关于开展2018年度山东省自然科学基金

第３３卷第２期烟台大学学报（自然科学与工程版）Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．２２０２０年４月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹａｎｔａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＥｄｉｔｉｏｎ）Ａｐｒ．２０２０ 文章编号：１００４８８２０（２０２０）０２０１８２０６ｄｏｉ：１０．１３９５１／ｊ．ｃｎｋｉ．３７１２１３／ｎ．２０２０．０２．００９ 收稿日期：２０１９０９１５ 基金项目：山东省自然科学基金资助项目（ＺＲ２０１８ＭＨ０３９）． 通信作者：范华英（ｋａｔｉｅｆｈｙｄｏｎｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ），副教授，博士，从事创新药物的开发研究．松花粉抗血小板及抗血栓作用研究李　新１，冀　凯１，杜世豪１，滕　莉２，王增阳１，刘彦君１，齐　栋３，范华英１（１．烟台大学新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心、分子药理和药物评价教育部重点实验室（烟台大学），山东烟台２６４００５；２．烟台市烟台山医院药剂科，山东烟台２６４０００；３．烟台市毓璜顶医院肾内科，山东烟台２６４０００）摘要：为研究松花粉的抗血小板及抗血栓作用，采用大鼠急性血瘀模型研究松花粉对血流变学的影响和对血小板聚集的影响，采用大鼠动－静脉血栓模型研究松花粉对血栓形成、ＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２的表达以及对ＴＸＢ２的含量和ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值的影响．结果显示：松花粉可以抑制ＡＤＰ诱导的血小板聚集，降低全血粘度、血浆粘度和红细胞压积水平；同时，松花粉可以显著降低血栓重量以及选择性抑制血管壁ＣＯＸ－２的表达，而不影响ＣＯＸ－１的表达，并且能够降低ＴＸＢ２的含量以及使ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的比值趋于平衡．松花粉具有较好的抗血小板和抗血栓的作用，并且该作用与其能够高度选择性抑制ＣＯＸ－２的表达和调节ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的平衡有关．关键词：松花粉；抗血小板；抗血栓；血液流变学中图分类号：Ｒ９６５ １ 文献标志码：Ａ 血栓病是指由于血管内形成异常的血栓使得血流受阻造成机体内各种器官供血受阻而引起的各种脏器机能障碍疾病．血栓形成加速了各种心脑血管疾病的发生和发展［１］．血小板是人体正常凝血机制的关键组成部分，是导致心脑血管疾病的重要原因［２］．随机临床荟萃分析结果表明，抗血小板治疗对血栓栓塞性疾病非常有利，并且能够预防动脉栓塞和静脉血栓栓塞等严重的血管病变［３］．目前临床上使用的抗血小板药物主要包括阿司匹林、氯吡格雷、阿昔单抗等，虽然这些药物可以起到一定的抗血小板作用，但是仍会导致较多的不良反应，包括：出血风险、胃粘膜损伤、造血功能障碍［４］．因此，寻找新的更安全有效副作用低的抗血小板药物具有重要的临床意义．松花粉（Ｐｉｎｅｐｏｌｌｅｎ）又名松黄，为松科植物马尾松ＰｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａＬａｍｂ、油松ＰｉｎｕｓｔａｂｕｌｉｆｏｒｍｉｓＣａｒ或同属数种植物的干燥花粉［５］．《神农本草经》里有记载：“松花（粉），气味甘平无毒，主治心腹寒热邪气，利小便，消淤血，久服轻身益气力，延年”［６］．松花粉所含黄酮类物质可有效降低血脂和胆固醇，维持正常血压［７］，所含的各种维生素有利于增加血管壁细胞的生长，促进心脏和大脑的血液微循环．松花粉中提取的粗多糖、精致多糖和酚类物质在体外具有较强的抗氧化能力［８］．然而，松花粉是否具有抗血栓及抗血小板作用是未知的．本研究确定了松花粉对血小板聚集、血栓形成和血液循环的作用和机制，从而为松花粉抗血小板和抗血栓作用提供药理学支持．１　材料与方法１ １　实验动物雄性成年ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）大鼠（体重２２０　第２期李　新，等：松花粉抗血小板及抗血栓作用研究±２０ｇ）７２只，购自山东省济南朋悦实验动物繁育有限公司，实验动物合格证Ｎｏ．０００３６０９，许可证号：ＳＣＸＫ（鲁）２０１４００７．所有实验用大鼠均在温度为２４±１℃和湿度为５５％±５％的条件下适应性饲养７ｄ，并给予自由饮食和饮水．本研究经过烟台大学动物伦理委员会批准，且实验方案符合烟台大学动物伦理委员会的规定．１ ２　实验仪器与设备ＬＢＹ－ＮＪ４血小板聚集仪（北京泰利康信科技有限公司），电子计重秤（上海浦春仪器有限公司），电子天平（余姚纪铭称重设备有限公司），ＴＧＬ－１６Ｇ台式高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂），多功能酶标仪（美国ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ公司），ＭＶＩＳ－２０３５全自动血液流变分析仪（重庆天海医疗设备有限公司）．１ ３　药品与试剂破壁松花粉由烟台新时代健康产业有限公司提供；阿司匹林来源于美国Ｓｉｇｍａ公司；０ ９％氯化钠溶液购自山东科伦药业有限公司；环氧合酶－１（Ｃｙ ｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ １，ＣＯＸ－１）、环氧合酶－２（Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅ ｎａｓｅ ２，ＣＯＸ－２）、β－ａｃｔｉｎ购自ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙＩｎｃ．（Ｄａｌｌａｓ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）；ＢＣＡ蛋白定量试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；大鼠血栓素Ｂ２（ＴｈｒｏｍｂｏｘａｎｅＢ２，ＴＸＢ２）试剂盒、大鼠６－酮－前列腺素Ｆ１α（６ ｋｅｔｏｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＦ１α，６ ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司．