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间歇低氧幼鼠8异前列腺素F2α变化及芹菜素的干预效果

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间歇低氧幼鼠8-异前列腺素F2α变化及芹菜素的干预效果作者：周永海，蔡晓红，张存雪，李源，李宁，龚永生，胡良冈【关键词】间歇低氧；8-异前列腺素F2α；芹菜素Abstract: Objective: To detect the changes of 8-iso-prostaglandin F2α(8-ISO-PGF2α) in serum and the hippocampus and to observe the intervention effect of apigenin in immature rats exposing to intermittent hypoxic. Methods: Thirty two 3～4 week-aged SD rats were randomly divided into intermittent hypoxia (IH) group，air control(C) group，apigenin+ DMSO (Q) group and DMSO control(R) group. Each group had eight rats. Intermittent hypoxia model was induced by an intermittent hypoxia cabin and the cabin was flushed with 99.99% nitrogen alternating with 99.5% oxygen. The cycle of hypoxia- reoxygenation was 90 s. After 2 weeks，the serum and hippocampus levels of 8-Iso-Prostaglandin F2αwere tested by ELISA. Results: In the serum，the expression of 8-ISO-PGF2α in IH and R groups were significant higher than that in C and Q groups (P <0.01，respectively). There were no difference between C and Q groups (P >0.05)，and no difference between IH and R groups (P >0.05). The similar results were found in hippocampus. Serum 8-ISO-PGF2αand hippocampus 8-ISO-PGF2αwere positivelycorrelated (r =0.818，P <0.01). Conclusion: The 1evels of 8-iso-PGF2αincreases in both serum and hippocampus of immature rats with IH and the 1evels of 8-iso-PGF2α in serum can reflect indirectly the degree of oxidative stress in hippocampus. Apigenin can reduce the 1evel of 8-iso-PGF2α in serum and hippocampus. Therefore，it has plication prospect in treatment of injuries which induced by IH.Key words: Intermittent hypoxia；8-ISO-PGF2α；Apigenin儿童睡眠障碍阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)可造成神经系统损害，从而引起认知功能障碍、学习成绩下降，其危害逐渐引起社会的广泛关注。

目前认为OSAHS最重要的病理生理改变是夜间反复的间歇低氧，进而引起机体氧化应激。

芹菜素是天然存在的一种黄酮类化合物，能清除氧自由基及NO自由基等，从而体现了对神经的保护作用[1]。

本试验模拟OSAHS的典型病理生理特征，建立慢性间歇低氧的幼鼠模型，测定血清及海马中8异前列腺素F2α水平，并观察芹菜素的干预作用，以期为临床应用芹菜素治疗间歇低氧造成的损伤提供实验基础和理论依据。

1 材料和方法1.1 动物与药品取体重为80～100 g健康雄性SPF级SD幼鼠(3～4周龄)32只，由温州医学院实验动物中心提供，合格证号：SYXK(浙)2005-0061。

芹菜素纯度为98%，批号：060313（陕西慧科植物开发有限公司）；二甲基亚砜（DMSO）批号：040602（上海生工生物工程技术服务有限公司）。

芹菜素配制方法：25 mg芹菜素+8 ml生理盐水+40μl DMSO，配成11.6×10-3μmol/L，4 ℃冰箱保存。

溶剂配制方法：8 ml生理盐水+40μl DMSO，配成0.5%的溶剂，4 ℃冰箱保存。

1.2 仪器 CYES蛐脱酢⒍趸计宀舛ㄒ怯缮虾＜味ㄑЯ潜沓峁湫脱醪蘸涂掌Ｄ舛哉詹兆灾疲ㄖ魈逵刹恍飧种瞥桑崭侵屑洳糠治ＡВ黄甯制俊⒓跹狗А⒘髁考啤⒖刂瞥绦颉⒓痰缙鳌⒌绱欧Ш拖允酒鞯茸槌煽刂葡低场＜湫脱醪?25 cm×48 cm×24 cm 大小，侧壁上有4个进气的单向阀，4个排气的单向阀；空气模拟对照舱60 cm×48 cm×24 cm大小，侧壁上有2个进气的单向阀，2个排气的单向阀），电磁阀由宁波亚德客自动化工业有限公司提供，单片机选用台湾华邦（Winbond）的W78E516B八位单片机，医用压缩氧气(浓度>99.5%)和压缩高纯度氮气(浓度>99.99%)由温州市医用氧厂提供。

