DNA分子（含目的基因）
同一种限制性内切酶切割
带有黏性 末端切口
带有相同黏性末 端的目的基因片段
DNA连接酶 重组DNA（环状重组质粒）
3.目的基因的表达与鉴定
目的基因 转录
翻译
是否插入
mRNA
蛋白质
个体
DNA分子杂交
核酸 抗原-抗体杂交 抗性实验 分子杂交
是否出现了杂交带
是否出现特 抗性是否 异性结合 存在
【解题指南】 1.考查实质：限制性内切酶作用的位点及特点。 2.解题关键： （1）一种限制性内切酶有特定的切割位点。 （2）抗生素抗性基因作为标记基因被破坏后，不能鉴定和 筛选目的基因。
【解析】本题以基因工程为载体，主要考查比较、判断、推 理、分析、综合思维能力以及识别图表等能力。 (1)该质粒为环状DNA，经SmaⅠ切割前，不含有游离的磷酸 基团，经SmaⅠ切割后形成平末端，含有2个游离的磷酸基团。 (2)SmaⅠ识别的是CCCGGG序列，在C与G之间切割，SmaⅠ酶 切位点越多，C-G碱基对越多，因C与G之间的氢键(3个)比A 与T之间的氢键(2个)数量多，故质粒的热稳定性越高。
DNA解旋酶 DNA(水解)酶
DNA分子 DNA分子
碱基对间的氢键 形成脱氧核苷酸 单链
磷酸二酯键 游离的脱氧核苷酸
(2)限制性内切酶和DNA连接酶之间的关系图示：
2.作为载体的条件
条件
适应性
外源DNA的插入不影响载 目的基因稳定存在且数量可 体在宿主细胞内自我复制 扩大
有一个至多个限制性内切 酶酶切位点
基因工程的基本操文 库中获取。 (2)利用PCR技术扩增目的基因：利用DNA复制的原理在体外 特异性地复制某DNA片段以获得呈指数方式增加的目的基因。 (3)人工合成法：反转录法或通过DNA合成仪用化学方法直接 人工合成。