１ ４　大鼠急性血瘀模型的制作及指标检测１ ４ １　模型制作　将３６只健康雄性成年ＳＤ大鼠随机分为６组，每组６只．（１）正常对照组：给予等剂量的０ ９％氯化钠溶液灌胃；（２）血瘀模型组：给予等剂量的０ ９％氯化钠溶液灌胃；（３）阿司匹林组：以０ ９％氯化钠溶液为溶媒配制阿司匹林溶液，按照２０ｍｇ／ｋｇ的给药剂量通过灌胃给药；（４）低剂量松花粉组：以０ ９％氯化钠溶液为溶媒配制松花粉溶液，按照０ ９０ｇ／ｋｇ的给药剂量通过灌胃给药；（５）中剂量松花粉组：按照１ ８０ｇ／ｋｇ的给药剂量通过灌胃给药；（６）高剂量松花粉组：按照３ ６０ｇ／ｋｇ的给药剂量通过灌胃给药．所有药物均为每日单次给药，连续给药１４ｄ．第１３天除正常对照组之外其余各组大鼠参照文献［９］方法制备大鼠急性血瘀模型，即大鼠以０ ８ｍｇ／ｋｇ的剂量皮下注射肾上腺素，正常对照组大鼠注射等剂量生理盐水．第一次注射２ｈ后，除正常对照组外，将其余各组大鼠置于冰水浴中５ｍｉｎ，２ｈ后再次注射肾上腺素．之后将大鼠放入鼠笼中正常饲养．禁食不禁水１２ｈ后，大鼠末次给药３０ｍｉｎ后腹主动脉取血．１ ４ ２　血液流变学测定　禁食不禁水１２ｈ后，大鼠末次给药３０ｍｉｎ后腹主动脉取血，用肝素抗凝后，检测血液流变学指标：全血粘度包括：高切变率、中切变率和低切变率，血浆粘度，红细胞压积．１ ４ ３　体内血小板聚集实验　禁食不禁水１２ｈ后，大鼠末次给药３０ｍｉｎ后腹主动脉取血，用３ ８％枸橼酸钠抗凝．血液在１０００ｒ／ｍｉｎ下离心６ｍｉｎ，取出上层血浆即为富血小板血浆，余下的部分在３０００ｒ／ｍｉｎ下离心１５ｍｉｎ，上层清液即为贫血小板血浆．将血小板数目调至４×１０８个／ｍＬ．用二磷酸腺苷（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＡＤＰ）诱导血小板聚集，使用血小板聚集仪测定血小板聚集率，最后结果以最大聚集率表示．１ ５　大鼠动－静脉旁路血栓形成模型制作及指标检测１ ５ １　模型制作　将３６只健康雄性成年ＳＤ大鼠随机分为６组，每组６只：（１）正常对照组，（２）血栓模型组，（３）阿司匹林组，（４）低剂量松花粉组，（５）中剂量松花粉组，（６）高剂量松花粉组．各组给药情况与“１．４．１”中对应的各组相同，在末次给药３０ｍｉｎ后，参照文献［１０］方法进行建立大鼠动－静脉旁路血栓形成模型．即大鼠麻醉后，仰卧位进行固定，分离右侧的颈总动脉和左侧颈外静脉，在自制的３段聚乙烯管中放入一根已称重的６ｃｍ的手术丝线．以０ ９％的生理盐水充满聚乙烯管，然后将聚乙烯管的一段插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉．打开动脉夹，使血流从右颈总动脉流经聚乙烯管后，返回左颈外静脉．开放血流１５ｍｉｎ后，取丝线称湿重，丝线放室温６ｈ干燥后，称重记为干重．血栓质量为称得的总质量减去丝线质量．血栓形成抑制率的计算公式如公式（１）所示．正常对照组为假手术组，只分离动脉和静脉，不进行插管．血栓形成抑制率＝模型组血栓质量－给药组血栓质量模型组血栓质量×１００％．（１）１ ５ ２　ＴＸＢ２和６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量测定　待大鼠动－静脉旁路血栓形成模型制备完成后，大鼠进行腹主动脉取血．以４０００ｒ／ｍｉｎ的转速离心５ｍｉｎ，收集上清，用于检测ＴＸＢ２和６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量．其含量利用ＥＬＩＳＡ试剂盒检测，实验步骤严格按照试剂盒的说明书进行，含量用ｐｇ／ｍＬ表示．１ ５ ３　ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ方法检测松花粉对ＣＯＸ蛋白表达的影响　将形成血栓处的血管段进行组织破碎３８１烟台大学学报（自然科学与工程版）第３３卷　后加入裂解液（ＰＭＳＦ∶ＲＰＭＩ＝１∶１００）搅匀后，使用电动匀浆机进行匀浆，直至成混悬液状，匀浆过程在冰水浴中进行．将制得的组织匀浆置于４０００×ｇ的离心力下离心１０ｍｉｎ，取上清液至预冷的ＥＰ管中，即得到血管总蛋白．使用ＢＣＡ蛋白浓度试剂盒测量蛋白浓度，以３０μｇ的上样量求得上样体积．蛋白上样于１０％的聚丙烯酰胺凝胶进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，电泳完成后转移至ＰＶＤＦ膜，之后置于５％的脱脂牛奶中进行孵育４ｈ．加入一抗并放在４℃过夜，第二天洗涤后加入二抗孵育１ ５ｈ．洗涤后，极超敏ＥＣＬ化学发光试剂盒检测蛋白条带，并使用Ｉｍ ａｇｅＱｕａｎｔＬＡＳ４０００拍照处理．１ ６　统计学方法所有数据用平均数±标准差（珋ｘ±ｓ）来表示，本实验使用统计学软件ＳＰＳＳ２２ ０对数据进行处理．首先采用Ｌｅｖｅｎｅ’ｓ检验法对各组数据方差进行齐性检验，方差齐性（Ｐ≥０ ０５），则采用单因素方差分析（Ｏｎｅ ｗａｙＡＮＯＶＡ）进行统计分析．如果ＡＮＯＶＡ有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），进一步使用ＬＳＤｔｅｓｔ（参数法）进行组间两两比较分析．如果方差不齐（Ｐ＜０ ０５），则采用Ｋｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ进行非参数检验．如果Ｋｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ检验有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），则进一步使用Ｍａｎｎ ＷｈｉｔｎｅｙＵ法进行均数间的两两比较．２　实验结果２ １　松花粉对大鼠血液流变性的影响如表１所示，急性血瘀模型组大鼠的全血粘度包括高切变率、中切变率和低切变率以及血浆粘度和红细胞压积均有明显的增高，具有显著性差异，表明造模后大鼠血液处于高凝状态．不同浓度的松花粉能够显著降低大鼠全血粘度、血浆粘度和红细胞压积，且呈剂量依赖性．表１　松花粉对大鼠血液流变性的影响（珔ｘ±ｓ）Ｔａｂ．