无菌实验室操作规程

无菌实验室的基本要求

无菌实验室主要用于生物医学、生物化学、微生物学、动物实验、基因重组及生物制品等研究使用的实验室。

介绍无菌实验室的基本要求有以下几点：

(1)在分隔内间和外间的墙壁或者“隔扇”上，应开一个小窗，用作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以便减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都应挂对拉的窗扇。

(2)无菌实验室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应该设在内室进门处的顶棚上(即距离工作台最远的位置)，最好为双 层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式的窗扇。通气窗可以在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件的可以安装恒温恒湿机。

(3)无菌实验室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间的容积不宜过大，以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5=5㎡，外间面积1×2=2㎡，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。

(4)内间应当设拉门，以便减少空气的波动，门应该设在离工作台最远的位置上;外间的门最好也采用拉门，要设在距离内间最远的位置上

无菌实验室主要用于产品的无菌检测，在检测全过程均应实施无菌操作，严防因污染而出现假阳性的检测结果。所以，其布局、设计和建造应该有利于避免交叉污染、便于清洁以及日常的维护，以保证高洁净度无菌实验的环境。

gja0jbk4m 实验室设计

无菌室操作规程

1.目的

本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。

2.安全注意事项

严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。

3.规程

3.1 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

3.2 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

3.3 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

3.4 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

3.5 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒。

3.6 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室。

3.7 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用75％的酒精棉球消毒外表面。

3.8 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

3.9 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

3.10 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

3.11 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

3.12 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

无菌检查操作规程

1、 目的

建立无菌检查标准操作规程，规范无菌检查操作过程，确保检查结果的准确性。

2、 范围

本规程适用于广州赛哲生物科技股份有限公司无菌检查操作过程。

3、 职责

相关操作人员负责本规程的具体实施，质检部负责对本规程的实施过程进行监督。

4、 工作程序

4.1培养基的制备及培养条件

培养基可按以下给出的处方制备，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光环境下，三周内使用。

4.1.1硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养。配方如下：

名称 数量 名称 数量

胰酪胨 15.0 g 氯化钠 2.5g

酵母浸出粉 5.0 g 新配制得0.1％刃天青溶液 1.0ml

无水葡萄糖 5.0 g 琼脂 0.75g

L-胱氨酸 0.5 g 水

1000ml

硫乙醇酸钠 0.5 g

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH,使灭菌后在25℃的pH值为7.1土0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不释过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。

除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜35℃培养。

4.1.2胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。配方如下：

名称 数量 名称 数量

胰酪胨 17.0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g 磷酸氢二钾 2.5g

葡萄糖/无水葡萄糖 2.5g/2.3g 水 1000ml

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。

手术室无菌技术操作常规

1. 刷手法

⑴准备工作:手术前不要参与感染伤口的换药;进手术区先药换洗手术衣、裤、鞋，戴好口罩、帽子，口罩须遮住鼻孔，头发不可飘落在帽外；修剪指甲，用肥皂水洗去手、前臂、肘部及上臂下半部之污垢与油脂。

⑵刷洗手臂：取无菌刷蘸消毒液，按顺刷洗指尖、手、腕、前臂、肘部至上臂下1/2段，特别是甲沟、指间、腕部，如此反复刷洗3遍。刷洗完毕，用无菌小毛巾拭干手臂，手臂不可触碰他物，否则必须重新刷手。手术人员刷手后手的细菌含量≦5cfu/cm2。

⑶连台手术：须先洗去手套上的血渍，由他人解开衣带先脱衣服。后脱手套，脱手套时，手不可触及手套外面，以免手被污染，然后刷手臂3min，穿手术衣、戴手套。

2.穿无菌手术衣 手提衣领，两手拿住领口，抖开手术衣，两手伸入袖筒内，由巡回护士在身后帮助穿衣，全遮式手术衣腰带由巡回护士由无菌持物钳传递给术者自己系扎。

3.戴无菌手套 注意戴手套的手不可接触手套的外面，已戴手套的手不可接触未戴手套的手，无菌手套边要遮住手术衣袖头；还有一种方法是不接触戴手套法，穿好手术衣后，手隔着袖头，不直接碰手套而将手套戴好。不可将手上举或下垂或交叉置于腋下，避免触碰周围的人和物，如有污染，立即更换。

4.无菌持物钳及无菌罐

⑴持物钳和罐必须经高压消毒，可采用不装消毒液的空罐，每4h更换1次。

⑵持无菌钳时应前端向下倾斜，并保持在持物者胸部高度，钳尖抬高不可超过水平度。

⑶取放无菌钳时，要闭合后垂直取放，不可触碰罐口。

⑷已被污染的无菌钳不可放回罐内，而应重新经高压灭菌后再用。

5.无菌器械桌的铺置

⑴铺无菌桌应着短袖洗手衣。

⑵首先检查无菌包的有效期和灭菌标志。

⑶无菌桌单一般要铺4层，主要部位铺5层，桌巾应下垂33cm。移动已铺的无菌桌时，不可手握下垂桌单。

⑷已铺完的无菌桌盖单上面不可放物品。

⑸戴无菌手套的手推移无菌桌时，手不可握桌栏杆；无菌桌上的器械和物品，不能伸至桌缘以外。