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分子物质罗丹明

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分子物质罗丹明,这两种物质都不能自由通过细胞膜进入正常细胞中去,只有在划痕瞬间由于细胞膜的通透性增加才能进入被划伤的细胞。

荧光黄由于分子较小能通过缝隙连接中央的水相通道进入邻近的细胞中去,而罗丹明由于分子较大而只能停留在划伤负载的细胞中,故在划痕后不同时相观察两种荧光染料的分布情况,就可以判断细胞间经缝隙连接进行直接通讯的情况,这一方法用于缝隙连接的研究很快得到大家的认同7,8。

本研究中我们采用划痕负载染料迁移的方法观察培养的H UVEC间直接通讯情况,伤后5min时观察两种荧光物质的分布,发现位于划痕中心的细胞,罗丹明和荧光黄负载均为阳性,这些细胞的数量代表该视野中划伤细胞的总数。

在划痕中心以外,有许多荧光黄负载阳性而罗丹明负载阴性的细胞。

我们知道,荧光黄由于其分子量小,能通过缝隙连接传递到相邻的细胞中去,而罗丹明则相反,故这部分细胞中的荧光黄染料只能是由划伤细胞经缝隙连接传递来的。

伤后15 min时观察,荧光染料的分布和5min相比,出现许多罗丹明负载阳性而荧光黄负载阴性的细胞,说明这些细胞中的荧光黄已经全部转移到其它细胞中。

该结果为H UVEC通过缝隙连接进行细胞间直接通讯提供了重要的形态学的证据,也为内皮细胞对无神经支配血管的调控机制的研究提供了新的线索。

参考文献:1LeC outer J,Ferrara N.EG2VEG F and Bv8,a novel family of tissue2selec2 tive mediators of angiogenesis,endothelial phenotype,and function J.T rends Cardiovasc M ed,2003,13(7):276-282.2T illy N,Schneider J G,Leidig B G,et al.Endothelin21levels in patients with dis orders of the thyroid gland J.Exp Clin Endocrinol Diabetes, 2003,111(2):80-84.3Li A F,Sato T,Haim ovici R,et al.H igh glucose alters connexin43ex2 pression and gap junction intercellular communication activity in retinal per2 icytesJ.Invest Ophthalm ol Vis Sci,2003,44(12):5376-5382.4G abriels J E,Paul D L.C onnexin43is highly localized to sites of disturbed flow in rat aortic endothelium but connexin37and connexin40are m ore uni2 formly distributedJ.Circ Res,1998,83(6):636-43.5K o Y S,Y eh H I,R othery S,et al.C onnexin make2up of endothelial gap junctions in the rat pulm onary artery as revealed by immunocon focal mi2 croscopy and triple2label immunog old electron microscopyJ.J H istochem Cytochem,1999,47(5):683-692.6Van R H,Van KM,Analbers L J,et al.G ap junctions in human umbili2 cal cord endothelial cells contain multiple connexins J.Am J Physiol, 1997,272(1Pt1):C117-130.7Zhang X,Ren Z,Zuo J,et al.The effect of all2trans retinoic acid on gap junctional intercellular communication and connexin43gene expression in glioma cellsJ.Chin M ed Sci J,2002,17(1):22-26.8Fernandes R,G irao H,Pereira P,et al.H igh glucose down2regulates in2 tercellular communication in retinal endothelial cells by enhancing degrada2 tion of connexin43by a proteas ome2dependent mechanism J.J Biol Chem,2004,279(26):27219-27224.(编辑　张大春)文章编号:100025404(2005)0120015201 个案与短篇双侧同时患Bell麻痹1例Bilateral Bell palsy at the same time:a case report桂　莉,李露斯,程先义 (第三军医大学西南医院神经内科,重庆400038) 患者,男,14岁,因双眼闭合不能7d入院。

表现为双眼闭目不能,双侧面颊滞食,饮水时双侧口角漏水。

无面部麻木,视物成双,不伴饮水呛咳、声音嘶哑、吞咽困难。

无发热、头痛、肢体活动障碍。

入院查体:血压105/66mmHg,一般情况良好。

神经系统体征:皱额、皱眉不能,双眼闭合不能,有Bell现象。

双侧鼻唇沟消失,双侧口角松弛下垂,不能露齿、鼓腮、吹口哨。

伸舌居中,张口时下颌无偏斜。

双耳廓无疱疹,粗测听力正常,双侧软腭动度正常,咽反射存在。

四肢肌肉无萎缩,四肢运动、感觉、反射未见异常,病例反射未引出。

疲劳试验及新斯的明 作者简介:桂　莉(1975-),女,重庆市人,硕士,主治医师,主要从事神经内科临床方面的研究。

电话:(023)68754114273070 收稿日期:2004207216;修回日期:2004211221试验均为阴性。

头颅MRI:未见异常;脑电监测:儿童正常脑电图;听觉诱发电位:双侧听通路正常;瞬目反射:双侧面神经损害;脑脊液压力为120mmH2O,常规及生化结果正常;血常规、肝肾功能均正常,五官科排除了中耳炎。

