唐筛甲胎蛋白正常值
一、唐筛甲胎蛋白正常值二、甲胎蛋白升高有什么意义三、孕妇甲胎蛋白弱阳性意味着什么
唐筛甲胎蛋白正常值1、唐筛甲胎蛋白正常值
甲胎蛋白的正常值应大于2.5MoM,化验值越低,胎儿患唐氏症的机会越高。而绒毛膜促性腺激素越高,胎儿患唐氏症的机会越高。
另外,医生还会将唐筛甲胎蛋白值、绒毛膜促性腺激素值以及孕妇的年龄、体重、怀孕周数输入电脑,由电脑算出胎儿出现唐氏症的危险性。如果化验结果显示危险性低于1/270,就表示危险性比较低,胎儿出现唐氏症的机会不到1%。但如果危险性高于1/270,就表示胎儿患病的危险性较高,应进一步做羊膜穿刺检查或绒毛检查。
2、孕妇甲胎蛋白偏高怎么办
孕妇甲胎蛋白偏高大部分属于正常现象,因为胎儿能合成甲胎蛋白,一般在怀孕30周左右甲胎蛋白浓度最大。但是一些肝病等疾病也会导致孕妇甲胎蛋白偏高,因此要到医院及时检查,诊断是什么原因导致甲胎蛋白偏高。
甲胎蛋白主要在胎儿肝中合成,它在血浆中的浓度会在妊娠30周时达到顶峰,以后逐渐下降,出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右,到周岁时就和普通的成人一样了。
孕妇甲胎蛋白偏高也可能是一些疾病引起的,如孕妇本身患有急慢性肝炎、肝硬化、肝癌等肝胆疾病及胚胎瘤时,或胎儿在宫腔内出现异常情况时(如脊柱裂、神经管缺损、无脑以及死亡、脐胎瘤等先天性的缺陷)也可导致孕妇血中的甲胎蛋白高出正常水平。
甲胎蛋白检测的临床意义 甲胎蛋白是一种糖蛋白，正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生后约两周甲胎蛋白从血液中消失，因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克/升。 形成过程 甲胎蛋白（α-fetoprotein,αFP或AFP）主要在胎儿肝中合成，分子量6.9万，在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右，约40mg/L，在周岁时接近成人水平（低于30μg/L）。 胎儿在有神经管缺损、脊柱裂、无脑儿等时，AFP可由开放的神经管进入羊水而导致其在羊水中含量显著升高。胎儿在宫腔内死亡、畸胎瘤等先天缺陷亦可有羊水中AFP增高。AFP可经羊水部分进入母体血循环。在85%脊柱裂及无脑儿的母体，血浆AFP在妊娠16-18周可见升高而有诊断价值，但必须与临床经验结合，以免出现假阳性的错误。 在成人，当肝细胞发生癌变时，肿瘤细胞可恢复产生这种蛋白质的功能，而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加。在其它肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者的癌组织中亦可出现不同程度的升高。 甲胎蛋白检测方法 甲胎蛋白的测量方法不同，正常值水平也有所不同，测量方法主要有酶标法、酶标电泳法、放射免疫法检测三种测量方法，正常值范围如下： 一、甲胎蛋白(AFP)用酶联免疫法测量时的正常值为：≤25μg/L。 二、甲胎蛋白(AFP)用放射免疫分析的正常值为：≤20μg/L。 三、甲胎蛋白(AFP)用放射免疫电泳法测量时的正常值为：≤25μg/L（重点提示：若在25～400 ug/L之间为低浓度阳性，超过400ug/L为高浓度阳性，若甲胎蛋白升高幅度不大，在50ug～300ug/L，可能是病毒性肝炎）。
甲胎蛋白异质体 甲胎蛋白异质体（Variants of AFP or molecular heterogenetic of AFP ）是一种单链糖蛋白，含糖量约为4％左右。不同组织细胞合成的AFP，其糖链结构有所不同，对植物凝集素的结合能力也不相同，此种糖链结构不同的AFP称为AFP的亚型或变异体，也称为AFP分子异质体。近年来对AFP异质进行了电泳、糖链结构及与植物凝集素结合能力等方面进行了深入研究。有资料表明，AFP异质体存在着分子大小和电荷量的差异。淀粉胶电泳将人肝癌血清AFP分为4种亚型；用SDS聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳发现AFP可分为分子量72kD和kD两种成分；等电聚焦结合交叉免疫电泳可使胎儿AFP分成10种等电点不同的异质体。这表明AFP异质体存在着电泳不无一性，这与其一级结构差异有关。其C－末端结构基本相同，N末端至少有3种不同结构，这能否产生AFP电泳异质性有待于证实。AFP结构中的糖链主要由甘露糖、半乳糖、N－乙酰葡萄糖和唾液酸，并以寡糖单位的形式组成。AFP 异质体糖链结构的差异主要表现在分支结构的不同，刀豆素A（ConA）结合型和非结合型AFP异质体的糖链结构模型差异表现在一个分支中有无－GLcNAc-Gal-NeuNAc结构。对人肝癌AFP糖链结构电泳研究发现，其寡糖分为中性（N）、酸性（A1，A2）三种成分。进一步研究证实N两分支末端均由半乳糖组成，A1两分支末端分别为半乳糖和N－乙酰神经氨酸，A2则均为N－乙酰神经氨酸。卵黄囊肿瘤的AFP其ConA亲和性组占50％左右，肝癌腹水中与LCA结合的AFP糖链中具有与Asn连接的N－乙酰基葡萄糖胺残基，而在非结合型异质体的糖链中无此成分。 根据AFP与外源性凝集素（Lectin）结合能力的差异，可分为不同的变异体。