１　ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＰｉｎｅｐｏｌｌｅｎｏｎｔｈｅｈｅｍｏｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｒａｔｓ（珋ｘ±ｓ）组别全血粘度／（ｍＰａ·ｓ）低切变率中切变率高切变率血浆粘度／（ｍＰａ·ｓ）红细胞压积／％空白对照组２２ ７３±３ ５６６ ００±０ １５４ ４２±０ １４１ ４３±０ ０６０ ４１±０ ０２血瘀模型组３８ ８５±２ ７３＃＃９ ０３±０ ２３＃６ ５１±０ １９＃＃２ ０８±０ １２＃＃０ ４４±０ ０２＃阿司匹林组２６ ２５±１ ９４ ６ ８２±０ １７ ５ ０６±０ １３ １ ６４±０ ０５ ０ ４３±０ ０２松花粉０ ９０ｇ／ｋｇ３５ ５６±２ １２ ８ ７２±０ ３８６ ２５±０ ２１ １ ９１±０ ０７ ０ ４６±０ ０２松花粉１ ８０ｇ／ｋｇ３２ ８５±１ ６１ ８ ７３±０ ２２ ６ ０６±０ １９ １ ６８±０ ０９ ０ ４５±０ ０２松花粉３ ６０ｇ／ｋｇ３１ ５２±０ ８６ ８ ６４±０ １７ ５ ８４±０ １９ １ ５９±０ １１ ０ ４２±０ ０１ 与对照组相比，＃Ｐ＜０ ０５，＃＃Ｐ＜０ ０１；与血瘀模型组相比， Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１．２ ２　松花粉体内对血小板聚集的影响如图１所示，血瘀模型组的血小板聚集率显著高于其他各组，与正常对照组相比，其差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０１）．松花粉中、高剂量组可以显著降低血小板聚集率，其中，高剂量松花粉组作用与阿司匹林组作用相当．２ ３　松花粉对大鼠动－静脉旁路血栓形成的影响通过大鼠动－静脉旁路血栓模型探究松花粉的抗血栓活性，结果如图２所示．与血栓模型组相比，不同浓度的松花粉（０ ９０，１ ８０，３ ６０ｇ／ｋｇ）组的血栓湿重和干重明显降低，且呈剂量依赖性抑制血栓的形成：血栓湿重形成抑制率分别为１０ ２％，１８ ０％，２３ １％；血栓干重形成抑制率分别为１２ ４％，２５ ４％，３７ １％．阿司匹林（２０ｍｇ／ｋｇ）有较强的抑制作用，血栓形成湿重和干重抑制率分别为２７ ２％，５６ ０％．!"#!$"%!&"'!)*+()* +*,$-,-./1./ 与正常对照组相比，＃＃Ｐ＜０ ０１；与血瘀模型组相比， Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１．图１　松花粉体内对ＡＤＰ诱导的血小板聚集率的影响Ｆｉｇ．１　ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰｉｎｅｐｏｌｌｅｎｏｎＡＤＰ ｉｎｄｕｃｅｄｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｉｎｖｉｖｏ４８１　第２期李　新，等：松花粉抗血小板及抗血栓作用研究'()()* +*,$-*+,-./*与血栓模型组相比， Ｐ＜０ ０１．图２　松花粉在动－静脉血栓模型中抗血栓形成的活性Ｆｉｇ．２　ＡｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＰｉｎｅｐｏｌｌｅｎｉｎｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓｓｈｕｎｔ２ ４　松花粉对血浆ＴＸＢ２和６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量及ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的影响如表２所示，在大鼠动－静脉血栓模型中，模型组大鼠血浆ＴＸＢ２，６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量及ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值明显升高，阿司匹林能够显著降低ＴＸＢ２，６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量及ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值．与模型组相比，不同浓度的松花粉（０ ９０，１ ８０，３ ６０ｇ／ｋｇ）也能够显著降低ＴＸＢ２，６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量及ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值．２ ５　松花粉对ＣＯＸ蛋白表达的影响使用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ方法研究了松花粉对ＣＯＸ蛋白表达的影响，实验结果如图３、图４所示．与正常对照组相比，血栓模型组ＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２的表达明显升高．阿司匹林可以显著降低ＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２的表达，而松花粉能够通过选择性地抑制ＣＯＸ－２的表达，而对ＣＯＸ－１的表达没有明显的影响，表明松花粉通过选择性靶向ＣＯＸ－２发挥抗血栓的作用．表２　松花粉对血浆ＴＸＢ２和６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量及ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的影响（珔ｘ±ｓ）Ｔａｂ．２　ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＰｉｎｅｐｏｌｌｅｎｏｎｐｌａｓｍａＴＸＢ２ａｎｄ６ ｋｅｔｏ ＰＧＦ１αｌｅｖｅｌｓａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＴＸＢ２／６ ｋｅｔｏ ＰＧＦ１α（珋ｘ±ｓ）组别ＴＸＢ２／（ｐｇ·ｍＬ－１）６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α／（ｐｇ·ｍＬ－１）ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α正常１９４ ３±７ １５４１ ３±１４ ６０ ３６±０ ０１血栓模型６０８ ８５±１５ ９＃＃６４７ ２±１９ ６＃＃０ ９４±０ ０３＃＃阿司匹林１０８ １±５ ４ ４００ ４±７ ６ ０ ２７±０ ０１ 松花粉０．