1.3 动物模型建立及分组参照McGuire、Gozal等[2，3]方法建立慢性OSAHS动物模型。

取3～4周龄雄性幼鼠32只，按数字表法随机分为间歇低氧组（IH），空气对照组（C），芹菜素+DMSO组(Q)和二甲基亚砜组(R)，每组各8只。

IH、R、Q组置于常压间歇低氧舱内。

90 s 为一次低氧囱跹罚?.3 kPa压力通氮气30 s、停30 s，25 L/min 流量通氧气12 s、停18 s，在停止通气阶段由连接的测氧仪分别测间歇低氧舱内的氧浓度高值、低值和CO2 浓度，CO2 浓度始终<0.01%，湿度为（50±10）%。

每天7.5 h (8:50-16:20)。

C组幼鼠置于同等条件下的空气模拟对照舱，通压缩空气，与间歇低氧舱由同一单片机程序控制气体输入。

Q组幼鼠每天于常压低氧前30 min腹腔注射25 mg/kg[4]用DMSO溶解的芹菜素，R组则注射同量DMSO+生理盐水。

幼鼠自由活动，不限饮食，实验时间为2周。

实验过程中，白天各舱上面均盖厚布，使舱内保持黑暗，模拟黑夜，幼鼠进入睡眠状态。

每天间歇低氧结束后，幼鼠出舱，置于日光灯下，模拟白天，自由活动，饮食不限。

1.4 血清及海马8-ISO-PGF2α测定低氧结束次日，戊巴比妥钠（35 mg/kg，腹腔注射）麻醉，将幼鼠仰卧固定，剖开腹腔，抽取腹主动脉血3 ml，低温离心机4 000 r/min离心15 min，取上清，-20 ℃保存待测；取血后迅速断头处死幼鼠，取出海马，留取100 mg，用磷酸缓冲液反复冲洗干净后-80 ℃保存待测。

ELISA试剂盒购自美国Assay designs公司，按照试剂盒说明书操作，用CurveExpert1.38软件绘制标准曲线，计算各孔相应8-ISO-PGF2α浓度。

批内和批间变异系数分别为6.5%和7.8%，最低可测范围为40 pg/ml。

1.5 统计学处理方法采用SPSS12.0统计软件。

用单因素方差分析，方差齐者组间比较用LSD-t检验，方差不齐者用Tamhane’s T2 检验。

两变量的相关分析用Pearson 直线相关分析法。

2 结果2.1 各组幼鼠血清与海马中8-ISO-PGF2α的含量结果见表1。

2.2 血清和海马组织中8-ISO-PGF2α含量的相关分析两者呈显著正相关（r =0.818，P＜0.01，n =64）结果见图1。

3 讨论睡眠是人生命的重要组成部分，儿童睡眠障碍以OSAHS为多见，发病率约为2%。

OSAHS患儿存在一定程度的执行能力、注意力、记忆力和言语能力下降[5]；有研究发现，虽经鼻持续气道正压通气(nCPAP)、口咽部手术等方法治疗，OSAHS患者受损的学习记忆等认知功能也只能得到部分改善[6, 7]，因此，如何早期便捷、有效地判定OSAHS所致的间歇低氧脑损伤程度及探寻一种新的方法来进行防治具有重要意义。