采用扁豆凝集素（LCA）／刀豆素A亲和电泳或层析技术能将AFP分为LCA／ConA非结合型AFP （AFP－N－L／AFP－N－C）和LCA／ConA结合型AFP（AFP－R－L／AFP－R－C）两种。新的Lectin的应用，使AFP在糖链结构上异质体达9种之多。AFP异质体的命名方法为：从阴极开始在LCA亲和电泳上AFP的条带依次为L1、L2、L3；在E－PHA亲和电泳上AFP的条带依次为P1、P2、P3、P4、P5；用ConA时按AFPC1、C2命名；alloA时按AFPA1、A2、A3命名。AFPL2、L3完全不能分离，存在中间成分时按AFPL2、L3命名，AFPP4、P5分离不充分时命名为AFP－P4＋AFP－P5。因此，AFP对不同的Lectin反应所表现的异质体不同，故可用于疾病的鉴别诊断。 AFP异质体亲和交叉免疫电泳检测法 【原理】 根据AFP对刀豆素（ConA）或小扁豆凝集素（LCA）结合能力的不同，可区别原发性肝细胞癌与非原发性肝癌引起的AFP升高，提高AFP对肝癌的诊断价值。此法原理是将检样于含LCA的琼脂糖凝胶中电泳，与LCA结合型AFP在电泳时被阻留，而非结合型AFP 则向阳极侧泳动。然后，与首次电泳的方向垂直，在含抗AFP的琼脂糖胶中作第二次电泳。此时被首次电泳分离的AFP异质体，将分别于含抗AFP的凝胶板中形成沉淀峰,根据峰的大小即可了解结合型或非结合型AFP所占的比例。 【试剂】 1．小扁豆凝集素（LCA）。 2．抗AFP血清：同ELISA法。 3．10.0g/L琼脂糖：琼脂糖1.0g加0.25mol/L pH8.6巴比妥缓冲液100ml，沸水浴中使溶，加入NaN3使达1.0g/L，按需要量分装后密塞，4℃保存。 4．125I－AFP。 【试剂】 1．小扁豆凝集素（LCA）。
唐氏筛查afp正常值范围 一、唐氏筛查afp正常值范围唐氏筛查是一种通过抽取孕妇血清,检测母体血清中甲型胎儿蛋白、绒毛促性腺激素和游离雌三醇的浓度,并结合孕妇的预产期、体重、年龄、体重和采血时的孕周等,计算生出先天缺陷胎儿的危险系数的检测方法。 唐氏血清筛查是检查唐氏儿很有效的方法,任何孕妇都有可能怀上唐氏综合征的胎儿。过去认为:>35岁的是高危人群,几率会随着孕妇年龄的递增而升高。认为80%的唐氏综合征发生在>35岁的孕妇当中。唐氏筛查既能缩小羊水检查的范围,又不会遗漏可能怀有唐氏儿的孕妇,建议每一位孕妇都要进行唐氏筛查,做到防范于未然。检查血清afp、HGG还可筛查出神经管畸形、18三体综合征及13三体综合征的高危孕妇。那么唐氏筛查afp正常值范围是多少呢？首先,我们要知道afp是什么。 甲胎蛋白是一种糖蛋白,英文缩写afp。afp是胎儿的一种特异性球蛋白,分子量为64000-70000道尔顿,在妊娠期间可能具有糖蛋白的免疫调节功能,可预防胎儿被母体排斥。 afp在妊娠早期1-2个月由卵黄囊合成,继之主要由胎儿肝脏合成,胎儿消化道也可以合成少量afp进入胎儿血循环。妊娠6周胎血afp值快速升高,至妊娠13周达高峰,此后随妊娠进展逐渐下降至足月,羊水中afp主要来自胎尿,其变化趋势与胎血afp相似,母血afp来源于羊水和胎血,但与羊水和胎血变化趋势并不一致。妊娠早期,母血afp浓度最低,随妊娠进展而逐渐升高,妊娠28-32周时达高峰,以后又下降。 正常情况下,这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞,胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失,因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克
甲状腺球蛋白与分化型甲状腺癌的关系 【摘要】甲状腺球蛋(Tg)是分化型甲状腺癌(DTC)的肿瘤标志物，血清Tg测定对DTC复发或转移的诊断和检测治疗效果有重要意义。本文对甲状腺球蛋白的理化特性，临床检测方法以及其与分化型甲状腺癌患者预后的相关性进行总结，为临床准确判断分化型甲状腺癌预后提供参考。 【关键词】甲状腺球蛋白; 分化型甲状腺癌 随着医学研究的不断发展与进步，人们发现甲状腺球蛋白( Tg) 是分化型甲状腺癌(DTC) 的肿瘤标志物，它可作为DTC患者治疗后随访的重要参考指标。但Tg 检测受多种因素影响，临床医师在判断其检测结果及分析其临床价值时，应全面考虑影响T g 的各种因素。并且近年来，众多学者对Tg进行了大量研究。 1、Tg的结构及作用机制 甲状腺球蛋白属糖蛋白，来源于功能性甲状腺组织，占全部甲状腺蛋白的75%，是甲状腺滤泡上皮细胞分泌的大分子糖蛋自，由两个相同的单体肽链组成，分子量为660kDa。正常情况下其受促甲状腺激素（TSH）调节，在甲状腺细胞内循环，在蛋白水解酶的作用下，仅极少部分Tg经甲状腺淋巴管分泌入血。它可以促进甲状腺激素的碘化合成，每个Tg 结合2.5个甲状腺素（T4）和0.7个三碘甲腺原氨酸（T3）分子，储存于滤泡腔中。溶酶体内的酶水解Tg，使T4、T3释放入血，正常人血清均可以检测到Tg，其浓度为3~40ug/L。生理条件下，血清Tg 含量很少。当患者发生甲状腺良性和恶性疾病时，血清Tg 水平均会升高，因此Tg 不适合作为诊断指标[1]，但术后血清Tg 的动态检测对甲状腺癌术后随诊很重要，是患者预后检测必不可少的一个指标，现已广泛应用于临床中，有助于发现DTC 的持续存在、复发或转移[2-4]。 