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2.2 受体胞质的选择和处理
2.2.1 卵母细胞在动物克隆中的作用
在克隆中,供核细胞的全能性是基础,但这种全能性 只有在特定的条件下才能实现。这一特定条件就是卵 母细胞。研究发现:早期胚胎的发育首先是由母型信 息调控(maternal regulation)的,直到合子型基因 被 激 活 , 才 能 过 渡 到 合 子 型 调 控 ( zogotic regulation)。也就是要经过由母源控制向合子型控 制胚胎发育的转变(maternal-zygotic transition, MZT)。
目前一般以排出第一极体作为卵母细胞成熟 的标志。
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2.2.5 卵母细胞的激活
成熟后的卵母细胞停滞于MⅡ期,自然条件下, 当精子穿入(受精)后会激活卵母细胞,启动一 系列生化事件和形态变化。
面对问题:核移植胚是怎样被激活的?
解决途径:
途径一:电激活。电脉冲剌激是最经典、应用最 为广泛的卵母细胞激活方式。细胞膜在瞬间高压 电流脉冲的作用下,激发穿孔,从而使细胞内外 的离子和大分子物质发生短暂流动,其中钙离子 的内流会导致卵母细胞活化。
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途径二:化学物质激活。包括乙醇、钙离子载 体A23187(Calcium ionophore A23187, CaA)、 离 子 霉 素 ( Ionomycin)、Sr2+、 Thimerosal(THI) 、Dithiothreitol(DTT)、三 磷 酸 肌 醇 、 精 子 因 子 ( sperm factor, SF) (精子的提取物)。
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1938年,Hans Spermann提出了克隆动物的设想:从一 个分化细胞中提取细胞核,然后注入另一个去核的受 精卵中构建新胚胎,他同时提出用体细胞进行动物克 隆的思想,但一直未能付诸实施。