OSAHS特征性的低氧方式是慢性间歇低氧，这种低氧/复氧方式出现类似缺血/再灌注过程中的病理变化，产生大量的活性氧（ROS），引起机体氧化应激。

由于ROS过量生成，一方面导致超氧阴离子(O2-)、过氧化氢（H2O2）等氧自由基及其相关代谢产物过量聚集，将膜磷脂、DNA氧化，将酶蛋白变性，从而对细胞产生多种毒性作用[8]。

由于中枢神经组织含有丰富的脂质成分而且抗氧化酶相对缺乏、耗氧量高，所以对自由基损伤特别敏感，对氧化应激具有独特的易损性，易导致脑损伤及海马等处神经细胞凋亡[9]。

8-ISO-PGF2α是近年来新发现的具有生物活性的一类拟前列腺素样物质，由自由基损伤细胞膜脂质花生四烯酸发生脂质过氧化而产生，是异前列腺素类物质中含量最多、性质最稳定的一种具有生物活性的拟前列腺素物质。

在体内，8-ISO-PGF2α的合成不依赖环氧酶催化，在体液内含量非常稳定，故被认为是判断活体内自由基氧化强度和临床上作为评价抗氧化剂疗效的最理想的生化指标[10]。

临床研究显示，持续低氧时，脑脊液甚至脐血的8-ISO-PGF2α都明显增高，并且与病情的严重程度密切相关[11]。

本研究结果显示，IH组的血清及海马中8-ISO-PGF2α含量明显高于C组，证明间歇低氧后，幼鼠机体不仅发生了系统性氧化应激，亦发生了局部性氧化应激，血清和海马组织中8-ISO-PGF2α表达呈显著正相关，证实血清中的8-ISO-PGF2α水平能够作为评价间歇低氧脑部氧化应激损伤的评价指标。

芹菜素是一种天然的抗氧化剂，我们此前的研究发现，芹菜素可保护间歇低氧幼鼠海马神经元，从而改善其学习记忆能力的损伤[12]。

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芹菜素对小鼠急性肺损伤的保护作用

芹菜素对小鼠急性肺损伤的保护作用

芹菜素对小鼠急性肺损伤的保护作用王玉明（酒泉职业技术学院，甘肃酒泉735000）摘要：急性肺损伤是由创伤、感染、休克等诸多非心源性因素导致的一种急性、进行性呼吸障碍。

该病的主要特点是出现顽固型低氧血症、促进呼吸频数升高、呼吸加重、呼吸困难、X线分析结果显示肺泡多出现弥漫性浸润等。

本实验在构建L P S诱导的小鼠急性肺损伤模型的基袖上，通过观察肺组织病理学变化、肺组织MPO活性变化及炎性细胞数量、促炎性细胞因子及NF%B和MAPKs 信号通路中关键接头蛋白分子磷酸化水平变化，探讨芹菜素对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用。

关键词：芹菜素；小鼠；急性肺损伤；核转录因子一％B；丝裂原活化蛋白激酶［中图分类号％S852.3［文献标识码％A［文章编号％10046704（2020）02001705Protective effect of Apigenin on Acute Lung Injury in MiceWANG Yu-mingCJiuquan Vocaiionl and Technical College,>iuquan Gansu China,735000)Abstract:Acute lung injury(ALI)is an acute,progressive respiratory dysfunction,which usually caused by trauma,in-fec ion,shock,and many oCher non cardiac causes.The mainfeaCuresofChediseaseareChesCubbornhypoxemia,increased breaChfrequency,heavybreaChing,dysonea,adi f useinfilCraCionofalveolarChroughX—rayanalysis.OnChebasisofChelung issue paChology observaCion,lung issue MPO acCivi y changes and inflammaCory ce l s,andChe changes of inflammaCory cyCo-kines and NF—^B protein molecules and MAPKs signaling pathways in the key joint phosphorylation level,this experiment built a mouse model of acute lung injury induced by LPS,explored the effect of apigenin on the protection of acute lung injury +n m+ce+nducedbyLPS.Key words：apigenin；mice；acute lung injury；LPS*MAPKs11.1清洁级BALB/c小鼠（6—8周龄，体重20#23 g）,购自吉林大学白求恩医学院动物实验中心，小鼠饲养一周左右以适应新环境，给予充足的饲料和饮水。