Tg的浓度主要由3个因素决定:甲状腺的大小、甲状腺的损伤程度（如活检、外伤、出血、放射性损伤及炎症等）、激素的影响（如促甲状腺激素（TSH）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）及TSH受体抗体（TRAb）等）。在稳定状态下，甲状腺大小是影响血清Tg水平的主要因素。当甲状腺大小稳定时，血清Tg水平和TSH 的浓度呈正相关。 2 、Tg的检测方法 目前检测Tg的方法主要有放射免疫分析法（RIA）免疫放射量度分析法（IRMA）两大类。RIA的原理是标记抗原（Ag）和非标记抗原（Ag）或待测物，与特异性抗体进行竞争结合，灵敏度最高可达10-14mol/L。IRMA是以标记过量抗体与被测抗原或被测物的非竞争结合为基础的方法，灵敏度更高（最高可达10-16mol/L）。由于两种检测方法的原理不同，因此当血中有TgAb存在时，两种检测方法将从不同的角度影响检测结果。 TgAb阳性时，因IRMA是特异性较高的双位点夹心法，血清TgAb可与试剂中的标记
临床常用实验室检查正常值 血液检查 红细胞成年男性（4.0~5.5）×1012/L 女性（3.5~5.5）×1012/L 新生儿（6.0~7.0）×1012/L 血红蛋白成年男性120~160g/L 女性110~150g/L 新生儿170~200g/L 白细胞成人（4~10）×109/L 新生儿（15~20）×109/L 6个月~2岁（11~12）×109/L 白细胞分类N 50~70% E 0.5~5% B0~1% L20~40% M3~8% 血小板（100~300 ）×109/L 红细胞比容男0.4~0.5 女0.37~0.48 红细胞平均指数MCV82~92fl MCH27~31pg MCHC320~360g/L 出血时间Duke法 1~3min 凝血时间试管法 4~12min 凝血酶原时间11~13s 网织红细胞0.5%~1.5% 平均1%新生儿2%~6% 红细胞沉降率男0～15mm/h 末女0～20mm/h末 尿液检查 颜色淡黄色 尿量1000~2000ml/24h 平均1500ml/h 比重最大变动范围 1.003~1.030以上 一般变动范围 1.015~1.025 晨尿 1.020左右 尿沉渣检查 红细胞 0~偶见/HP 上皮细胞 0~少量/HP 白细胞＜5/HP 透明管型 0~偶见/LP 12小时沉渣计数（Addis计数） 白细胞＜1000000 /12h 红细胞＜500000/12h 管型＜5000/12h 1小时尿细胞计数 白细胞男＜7×104/h女＜14×104/h
红细胞男＜3×104/h女＜4×104/h 中段尿培养菌落形成单位（CFU） 杆菌：＞105CFU肯定为感染 球菌：＞103CFU肯定为感染 尿葡萄糖定性（—）定量斑氏法 0.1~0.9g/d 尿蛋白定性（—）定量＜150mg/24h 尿蛋原 稀释试验＜1∶20 定量 0~5.9mol/L（0~3.5mg/d） 尿酮体试验定性（—） 尿胆红素试验定性（—） 尿妊娠试验定性乳胶法（—） 粪便检查 颜色：黄褐色量100~300g/日细胞（上皮细胞或白细胞）0~偶见/HP，食物残渣、大量植物细胞、淀粉颗粒、肌纤维等。隐血试验阴性。 血清蛋白测定 总蛋白60~80g /L 白蛋白40~55g/L 球蛋白20~30g/L A/G比值 1.5：1~2.5：1 甲胎蛋白（α-FP，AFP）0~25μg/L （0~25ng/ml）血清C反应蛋白（CRP） 单向免疫扩散法〈8mg/L 尿素氮成人3.2~7.1 mmol/L 儿童1.8~6.5 mmol/L 尿酸119~238μmol/L 肌酐全血88.4~176μmol/L 血清男性53~106μmol/L 女性44~97μmol/L 血糖（空腹） 全血（Folin-吴法）4.4~6.7（80~120 血清（邻甲苯胺法）3.9~6.4 mmol/L(70~110 mg/dl） 血钾（K+）4.1~5.6 mmol/L（4.1~5.6 mEq/L） 血钠（Na+）135~144 mmol/L（135~144 mEq/L） 血钙（Ca2+） 2.2~2.7 mmol/L
甲胎蛋白检测操作规程 【检验原理】 产品采用双抗体来心法定量测定人血清中的甲胎蛋白(AFP)的含量。在微孔版的孔内先包被了识别抗AFP的单克隆抗体,用辣根过氧化酶标记另一株与之配对的单克隆抗体。待测孕妇血清样本中的AFP与包被的和酶标记的两株单克隆抗体形成夹心抗原抗体反应。再加上发光底物,用微孔板发光分析仪读取发光数值,发光值与待测血清中AFP含量成正比。 【储存条件及有效期】 试剂盒于2-8℃避光贮存，不得冻存,有效为12个月。 开封有效期:板条开封后2-8C存放效期为3个月,其他液体组份同成品试剂盒效期。 【检测仪器及试剂】 仪器：重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪 试剂：潍坊康华甲胎蛋白检测试剂盒（化学发光法） 【样本要求】 抽取静脉血3mL,置一次性采血管内,充分离心,吸取血清,不应有溶血及细胞颗粒:血清标本4℃存放最好不要超过3天,若不能及时检测,应-20℃冻存,检测时应将标本融化后混合均匀,并避免反复冻融。 