-精品- 【跑电泳的步骤】
1、取出电泳仪器和四个烧杯；
2、将超纯水倒入烧杯中，保鲜膜封口；
3、配制过硫酸铵溶液（AP）：0.1gAP+0.9g超纯水，保鲜膜封口；
4、取出所有药品。Tris-HCL(88,6.8)，TEMED，SDS，Acry-bis，按次序排好；
5、拿卷纸平铺，移液枪枪头：三个蓝，两个黄，一个白，移液枪3只；
6、先配分离胶
7、组装凝胶模具，插好板
（1）海绵用自来水润湿，插在下面槽里；
（2）板：Bio-Rad前后玻璃板，注意前后顺序，夹子夹好，塞枪头于夹子上。
8、配胶见配方， 用2号蓝混匀所有试剂；
9、加液至支架上方， 用超纯水液封（不能用气泡）；
10、待界面清晰后，用滤纸将水吸干；
11、配浓缩胶；
12、插梳子：一个个斜着插，有字面朝向我；
13、拔下梳子，转移（有字朝里，白色架子垫黄纸，将玻璃板卡在绿卡下面，不要有空隙，装去离子水，不能漏（1h），等待。），样品煮沸3分钟；
14、用10uL移液枪移液，移液，每个依次加入梳槽内；
15、电压（浓缩胶）90V，电流20mV；
16、盖上盖子：红对红，黑对黑；插上电源插头：红对红，黑对黑。
【附配方】
分离胶 separating gel (5mL) ( 1个板3.5mL) 1板 2板
-精品- Prescription 12% 10% 7.5% 3.5 mL 7.0 mL
Del H2O 1.6 mL 1.9mL 2.3 mL 1.3 3mL 2.66mL
1.5M Tris-HCL pH8.8 1.3 mL 1.3 mL 1.3 mL 0.91 mL 1.82 mL
30%Acry/bis
单体胶（29.2g+0.8g/100mL） 2 mL 1.7 mL 1.3 mL 1.19mL 1.38 mL
10%SDS 50uL 50uL 50uL 35uL 70uL
10%AP 50uL 50uL 50uL 35uL 70uL
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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
1. 引言
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是一种常用的蛋白质分离和分析方法。通过SDS（十二烷基硫酸钠，Sodium
Dodecyl Sulfate）将蛋白质变性并赋予负电荷，在凝胶电泳中，根据蛋白质的分子量大小，使蛋白质在电场中向阳极方向运动，从而实现蛋白质的分离。
SDS-PAGE广泛应用于蛋白质的分子量测定、复杂蛋白质混合物的分离、蛋白质组学研究等领域。它具有简单易行、高分辨率、高灵敏度以及可以与其他技术（如质谱、Western blot等）结合等优点。
本文将介绍SDS-PAGE的原理、实验步骤和关键注意事项，并提供相关的Markdown文本格式输出，以便读者在实验中参考。
2. 原理
SDS-PAGE的原理基于SDS的作用。SDS是一种带有负电荷的表面活性剂，能够使蛋白质在水溶液中均匀地带上负电荷，同时使蛋白质变性并展开成线性构象。在电泳过程中，SDS包未知驱动探索，专注成就专业
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裹在蛋白质中，使蛋白质的电荷密度保持均一，从而使蛋白质的迁移速率仅与蛋白质的分子量有关，而与蛋白质的电荷无关。
SDS-PAGE通常在聚丙烯酰胺凝胶上进行。聚丙烯酰胺是一种化学稳定性强的凝胶材料，通过聚合物的交联形成网状结构。在凝胶电泳过程中，根据蛋白质分子量的不同，蛋白质能够在凝胶孔隙中以不同程度的速率迁移。
3. 实验步骤
3.1. 制备凝胶
1. 准备1.5 M的Tris缓冲液，pH 8.8。