９０ｇ／ｋｇ４６５ ９±１１ ０ ８４４ ０±２０ ３ ０ ５５±０ ０２ 松花粉１．８０ｇ／ｋｇ４３８ １±７ ２ ８７２ ７±１２ ２ ０ ５０±０ ０１ 松花粉３ ６０ｇ／ｋｇ４２６ ５±１４ ９９０６ ０±１５ ２０．．４７±０ ０１ 与正常对照组相比，＃＃Ｐ＜０ ０１；与血栓模型组相比， Ｐ＜０ ０５，Ｐ＜０ ０１．３　讨　论血栓栓塞性疾病是严重危害公共健康的常见病与多发病．许多疾病与血小板功能障碍有关［１１］．但是，很多有效的抗血小板药物在临床上会产生一些副作用，如胃肠道出血．因此，寻找更加安全有效且副作用低的抗血小板药物是亟待解决的问题．本研究通过测定松花粉的血液流变学、抗血小板聚集活性探究其抗血小板及抗血栓作用和作用机制．为探究松花粉对微循环的影响，该研究通过大鼠急性血瘀模型评估血液流变学参数．血瘀可导致血小板聚集及血液流变学异常，血液流变学异常通常介导许多心脑血管疾病的发生与发展［１２］．研究结果显示，与正常组相比，血瘀模型组全血粘度、血浆粘度、红细胞压积均明显增加，结果具有显著性差异．血小板聚集是决定血液粘度的因素之一［１３］，通过对血小板的聚集率的测定，结果证明松花粉具有明显的抗血小板作用，对ＡＤＰ诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用．松花粉在３ ６０ｇ／ｋｇ剂量时的抑制作用与阿司匹林２０ｍｇ／ｋｇ时的作用相当．该研究通过动－静脉血栓模型研究了松花粉对血栓形成的影响，结果表明松花粉具有一定的抗血栓作用．因此，进一步探讨了松花粉的抗血小板和抗血栓作用的机制．血栓素Ａ２（ＴｈｒｏｍｂｏｘａｎｅＡ２，ＴＸＡ２）和前列环素（Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ，ＰＧＩ２）的平衡是影响血小板功能的主要因素［１４］．ＴＸＡ２是血小板生理激动剂，在体内极不稳定，迅速降解为无活性的ＴＸＢ２；ＰＧＩ２是血小板功能抑制剂，在体内很快代谢为６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α．通过ＥＬＩＳＡ法检测了动－静脉血栓模型中ＴＸＢ２和６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的含量，以判断ＴＸＡ２和ＰＧＩ２的含量．ＣＯＸ存在２种不同的亚型：５８１烟台大学学报（自然科学与工程版）第３３卷　!"#$%&'(!"#!$"%!&"'!)*+()* +*,$-).+.)* +*,$-/01,$/012345 与正常对照组相比，＃＃Ｐ＜０ ０１；与血栓模型组相比， Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１．图３　松花粉对ＣＯＸ－１蛋白表达的影响Ｆｉｇ．３　ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰｉｎｅｐｏｌｌｅｎｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ １ｉｎｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ!"#$%&'(!"#!$"%!&"'!)*+()* +*,$-).+.)* +*,$-/01,2/012345 与正常对照组相比，＃＃Ｐ＜０ ０１；与血栓模型组相比， Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１．图４　松花粉对ＣＯＸ－２蛋白表达的影响Ｆｉｇ．４　ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰｉｎｅｐｏｌｌｅｎｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ ２ｉｎｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓｓｈｕｎｔＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２．ＣＯＸ－１在胃肠道中表达较多，与维持胃肠道内环境稳定和功能密切相关．ＣＯＸ－２的高表达能够促进单核细胞与内皮细胞间粘附，加重炎症反应并通过上调局部基质金属蛋白酶的活性诱发血栓形成［１５］．因此，通过ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ方法检测了ＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２蛋白的表达．结果表明阿司匹林能够显著降低ＴＸＢ２的含量，非选择性抑制ＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２的表达．阿司匹林通过同时抑制ＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２的表达发挥抗血小板抗血栓活性，不仅可抑制ＴＸＡ２的产生，而且抑制ＰＧＩ２的产生．这种现象称为“阿司匹林困境”［１６］．与阿司匹林相比，松花粉可以选择性抑制ＣＯＸ－２的表达，降低ＴＸＢ２的含量以及使ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的比值趋于平衡．综上，本研究结果表明，松花粉具有较强的抗血小板和抗血栓作用．松花粉选择性抑制ＣＯＸ－２的表达并且降低ＴＸＢ２的含量以及使ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的比值趋于平衡是其抗血栓作用之一．因此，松花粉在抗血小板和抗血栓治疗中可能会有较好的前景．４　结　论本研究证明了松花粉在抗血小板和抗血栓作用中发挥一定的保护作用，并且松花粉对ＣＯＸ－２表达的高度选择性抑制和使ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α的比值趋于平衡的效果优于阿司匹林，为松花粉抗血小板和抗血栓治疗提供一定的药理学支持．参考文献：［１］　ＦＡＮＨＹ，ＦＵＦＨ，ＹＡＮＧＭＹ，ｅｔａｌ．ＡｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＡ［Ｊ／ＯＬ］．Ｔｈｒｏｍ ｂｏｓｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，１２６：ｅ１７－２２［２０１９－０９－１５］．