【检验方法】 手工操作步骤: 1、将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡30分钟 2、,将浓缩洗涤液按1:40的比例稀释,摇匀备用,作为应用洗涤液 3、根据AFP参考品、质控品及待测标本确定所需孔数。 4、直接取AFP参考品、质控品及标本各25微升加入相应孔内,再每孔加入50 微升AFP酶结合物,用振荡器振荡30秒钟(此步非常重要),盖上封板膜,置37℃温浴1小时。 5、取出,用应用洗涤液洗涤5次,洗涤时每孔注满洗涤液,停留10秒后吸尽拍干。 6、根据使用量,将底物液A、B按1:1混匀,现用现配。每孔加入50微升,用振荡器振荡20秒钟,设定每孔测量时间为1秒,于10-20分钟内测定结果。 仪器操作步骤： 按照重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪操作规程检测。 【参考区间】 测定正常人血清样本并结合参考文献的报道,建议正常参考值范围如下: 正常人血清中AFP浓度<20ng/mL 若用于产前筛查,应结合相应的风险分析评估软件使用。 由于地区及人群的差异,以上范围仅供参考,各实验室在长期实践中应建立本实验室自己的正常参考值范围。 【检验结果的解释】 AFP质控品Q1浓度应为2.5-7.5ng/mL,质控品Q2应为105~195ng/mL 【检验方法的局限性】 1、每次检测必须做AFP标准曲线,不能使用以前做过的标准曲线。 2、含大量脂质、严重黄及溶血或加热灭活之标本均可能影响检测结果。 3、建议按《产前诊断技术管理办法》的有关规定使用本品 4、本品仅用于人血清的测定,不得使用抗凝血浆。 5、用其他方法得出的AFP浓度值与本品测定结果不具有直接的可比性,应结合其他有关的临床诊断结果作
抗甲状腺球蛋白抗体高吃什么好 抗甲状腺球蛋白抗体高是一种检查的指标，这种指标意味着你的甲状腺是不正常的，这种不正常主要是源于甲状腺疾病。当出现甲状腺疾病之后，饮食就变得特别的重要，以为甲状腺与人们日常都需要摄入的碘元素有关。为此，我们一起来了解下抗甲状腺球蛋白抗体高吃什么好。 抗甲状腺球蛋白抗体高是桥本病即慢性淋巴细胞性甲状腺炎,慢性淋巴细胞性甲状腺炎的病程分为1）短暂的甲亢期：治疗可以用抗甲状腺药物治疗，如果有明显的心率增快可以用β受体阻断药对症治疗，结合中药提高免疫力降低抗体，要预防甲减的发生。2）甲状腺功能正常期：主要是用中药改善免疫力降低抗体，减缓疾病的发展，使其不进入甲减期或晚进入甲减期，争取治愈。3）甲减期：适当补充甲状腺素，稳定甲状腺功能，结合中医中药调整阴阳平衡，恢复免疫功能降低抗体，积极治疗争取减少西药的替代量，达到部分停药或长期缓解的目的。 ★甲状腺疾病饮食禁忌
(1)能多吃具有消结散肿作用的食物，包含菱、油菜、芥菜、猕猴桃等是甲状腺结节饮食原则。 (2)可以多吃具有加强免疫力的东西，比如香菇、蘑菇、、红枣、山药和新鲜水果等也是常常的甲状腺结节饮食禁忌。 (3)可以多吃含碘量高的食物，如海带、紫菜、发彩、干贝、甲鱼等是甲状腺结节饮食禁忌之一。 能多吃具有消结散肿作用的食物 忌吃如下食物 (1)甲状腺结节的饮食：不要吃肥腻和油煎的食物。 (2)不要吃辛辣刺激性食物，如大葱、花椒和辣椒、桂皮等是甲状腺结节的饮食禁忌。 如果我们拥有一个健康的作息时间 (3)不要吸烟喝酒。
如果我们拥有一个健康的作息时间，健康而规律的饮食，还有健康乐观的心态，都是守护我们健康很重要的因素所在，朝着这个方向努力，准没错。希望大家都能健康如意。 ★一、甲亢 1.慎用含碘过高食物 甲亢并非因缺碘而致，使用碘治疗应遵照医师指导准确使用碘的剂量。否则饮食中大量摄碘，如海带、海藻、昆布等，影响医生对病情的判断与分析，将干扰临床治疗。 2.甲亢患者多属阴虚阳亢证型 甲亢患者多属阴虚阳亢证型 应禁忌以下食物忌辛辣食物，如辣椒、刺激性的饮料、酒、韭菜、生葱、生姜、生蒜等，以及热性和有壮阳升火作用之食物， 如：桂皮、生姜、羊肉、狗肉、鹿肉、麻雀、海虾、海马、
药物 关键点 1、某些药物会影响垂体及其分泌促甲状腺激素的功能； 2、还有一些药物治疗会直接导致甲状腺功能紊乱或引起甲状腺自身免疫； 3、常规的药物治疗会引起甲状腺结合蛋白、去碘酶和甲状腺激素代谢的改变； 4、一些药物会导致胃肠道对左甲状腺素片的吸收下降； 5、了解这些药物，对于分析甲状腺功能检测结果是十分重要的。 了解促甲状腺激素（TSH）和甲状腺激素（TH）的水平，对于正确的估计甲状腺功能是十分重要的。然而，各种各样的药物治疗会对上述激素水平及其他甲状腺功能检测（TFTs）结果产生干扰。一些药物会导致甲状腺功能紊乱，而另外一些药物则不会对TFTs产生影响。了解了一些药物会对上述检查产生影响，就要尽量减少不恰当的治疗。这一章，我们回顾一下药物治疗的作用：（1）扰乱垂体对甲状腺的作用；（2）改变甲状腺自身功能；（3）干扰甲状腺激素的激活形式（4）改变甲状腺激素结合蛋白的水平和/或功能（5）减弱甲状腺激素在胃肠道的吸收率。了解药物治疗及其对甲状腺激素的作用对甲状腺功能紊乱患者的诊断和治疗是十分重要的。 1、药物对垂体促甲状腺细胞的影响 位于垂体前叶分泌TSH的细胞叫做促甲状腺细胞。TSH由两个亚族组成，两个亚族都是由促甲状腺细胞构成的。第一个亚族普遍存在于TSH、卵泡刺激素（FSH）、白介素（LH）和人绒膜促性腺激素（hCG）。第二个亚族是TSH所特有的。许多药物都是作用于促甲状腺细胞以抑制TSH的合成和/或分泌，这要与其他原因引起的继发性甲状腺功能减退进行区分。