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核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用

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核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用

吴洪明

【摘 要】目的:探讨核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用及存在的问题.方法:对2016年3月-2017年3月本血站采用ELISA进行检测后,对检测结果为阴性的无偿献血血液标本进行HIV、HBV、HCV核酸检测,分析检测结果,以了解核酸的检出率和阳性标本的感染性.结果:对21214例血液标本进行筛查,HBV-DNA阳性标本的共有70例,阴性标本共有21144例,阳性率为0.329％,本次血液标本中未发现HCV RNA、HIV-RNA.结论:核酸检测技术应用于基层血站的血液筛查,能够有效提高对血液传播性疾病的筛查水平,配合相关血清学检测,可显著提高临床用血的安全性.

【期刊名称】《医学理论与实践》

【年(卷),期】2018(031)001

【总页数】2页(P111-112)

【关键词】核酸检测;基层血站;血液筛查;ELISA;血清学检测

【作 者】吴洪明

【作者单位】福建省莆田市中心血站 351100

【正文语种】中 文

【中图分类】R446.6

临床常用的检测血液标本的筛查方法为血清学检测和核酸检测[1]，筛查血液疾病病原体对于提高用血安全、预防血液传播性疾病、提高血液制品的安全性方面有重要的意义。我国通常采用ELISA(酶联免疫法)联合乙肝五项等血清学检测[2]，但诸如隐匿性感染、窗口期感染等因素的影响，可能产生部分假阳性或假阴性结果，造成了输血传播性疾病的风险有所增加，特别是间接检测的标志物，其检测窗口期的时间较长，例如免疫滴度、病毒变异等因素难以被消除，血液传染性疾病仍然不时有发生，而NAT(核酸检测技术)作为一种直接检测的标志物[3，4]，能够直接对病原体基因进行检查，且其敏感性高、特异性强，能够有效缩短窗口期的时间，对感染的情况进行明确，进而提高了血液制品的使用安全，本站对2016年3月—2017年3月开展的核酸检测技术情况进行汇报如下。

1 材料和方法

1.1 材料来源 选取本站2016年3月—2017年3月采集到的21 214例无偿献血者的标本，所有献血者的筛选均符合卫计委《献血者健康检查要求》的标准，献血者的年龄在18～55岁，排除HBsAg阳性、ALT>50U/L的血液标本，每位献血者均采集2管血液，其中1管血液量为5ml，用于NAT的监测，1管血液量为5ml，用于ELISA监测和保存，所有血液标本均保存于2～8℃的环境中，在采血后的4h内，在正常室温环境下，1 600g离心20min，待分离出血浆后，放入2～8℃的环境中，核酸标本在72h内完成检测工作。

1.2 仪器与试剂 检测设备厂家名称:上海浩源生物科技有限公司;试剂名称:乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(1型)，核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)批号:MF20160102,MF20160411,MF20160512,MF20160713,MF20161016。

1.3 监测方法 (1)对所有采集到的血液标本选取两种不同厂家的酶免试剂进行两次检测，监测HBsAG、抗-HCV、抗-HIV-1/2，选取对两种试剂均为阴性或其中一种试剂为阴性的标本进行核酸检测。我站使用ChiTaS1200汇集和核酸提取设备,ABI 7500荧光PCR仪检测仪器，每8份样本纳入混样检测，每份样本中含有200μl的血浆，将其放置在标记好的POOL中，并使用全自动混样仪进行加样处理，POOL在ChiTaS1200汇集和核酸提取设备核酸提取仪中提取核酸，扩增仪检测HBV、HCV、HIV的靶序列，用系统自带的PDM服务器对结果进行读取，若POOL存在反应性，则对阳性的POOL进行拆分实验，若拆分实验仍为阳性，则说明核酸检测结果为阳性；若拆分实验的结果为阴性，则说明核酸检测结果为阴性。(2)对NAT检测为阳性，系统会自动鉴别出HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA的分项确诊结果。(3)若NAT检测为阳性，且分项确诊为HIV-RNA阳性的样本，则再次进行ELISA检查，并在1个月后再次采集该献血者的血液标本，送至莆田市疾病预防控制中心进行确认试验。

1.4 统计学方法 统计分析利用SPSS18.0软件，χ2 检验用于对研究中率的比较，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

对21 214例血液标本进行筛查，HBV-DNA阳性标本的共有70例，阴性标本共有21 144例，阳性率为0.329%，本次血液标本中未发现HCV-RNA、HIV-RNA。

