肥达实验ppt

肥达试验的原理
肥达试验是一种用于测定某物质中可溶性固体物质含量的方法。

其原理基于物质的溶解特性，通过将待测样品与某一溶剂进行反应，并通过重量差来计算出溶解的固体物质含量。

具体操作步骤如下：
1. 取一定质量的待测样品，并称取其质量。

2. 将样品加入预先称好的溶剂中，搅拌使其充分溶解。

3. 将溶解后的溶液过滤，将滤液收集。

4. 将滤液置于加热板上用温度适宜的程度加热，使其水分蒸发，直到溶液完全干燥。

5. 将干燥后的残渣置于恒温烘箱中加热一段时间，直到质量不再发生变化。

6. 计算可溶性固体物质的含量，通过以下公式计算：
可溶性固体物质含量（%）=（残渣质量 - 初样质量）/ 初样
质量 × 100%
肥达试验是一种常用的分析方法，对于确定某物质中的可溶性固体物质含量具有一定的准确性和可靠性。

抗体检测－肥达试验
步 骤： 管外稀释血清 分装已稀释血清 稀释抗原（ TO，TH ， A ， B ， C ） 抗原＋等量已倍比稀释血清（0.5mL＋0.5mL） 摇匀 ， 37℃过夜 ℃ 结果观察 ， 记录
1
待检血清稀释： 待检血清稀释：
1∶20 ∶
1∶40∶
1∶320 ∶
1∶20 1∶40 ∶ ∶
T0
TH
A
B
C
加0.5mL 相应抗原
4
结果观察和记录
从温箱或水浴中轻轻取出试管架，不要振动试管。观察 结果时，取出试管，观察试管中上清液的透明度和管底 凝集物的多少及性状，然后再轻摇试管使凝块从管底升 起，记录液体的清浊，凝块的大小。 H凝集呈絮状，以疏松之团块沉于管底，轻摇试管即能 荡起，而且极易散开；O凝集呈颗粒状，呈致密凝块沉 于管底，轻摇试管不易荡起，而且不易散开。
1∶640 ∶
0.3mL 血清 5.7ml N.S
取3mL前1管稀释液 加入下1管3mLN.S中
2
0.5mL血清稀释液 血清稀释液/ 分装待检血清稀释液 0.5mL血清稀释液/每管
阴性对照 (N.S)
1∶640 ∶ 1∶320 ∶
1∶640 1∶320 1∶160 1∶80 1∶40
1∶160 ∶ 1∶80 ∶
5
肥达结果判断:
++++ 上清完全透明，细菌全部形成凝块。 +++ 大部分细菌形成凝块，上清较透明。 ++ 约50%细菌形成明显可见的凝集块，上清中度混浊。 + 仅有小部分细菌形成小凝集块，上清较混浊。 － 液体均匀混浊，无凝集块（有部分菌体因静置而沉于管底， 振摇后细菌如云烟状升起，但很快消失。 以呈现“++”凝集的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。

内科学症状部分：肥达反应阳性>>>
病因：
细胞摄取伤寒杆菌最多，持续时间也较长， 故培养阳性率最高。此时相当于疾病的第 一周。
随后，伤寒杆菌随血流散布至全身生 长繁殖。由于网状内皮组织丰富的器官如 肝、脾、骨髓、淋巴结等摄取菌较多，因 而引起更严重的全身中毒现象及各脏器的 病变。引起第二次严重菌血症并释放强烈 的内毒素，产生发热
伤寒杆菌在自然界中的生活力较
内科学症状部分：肥达反应阳性>>>
病因：
强在水中一般可存活2～3周，在粪便中能 维持1～2月，在牛奶中不仅能生存且可繁 殖，能耐低温，在冰冻环境中可持续数月 但对光、热，干燥及消毒剂的抵抗力较弱 日光直射数小时即死，加热至60℃经30分 钟或煮沸后立即死亡，在3%石炭酸中5分 钟即被杀死消毒饮水余氯达0.2～0.4mg/L 可迅速致
内科学症状部分：肥达反应阳性>>>
病因：
小肠粘膜再度侵入肠壁淋巴组织，在原已 致敏的肠壁淋巴组织中产生严重的炎症反 应和单核细胞浸润(即ⅳ型超敏反应)引起 坏死，脱落而形成溃疡，若波及病变部位 血管可引起出血若侵及肌层与浆膜层则可 引起肠穿孔，此外，伤寒杆菌也可在其他 组织引起化脓性炎症如骨髓炎肾脓肿、胆 囊炎、脑膜炎 、心包炎等。
内科学症状部分：肥达反应阳性>>>
简介：
疹和相对缓脉。本病又称为肠热病 (enteric fever)但本病的临床表现主要 系病原经血播散至全身全器官，而并非肠 道局部病变所引起。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
内科学症状部分：肥达反应阳性>>>
病因：
本病的病原是伤寒杆菌属沙门菌属D 族(组)，革兰染色阴性，呈短杆状长1～ 3.5μm，宽0.5～0.8μm，周有鞭毛能活 动，不产生芽胞，无荚膜。在普通培养基 上能生长。因胆汁中的色氨酸及类脂可作 为伤寒杆菌的营养成分，故在含有胆汁的 培养基中生长较好。