要想知道药物是如何影响TSH 水平的，就要明确TSH的合成过程。下丘脑分泌的促甲状腺激素释放激素（TRH）是刺激TSH分泌的最主要因素。TRH能够刺激TSH合成，促进TSH分泌并且通过使TSH糖基化而增强TSH的生物学作用。抑制TSH分泌的最主要因素是甲状腺激素，后者通过一个经典的负反馈环路而发挥抑制作用。然而，还有许多其他影响TSH分泌的因素，如下丘脑分泌的多巴胺、生长激素抑制素和肾上腺皮质激素。药物能够通过调节和/或模拟这些激素的作用而改变TSH的水平。 糖皮质激素通过也糖皮质激素受体（GR）结合而对基因转录产生促进或抑制作用。糖皮质激素对TSH两个亚族的基因转录都有抑制作用。然而，GR对TSH 的两个亚族基因合成的调节机制还不明确。对于是否还受其他垂体细胞的调节，目前还不清楚[1]。糖皮质激素也能减弱TSH的脉冲式分泌，这说明，前者对TRH 神经元也有调节作用。 糖皮质激素缺乏会导致TSH的水平升高，并且有研究证明，对患有Addison,s 疾病的患者进行氢化可的松替代治疗会降低TSH的水平。反之，当在临床上应用药理学剂量的糖皮质激素时，会降低TSH的水平。当TSH水平可测时，应用糖皮质激素治疗偶尔会与原发性甲状腺功能亢进症相混淆。与原发性甲状腺功能亢进症不同的是，当应用糖皮质激素治疗时，TSH通常不会被完全抑制，所以应用高敏TSH检查通常能将这两种情况区分。糖皮质激素对TSH的影响经常与继发性甲状腺功能亢进症及严重的非甲状腺疾病（NTI，又称为正常甲状腺功能病态综合症）对TSH的影响难以区分，检测rT3的水平，rT3在NTI时通常是可测的，这对于与后一种情况鉴别是很重要的。糖皮质激素对生理水平的甲状腺激素有多
关于甲胎蛋白（AFP）定量分析的开展说明AFP是血清中一种α球蛋白，分子量68000，从妊娠6周开始由卵黄囊和胎儿肝产生，13周达到高峰，胎儿出生后3个月至第二年逐渐降至成人水平并保持终身。主要起免疫抑制作用。它不仅是胎儿宫内发育状态的重要监测指标，同时又是肿瘤组织产生的肿瘤标志物之一，因此在围产保健和肿瘤诊治方面有重要作用，并已列常规检查。AFP放免定量克服了普通的AFP定性的使用局限性和单一片面性，以确切的数值形式，表达血液中AFP 实际水平，客观反映机体变化状态，对病情的诊断、发展、转归做出可靠的动态观察。 一、AFP在胎儿血中浓度很大，羊水中浓度比胎儿血低100倍，随着胎儿血AFP?浓度的波动，羊水中AFP浓度也波动，因此可测定羊水和母体血中的AFP浓度来判断胎儿发育有无重大异常。 （一）各孕周参考值单位：ng/ml 10 17.5±11.0 22 90±56 29 187±133 36 234±139 12 36±27 23 100±57 30 164±115 37 192±142 15 50±33 24 115±63 31 193±100 38 167±96 18 71±49 25 133±45 32 237±140 39 153±102 20 93±57 26 150±50 33 234±114 40 145±123 21 80±56 27 126±64 34 212±140 28 175±90 35 236±155 (二)临床意义 1、异常妊娠，血AFP定量鉴别正常妊娠和绒癌，后者血清AFP?不升高与非妊娠妇女无异。 2、先兆流产，部分妊娠初、中期先兆流产孕妇血清AFP值比正常孕妇低，稽留流产和自然流产孕妇血AFP值增高. 3、有胎块的葡萄胎，胎盘、羊水疾病可使AFP含量增高。 4、高危妊娠，母儿血型不合，糖尿病孕妇血清AFP增高。 5、无脑儿，多胎，低体重母血AFP增高。 6、先天性开放性神经管畸形的胎儿，母血、羊水中AFP含量异常增高，10-16周孕妇血清AFP比正常高10倍，可诊断开放性神经管缺损，其预价值99.96%。 7、死胎、胎儿窒息，胎儿低氧症，母血AFP增高，孕妇血清AFP〉800ng/ml预示胎儿处于危境或死亡，〉1075ng/ml后见流出死胎块，孕15周当母血AFP含量≤10ng/ml预示胎儿危险，如≤5ng/ml有30%胎儿未存活。 8、先天性食管、十二指肠、胆道闭锁，先天性皮肤缺损，肾发育不全，染色体异常母血或羊水AFP增高，检查宜在分娩前30周进行，由于诊断可靠，可及时中止妊娠。 二、成人血中AFP由肝细胞产生，含量极微，AFP放免分析对肝细胞癌的早期诊断，鉴别诊断，流行病学调查和理论研究都很有价值。 1、AFP重新升高对肝细胞癌诊断的阳性率在70-90%，肝癌高发区AFP〉200ng/ml持续8周以上或者临床上AFP浓度达300-500ng/ml,经2-4周复查不下降或上升对原发肝癌的诊断比较肯定。 2、AFP动态变化与病情有一定关系，AFP高预后不好，手术切除后2个月AFP应降至正常，不降低或降而复升提示手术效果欠佳或复发，同时又可作放、化疗效果和评价。 3、急慢性肝炎，肝炎后肝硬化，也有10%-50%的患者有一过性低水平升高。 4、AFP与CEA（癌胚抗原）配合使用，鉴别原发性肝癌和继发性肝癌。AFP明显升高，CEA正常或者略高，提示原发肝癌可能性大。CEA升高而AFP正常或升高幅度不大，则考虑为继发。 5、睾丸、卵巢、腹膜、恶性畸胎瘤以及其他消化道肿瘤AFP可以升高。