3 讨论

核酸检测技术全称为核酸扩增检测技术[5]，不同于以往的间接检测，核酸检测技术是利用分子诊断技术，直接对病原体核酸进行检测的技术，其具有高敏感性和高特异性的特点，即使只有微量的核酸在样本中，也能够被检测到，有效缩短了窗口期的时间。本组NAT的阳性筛查率为0.329%，高于南昌血液中心的0.173%[6]，武汉血液中心的0.123%[7]。本组结果高于其他地区，具体原因分析如下：(1)由于本地区对核酸检测技术的工作开展时间尚短，前期可能存在工作人员对于仪器的使用、工作的流程和相关注意事项不熟悉的情况，有可能因人为因素造成本次结果中出现阳性率偏高的情况，随着该技术的不断应用，人为因素造成的高阳性率将进一步下降；(2)受到人群分布和地域因素的影响，导致各地区的样本差异较大；(3)本文使用的仪器来源于上海浩源生物科技有限公司，对于检测环境、工作人员、设备保养等方面的要求较高，不排除是因不同地区的不同检测仪器造成的检测结果差异性，如国产仪器和进口仪器之间的检测结果就存在差异性，具体是主观因素还是客观因素造成的影响，仍然有待进一步的考证。在21 214份样本中，未检测出HCV/HIV，可能与ELISA的高灵敏度有关，一项大型研究显示，HCV的残余风险率为0.002 3%，说明血清学对于筛查HCV方面有很高的保障，对于排除抗-HCV漏检的血液标本，ALT的筛查作用显著，本次未检测出HIV,考虑原因主要为样本量不足所造成。血液标本的安全性在临床用血安全方面有重要意义，目前的技术来说，仅仅通过血清学检测HBsAg,抗HCV,抗HIV阴性，并不能够排除未受到病毒感染，最大的风险在于“窗口期”，而核酸检测技术联合免疫筛检技术能够有效的解决“窗口期”的问题，缩短“窗口期”的时间，提高检出率[8，9]，本次研究结果显示，核酸检测联合ELISA检测筛查阳性率为0.329%，核酸检测技术主要指向为HBV-DNA、HIV-RNA、HCV-RNA，而ELISA主要指向为抗原、抗体，因此核酸检测技术与酶联免疫检测能够互补有效。

综上所述，利用核酸检测技术，提高HBV-DNA的检测灵敏度，应用于基层血站的血液筛查，能够有效提高对血液传播性疾病的筛查水平，配合相关血清学检测，可显著提高临床用血的安全性。总之，核酸检测技术在基层血站中的应用有重要意义，能够作为ELISA等检测方法的补充，降低漏检率，提高用血安全。

参考文献

[1] 郭超群,李运琴,来祝稟.基础血站开展核酸筛查的必要性及可行性分析〔J〕.医药前沿,2014,3(9):84-85.

[2] 瞿文金,陈秀琼,邓丽娟,等.分析血站开展血液核酸筛查的必要性及可行性〔J〕.临床医药文献电子杂志,2015,12(2):374-375.

[3] 刘文,李东.核酸检测技术与血液安全〔J〕.山西医药杂志,2016,45(12):1468-1469.

[4] 曹志刚，李霜云.核酸检测技术在襄阳地区献血筛查中的应用分析〔J〕.临床输血与检验,2013,15(2):150-151.

[5] 邹峥嵘,周国平,郑岚,等.上海血站血液核酸检测确认工作初探〔J〕.中国输血杂志,2013,26(9):813-815.

[6] 徐晶.核酸检测技术在南昌地区无偿献血血液筛查中的应用〔J〕.实验与检验医学,2012,31(5):437-438.

[7] 余谨,毕昊,陆华新,等.核酸检测技术在酶联免疫吸附法漏检HIV和HBV血样筛查中的应用〔J〕.国际检验医学杂志,2012,33(8):964-965.

[8] 胡越,高犁,蒋瑞馨.核酸检测技术在无锡市献血筛查中的应用分析〔J〕.检验医学与临床,2016,13(s1):216-218.

[9] 秦龍丽,潘登,戴田,等.血站核酸实验室质量监控及分析〔J〕.中国卫生检验杂志,2017,21(5):307.

