位置。
2.思考题：在使用显微镜的过程中要注意哪些问题？
1。
原核生物的形态、构造和功能知识点整理一、原核生物：无真正的细胞核结构，细胞核被称作拟核。
不进行有丝分裂二、细菌1.基本特征：二分裂、水生性强（偏碱）2.形态大小1)群体形态●在固体培养基上●观察形态特征：大小、形态、隆起情况、边缘情况、颜色和透明度等●影响菌落形态特征因素：临近菌落、组成菌落的细胞结构和生长行为、培养条件和培养时间●细菌的菌落特征：湿润、粘稠、较光滑、较透明、易挑取、质地均匀、菌落各部分颜色一致、菌落较小等●在半固体培养基上的群体形态●半固体琼脂培养基：判断细胞的呼吸类型和运动能力●明胶半固体培养基：细菌是否产蛋白酶●在液体培养基上的群体形态2)细胞的个体形态●球菌：球状（单个）或近似球状（几个连在一起，稍扁），●杆菌：单杆、双杆、链状、栅状、八字状●工业常用：●致病杆菌：●螺旋菌●弧菌：螺旋不满一圈●螺菌：螺旋2~6环，菌体坚硬●螺旋体：旋转6环以上，菌体柔软●异常形态：处于幼龄或生长条件适宜时为正常整齐形态，处于较老或异常条件下，细胞出现异常形态●畸形●衰退形3)大小●表达方法●球状：直径表示●杆状和螺旋菌：宽度×长度●细菌大小测量结果差异规律：干燥的比活菌短、液体培养的大于固体培养的、幼龄比老龄和成熟的大、培养基渗透压变大细胞变小3.细菌的细胞构造1)一般结构●细胞壁●主要成分：肽聚糖●主要功能：固定外形和提高机械强度、细胞生长分裂和鞭毛运动所必须、阻止大分子有害物质、赋予细菌特定抗原性以及抗生素噬菌体敏感性。
●青霉素●作用于G+菌抑制细胞壁肽聚糖合成●应用：配合溶菌酶制备原生质体、制备细胞壁缺失细胞有利于代谢产物和合成酶渗漏、制备青霉素抗性标记、检验营养缺陷型菌株淘汰野生菌株●溶菌酶：破坏β-1，4-糖苷键●缺壁细胞●人工去壁●原生质体：人为条件下溶菌酶除去细胞壁，青霉素抑制新壁合成所得到的渗透状态敏感细胞，一般为革兰氏阳性菌●球状体：原生质体处理后还剩下部分残余细胞壁的圆球型原生质体，多为革兰氏阴性菌●共同点：无完整细胞壁、细胞呈圆球状、对渗透压极其敏感、革兰氏染色为阴性、不能运动、细胞不分裂、对噬菌体不敏感●自生进化或突变●L型菌：自发突变使细胞壁缺损●支原体：细胞膜具有较高机械强度●细胞膜●概念：包围着细胞质的半透性薄膜，由磷脂和蛋白质构成●生理功能：维持细胞渗透压稳定、选择性控制细胞的物质进出、合成细胞壁的场所、鞭毛着生和供能部位、产能场所●间体：细胞膜内褶形成的囊状结构●表层间体与某些酶分泌有关●深层间体与DNA复制、分配及细胞分裂有关●细胞质和包含体●定义：①、被细胞膜包围除核区外的部位②、细胞质内显微镜下可见的大分子物质●质粒：游离于原核生物核基因以外的具有独立复制能力的小型共价闭环DNA分子●典型质粒：F质粒（性别和转移）、R质粒（抗药性）、Col质粒（抑制杀死近源细菌）、Ti质粒和Ri质粒（诱癌）、Mega质粒（巨大质粒，共生固氮）、降解性质粒●特点：可自我复制能稳定遗传、基因工程载体、可自行消失但不能自发产生、存在与否不影响细菌生存●贮藏物：一类由不同化学物质积累的不溶性颗粒，用于贮藏营养物，以多聚物存在●聚-β-羟丁酸：脂质碳源贮藏物，生产生物降解塑料的良好原料●多糖类贮藏物：包括糖原和淀粉粒●异染粒：贮藏磷元素和能量，降低细胞渗透压2)特殊结构●鞭毛：细菌体表的丝状蛋白质附属物、具有运动功能（但非生物所必须）●着生方式：●糖被：包被于细胞壁外厚度不定的胶状物质。
一、实验目的1. 掌握显微镜的使用方法，学会油镜的使用技巧。
2. 了解并掌握微生物的基本形态特征，包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。
3. 培养无菌操作技能，提高实验操作的规范性和准确性。
二、实验原理微生物是构成生命的基本单位，其形态和结构是微生物学研究的重要内容。
通过显微镜观察微生物的形态，可以了解其生物学特性，为微生物的分类、鉴定和实验研究提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的纯培养物。