论著·临床辅助检查 CHINESE COMMUNITY DOCTORS 肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国发病率排在第3位，其中乙型肝炎病毒(HBV)感染与肝细胞癌(HCC)的发生发展密切相关。肝癌的发生发展是由多种因素引起的，常见的诱发因素有乙肝病毒慢性感染、丙肝、黄曲霉素及遗传因素等[1]。血清学中甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)是近年来用于肝癌早期诊断及判断预后的重要指标[2，3]。为此本文拟探讨乙肝相关性肝癌患者不同HBV-DNA 载量组别中AFP-L3和PIVKA-Ⅱ的差异，现报告如下。资料与方法2012年1月-2016年6月收治乙型肝炎相关肝癌患者115例，其中男75例，女40例，平均年龄(51.7±12.9)岁。病例纳入参照2011年卫生部《原发性肝癌诊疗规范》的标准[4]。根据HBV-DNA 病毒载量将病例分为低载量组(＜104IU/mL)65例和高载量组(≥104IU/mL)60例。两组一般资料比较，差异均无统计学意义(P ＞0.05)，有可比性。检测指标及方法：空腹采集患者2mL 外周静脉血，置于真空抗凝管中并分离血清，用于检测血清AFP-L3和PIVKA-Ⅱ的水平，并按照RNA提取试剂盒提取DNA 用于HBV-DNA 病毒载量测定。PIVKA-Ⅱ采用日本富士G1200化学发光免疫分析仪及配套试剂，严格按照仪器和试剂说明书进行检测；亲和吸附法：从血清中分离AFP-L3，用雅培i2000化学发光免疫分析仪及其原装配套试剂检测AFP-L3含量。HBV-DNA 病毒载量采用荧光定量聚合酶链反应，使用厦门安普利生物工程有限公司生产的乙肝肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(荧光PCR 法)。统计学方法：采用SPSS 17.0对数据进行统计分析，计量资料用(x ±s )表示，采用t 检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。结果HBV-DNA 病毒高载量组中AFP-L3和PIVKA-Ⅱ分别为(189.7±56.9)ng/mL 和(1996.1±359.6)mAU/mL，明显高于低载量组，差异具有统计学意义(均P ＜0.05)，见表1。讨论 我国是个乙肝感染的大国。乙肝患者由于血清中HBV 病毒的复制，体内HBV-DNA 可被激活并以肝细胞内cccDNA 为模板进行大量病毒复制，导致肝细胞损伤及肝功能异常，HBV-DNA 病毒载量高低与乙肝相关性肝癌患者肝脏损伤程度具有一定的相关性[5，6]。 随着现在临床诊疗技术的不断发展，目前用于肝癌诊断的标志物主要有甲胎蛋白、AFP-L3、PIVK A-Ⅱ、HCC 易感基因等。AFP 对原发性肝癌的诊断具有较高的敏感性和特异性，但有 35%～40%原发性肝癌患者血清AFP 浓 度升高变化不明显，有时甚至正常，对 于肝癌的早期临床诊断效能比较低，已经无法满足临床的需要。近年来的研究发现，AFP-L3是AFP 的一种亚型，根据与植物凝集素(LCA)的结合能力不同分为AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3，其中AFP-L1、AFP-L2为LCA 非结合型，而AFP-L3为LCA 结合型。不同的甲胎蛋白异质体，其组织来源不同，其中AFP-L1主要来源于慢性肝炎和肝硬化，AFP-L2 doi:10.3969/j.issn.100614x.2017.2.80 摘要目的：探讨乙肝相关性肝癌不同HBV-DNA 载量组别中血清甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和异常凝血酶原 (PIVKA-Ⅱ)的水平差异。方法：根据HBV-DNA 病毒载量将患者分为低载量组和高载量组，测定PIVKA-Ⅱ及 AFP-L3含量，比较组间差异。结果：高载量组中AFP-L3和PIVKA-Ⅱ明显高于低载量组(P ＜0.05)。结论：针对不同 患者采取适当抗病毒治疗，降低病毒拷贝数，可能有助于改善患者生存期。 关键词乙肝相关性肝癌；乙肝病毒载量；甲胎蛋白异质体；异常凝血酶原 Differential levels of alpha fetal protein variant and abnormal prothrombin in HBV related hepatocellular carcinoma Lin Xiaoyuan Department of Laboratory,the Traditional Chinese Medicine Hospital of Xiamen City Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine 361000 Abstract Objective:To explore the differential levels of alpha fetal protein variant(AFP-L3)and abnormal prothrombin(PIVKA- Ⅱ)in HBV related hepatocellular carcinoma with different HBV-DNA load.Methods:According to HBV-DNA viral load,patients