两种不同方法检测甲胎蛋白的比较
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两种不同方法检测甲胎蛋白的比较
发表时间：2012-10-09T10:39:12.860Z 来源：《医药前沿》2012年第13稿 作者： 扈晓晴
[导读] 所以，试剂的线性及标准问题是测定结果准确性的关键。
扈晓晴
（南雄市人民医院检验科 广东南雄 512400）
【摘要】目的 探讨研究酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光分析法(ECLIA)对甲胎蛋白(AFP）检测的效果。方法 对65例血清标本同时
采用ELISA 和ECLIA方法进行AFP检测，并对同一标本连续测定20次进行批内变异的比较，同时对标本每天测定1次，连续测定20天进行批
间变异比较。评价两种方法的稳定性、敏感性及重复性。结果 ECLIA其检出限为0.50μg /ml，线性范围为0.50μg /ml～ 3 000μg /ml；当
AFP<400μg/ ml时，ELISA和CL对AFP检测敏感性差别无统计学意义；当AFP>400μg/ ml时，ECLIA检测敏感性高于ELISA，P ＜0.05，有统计学差异；ECLIA低、中、高值批内和批间CV均小于5，较ELISA重复性好、稳定性高。结论 ECLIA敏感性高、稳定性、重复性好。
【关键词】 甲胎蛋白 电化学发光分析法 酶联免疫吸附法
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2012）13-0280-02
Two different methods for the detection of alpha-fetoprotein comparison. Hu xiao-qing, The People's Hospital Laboratory of Nanxiong,
Nanxiong Guangdong，512400 China. 【Abstract】 Objectives Study of ELISA and ECLIA on alpha-fetoprotein( AFP ) detection effect.Methods On65 serum specimens from
patients with ELISA and ECLIA methods for AFP detection, and determination of the same specimen consecutive 20times within a batchvariability compared to specimens were measured every day,1 times,20 days of continuous determination of interassay variationcomparison. Evaluation of two methods of stability, sensitivity and reproducibility.Results ECLIA the detection limit is0.50μg / ml, linear in
the range of 0.50μg / ml ～3000μg / ml; when AFP <400μg / ml, ELISA and CL on AFP detection sensitivity difference was notstatistically significant; when AFP >400μg / ml, ECLIA detection sensitivity is higher than that of ELISA, P < 0.05, with statisticaldifference; low, high value of ECLIA, intra and inter CV were less than 5, is ELISA good repeatability, high stability.Conclusions ECLIAhigh sensitivity, stability, good repeatability. 【Key Words】 AFP ECLIA ELISA
甲胎蛋白(Alpha fetal protein, AFP）是1956年Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现的一种单一多聚体肽链的糖蛋白，其分子量平均为68000[1]，系肝细胞内粗面内网核糖颗粒所合成，在胎儿血清中正常存在的一种特殊蛋白，正常成人肝细胞失去合成AFP的能力。
AFP是原发性肝细胞肝癌的最灵敏、最特异的肿瘤标志物（tumor markers,TM）。为了探讨酶联免疫吸附法(ELISA)、电化学发光分析法
(Electro-chemiluminescence immunoassay，ECLIA) 对AFP检测的稳定性、敏感性及重复性，对65例血清标本AFP含量进行了ELISA及
ECLIA检测，现报道如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 收集2011年2月～2012年1月住院及门诊患者65例的血清标本，做为AFP含量测定的研究对象。其中男性18例，女性47名，年龄31～74岁，平均（42.3±6.8）岁。
1.2仪器和试剂 ELISA采用We Scan MK-2酶标仪、深圳PW-812全自动酶标洗板机进行ELISA检测，其试剂为郑州安图绿科生物工程有限公司甲胎蛋白诊断试剂盒；ECLIA选用德国ADVIA Centaur CP全自动ECLIA分析仪及配套试剂、定标液和质控品。使用时均严格按照
分析仪和试剂盒的质控说明书操作。对同一标本连续测定20次进行批内变异的比较，同时对标本每天测定1次，连续测定20天进行批间变
异比较。
1.3统计学方法 所得数据均采用SPSS 13.00软件包进行统计处理，计量比较进行t检验，计数资料进行χ2检验，P＜0.05，为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 ECLIA标准曲线和灵敏度 分别取0μg /ml、50μg /ml、100μg /ml、200μg /ml、400μg /ml等5个点，根据实验步骤测定发光强度的变化，绘制标准曲线(见图1)。其检出限为0.50μg /ml，线性范围为0.50μg /ml～ 3 000μg /ml。
2.2重复性和稳定性比较 对低、中、高三种混合血清(140.9 μg/ml，348.6 μg/ml，951.7 μg/ml)分别重复测定20次,计算变异系数CV。
ECLIA低、中、高值批内CV分别为3.2 、2.1 、1.3；批间CV 分别为4.5 、2.9 、1.6，较ELISA重复性好、稳定性高。见表1。
表1 ECLIA和ELISA检测重复性和稳定性比较
浓度 μg/ml ECLIA ELISA
批内 批间 批内 批间 140.9 3.2 4.5 5.1 4.9 348.6 2.1 2.9 3.1 5.7 951.7 1.3 1.6 4.0 6.1
2.3敏感性指标 ELISA和 ECLIA检测敏感性比较。见表2.