实验采用肥达氏试验等方法， 检测肠道微生物的种类和数量， 分析其对宿主健康的影响。
实验步骤
01
采集粪便样本，进行微 生物培养。
02
03
04
对培养出的微生物进行 形态观察和分类鉴定。
采用肥达氏试验等方法， 检测肠道微生物的抗原 和抗体。
分析实验数据，得出结 论。
03
CHAPTER
微生物培养技术
培养基的制备
THANKS
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ谢谢
高通量检测技术
随着基因组学、蛋白质组学等技术的发展，微生物实验将更加注 重高通量检测技术的应用，提高检测效率和准确性。
自动化与智能化
借助自动化仪器和智能技术，实现微生物实验的自动化和智能化， 提高实验效率和精度。
交叉学科融合
加强微生物实验与生物信息学、计算生物学等交叉学科的融合，推 动微生物实验的创新发展。
实验步骤
采集待检血清
采集患者的静脉血液，分离血 清备用。
观察结果
在规定时间内观察凝集反应的 结果，记录凝集程度和效价。
准备试剂和器材
包括肥达试验抗原、抗体检测 试剂盒、试管、吸管、显微镜 等。
加样
将待检血清分别加入试管中， 加入适量的抗原和抗体。
结果判断
根据凝集程度和效价判断患者 是否感染伤寒沙门氏菌。
05
CHAPTER
微生物实验的应用与展望
微生物实验在医学领域的应用
诊断疾病
微生物实验是诊断感染性疾病的 主要手段，通过分离培养、抗原 抗体检测等技术，确定病原体种
类，为临床治疗提供依据。
药物研发
微生物实验可用于筛选具有抗菌、 抗病毒活性的药物，为新药研发提 供候选药物。

（ +）
（ -）

上清液混浊，仅有小部分细菌凝集。
不凝集，液体呈乳状与对照管相同。
效价判定：以能出现“++”凝集现象的血清最高稀释度为
该血清的凝集效价。

血清的凝集效价（滴度）：指能与一定量的抗原发生肉眼 可见的明显凝集（即“++”凝集）的血清最高稀释倍数。
血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗
材料

伤寒沙门菌O、H菌液，甲、乙型副伤寒沙门菌菌液 生理盐水和患者血清（须经56℃30min灭活），试管，吸
管，试管架，水浴箱
结果

凝集程度：以“+”多少表示 。
（++++）上清液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。 （+++） 上清液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。 （++） 上液半混浊，细菌部分凝集。
肥达反应
凝集反应

抗原与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可
见的凝集物，称之为凝集反应。
l l
直接凝集反应
间接凝集反应
直接凝集反应

颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象。
间接凝集反应

将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的 表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即 可出现凝集现象。
直接凝集反应ຫໍສະໝຸດ 试管凝集试验——肥达反应 玻片凝集试验——ABO血型鉴定
肥达反应

肥达反应(widal reaction)是用已知的伤寒沙门菌的H抗原 (鞭毛)和O抗原(菌体)以及甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌
和希氏沙门菌的H抗原的诊断菌液与病人血清做凝集试验，

可帮助诊断伤寒及副伤寒。
肥达反应稀释法示意表
试验管（每管0.5ml） 1
生理盐水
对照管 5 0.5 6 0.5 7 0.5
2 0.5
3 0.5
4 0.5
0.5
1
2
“O”抗原
“H”抗原
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
3
4
PA抗原
PB抗原
0.5
0.5 1:40
伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒 甲型副伤寒 乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
实验报告

记录肥达实验结果并分析Fra bibliotek医学微生物学实验
微生物学教研室
2011年5月
实验内容
录像：肠杆菌科
操作：肥达试验
目的要求
掌握肥达试验的原理、操作方法、结
果判断
肥达实验
【原理】
肥达试验（Widal test）是用已知的伤寒 杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原与
病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有
无相应抗体，根据抗体含量的多少以及增长情况，
结果判断
1、正常凝集效价 伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以下，伤 寒沙门菌“H”抗体在1：160以下， 甲、乙型副伤寒沙门菌“H”抗体凝集效价在1： 80以下。 2、病程中动态观察 二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义 3、O与H抗体在诊断上的意义
3、O与H抗体在诊断上的意义

伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒
甲型副伤寒
乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
实验报告
记录肥达实验结果并分析
0.5
0.5
4 PB抗原 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5
0.5
0.5
血清最终稀释度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 -
肥达实验结果判断
血清的凝集效价（滴度）：是指能与一定量的抗 原发生肉眼可见的明显凝集（即“++”凝集）的血 清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含 量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。
结果判断
1、正常凝集效价 伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以下，伤 寒沙门菌“H”抗体在1：160以下， 甲、乙型副伤寒沙门菌“H”抗体凝集效价在1： 80以下。
2、病程中动态观察 二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义
3、O与H抗体在诊断上的意义
3、O与H抗体在诊断上的意义
OHAB
诊 断 意 义（可能）
肥达反应稀释法示意表
生理盐水
试验管（每管0.5ml）
1
2
3
4
5
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
对照管
6
7
0.5 0.5
-
1 “O”抗原 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5
0.5
0.5
2 “H”抗原 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5
0.5
0.5
3 PA抗原 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5
医学微生物学实验

该血清的凝集效价。
血清的凝集效价（滴度）：指能与一定量的抗原发生肉眼 可见的明显凝集（即“++”凝集）的血清最高稀释倍数。 血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗 体的量愈多。一般认为，伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价 在1:80以上，“H”抗体凝集效价在1:160以上，引起副伤 寒的沙门菌H凝集效价在1:80以上才有诊断价值。
肥达反应
※ 肥达反应 Widal
原理
Reaction
用已知的伤寒沙门菌O抗原和H抗原，以及引起副伤寒的 甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液 与受检血清做试管凝集实验
目的：
测定受检血清中有无相应抗体及其效价
器材: 小试管5支/组，试管架1个/组，洗耳球1个/组，1ml
移液管1支/组，离心管架1个/班，50μL 移液枪一个/ 组,伤寒杆菌O抗原菌液1管 /组，吸头3个/组，生理盐 水（中试管）1管/组，标记笔1支
伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
非特异性回忆反应
伤寒 甲型副伤寒 乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
效价判定：以出现 ++ 凝集的血清最高稀释倍 数为该血清抗体的效价
1：40
++++ ++++ ++++
+
1：80
+++ +++ +++
-
血清稀释度
1：160 1：320 1：640
++ + -
++ ++ -

伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒
甲型副伤寒
乙型副伤寒
接种伤寒及副伤寒三联疫苗
非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
.
8பைடு நூலகம்
实验报告
记录肥达实验结果并分析
9
.
6
.
结果判断
1、正常凝集效价
伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以下，伤 寒沙门菌“H”抗体在1：160以下，
甲、乙型副伤寒沙门菌“H”抗体凝集效价在1： 80以下。
2、病程中动态观察
二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义
3、O与H抗体在诊断上的意义
7
.
3、O与H抗体在诊断上的意义
OHAB
诊 断 意 义（可能）
0.5 0.5
0.5
0.5
4 PB抗原 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5
0.5
0.5
血清最终稀释度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 -
5
.
肥达实验结果判断
血清的凝集效价（滴度）：是指能与一定量的抗 原发生肉眼可见的明显凝集（即“++”凝集）的血 清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量， 血清效价越高，所含抗体的量愈多。
医学微生物学实验
微生物学教研室
2011年5月
1
.
实验内容
录像：肠杆菌科 操作：肥达试验
2
.
目的要求
掌握肥达试验的原理、操作方法、结 果判断
3
.
肥达实验
【原理】
肥达试验（Widal test）是用已知的伤寒 杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原与 病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有 无相应抗体，根据抗体含量的多少以及增长情况，

肥达试验Widal test一种试管凝集反应，用于检测沙门杆菌感染。

用已知的伤寒杆菌O抗原、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原，与病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考肥达试验是一种试管凝集反应，最早由肥达（Widal）用于临床，故名。

用已知的伤寒杆菌O、H 抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与待测血清作试管或微孔板凝集实验,以测定血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。

原理伤寒杆菌有三种抗原：分别为菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）、体表抗原（Vi抗原）。