were divided into the low load group and the high load group.We measured the content of PIVKA-Ⅱand AFP-L3,and compared the differences between groups.Results:In the high load group,AFP-L3and PIVKA-Ⅱwere significantly higher than those in the low load group(P ＜0.05).Conclusion:For different patients,appropriate antiviral treatment to reduce the number of copies of the virus may help improve patient survival. Key words HBV related hepatocellular carcinoma;Hepatitis B virus load;Alpha fetal protein variant;Abnormal prothrombin 乙肝相关性肝癌中甲胎蛋白异质体和异常凝血酶原的水平差异林晓渊 361000福建中医药大学附属厦门市中医院检验科 127
. 常见肿瘤指标的意义 740) 发表者：朱陵君(访问人次：22:51 全网发布：2012-09-26 ）．甲胎蛋白（AFP1 15 ng/ml正常参考值：0～、最特异的指标，适用于大AFP是早期诊断原发性肝癌最敏感AFP值升高，则表示有患肝癌的可能。规模普查，如果成人血升患者的AFPAFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌，70~95%AFP含量越高，但阴性并不能排除原发性肝癌。AFP高，越是晚期，水平在一定程度上反应肿瘤的大小，其动态变化与病情有一定的关值异常高者一AFP系，是显示治疗效果和预后判断的一项敏感指标。通常手术切除肝癌后其含量上升则提示病情恶化。般提示预后不佳，提示若降的不多或降而复升，值应降至20ng/ml以下，二个月，AFP值一般低AFP切除不彻底或有复发、转移的可能。在转移性肝癌中，。于350-400ng/ml中度AFPAFP也会明显升高。妇产科的生殖腺胚胎癌、卵巢内胚窦癌携带者。某些消HBsAg升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及升高提示胎儿升高现象。孕妇血清或羊水AFP化道癌也会出现AFP提示结合孕妇年龄)AFP降低(无脑症、脊柱裂、食管atresia或多胎，综合征的危险性。未出生的婴儿有Down's）CEA2．癌胚抗原（ 5 ng/ml～正常参考值：0是一种重要的肿瘤相CEA在正常成人的血液中CEA很难测出。 高度阳性，在其它恶性肿瘤中CEA70-90%的结肠腺癌患者关抗原，6
小肠腺癌％）（、60-90的阳性率顺序为胃癌（％）胰腺癌70-80、（. . 、％）（40-68乳腺癌肝癌（62-75％）、56-800-83％）、肺癌（％）、％）。胃液（胃癌）、唾液（口腔癌、鼻咽癌）31-46泌尿系癌肿（的阳性 检测率更高，因为这些肿CEA以及胸腹水（肺癌、肝癌）中有无转CEA含量与肿瘤大小、CEA浸泡液”中的可先于血中存在。瘤“CEA 的升高尤为明显。移存在一定关系，当发生肝转移时，对肿瘤患者血液或其CEA测定主要用于指导各种肿瘤的治疗及随访，浓度进行连 续观察，能对病情判断、预后及疗效观他体液中的CEA可达的检测 对肿瘤术后复发的敏感度极高，CEA察提供重要的依据。光检查。80%以上，往往早于临床、病理检查及X浓度能明确预示肿瘤的状态、CEA大量临床实践证实，术前或治疗前浓度越低，说明病期越早，肿CEA存活期及有无手术指征等。术前浓度CEA瘤转移、复发的可能 越小，其生存时间越长；反之，术前越高说明病期较晚，难于切除，预后差。将有助于疗效观察。在对恶性肿瘤进行手术切除时，连续测定CEA回复正常；术后有残留或微转CEA周手术完全切除者，一般术后6移者，可见下降，但不恢复正常；无法切除而作姑息手术者，一般呈其疗效浓度的检测也能较好地反映放疗和化疗疗效。持续上升。CEA浓度能随治疗而下降，则说明不一定与肿瘤体积成正比，只要CEA 有效；若经治疗其浓度不变，甚至上升，则须更换治疗方案。 恢复正常的病人，进CEACEA检测还可对经手术或其他方法治疗使行
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人血清、血浆及相关液体样本中抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)的含量。 【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人抗甲状腺球蛋白抗体(A TGA/TGAB)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×4条7 底物夜A3mL 2 标准品：100ng/ml0.6mL 8 底物夜B3mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液3mL 4 标准品稀释液3mL10 说明书1份 5 样本稀释液3mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂3mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：100、50、25、12.5、6.25、3.12ng/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