表2 ELISA和 ECLIA检测敏感性比较 AFPμg/ml ELISA ECLIA
＜20 13 NS 20-400 36 33
＞400 4 16
NS= no significance
由表1见当AFP<400μg/ ml时，ELISA和CL对AFP检测敏感性差别无统计学意义；当AFP>400μg/ ml时，ECLIA检测敏感性高于
ELISA，P ＜0.05，有统计学差异。
3 讨论
肿瘤标志物是肿瘤组织和细胞由于其癌基因异常表达所分泌的、存在于肿瘤组织及全身血液和体液中的浓度明显高于正常值的一类物质。随着医学检验的发展，血清肿瘤标志物日益受到医学界的广泛重视。其含量的检测是一项非侵袭性检查方法，成为肿瘤患者早期诊断
的重要辅助检查手段之一，故肿瘤标志物测检方法的敏感性、稳定性和重复性对早期肿瘤的筛查和诊断至关重要[2]。
甲胎蛋白（AFP）被公认为是诊断原发性肝癌的重要肿瘤标志物[3]。血清中AFP含量的测定是诊断原发性肝癌(PHC)和判断预后的重要指标，同时还可以鉴别肝脏良、恶性病变或对高危人群进行随访，以提高肝癌的早期诊断率。目前AFP常用的检测方法主要包括酶联免
疫吸附法(ELISA)、放射免疫(Ridioimmunoassay，RIA)、ECLIA。RIA虽具备高敏感性但是检测耗时长，而且容易造成污染[4]。ELISA法
定量AFP以快速、简便、成本低廉的优点在基层广应用。但由于ELISA法的“钩状效应”，即测定显色随着待测标本中抗原浓度的增加而升高
至一定程度后，测定吸光度随抗原浓度的增加而开始下降至不显色，同时受人工操作影响等问题的影响，使检测敏感性、准确性以及稳定
性方面不好控制[5]，容易造成假阴性结果。所以，试剂的线性及标准问题是测定结果准确性的关键。
ECLIA结合了电化学发光与免疫测定的优势，具备快速、精确、而且检测全过程在一个全封闭的反应体系中全自动进行，避免了人为操作的影响[6]。本文采用ECLIA检测AFP，在AFP<400μg/ml时，ELISA和ECLIA检测法对AFP的检测敏感性的差别无统计学意义，当
AFP>400μg/ml时, CL敏感性好于ELISA，两者差别具有统计学意义（P <0.05）。其检出限为0.50 ng/ml，线性范围为0.50μg/ml～ 3
000μg/ml。ECLIA检测标准曲线可以稳定大约20天，无需每批检测都需要重新制作检测标准曲线，批内和批间CV均小于5，提示具有较好的重复性和稳定性。
综上所述，ECLIA应用实现了免疫测定的自动化，与ELISA 比较，有特异性好、灵敏度高、线性范围宽等优点，值得临床推广
参考文献
[1]林英，柳丽娟，林秀珍.荧光酶免定量测定甲胎蛋白的临床评价[J].国际检验医学杂志,2006,27（2）：182-184.
[2]黄延平.电化学发光免疫分析(ECLIA)检测甲胎蛋白(AFP)对原发性肝癌的临床诊[J].中国民康医学，2010，22(9)：1127. [3]Wiwanitkit V. Alpha fetoprotein for screening for hepatocellular cancer in populations with viral hepatitis B: an appraisal of Thaireports[J].Asian Pac J Cancer Prev, 2005,12(6):535.
[4]高银河, 任忠良, 孟昭歧.生化检验血液标本室前质控不容忽视[J].陕西医学检验,，2000, 15 (4) :49.
[5]马洪滨,徐军,史佳彬,等.4种AFP定量测定方法的比较及临床应用评价[J].中国卫生检验杂志，2006，12（8）：231-233.
[6]谢跃文，王强，夏洁，等.电化学发光和酶联免疫吸附法检测癌胚抗原和甲胎蛋白结果分析[J].国际检验医学杂志，2011，17（2）：45-48.
