无菌室操作规程

无菌室沉降菌测试标准操作规程

一、目的：建立无菌室中沉降菌的测试标准操作规程，保证微生物检验在规定洁净级别内进行。

二、范围：无菌室的沉降菌的监测。

三、依据：国家标准GB/T 16294-1996。

四、职责：微生物检验人员对本制度的实施负责。

五、内容

1、菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。

2、测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。

3、所用的仪器和设备

1）高压灭菌锅锅

2）恒温培养箱：必须定期对培养箱进行检定。

3）培养皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。

4、培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。

5、测试步骤

1）采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。

2）培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。

3）菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

6、注意事项

1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

2）采取一切措施防止人为对样本的污染。

3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

无菌室操作规程

1.目的

本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。

2.安全注意事项

严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。

3.规程

3.1 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

3.2 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

3.3 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

3.4 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

3.5 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒。

3.6 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室。

3.7 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用75％的酒精棉球消毒外表面。

3.8 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

3.9 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

3.10 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

3.11 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

3.12 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

无菌室清洁消毒标准操作规程1

一、目 的：建立洁净室清洁、消毒程序，防止样品被环境中的微生物污染影响检测结果的准确性。

二、适用范围：适用于品管部洁净室的清洁、消毒。

三、责 任 人：品质管理部洁净室工作人员。

四、正 文：

1 清洁部位：层流净化台、地面、墙面、天花板、门窗及玻璃、把手等。

2 清洁频率：操作前、操作后、每两周最后一个工作日。

3 清洁工具：水桶、拖布、毛刷、海绵、清洁巾、橡胶手套等。

4 清洁剂：取洗涤剂加纯水配成适宜浓度摇匀即可。

5 消毒剂（每月轮换使用）：

%新洁尔灭溶液：取新洁尔灭适量加饮用水配制成 %溶液，摇匀即可

75%酒精溶液：95%乙醇加饮用水稀释成 75%溶液，摇匀即可。

6 清洁方法：

操作前的清洁消毒：操作前对工作间内各种表面、空气进行清洁或消毒。

6.1.1 层流净化台：用湿纱布擦拭后，用消毒剂擦拭消毒。

6.1.2 桌面：用湿纱布擦拭后，用消毒剂消毒。

6.1.3 地面：用清洁剂溶液擦拭后，用消毒剂擦拭消毒。

6.1.4 空气消毒：洁净室清洁、消毒后，打开层流净化台，使其开始运转，开启层流净化台紫外灯及洁净室紫外灯照射消毒 30 分钟，关闭紫外灯后，方可进行操作。

6.2 操作结束后的清洁消毒：

6.2.1 整理工作台面：将使用过的器具放入清洁液缸内浸泡12小时后清洗。收集各种废弃物， 经消毒或灭菌后处理。

6.2.2 分别用清洁剂、消毒剂擦拭台面、桌面、地面。

6.2.3 所有废弃的活菌培养物以及盛装活菌培养物的器皿，均应放入蒸汽灭菌锅内高压灭菌后， 再按规定处理。不能高压灭菌的器皿应在清洁液内浸泡 12 小时以上取出清洗晾干备用。

6.2.4 空气消毒：洁净室清洁、消毒后，开启洁净室及层流净化台紫外灯，照射消毒 30 分钟。

每两周工作结束后的清洁消毒：

6.3.1 先用清洁剂、消毒剂擦拭室内各种表面：层流净化台、桌面、台面、所有门窗、墙壁、天花板、地面等。

编辑版word 洁净室（无菌室）

洁净室（无菌室）是微生物检测的重要场所与最基本的设施。它是微生物检测质量保证的重要物质基础。因此它的设计要按国家标准-2001《洁净厂房设计规范》、国家药品监督管理局颁发的《药 品检验所实验室质量管理规范（试行）》中第十八条规定执行。微生物实验室洁净室的施工、安装、验收应按国家行业标准JGJ71-1990《洁净室的施工及验收规范》执行。对于微生物检测工作者和使用管理者来讲，更大量的工作是进行正常管理到日常的使用。

洁净室（无菌室）的标准要符合GMP洁净度标准要求。

洁净室（无菌室）的使用管理要做到以下工作：

1、洁净室（无菌室）要符合规范要求：无菌室应采光 良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。由1—2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18—26℃，相对湿度45%—65%。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板 内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2—2.5w/m3），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40uw/m2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。

2、建立使用登记制度：药厂各个微生物检测检验室都要建立使用登记制度。在登记册中可设置以下项目内容：如使用日期、时间、使用人、设备运行状况、温度、湿度、洁净度状态（沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数 ）、报修原因、报修结果、清洁工作（台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手）、消毒液名称等。