入院后诊断为双侧Bell麻痹。

经血管扩张剂、激素、维生素、神经营养药物等治疗,并配合局部理疗及针灸治疗2周后,患者双侧面瘫逐渐恢复,右侧额纹、鼻唇沟可见,左侧浅见,右眼能完全闭合,双面颊滞食消失,露齿时口角向右侧歪斜,面肌功能不同程度好转出院。

第4周门诊随访,双侧额纹可见,双眼均能闭合,但左眼闭合力弱,双侧鼻唇沟可见,鼓腮无漏气。

面瘫症状基本消失,面肌功能基本恢复。

(下转19页)51第27卷第1期2005年1月 第　三　军　医　大　学　学　报ACT A　AC ADE MI AE　ME DICI NAE　MI LIT ARIS　TERTI AEV ol.27,N o.1Jan.2005肾脏内,并在局部微环境诱导下表达肾小管上皮细胞的表型特征CK18和RC A。

K rause等13曾将分离培养的造血干细胞移植给受照小鼠,以后在受体鼠的呼吸道、消化道、皮肤等处观察到移植的造血干细胞表达相应部位上皮细胞的表型标志,但在肾脏内未找到表达肾小管上皮细胞标志的造血干细胞,K rause认为是由于移植细胞中缺乏骨髓间充质干细胞所致。

实验中我们对I/R雌鼠移植的骨髓源性干细胞中包含有间充质干细胞和造血干细胞等类型,因此所观察到的Y+/ CK18+和Y+/RC A+细胞具体来源于哪一类干细胞尚需通过进一步的实验予以明确。

骨髓源性干细胞在缺血再灌注损伤肾脏内表现出的分化潜能为损伤肾小管的修复和再生提供了新思路,如果能通过骨髓干细胞移植实现肾小管上皮细胞“原位”的再生和扩增,取代坏死的肾小管上皮细胞。

或者通过患者自身的骨髓干细胞体外诱导成肾小管上皮细胞,从而获得种子细胞构建人工肾小管,取代衰竭的肾小管,就可以从根本上解决肾小管功能衰竭的难题,而目前需要我们进一步明确的问题还有很多,例如参与分化的骨髓源性干细胞的具体类型、骨髓干细胞迁移到肾脏局部定居的机制及诱导分化的环境等等,因此要实现上述目标,还有很长的路要走。

参考文献:1Theise N D,Henegariu O,G rove J,et al.Radiation pneum onitis in mice:a severe injury m odel for pneum ocyte engraftment from bone marrow J.Exp Hematol,2002,30(11):1333-1338.2Theise N D,Nimmakayalu M,G ardner R,et al.Liver from bone marrow in humansJ.Hepatology,2000,32(1):11-16.3M ezey E,K ey S,V ogelsang G,et al.T ransplanted bone marrow generates neurons in human brainsJ.Proc Natl Acad Sci U S A,2003,100(3): 1364-1369.4K ocher A A,Schuster M D,S zabolcs MJ,et al.Neovascularization of is2 chemic my ocardium by human bone2marrow2derived angioblasts prevents cardiomy ocyte apoptosis,reduces rem odeling and im proves cardiac function J.Nat M ed,2001,7(4):430-436.5Fukada S I,M iyag oe2Suzuki Y,Tsukihara H,et al.Muscle regeneration by reconstitution with bone marrow or fetal liver cells from green fluorescent protein2gene transgenic mice J.J Cell Sci,2002,115(Pt6):1285-1293.6Jacks on K A,M ajka S M,W ang H,et al.Regeneration of ischemic car2 diac muscle and vascular endothelium by adult stem cellsJ.J Clin Invest, 2001,107(11):1395-1402.7Scriba A,Luciano L,S teiniger B.H igh2yield purification of rat m onocytes by combined density gradient and immunomagnetic separation J.J Im2 munol M ethods,1996,189(1):203-216.8陈松林,张　成,黄　文.亚致死量放疗对Duchenne型肌营养不良鼠骨髓干细胞移植的影响J.中山大学学报,2003,24(2):109 -112.9Ito T,Suzuki A,Imai E,et al.Bone marrow is a reserv oir of repopulating mesangial cells during glomerular rem odeling J.J Am S oc Nephrol, 2001,12(12):2625-2635.10Imasawa T,Utsunomiya Y.S tem cells in renal biology:bone marrow transplantation for the treatment of IgA nephropathy J.Exp Nephrol,2002,10(1):51-58.11蔡文琴,王伯氵云.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术M.成都:四川科学技术出版社,1994.245.12Schulte B A,S picer S S.H istochemical evaluation of m ouse and rat kid2 neys with lectin2horseradish peroxidase conjugatesJ.Am J Anat,1983,168(4):345-362.13K rause D S,Theise N D,C ollector M I,et al.Multi2organ,multilineage engraftment by a single bone marrow2derived stem cell J.Cell,2001,105(3):369-377.(编辑　刘洪娥) (上接15页)讨论 Bell麻痹是指原因不明的由于茎乳孔内面神经非化脓性炎症所致的急性面神经麻痹,又称面神经炎。