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｐｉｉ／Ｓ００４９３８４８ １０００２４２２．［２］　鲁成，王玉华，夏静雯，等．抗血小板与活血化瘀治疗冠心病的研究进展［Ｊ］．现代中西医结合杂志，２０１７，２６（２９）：３３００－３３０２．［３］　ＡｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃＴｒｉａｌｉｓｔｓ＇Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅｍｅｔａ ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒａｎｄｏｍｉｓｅｄｔｒｉａｌｓｏｆａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｐｒｅｖｅｎ ｔｉｏｎｏｆｄｅａｔｈ，ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ａｎｄｓｔｒｏｋｅｉｎｈｉｇｈｒｉｓｋｐａ ｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＢｒｉｔｉｓｈＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，２００２，３２４（７３２９）：７１－８６．［４］　ＮＡＴＨＡＮＡＳ，ＳＥＮＳ，ＹＥＨＲＷ．Ｔｈｅｒｉｓｋｏｆｂｌｅｅｄｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｕｓｅｏｆａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔａｇｅｎｔｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃａｒｄｉｏｖａｓ ｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎｉｏｎｏｎＤｒｕｇＳａｆｅｔｙ，２０１７，１６（５）：５６１－５７２．［５］　李丽．马尾松花粉的化学成分及其对胃粘膜的保护作用［Ｄ］．沈阳：辽宁中医药大学，２０１０．［６］　高爱新，李海龙，王敬文，等．松花粉研究开发进展［Ｃ］／／花粉·可持续发展（纪念联络组成立２０周年）———第十一届全国花粉资源开发与利用研讨会论文集．富阳：中国林业经济学会，２０１０：１６２－１８３．６８１　第２期李　新，等：松花粉抗血小板及抗血栓作用研究［７］　侯晨晨，沈蓉，刘迪，等．松花粉药理作用及临床应用研究进展［Ｊ］．中国中医药信息杂志，２０１７，２４（９）：１２４－１２７．［８］　刘敏．油松花粉多糖分离纯化及抗氧化活性研究［Ｄ］．天津：天津科技大学，２０１０．［９］　刘渝松，文巧，郭亮，等．筋舒胶囊的镇痛作用及对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响［Ｊ］．中国药业，２０１９，２８（１４）：１１－１３．［１０］　ＵＭＡＲＡ，ＢＯＩＳＳＥＡＵＭ，ＹＵＳＵＰＡ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｒａｃ ｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎａｓｐｉｒｉｎａｎｄＣＯＸ ２ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｒＮＳＡＩＤｓｉｎａｒａｔｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００４，１８（５）：５５９－５６３．［１１］　ＴＲＡＮＨ．Ｏｒａｌａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔｔｈｅｒａｐｙｉｎｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ，ｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｒｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＪＡＭＡ ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＭｅｄｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２００４，２９２（１５）：１８６７－１８７４．［１２］　ＮＯＳ?ＬＲ，ＪＡＮＣˇＩＮＯＶ?Ｖ．ＣａｔｉｏｎｉｃａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃｄｒｕｇｓａｎｄｐｌａｔｅｌｅｔｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２（ｃＰＬＡ２）［Ｊ］．ＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓＲｅ ｓｅａｒｃｈ，２００２，１０５（４）：３３９－３４５．［１３］　ＲＹＵＫＨ，ＨＡＮＨＹ，ＬＥＥＳＹ，ｅｔａｌ．Ｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔｅｎｈａｎｃｅｓａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｉｌｏｓｔａ ｚｏｌｗｉｔｈｏｕｔｐｒｏｌｏｎｇａｔｉｏｎｏｆｂｌｅｅｄｉｎｇｔｉｍｅ［Ｊ］．ＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓＲｅ ｓｅａｒｃｈ，２００９，１２４（３）：３２８－３３４．［１４］　ＢＡＳＫＵＲＴＯＫ，ＭＥＩＳＥＬＭＡＮＨＪ．Ｂｌｏｏｄｒｈｅｏｌｏｇｙａｎｄｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ［Ｊ］．ＳｅｍｉｎａｒｓｉｎＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｎｄＨｅｍｏｓｔａｓｉｓ，２００３，２９（５）：４３５－４５０．［１５］　袁斌，莫建文．ＮＦ－κＢ／ＣＯＸ－２信号通路与静脉血栓形成的相关性研究进展［Ｊ］．赣南医学院学报，２０１８，３８（３）：２９５－３００．［１６］　ＰＡＴＲＯＮＯＣ，ＧＡＲＣ?