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核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用

核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用

一　ｌ　血液质量　

Ｂｌｏｏｄ　０ｕａｌｉ　

《中国卫生质量管理》第１９卷第４期（总第１０７￣）２０１２年【Ｊ７月　

核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用　

孙振秀　许　雷　杨忠思　刘晓华　

【摘要】从建立ＰＣＲ标准化实验室，制定标准操作规程；强化人员培训；正确选择设备设施，做好校准、维护与保　养；选择合格的实验耗材；制定严格的防污措施，做好环境质控；做好检测环节质控；确保记录完整等方面，总结了核酸扩　

增检测技术在血液筛查中的应用实践。　

【关键词】　核酸扩增检测技术；聚合酶链式反应（ＰＣＲ）；实验室　

Ｔｈｅ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｔｅｓｔ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｉｎ　Ｂｌｏｏｄ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ／ＳＵＮ　Ｚｈｅｎｘｉｕ，ＸＵ　Ｌｅｉ，ＹＡＮＧ　

Ｚｈｏｎｇｓｉ，ｅｔ　ａ１．／／Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２０１２，１９（４）：７８—８Ｏ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｐａｐｅｒ　ｓｕｍｍｅｄ　ｕｐ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　ＮＡＴ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ａｓｐｅｃｔｓ：ｔｈｅ　ｅｓｔａｂ—　

ｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＰＣＲ　ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｏｐｅｒａｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ；ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ　ｐｅｒｓｏｎｎｅｌ　ｔｒａｉｎｉｎｇ；ｔｈｅ　ｃｏｒ—　

ｒｅｃｔ　ｃｈｏｉｃｅ　ｏｆ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｆａｃｉｌｉｔｉｅｓ，ａｎｄ　ｔｏ　ｍａｋｅ　ｉｔｓ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ；ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕａｌｉｆｉｅｄ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｓｕｐｐｌｉｅｓ；　

ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｔｒｉｃｔ　ａｎｔｉ—ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ　ｍｅａｓｕｒｅｓ，ｇｏｏｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ；ｐｅｒｆｏｒｍｉｎｇ　ｔｅｓｔ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ：ｅｎｓｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｎ—　

传染病检测技术在血液筛查中应用的现状

传染病检测技术在血液筛查中应用的现状

传染病检测技术在血液筛查中应用的现状

北京市红十字血液中心 邱艳

一、 血液筛查的发展历史

（PPT1）从血液筛查的发展历史可以看到，在二十世纪60年代，输血传染病高达25%。1970年发现了乙肝表面抗原，然后对其进行检测，输血后的感染率降到10%。1980年检测艾滋病病毒后，输血感染率继续下降，随后检查抗核抗体、丙肝等，输血感染率降到很低。

（PPT2）显示的是输血传染病的检测方法，1970年采用颗粒凝集法，1980年采用ELISA酶联免疫法，1990年采用化学发光法，目前多采用核酸法。

目前，输血感染率的残余风险逐渐降低，2001年达到百万分之几的概率。

二、HIV感染诊断

（一） HIV 感染诊断实验的种类

1. 抗体检测实验

间接酶联法测抗体 , 直接 ( 双抗原夹心 ) 法测抗体 , 快速诊断法检测抗体抗体确认试剂 , 其他抗体检测试剂。

2. 抗原检测实验：主要是检测 P24 抗原。

3. 抗原和抗体联合检测实验：与 ELISA抗体检测兼容性良好，成本低。

4. 核酸检测实验：核酸定性和定量检测实验。

（二）HIV检测的标记物

PPT6显示的是HIV的不同标志物。HIV感染后的10天以内是窗口期，不能检测出病毒。约5天后会出现P24抗原，即病毒核酸RNA复制，随后机体的免疫系统对其进行识别，会产生IgG、IgM。四十天后，会出现IgG抗体。这些标志物中，只有IgG抗体是稳定的。

（三） HIV 抗体检测方法

1.酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA） ELISA最早用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测。

2.抗体确证实验

3.其他类抗体检测试验

（四）抗 -HIV EIA 检测试剂的发展

第一代是HIV-1病毒裂解产物，检测类型是IgG类抗体。第二代是HIV-1+2人工合成肽，检测类型是IgG类抗体。第三代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体，把窗口期缩短到三周。第四代是HIV-1+2基因重组，利用双抗原加锌法，检测IgG、IgM抗体与抗原，把窗口期缩短到两周。现在又加入核酸，可以缩短到一周之内，越来越安全。