芹菜素对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

芹菜素对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

芹菜素对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用王玉明;杨正涛;张乃生【摘要】[目的]揭示芹菜素的抗炎作用机制.[方法]通过建立小鼠模型,研究芹菜素对LPS诱导急性肺损伤的保护作用.[结果]芹菜素可以降低LPS诱导的肺组织损伤和肺组织MPO活性.与LPS组相比,芹菜素治疗组可以显著降低肺泡盥洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平,并抑制NF-κB信号通路的激活.[结论]芹菜素可以通过抑制NF-κB的激活并降低炎性细胞因子的水平,从而对小鼠急性肺损伤产生抗炎保护作用.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)035【总页数】3页(P187-189)【关键词】LPS;急性肺损伤;芹菜素;NF-κB【作者】王玉明;杨正涛;张乃生【作者单位】吉林大学动物医学学院,吉林长春130062;吉林大学动物医学学院,吉林长春130062;吉林大学动物医学学院,吉林长春130062【正文语种】中文【中图分类】S865.1急性肺损伤常伴有毛细血管内皮细胞损伤、肺水肿及中性粒细胞浸润等病理学变化[1]。

LPS是引起急性肺损伤的主要因素[2]。

LPS能够诱导细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6显著升高[3-4]，这些细胞因子可以启动、放大并延续炎症反应，并对机体造成严重损伤。

急性肺损伤及其严重时发生的急性呼吸窘迫综合征所导致的病人死亡率约为20%～50%[5-6]。

因此，寻找防治急性肺损伤的有效策略具有重要的临床意义。

芹菜素是一种黄酮类化合物，研究发现芹菜素具有抗肿瘤、抗炎等多种药理作用[7-8]。

据报道，芹菜素可以抑制LPS刺激巨噬细胞所引起的炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放[9]，对大鼠急性脑损伤和大鼠肝脏局部缺血再灌注损伤具有一定的保护作用[10]。