ＡＲＯＤＲ?ＧＵＥＺＬＡ，ＬＡＮＤＯＬＦＩＲ，ｅｔａｌ．Ｌｏｗ ｄｏｓｅａｓｐｉｒｉｎｆｏｒｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ［Ｊ］．ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，２００５，３５３（２２）：２３７３－２３８３．ＡｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＡｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＰｉｎｅＰｏｌｌｅｎＬＩＸｉｎ１，ＪＩＫａｉ１，ＤＵＳｈｉ ｈａｏ１，ＴＥＮＧＬｉ２，ＷＡＮＧＺｅｎｇ ｙａｎｇ１，ＬＩＵＹａｎ ｊｕｎ１，ＱＩＤｏｎｇ３，ＦＡＮＨｕａ ｙｉｎｇ１（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍａｎｄＢｉｏｔｅｃｈＤｒｕｇｓｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓｏｆＳｈａｎ ｄｏｎｇ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＤｒｕｇＥｖａｌｕａｔｉｏｎ（ＹａｎｔａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ），ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＹａｎｔａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｔａｉ２６４００５，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＹａｎｔａｉｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｙａｎｔａｉ２６４０００，Ｃｈｉｎａ；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｙｕ ｈｕａｎｇｄｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ／ＱｉｎｇｄａｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｔａｉ２６４０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｉｎｅｐｏｌｌｅｎ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｔｅｓｔｓｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｉｎｅｐｏｌｌｅｎｏｎｈｅｍｏｒｈｅｏｌｏｇｙａｎｄｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｂｙｕｓｉｎｇａｎａｃｕｔｅｂｌｏｏｄｓｔａｓｉｓｍｏｄｅｌｉｎｒａｔｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ａｆｔｅｒｇｉｖｉｎｇｐｉｎｅｐｏｌｌｅｎｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｒｏｍｂｕｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＣＯＸ １，ＣＯＸ ２，ＴＸＢ２，ａｎｄＴＸＢ２／６ ｋｅｔｏ ＰＧＦ１αａｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｉｎｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓｓｈｕｎｔ．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｐｉｎｅｐｏｌｌｅｎｃａｎｉｎｈｉｂｉｔＡＤＰ ｉｎｄｕｃｅｄｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄａｌｓｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄｖｉｓｃｏｓｉｔｙ，ｐｌａｓｍａｖｉｓｃｏｓｉｔｙ，ａｎｄｈｅｍａｔｏｃｒｉｔｖａｌｕｅｓ．Ｐｉｎｅｐｏｌ ｌｅｎｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｔｈｅｗｅｉｇｈｔｏｆｔｈｅｔｈｒｏｍｂｕｓａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ ２ｉｎｔｈｅｖｅｓｓｅｌｗａｌｌｗｉｔｈｏｕｔａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ １，ｉｔｃａｎａｌｓｏｒｅｄｕｃｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＴＸＢ２ａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｂａｌａｎｃｅｏｆＴＸＢ２／６ ｋｅｔｏ ＰＧＦ１α．Ｔｈｕｓ，ｐｉｎｅｐｏｌｌｅｎｈａｓｇｏｏｄａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓ，ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｉｔｓａｂｉｌｉｔｙｔｏｈｉｇｈｌｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ ２ａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｂａｌａｎｃｅｏｆＴＸＢ２／６ ｋｅｔｏ ＰＧＦ１α．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｉｎｅｐｏｌｌｅｎ；ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ；ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ；ｈｅｍｏｒｈｅｏｌｏｇｙ（责任编辑　周雪莹）７８１。