献血人员血液筛查中核酸检测技术的应用

献血人员血液筛查中核酸检测技术的应用

２０１７年第４卷第１５期　２０１７　ＶｏｌＪ４　ＮＯ。１５　临床医药文献杂志　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　２８５１　献血人员血液筛查中核酸检测技术的应用　阿不都外力・阿巴拜克力，吕　萍　（新疆喀什地区中心血站检验科，新疆喀什８４４０００）　【摘要】目的分析核酸检测技术（ＮＡＴ）应用于献血人员血液筛查中的效果。方法选取２０ｌ４年ｌ２　月￣２０１６年ｌ１月本血站献血者的血液标本１０００例作为研究对象，利用酶联免疫吸附法对全部研究对象实施相　关检测．分析检测结果。结果全部标本ＨＢＶ／｝王ｃｖ／ＨＩｖ－１联检初筛阳性标本有５２份，ＮＡＴ阳性且ＥｕｓＡ检验　阴性有ｌ１份。鉴别检验联检初筛阳性标本ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性２例，ＨＩｖ．１ＲＮＡ阳性１例，ＨＣＶ－ＤＮＡ阳性０例。结　论核酸检测技术能够有效减少献血者感染窗口期和隐匿感染献血导致的疾病传播，提高输血安全性。　【关键词】献血人员；血液筛查；核酸检测技术　【中图分类号】Ｒ４４６．６　【文献标识码】Ｂ　【文章编号】ＩＳＳＮ．２０９５．８２４２．２０１７．１５．２８５１．０２　对献血人员进行血液筛查，主要为了保证血制品安　全、确保血液安全。检测常用的方法是酶联免疫吸附法　（ＥＬＩＳＡ），其检测得到的结果为抗原抗体，不过因为感　染有较长的窗口期、病毒会发生变异，可能存在隐匿性感　染，所以临床输血的安全仍无法足够保证＿】　】。本研究主要　分析核酸检测技术应用于献血人员血液筛查中的效果。　１材料与方法　１．１标本　选取２０１４年１２月￣２０１６年１１月本血站献血者的血液标本　１０００例作为研究对象。　１．２试剂　仪器　Ｐｒｏｃｌｅｉｘ　ＴＩＧＲＩＳ　Ｓｙｓｔｅｍ检测系统（盖立复医药咨询公　司）；Ｕｌ　ｏ｝玎ｖ－ｌ／｝王Ｃ、，肥　８试剂及其配套的鉴别试剂。　１．３方法　选取每名献血者５　ｍＬ静脉血放置在分离胶抗凝试管　中，６小时内进行１５分钟离心处理，速度为３０００　ｒ／ｍｉｎ，选取　上清液放在２～８℃冰箱中保存，２天之内放到实验室进行抽　提、扩增以及检测。测试步骤共分３个，第一，经特异性目　标捕获法从标本中将病毒核酸完成分离；第二，经ＴＭＡ法　扩增目标核酸片断；第三，通过杂家保护法对扩增产物实　施检测。阳性标本经Ｐｒｏｃｌｅｉｘ　ＴＩＧＲＩＳ　Ｓｙｓｔｅｍ检测系统联检试　剂检测出来后，经乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒　（ＨＣＶ）、人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）鉴别试剂开展　鉴别，对导致反应的病毒进行分辨。鉴别试验步骤等同于　联检，联检阳性标本置入零下２０℃的冰箱中保存，间隔一　６３．９３％且抗凝药物使用率为４５．６６％，与不伴房颤患者差异　有统计学意义；且伴房颤的缺血性脑血管病疾病患者的致亡　率、致残率以及复发率都明显较高，由此可见伴房颤的缺血　性脑血管病患者年龄高、多为女性，容易造成神经损害，引　发并发症，且预后结局不理想，具有较高的死亡率。　综上所述：伴房颤的缺血性脑血管病患者年龄高、女　性比例大，神经功能损害严重，且容易诱发多种合并症，　患者出院后多应用抗凝药物，但患者的预后较差，死亡　率、致残率和复发率显著较高。　个星期开展一次鉴别试验。　２结果　‘　２．１检验结果　全部标本ＨＢＶ／ＨＣＶ／ＨＩＶ－１联检初筛结果为阳性的标本　共有５２份，ＮＡＴ阳性且ＥＬＩＳＡ检验阴性的共有１１份标本。　鉴别检验联检初筛阳性标本，结果发现ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性患者　有２例（０．２％），ＨＩＶ－１ＲＮＡ阳性患者有ｌ例（０．１），ＨＣＶ－　ＤＮＡ阳性患者有０例。１１份为ＮＡＴ阳性且ＥＬＩＳＡ阴性标本，　诺华鉴别试剂鉴别率为５５％左右，所以仅有６份标本具备鉴　别结果。　２．２　ＨＩＶ－１ＲＮＡ阳性患者检测情况　１份ＨＩＶ．１ＲＮＡ阳性标本的对应献血者记录显示献了　４００　ｍＬ全血，献血后第二天利用ＥＬＩＳＡ方法检测这一标本　ＨＩＶ抗体／抗原＋抗体都显示阴性，核酸检￣ＨＩＶ－ＩＲＮＡ结果　都显示阳性。一周后对该献血者的全血标本进行再一次抽　取，进行核算检查结果仍然是阳性，ＥＬＩＳＡ检验显示弱阳　性。后该血液标本经免疫印迹法（ＷＢ）确诊为疑似ＨＩＶ－Ｉ　阳性，最后经市疾控中心利用ＷＢ法确诊为ＨＩＶ＝１阳性。　３讨论　在血液检验中采取酶联免疫吸附法法进行能够对血液　中的抗体以及抗原进行检测，不过如果献血者存在隐匿性　感染或者在处于感染窗口期这一阶段献血，受血者在接受　输血后可能会出现肝炎病毒以及ＨＩＶ感染［３】。国外有研究显　示，美国超过９０％的由于输血导致ＨＢＶ以及ＨＩＶ传播感染　参考文献　［１］　朱胜春．伴或不伴房颤急性缺血性脑卒中临床特征分析［Ｊ］．浙江　医学，２０１６，３８（８）：５８０—５８２．　【２】　李姝雅．伴房颤的缺血性脑血管病患者的临床特点及预后的研　究【Ｄ】．首都医科大学，２０１　３．　［３１　刘晓利，郭珍立，李平．非瓣膜性房颤患者合并脑卒中的临床特　点和危险因素分析【Ｊ］．实用临床医药杂志，２０１６，２０（９）：１６２—１６３．　