2. 仪器：光学显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、无菌水、无菌棉签、培养皿、试管等。
四、实验步骤1. 涂片（1）将接种环在酒精灯上灼烧，待其冷却后，蘸取适量纯培养物。
（2）将接种环在载玻片上轻轻涂成薄层。
（3）在涂片上滴加适量无菌水，用无菌棉签轻轻涂抹，使菌体均匀分布。
2. 干燥将涂片放在室温下自然干燥。
3. 染色（1）将干燥后的涂片放入乳酸石炭酸棉蓝染色液中，染色5-10分钟。
（2）用蒸馏水冲洗涂片，去除多余的染色液。
4. 观察（1）将涂片放在显微镜载物台上，先用低倍镜观察，找到菌体后，用高倍镜观察。
（2）观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的形态、大小、颜色等特征。
5. 记录将观察到的微生物形态特征记录在实验报告中。
五、实验结果与分析1. 细菌细菌是单细胞生物，基本形态有球形、杆形和螺旋形。
在显微镜下，观察到细菌的形态和大小，为杆状，大小约为0.5-1.0μm。
2. 放线菌放线菌是丝状真菌，由菌丝构成。
在显微镜下，观察到放线菌的菌丝呈细长状，直径约为2-5μm，菌丝间有横隔。
3. 酵母菌酵母菌是单细胞真菌，个体形态多为卵圆形、圆柱形。
在显微镜下，观察到酵母菌的个体大小约为5-10μm，细胞壁较薄，细胞质透明。
4. 霉菌霉菌是丝状真菌，由菌丝构成。
在显微镜下，观察到霉菌的菌丝呈粗细不一的丝状，直径约为5-20μm，菌丝间有横隔。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了显微镜的使用方法，观察了细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的形态特征，了解了微生物的基本生物学特性。
原核生物的形态、构造和功能2细菌是一类细胞细短、结构简单，胞壁坚韧，多以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核生物。
一、细菌的形态构造及其功能：（一）形态与染色1、基本外形：球状——球菌；杆状——杆菌；螺旋状——螺旋菌。
（1）球菌：球形或近球形，根据空间排列方式不同又分为单、双、链、四联、八叠、葡萄球菌。
不同的排列方式是由于细胞分裂方向及分裂后情况不同造成的。
细胞呈球状或椭圆形。
（2）杆菌：杆状或圆柱形，径长比不同，短粗或细长。
细菌中种类最多。
（3）螺旋菌：细胞呈弯曲杆状的细菌统称为螺旋菌。
是细胞呈弯曲杆状细菌统称，一般分散存在。
根据其长度、螺旋数目和螺距等差别，分为弧菌（菌体只有一个弯曲，形似C字）和螺旋菌（螺旋状，超过1圈）。
与螺旋体，区别：无鞭毛。
弧菌：偏端单生鞭毛或丛生鞭毛螺旋菌：两端都有鞭毛细菌形态不是一成不变的，受环境条件影响（如温度、培养基浓度及组成、菌龄等）。
异常形态：一般，幼龄，生长条件适宜，形状正常、整齐。
老龄，不正常，异常形态。
畸形：由于理化因素刺激，阻碍细胞发育引起。
衰颓形：由于培养时间长，细胞衰老，营养缺乏，或排泄物积累过多引起。
2、细菌染色法由于细菌细胞既小又透明，故一般先要经过染色才能作显微镜观察。
二、细菌的细胞构造（一）细菌细胞的一般构造基本结构是细胞不变部分，每个细胞都有，如细胞壁、细胞膜、细胞核。
1、细胞壁①概念：细胞壁：是细胞质膜外面具有一定硬度和韧性的壁套，使细胞保持一定形状，保障其在不同渗透压条件下生长，即使在不良环境中也能防止胞溶作用。
真细菌的细胞壁由肽聚糖构成，而古细菌细胞壁组成物质极为多样，从类似肽聚糖的物质、假肽聚糖，到多糖、蛋白质和糖蛋白。
真细菌细胞壁由肤聚糖构成，肤聚糖是N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)和带有交替排列的D-型或L-型氨基酸侧链的N-乙酰胞壁酸(NAM)的多聚体。
它是高度的交联的分子，使得细胞具有刚性、强度和保护细胞抵抗渗透压的裂解。
肽聚糖有许多独特的特性，如D-型氨基酸，它可作为抗生素攻击肽聚糖的靶目标(抗生素通过抑制或干扰肽聚糖合成而使细胞壁缺损)。