然而，芹菜素对LPS诱导的急性肺损伤的保护作用鲜有报道。

笔者通过建立小鼠模型观察芹菜素对LPS诱导急性肺损伤的保护作用，并初步揭示芹菜素的抗炎作用机制。

芹菜素改善肥胖型2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的实验研究

芹菜素改善肥胖型2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的实验研究

５１ ００１ Ｃｈ ｎ ｉａ
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔｅ ｏ ｘｌ ｅｈ ｆ ｔｏｆｖｎｉ ｅ ｉ ｌ ｐ ｅｉｔｔ ｕｏｅｌ ｉ ｄｎｕ ｎ Ａ ｓ ａｔ ｂ ｃｖ Ｔ ｐ ｒｔ ｅ ｅ ｓ ｆ ａｏｏ ｓ ｈｍ ｃ ｉ ｎ ｅ ｌ ｓ，ｐ ｓ ｎ ｓｌ ｒ ｅｉ ｅ ｏ ｅ ｆｃ ｌ ｄｃ ａＡ ｇ ｎｏｈ ｇ ｃ ｉｄ ａ ｉ ｉ
ｇ ｕ ｏ ｅａ ｄ ｐ ｅ ｅ ｔ ｈ ｉｈ ａｎ ｉ ｂ ｄ ｃ ． ｌ ｃ ｓ ｎ ｒ ｖ ｎ ｅｗｅｇ ｔ ｉ ｎｄ ／ ｂｍｉｅ ｔ ｇ
【 ｅ ｏｄ 】 Ａ ｉ ｎｎ Ｄ ／ｂｍｉ ；ｎｕｉ ｒｓ ｔ ｃ； ｌｏ ｕ ｏｅ ｅｅ；ｎｕｉ ｎｉｖｔ Ｋ ｙ ｒｓ ｗ ｐｇ ｉ； ｂｄ ｃ Ｉｓｌ ｉａ ｅ Ｂｏｄ ｌｃ ｓ ｖｌＩｓｌ ｓ ｓｉｉ ｅ ｅ ｎｅｓｎ ｇ ｌ ｎｅ ｔ ｙ
１ 实 验动物 及分组
抗 凝血 ，离 心后 得血 浆 ，以全 自动生化 分 析仪 测 高密 ６ ８ 龄雄性 ｄ ／ｂ 鼠 １ ，购于南京大学模式 度脂 蛋 白胆 固醇（ Ｌ Ｃ ，低密度脂 蛋 白胆 固醇（ＤＬ —周 ｂｄ 小 ２只 ＨＤ — ） Ｌ —
动 物 中心 ，分 为 ｄ ／ｂ 照组 ６只 ，给予普 通饮食 ，并 Ｃ ， ｂｄ 对 ） 总甘油Ｚ￣（Ｇ ， Ｔ ） 总胆 固醇（ｃ水平 。内脏组织 Ｈ Ｔ） ＆Ｅ 给予生理盐 水灌 胃 ，每天 １ ；ｄ ／ｂ芹菜素组 ，给予 染 色 ｊ取小 鼠的肠 系膜脂肪作 冰冻切片 ，１ ％ 甲醛 固 次 ｂｄ ０ 普通 饲料饮食 ，并给予生理盐水芹菜 素（０ ／ｇ ２ ０ｍｇ ） ｋ ￣悬 定 后行 Ｈ＆Ｅ染 色 ，观察 脂肪 细胞 的形 态 。 液 灌 胃，每天 １ ；同时 以非肥 胖非糖尿病 的 ｄ ／ｂ 次 ｂｄ 标 ２３ 统 计学 方法 实验数 据 以均数 －标准 差（ ． ４ － ±ｓ表 ）
芹菜素对雄性小鼠肝脏SOD、GSH Px、CAT活力影响

芹菜素对雄性小鼠肝脏SOD、GSH Px、CAT活力影响

芹菜素对雄性小鼠肝脏SOD、GSH Px、CAT活力影响【摘要】目的观察不同剂量、不同作用时间，芹菜素（AP）对雄性小鼠肝脏氧化还原酶活力的影响。

方法将200只雄性小鼠按体重随机分为对照组（生理盐水）、低剂量组（AP 252 mg/kg bw）、中剂量组（AP 504 mg/kg bw）和高剂量组（AP 1008 mg/kg bw）4组，各组动物又随机分成5个时间组即：7 d组、14 d组、21 d组、28 d组、35 d组。

小鼠给予001 ml/g bw 生理盐水和不同浓度的芹菜素灌胃，1次/d。

分批处死小鼠，制备肝匀浆。

测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）及过氧化氢酶（CAT）活力。

结果SOD活力28 d高剂量组明显低于其他组（P＜005），35 d中剂量组SOD活力低于对照组及低剂量组（P＜005）；GSHPx活力28 d高剂量组较对照组及低剂量组低（P＜005）；CAT活力变化不明显。

结论AP对雄性小鼠肝脏SOD、GSHPx活力具有一定抑制作用。

【关键词】芹菜素；超氧化物歧化酶（SOD）；谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）；过氧化氢酶（CAT）1 资料与方法11 一般资料111 实验动物成年健康SPF级昆明种雄性小鼠200只，动物合格证号编号为SCXK（甘）2011 00010001067，饲养在甘肃中医学院中心实室的SPF级实验室内。

112 芹菜素芹菜素购于陕西惠科植物开发有限公司（生产批号，HK20110105），经HPLC检测，芹菜素纯度为98 %，用生理盐水配制成所需浓度。

113 主要试剂与仪器试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒（生产批号：20120326），谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPX）测定试剂盒（生产批号：20120323），过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒。

722型分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），JA3003N 电子秤（上海精密科学仪器有限公司），LD42 离心机（北京医用离心机厂），DK600 s 型三用恒温水浴箱（上海精宏实验设备有限公司）。

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