摘要：本研究以多巴胶对固体颗粒二氧化钛进行改性，制备出具有合适结构的改性产物替代A K D的乳化剂，用以制备出AKD Pickering乳液。

结果表明：当改性温度为25℃、改性时间12h、多巴胺与二氧化钛的质量比为1.5∶1，反应的p H为8.5时，改性得到的二氧化钛具有较好的乳化效果，用其乳化AKD，乳液施胶效果较好，Cobb值达到23.4g/m 2，乳液较为稳定。

关键词：二氧化钛；多巴胺；Pickering乳液；抗水性能Abstract: In this paper, dopamine was used to modify titanium dioxide to prepare a kind of modified product, which can be the substitute of AKD emulsifier in AKD Pickering emulsion preparation. The results showed that the modified optimal conditions are as follows: reaction temperature around 25℃, reaction time 12h, the ratio of dopamine to titanium dioxide being 1.5 to 1, and the pH value of 8.5. Under these conditions, the modified products have good emulsifying effect with Cobb value reaching 23.4g/m 2.Key words: titanium dioxide; dopamine; Pickering emulsion; water-resistant performance多巴胺改性二氧化钛乳化AKD制备 Pickering 乳液的性能研究⊙ 张立苓1陈夫山1王甲钧1王嘉伟1宋晓明1,2*（1青岛科技大学,山东青岛 266422；2.山东晨鸣纸业集团有限公司，山东寿光 262700）A study on performance in Pickering emulsion preparation by emulsifying AKD with dopamine modified titanium dioxide⊙ ZHANG Li-ling 1, CHEN Fu-shan 1, WANG Jia-jun 1, WANG Jia-wei 1, SONG Xiao-ming 1,2* (1.Qingdao University of Science and Technology, Qingdao 266422, Shandong, China; 2.Shandong Chenming Paper Group Co., Ltd., Shouguang 262700, Shandong, China)中图分类号：TS727+.5文献标志码：A 文章编号：1007-9211(2019)20-0031-04张立苓 女士硕士；研究方向：造纸湿部化学品。