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罗丹明B介绍

罗丹明B介绍

罗丹明B - 物理性质性状：深红色结晶或红棕色粉末。

溶解性：易溶于水、乙醇，微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液；水溶液为蓝红色，稀释后有强烈荧光，醇溶液为红色荧光；最大吸收波长552nm，最大荧光波长610nm，激光峰值波长610nm，调谐范围 578～610nm。

[1]罗丹明B - 用途测定锑、铋、钴、铌、金、锰、汞、钼、钽、铊、钨等试剂；造纸工业染蜡光纸、打字纸、有光纸等，也可用于腈纶、麻、蚕丝等织物以及麦秆、皮革、羽毛制品的染色。

罗丹明B在溶液中有强烈的荧光, 常用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。

用于纸张、晴纶、丝绸、皮革、羽毛染色，并可用于食品和某些金属分析试剂罗丹明B - 检测原理罗丹明B1、罗丹明B具有脂溶性，被用作调味品（主要是辣椒粉和辣椒油）染色剂。

使用了被污染的调味品制作食品时会造成残留。

调味品使用罗丹明B染色时含量较高，甚至直接掺入，可进行现场检测。

食品中因其含量较低，需送实验室检测。

2、现场检测中使用非极性有机溶剂（例正己烷、正己烷+丙酮等）将其溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附罗丹明B，用非极性有机溶剂（例正己烷）淋洗小柱，洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，用肉眼可观测到在小柱上出现鲜亮的粉红色条带，判定为可疑样品，该样品需送实验室作进一步确证检验。

3、实验室检测法仍然采用非极性有机溶剂（例正己烷、正己烷+丙酮等）将罗丹明B从食品中溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附罗丹明B，用非极性有机溶剂（例正己烷）洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，再用极性有机溶剂（例甲醇）将罗丹明B从小柱上洗脱并收集，用反相高效液相色谱仪-紫外/可见光检测器进行定性定量检测。

罗丹明荧光探针的设计

罗丹明荧光探针的设计


罗丹明类染料的优缺点
优点：罗丹明类荧光染料具有光稳定性好、 较长的波长范围和较高的荧光量子产率、对 pH不敏感等。 缺点：亲脂性差，对细胞的穿透能力差；多 数罗丹明类探针最大吸收和发射波长600nm 以下，易受被标记物荧光的影响；特异选择 性差，发生特异性结合的选择性差。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
罗丹明荧光探针的设计
5-氨基罗丹明B丁脂
罗丹明荧光探针的设计
罗丹明类荧光染料概述
罗丹明(Rhodamine)是一类以氧杂蒽为母体 的染料,具有螺环和开环的互变分子结构。是 一类具有强荧光,高激光输出效率的染料,他们 的发色团中两个芳环间“氧桥”相连,碳与氧 处于对位,形成一个六元环,分子中具有很长的 共辄体系,并且刚性平面结构,容易吸收光而发 射长波,从而形成荧光。
常用罗丹明类衍生物的化学结构式
罗丹明荧光分子探针工作原理
大部分罗丹明荧光分子的传感响应机制为光诱导电 子转移机制(Photoinduced Electron Transfer; PET)
通常PET荧光分子探针的工作原理如下:识别基团通 常具有很强的给电子能力,能够将其处于最高占有轨道 (HOMO)上的电子,转入激发态的突光团因为电子激发 而空出的HOMO,从而使突光团被光激发的电子无法直 接跃迁回基态轨道发出荧光,从而导致荧光团辞灭;但 是当识别基团与被识别客体相结合后,识别基团的氧化 电位升高,给电子能力降低,使受体的HOMO低于荧光团 的HOMO,导致PET过程减弱,或不再发生,突光团能够放 出荧光。
2.为了改变罗丹明B类染料亲脂性差的特点，猜想引 入烷基基团来增强。又由于烷基的结构对罗丹明 B 的顶 环共轭体系的影响不大，而罗丹明 B 酯的荧光特性主要 由顶环的结构所决定,所以烷基的结构对最大吸收与发射 波长的影响应该不大。
罗丹明染色皮克林步骤及原理-概述说明以及解释

