血细胞实验报告

血细胞比容测定

【目的】

掌握血细胞比容的温氏测定法。

【原理】

将定量的抗凝血液灌注于温氏管中，经过一定的速度和时间离心沉淀后，观察压紧红细胞层占全血体积的比值。

【实验器材或试剂】

1 器材：温氏比积管、毛细吸管、离心机。

2 试剂：按EDTA-K223.5mg/每试管（或肝素钠0.2mg/每试管）标准，将抗凝剂分装于小试管中干燥。

【操作步骤】

1、 抽取静脉血2.0ml，立即注入装有抗凝剂的抗凝管中并混匀。

2、 用细长毛细滴管吸取混匀的抗凝血，插入温氏比积管底部，然后将血液缓慢注入至10cm刻度处，避免产生气泡。

3、 将加好血液的比积管置于水平离心机，以3000r/min的速度离心30min，读取压实红细胞层柱高的毫米数，然后再以同样速度离心10min至红细胞层高度不再下降为止。

【结果计算】

血细胞比容＝ 红细胞层柱高的毫米数×0.01

【注意事项】

1、 所用器材必须清洁干燥，以防溶血，如遇溶血现象应加以注明。

2、 不能使用影响红细胞体积的抗凝剂。

3、 离心速度和时间要规范化，否则血细胞比容的误差很大。

【临床意义】

1、参考范围： 男性： 0.40~0.50

女性： 0.37~0.48

2、增高或降低

A、血细胞比容增高：见于各种原因所致的血液浓缩或红细胞绝对性增多。临床上测定脱水病人的血细胞比容，作为计算补液量的参考。

B、血细胞比容减低：见于各类贫血。

细胞实验

实验七、Hela细胞凋亡诱导及检测

一、 实验目的

学习细胞凋亡诱导及检测。

二、 实验原理

1. 细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细胞主动死亡过程，是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，是一种自然的生理学过程。与细胞坏死不同，不会引起炎症反应，不释放细胞内容物。

2. DAPI是一种荧光染料，它可以与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与DNA紧密结合，可在紫外下激发蓝光。

三、 实验材料

8.8mol/L的H2O2溶液，甲醇，PBS溶液，10μg/mL的DAPI染液

四、 实验步骤

1. 细胞传代（上一次实验完成）

2. 凋亡诱导

1)取做H.E染色的小皿，加H2O2溶液150μL使终浓度为0.8mol/L

2)24小时后收集细胞进行染色和形态学观察。

3. 染色

1） 收集细胞，观察，贴壁细胞较多，直接用PBS溶液洗

2） 吸出洗液，加入500μL甲醇，室温固定10min

3） 倒掉甲醇，PBS洗净，加500μLPBS溶液和50μLDAPI母液，于37℃染色10min

4） 倒掉染液，用PBS洗净（注意避光），加入500μLPBS溶液，倒置荧光显微镜下观察并拍照。

五、 实验结果与分析

1. 观察：

实验开始前镜检：

细胞贴壁较多，细胞有的仍呈不规则状，有的细胞已皱缩，还有一些细胞呈圆形浮在培养基中，核质分界不明显。可以看到有的细胞处于裂解状态。

染色后：

由于DAPI染料只对核进行染色，所以在紫外下只可见核的结构。

视野里最多的是正常细胞，其特点是染色质均一且核表面光滑，说明凋亡是不同步的。

凋亡各时期的细胞也都可见，其主要特点是染色不均一。凋亡前期和中期的细胞较多。很少看到凋亡末期的细胞，除了这个时期细胞较少外，还可能因为在前期操作中很多凋亡小体被洗掉了。而且有的细胞在正常光下观察是明显的裂解状态，但是到紫外光路下就变得很不明显了。

实验结果及分析

图一：血涂片制作观察图

（一）血细胞计数

细胞种类 数量（单位：个） 总数

白细胞数 38 41 43 40 / 162

红细胞数 36 34 39 39 33 181

表一：血细胞统计计数表 样液中红细胞的数量为：181X50X200X10^6=1.81X10^12个/L

样液中白细胞的数量为：162/4X10X20X10^6=8.1X10^9个/L

（二）血涂片的制作（如上图）

实验分析

（一）血红细胞计数，计数室每个中方格容积为0.2X0.2X0.1=0.004uL,共计5个中方格中血红细胞数，容积为0.004X5=0.02ul，红细胞总数乘以50即为1ul血液的血红细胞数，稀释倍数为200倍，所以一升血中红细胞数为1ul血液血红细胞数乘以稀释倍数再乘以10^6。

白细胞计数，计数室一个大方格容积为0.1X0.1X1=0.1uL,共计4个大方格中白细胞的平均数，乘以10即为1ul血液的白细胞数，稀释倍数为20倍，所以一升血中白细胞数为1ul血液血白细胞数乘以稀释倍数再乘以10^6。

（二）鸡血图片观察：可看到不同形态细胞被染成蓝紫色、紫红色。白细胞较少，实验比较成功。

注意事项

1. 保证计数板、载玻片、盖玻片的清洁，以防影响最后实验结果的准确性。

2. 一次性完成充池。如充池过多或者过少，有气泡以及出现任何碎片应该重新操作。

3. 但凡压线的细胞，应该遵从数上不数下，数左不数右的计数原则。

4. 血涂片制作要求厚薄均匀，注意涂片的量以及时间。

小学科学实验报告单

班 第 小组 2015 年3月24日

实验名称 观察细胞

实验人员

实验目的 学会使用显微镜，认识常见细胞的形状

实验器材 显微镜一台，各种动植物的细胞装片

实验现象

及

实验结论 1、把显微镜放在实验台上，安装目镜和物镜。

2、转动转换器，使低倍物镜对准通光孔，物镜前端与载物相距2cm。

3、左眼注视目镜（右眼睁开），转动反光镜，直到看见白亮的视野。

4、把细胞装片放在载物台上，用压片夹压住，标本正对通光孔中心。

5、转动焦螺旋，使镜筒下降到物镜接近装片标本。6、左眼看目镜，转动粗准焦螺旋使镜筒上升，直到看清物象，再微调细准焦螺旋，使物象更清晰。

结论：看到的细胞形状有圆形、扁圆形、椭圆形、方形、梭形等。

备注