2. 准备汀凝胶的原液，将30%丙烯酰胺溶液、1.5 M
Tris缓冲液和10%过硫酸铵按照体积比例（29:1:10）混合均匀。
3. 快速加入TEMED（N,N,N’,N’-四甲基乙二胺）溶液至原液中，并迅速倒入凝胶模具中。
4. 在凝胶模具上方加入异丙醇以防止凝胶表面生成凝胶。 未知驱动探索，专注成就专业
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3.2. 样品处理
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定方案
步骤：
（1)先把垂直平板电泳槽和两块玻璃板洗净，晾干，两边用夹子夹住，装好。
（2)琼脂的加入
将1.5%的琼脂融化，趁热用吸管吸取热的1.5%琼脂沿电泳槽的两边条内测加入电泳槽的底槽中，封住缝隙，待琼脂凝固。
（3)分离胶的灌注
将加入TEMED后制成的分离胶立即混合均匀，然后用滴管吸取分离胶，浇灌到电泳槽的量玻璃板之间，留出梳齿的齿高加上1—1.5cm的距离，高度大约达电泳槽高度的2/3左右，再用滴管小心地在其上面覆盖一层重蒸水，将电泳槽垂直静止于室温下约30—60min,待分离胶聚合完全后，用滤纸尽可能的吸去上面的水，尽可能的干净。
（4)浓缩胶的灌注
将加入TEMED后制成的浓缩胶在试管中立即混合均匀，灌注在分离胶上，小心的插入梳尺，避免气泡，带浓缩胶凝聚完全后，将梳齿小心拔出，用电泳缓冲液立即冲洗孔格数次，待孔格凝固完全。
（5)用微量注射器按号向凝胶梳孔内加样,上面加20%甘油1滴，溴酚蓝指示剂1滴，再用滴管小心加入少量电极缓冲液，使充满梳孔。
（6)电泳
将电极缓冲液分别接入上下电泳槽，接上电泳仪，上电极接负级，下电极接正极。打开电泳仪开关，调节电压至300V，电流至20—30mA，并保持电流强度恒定。待蓝色的溴酚蓝条带迁移至距离凝胶下端约1cm时，停止电泳。
（7）染色和脱色
小心将胶取出，置于一大培养皿中，在溴酚蓝条带的中心插一细钢丝作为标志。加染色液染色1h，倾出染色液，加入脱色液，数小时更换一次脱色液，直至背景清晰。
（8）相对分子质量的计算
用直尺分别量出标准蛋白质、待测蛋白质区带中心以及钢丝距分离胶顶端的距离，按下式计算相对迁移率：
样品迁移率距离（cm）
相对迁移率=----------------------
染色迁移距离（cm）
分离胶；一块胶配5mL
每一块胶需要约4mL, 留出约2-3cm的距离，用水封口，防止空气接触。室温放置30min后，可以看到水和胶的界面重新出现。弃去上层水，倒入凝缩胶。
凝缩胶：一块胶配2mL
10%(W/V)过硫酸铵
1 称取1g APS
2加入10mL去离子水
3储存于4℃可使用两周时间，过期失去催化作用。
5* Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)
1.
Tris 15.1g
Gly 94g
SDS 5g
2加入800mL去离子水，搅拌溶解
3定容至1L，室温保存。
5*SDS-PAGE Loading Buffer
1.10ml 离心管
1M Tris-HCl (pH6.8) 1.25mL
SDS 0.5g
BPB 25mg
甘油 2.5ml
2加去离子水溶液后定容至5mL
3小份（500uL/份）分装后，于室温保存
4使用前将25uL的2-ME加到每小份中
5加入2-ME的Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右。 Resolving Gel 6% 8% 10% 12% 15%
5mL 10mL 5mL 10mL 5mL 10mL 5mL 10mL 5mL 10mL
H2O 2.6mL 5.3mL 2.3mL 4.6mL 1.9mL 4mL 1.6mL 3.3mL 1.1mL 2.4mL