罗丹明染色皮克林步骤及原理-概述说明以及解释

罗丹明染色皮克林步骤及原理-概述说明以及解释1.引言1.1 概述罗丹明染色是一种常用的细胞染色方法，用于检测细胞核以及细胞内某些特定结构的存在和性质。

它以罗丹明染料为染料剂，通过染料与细胞内某些物质的特异性亲和作用，使目标物质在镜下呈现出明亮的红色或橙色。

在细胞生物学和组织学研究中，罗丹明染色被广泛应用于生物样本的分析和观察。

其简便的操作步骤和准确的染色结果使得罗丹明染色成为一种常用的染色方法。

此外，罗丹明染色还具有极高的特异性和敏感性，可以用于检测DNA、RNA、蛋白质以及细胞膜的分布情况和数量。

因此，它在细胞生物学、分子生物学、遗传学等领域起着重要作用。

本文将介绍罗丹明染色的步骤及原理，并对其优缺点以及应用领域进行讨论。

通过对罗丹明染色的学习，我们可以更好地理解细胞结构和功能，为进一步的研究提供基础和指导。

1.2文章结构文章结构部分内容：文章结构部分主要描述了本文的布局和组织方式，以帮助读者更好地理解文章的内容和思路。

本文按照以下结构进行组织和阐述：1. 引言：介绍了本文的研究背景、意义和目的，为读者提供了一个整体的概览。

2. 正文：分为三个主要部分，分别是罗丹明染色步骤、罗丹明染色原理和优缺点及应用。

在正文部分，将详细叙述了罗丹明染色的实际步骤、染色结果观察和该染色方法的基本原理。

3. 结论：总结了罗丹明染色步骤及原理的要点，对其应用前景进行了展望。

通过以上结构的组织，本文全面而系统地介绍了罗丹明染色的步骤和原理，并对其进行了评价和应用展望。

这样的结构，既清晰明了，又能够帮助读者更好地理解和掌握文章的内容。

1.3 目的一、目的罗丹明染色是一种常用的细胞染色方法，在细胞生物学和医学领域具有广泛的应用。

本文旨在介绍罗丹明染色的步骤和原理，以及分析其优缺点和应用领域，从而帮助读者更好地了解和应用这种染色技术。

具体而言，本文的目的包括以下几个方面：1. 介绍罗丹明染色的步骤：通过细致的分析和详细的描述，向读者展示罗丹明染色的具体步骤，包括准备工作和染色过程。

分子荧光法测罗丹明B的含量

分子荧光法测罗丹明B的含量

实验三分子荧光法测定罗丹明B的含量
一、实验原理
罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比：
I f=kc
基此，测定一系列已如浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。

图1罗丹明B的分子结构
二、仪器与试剂
1．仪器
RF-5301PC分子荧光分光光度计；200 mL的容量瓶12支，2 mL的吸量管12支，250 mL烧杯12个。

2．试剂
l×l0-4 g∙mL-1的罗丹明B储备液。

三、实验步骤
1．标准溶液的配制
取11只200 mL的容量瓶分别加入l×l0-4 g∙mL-1的罗丹明B储备液0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00 mL,，用水稀释至刻度，摇匀。

2．绘制发射光谱
激发波长固定在556 nm, 在500-700 nm范围内扫描荧光发射光谱。

3．绘制标准曲线
荧光发射波长固定在640 nm处，从发射光谱上取系列标准溶液的荧光发射强度。

4．未知试样的测定
在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。

5．绘制荧光强度I f对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。

四、数据处理
1．原始数据
浓度/(l0-4 mg∙mL-1) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 x 荧光强度
扣除空白
2．标准曲线绘制和未知样品含量计算。