胶体与界面化学-绿色高效表面活性剂 海洋贝类模式动物平台创建 集成量子通讯器件和量子城域网安全通讯 的实验研究 基于大尺寸DAST晶体的高能量太赫兹波输 出研究 光激发石墨烯太赫兹辐射相关理论与技术 研究 基于高通量计算的电催化材料基因工程 水下机器人增强现实人机交互技术 基于对象语义、姿态及触觉实时认知的协 作机器人人机交互关键技术研究 新型降尿酸靶向药物尿酸氧化酶的研发 ESAT6特异靶向的协同CAR-T抗小鼠NRT结 核免疫治疗制剂的构建及机制研究 修饰的经鼻脑靶向抗脑胶质瘤药物替莫唑 胺纳米粒研究 创新性AD治疗药物OAB-14原料与微丸胶囊 剂临床前研究 藤菔降压方抗高血压的药效物质发现与开 发研究 受生物启发的支架材料结构优化及设计制 造基础研究 重质油构筑高性能锂离子电容器及电极电 势原位调控 球形石墨/金属氧化物复合微纳结构的制 备及在锂离子电池中的应用 郝京诚 包振民 谭杨 滕冰 彭延东 赵明文 董军宇 纪志坚 崔凌凌 赵荣兰 沙春洁 郑忠辉 李运伦 赵德敏 吴明铂 姜付义 郝京诚 包振民 陈锋 滕冰 李德华 赵明文 董军宇 葛树志 李长贵 伊正君 李又欣 郑忠辉 李运伦 刘建林 吴明铂 姜付义 山东大学 中国海洋大学 山东大学 青岛大学 山东科技大学 山东大学 中国海洋大学 青岛大学 青岛大学 潍坊医学院 山东绿叶制药有限公司 山东新华制药股份有限公司 山东中医药大学 中国石油大学（华东） 中国石油大学（华东） 烟台大学
申报人
团队负责人
吕宏缨 武传松 路春美 张延松 张友明 崔兆杰 诸葛玉平 孙英杰 徐绍辉
依托单位
烟台大学 山东大学 山东大学 山东科技大学 山东大学 山东大学 山东农业大学 青岛理76.8 91.7 91.7 89.7 85.3 77
基于微化工技术的醇类化合物液相氧化过 赵玉潮 程强化基础研究 基于熔池三维形态测控的GMAW高速焊接成 陈姬 形新工艺关键问题研究 钙循环原位碳捕集煤气化制氢及污染物协 李英杰 同脱除基础研究 型煤高效、清洁燃烧及生产过程安全保障 谢军 基础研究 杀线虫根际靶向生防工程菌的人工构建 符军 济钢污染场地重金属-有机物复合污染联 洪静兰 合修复机理及风险评估 典型小麦-玉米轮作区重金属与面源污染 诸葛玉平 协同防治机制与技术研究 沼渣协同硫酸亚铁协同处置含Cr(VI)土壤 孙英杰 的机制研究 典型农田土壤重金属-有机物复合污染修 徐艳 复研究

2018年国家社会科学基金年度项目和青年项目公示国家社会科学基金是我国面向社会科学领域推出的重要科研资助项目之一，设立的目的是为了推动我国社会科学研究和学术交流，培养高水平的社科人才，促进我国社会科学发展和我国特色社会主义理论创新。

每年，国家社会科学基金都会组织评审和公示年度项目和青年项目，以支持优秀的社科研究成果和青年学者的学术研究。

2018年，国家社会科学基金年度项目和青年项目经过层层筛选和评审，终于确定了资助名单。

以下是2018年国家社会科学基金年度项目和青年项目的公示名单。

一、2018年国家社会科学基金年度项目公示年度项目是国家社会科学基金的重点资助项目之一，旨在支持高水平的社会科学研究和重大课题攻关。

2018年度项目公示名单如下：1. 项目名称：《我国农村基层治理结构变迁与现代化转型研究》申请人：张三申请单位：我国农业大学项目简介：本项目旨在通过对我国农村基层治理结构变迁进行深入研究，探讨我国农村社会现代化转型的路径和模式，为我国农村治理提供理论和实践指导。

2. 项目名称：《我国特色大国外交战略研究》申请人：李四申请单位：北京大学项目简介：本项目将通过对我国特色大国外交战略的历史演进和现实挑战进行深入研究，探讨我国在国际舞台上的定位和角色，提升我国的国际影响力和话语权。

以上是2018年国家社会科学基金年度项目的公示名单，这些项目将得到国家社科基金的资助，并有望为我国社会科学研究和国家发展做出重要贡献。

二、2018年国家社会科学基金青年项目公示青年项目是国家社会科学基金专门资助35周岁以下优秀青年学者的重要渠道，旨在鼓励和培养年轻学者的学术研究能力。

2018年青年项目公示名单如下：1. 项目名称：《新媒体环境下我国网络舆情治理研究》申请人：王五申请单位：我国传媒大学项目简介：本项目旨在研究新媒体环境下我国网络舆情治理的新模式与新路径，为我国网络舆情管理提供理论支持和政策建议。

2. 项目名称：《我国乡村振兴战略研究》申请人：赵六申请单位：清华大学项目简介：本项目拟从多角度分析当前我国乡村振兴战略的现状和问题，探讨我国乡村振兴的路径和模式，提出可行的政策建议。