基层血站核酸检测所面临的困惑

基层血站核酸检测所面临的困惑

基层血站核酸检测所面临的困惑

近年来，随着我国科学技术的不断发展和进步，我国生化分析、检测水平也随之不断提高，有效降低了采供血机构工作过程中的风险事件发生率。但由于采用酶联免疫吸附检测方法（ELISA）检测血液病毒抗原的窗口期较长，在一定程度上增加了血液感染病毒发生“窗口期”感染的几率，易引发病毒变异、免疫沉默性感染和病毒滴度低等问题，影響基层血站工作的安全性。如何有效缩短血液感染病毒的检测窗口期，已成为现阶段我国医疗领域生化检测、分析工作人员的重点研究问题。

标签：基层血站；安全性；核酸检测；困惑

近年来，越来越多的国内外实践研究将核酸扩增检测技术（NAT）应用于基层血站的血液生化分析中。实践应用发现，核酸扩增检测技术能够显著缩短血液感染病毒的检验窗口期，有效降低经临床输血传播病毒的风险性，提高临床用血的安全性。但由于核酸扩增技术的引入成本较大，我国多数基层血站因自身资金运行问题，无法将这项利国利民的检测技术引进[1]。这一现状在较大程度上阻碍了我国基层血站的发展。本文分析了现阶段我国基层血站核酸检测所面临的困惑，并提出了几点解决困惑的对策，现做出以下综述。

1 基层血站核酸检测的基本原理

核酸检测技术是对一系列检测病毒核酸技术的总称。该种检测技术在基层血站血液感染病毒检测工作中的应用，是使用一些化学方法、物理方法和生物方法，通过靶位核酸直接扩增或扩增后附带其他信号的方法，将血液中看不见的极微量核酸转变成直观的光电或可视信号，在由专业的生化检测分析人员对血液标本中是否存在相应的抗原进行判断[2]。

2 核酸检测在基层血站中的应用

核酸技术在我国基层血站中的应用起步较晚，我国对于该种检测技术的应用尚不成熟，为确保检测结果的准确性，基层血站引进及应用核酸检测技术，应做到以下几点：

2.1合理设置核酸检测实验室

基层血站引进核酸检测技术，首先应建立符合检测标准的检测实验室，做好相关检测人员的职业技能培训，并规范核酸检测流程。核酸检测实验室的建立应制定严格的检测操作规范和严格的防污染措施，避免检测实验室内发生检验样品交叉感染和扩增物交叉感染。选择核酸检测设备和试剂时，应以自动化程度高、特异性良好、操作方便、检测灵敏度高的设备和试剂为首选。