其中以O抗原及H抗原的抗原性较强，而Vi抗原的抗原性不强，且相应抗体效价低且为时短暂，随细菌的消除而消失，故不列为肥达试验的检测项目。

（但其检查有助于发现伤寒带菌者。

）当抗原遇到特异性抗体（抗O及抗H）时，便会发生凝集反应，通过对凝集物量多少来推算病人体内抗体的多少，以协助诊断、治疗及判断预后。

值得一提的是：由于检查抗体的肥达试验是一种间接诊断试验，故对结果的判断要综合分析。

肥达试验阴性，亦不能排除患伤寒的可能。

如有些伤寒患者，肥达试验始终阴性。

应用肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断。

其结果的解释必须结合临床变现和病程,病史,以及地区流行病学情况。

机体患伤寒、副伤寒，一般于发病后1—2周内血液中出现特异性抗体并且随着病程延长而效价渐升，此时即可为阳性，第4周可达峰值，以后又逐渐降低。

一般以“O”凝集效价在1/80或以上和“H”在1/160或以上为阳性。

O抗体主要是IgM，出现较早；H抗体主要是IgG，出现较晚。

根据此特点，肥达试验结果有如下诊断价值：二者均超过正常值，患伤寒的可能性大。

二者均在正常值内，患伤寒的可能性小。

H抗体效价超过正常值，O抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应。

O抗体效价超过正常值，H抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染。

一般间隔1—2周复查，若抗体效价比前次结果增高2—4倍，则具有诊断价值。

2. 第一组第一孔加诊断血清 0.2ml，混匀 ；从第一孔取 0.2ml
加入第二孔，混匀； 从第二孔取 0.2ml 加入第三孔，混匀；从第三
孔取 0.2ml 加入第四孔，混匀；从第四孔取 0.2ml 加入第五孔，混
匀；从第五孔取 0.2ml，弃在污物盆里 第 2,3,4 组各孔依次如此 。
3.第一组各孔加 0.2ml 的伤寒 H 菌 ，混匀。同法加第 2,3,4 组
肥达实验
实验原理：
肥达试验是用已知的伤寒杆菌 O、H 抗原和甲、乙型副伤寒杆
菌 H 抗原与病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有无相应
抗体，根据抗体含量的多少以及增长情况，可帮助诊断伤寒及副伤寒。
步骤：
1. 先取洗净晾干的 20 孔凹窝塑料板，分成 4 组，2 排一组，
每孔加生理盐水 0.2ml（编号、标记）
各孔分别加伤寒 O 菌、副伤寒甲、乙菌 0.2ml。
4. 第一孔贴标签，放一排，56℃水箱，孵育 30—60 分钟。
结果判断：
血 清640 1:1280 1:2560 对照
伤 寒 ++++ +++ +++ ++ + H
伤 寒 ++++ +++ ++ ++ + O
———
+ ——
副———————— 甲 副———————— 乙

肥达反应操作步骤
①取一支10 ml试管：4.75ml生理盐水
0.25ml 血清 5 ml（1：20倍）
②取口径一致的小试管5×5排列，第一横排每管加0.5 ml稀释好的血清①，5管共用去2.5 ml，剩余2.5 ml 稀释血清再补加2.5 ml生理盐水做倍比稀释（1：40）后加入第二横排；用同样方法稀释第三排、第四排。

③菌液稀释：在第五排试管中分别依次取
生理盐水2.25 ml
H、O、甲、乙、丙菌液0.25 ml 2.5 ml（1：10稀释菌液）
④取稀释10倍的菌液③0.5 ml加入第一（H）、第二（O）、第三（甲）、第四（乙）、第五（丙）竖排。

⑤第五排每管补加0.5 ml生理盐水作为空白对照。

⑥化验单上写上完成试验的时间，准确到分钟，混匀置37℃水箱24h看结果。

备注：最终浓度第一排（1：40）、第二排（1：80）、第三排（1：160）、第四排（1：320）；竖排分别为H、O、甲、乙、丙。

肥达氏反应肥达试验是一种试管凝集反应。

用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。

[项目名称]肥达氏反应
这项化验是检查患者是否被伤寒或副伤寒杆菌感染。

正常范围：0＜1:80 H＜1:160
A、B、C均＜1:80
检查介绍：本试验（又称肥达Widal试验）可协助诊断伤寒、副伤寒。

一般病人抗体多在发病后1周出现，以后逐渐上升。

临床意义：O、H凝集价均有增高者可诊断伤寒；O及A、B、C（其中之一项）凝集价增高时，可诊断甲、乙、丙的某一种。

最有意义者系其凝集价逐渐上升并超过参考值。

三、肥达反应
【原理】
肥达试验是一种试管凝集反应。

用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原，与病人血清作定量凝集试验，以测定患者血清中无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考。

寒杆菌H菌液0.5ml；
5.加完菌液后，振荡试管架，混匀，置于56℃水浴箱2~4小时，放冰箱过夜，或放置37℃水浴箱18小时后观察结果
肥达氏反应操作表单位:ml
【结果与分析】
先观察对照管，正确结果应无凝集现象，再观察各试验管的凝集现象，凝集程度以“ ”多少表示之。

（）最强，上液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。

（）强，上液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。

（）弱，上液混浊，细菌少部分凝集。

既。