ELISA法甲胎蛋白（AFP)的检测 发表时间：2017-08-17T15:58:40.867Z 来源：《心理医生》2017年18期作者：刘晶 [导读] 甲胎蛋白(AFP)是一种在电场中泳动于α-球蛋白区的单一多聚体肽链的糖蛋白，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白同属一大家族。（富裕县中医院<富裕县第二医院>检验科黑龙江齐齐哈尔 161200） 【摘要】目的：探讨ELISA法甲胎蛋白（AFP)的检测方法及意义。方法：对原发性肝癌患者30例，对ELISA法甲胎蛋白（AFP)方法及临床意义进行分析。结果：ELISA测得的AFP含量取不同浓度的混合血清，AFP浓度为10.7lng/mL、18.08ng/mL、46.83ng/mL，分别加入不同浓度定值血清，用ELISA法分别检测其回收率。用ELSIA测得的回收率分别在93.90％～98.16％，平均回收率分别为96.42％，ICA的检测精度高，稳定性强。结论：AFP是原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上，或含量有不断增高者，更应高度警惕。 【关键词】ELISA法；甲胎蛋白（AFP)；检测 【中图分类号】R735.7 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）18-0058-02 甲胎蛋白(AFP)是一种在电场中泳动于α-球蛋白区的单一多聚体肽链的糖蛋白，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白同属一大家族。AFP是胚胎发育早期的重要血清成分，由卵黄囊和肝细胞合成。出生后一年内降至正常水平[1]。AFP有很强的免疫抑制功能。当肝细胞发生病变时，AFP基因表达重新开放，于血清中可检测到AFP浓度显著升高。 1.资料与方法 1.1 实验对象 选取2015年1月-2016年6月收治的门诊或住院原发性肝癌患者30例，年龄20～79岁，平均年龄54.5±3.5岁。所有患者增根据临床表现，经B超、CT及各项实验室指标检查确诊。 1.2 实验试剂 微孔反应板用抗AFP单抗体包被。2～8℃干燥保存，有效期内保持稳定。酶结合物溶于缓冲液中，含蛋白稳定剂。2～8℃保存，有效期内保持稳定。显色液A：0.05M乙酸缓冲液，含0.02%过氧化氢，存于滴瓶中。2～8℃保存，有效期内保持稳定。显色液B：含色素基质和稳定剂，存于滴瓶中。2～8℃避光保存，有效期内保持稳定。标准品：AFP浓度分别为5ng/ml，10ng/ml。30ng/ml，60ng/ml， 120ng/ml，240ng/ml。含蛋白稳定剂和防腐剂，存放于玻璃瓶中，2～8℃保存。质控血清含AFP浓度分别为，L-I，L-Ⅱ，含防腐剂及蛋白稳定剂。2～8℃保存，有效期内保持稳定。终止液：含lN H2SO4。洗液(10倍浓缩)：50ml，磷酸盐缓冲液，用前稀释[2]。2～8℃保存，有效期内保持稳定。 1.3 方法 实验前将试剂和标本置于室温（18～28℃）平衡20分钟。标本浓度超过200μg/L时，测定前用“0”标准品适当稀释并混匀。建议稀释倍数为l:10，1:20，1:100。计算数值应乘以相应稀释倍数。将试剂盒浓缩洗液用蒸馏水稀释10倍后，充分混匀后使用。 温浴，取出所需数量的微孔，做上标记，留出一孔做空白对照（指定A1）。在分别注明标号的反应微孔中依次加入50μl标准品0μg/L，10μg/L，30μg/L，60μg/L，120μg/L，240μg/L，质控血清，待测标本。在每孔中加入50μl（1滴）酶结合物（除去A1）。轻轻振荡微孔条，充分混匀。37℃保温60分钟（注：测定高值标本时，则37℃保温30分钟）。保温过程中保持微孔条水平。充分倾去微孔中的液体，用洗液冲洗微孔5次。将微孔条倒置在吸水纸上，拍尽残余水分。显色反应，每孔加1滴（50μl）显色液A，再加1滴（50μl）显色液B。在室温下反应5分钟。每孔中加1滴终止液终止反应。在终止反应的30分钟内测各孔的OD450nm。 2.结果 ELISA测得的AFP含量取不同浓度的混合血清，AFP浓度为10.7lng/mL、18.08ng/mL、46.83ng/mL，分别加入不同浓度定值血清，用ELISA法分别检测其回收率。用ELSIA测得的回收率分别在93.90%～98.16%，平均回收率分别为96.42%。 3.讨论 所有患者的血清标本和各测试组分均按可传染情况处理，实验中的溢出物需用消毒剂彻底清除。标本及所有可能被传染的物质均按含有传染物的情况进行净化和处理。避免显色液B或终止液与皮肤或黏膜接触。一旦接触，立即用水彻底清洗。不要混淆试剂瓶盖，不要混用不同批号的试剂及微孔反应板，不要使用过期的试剂盒。实验加样完毕后，应注意轻摇微孔反应条，一定要充分混匀[3]。在冲洗过程中，要冲洗干净，并拍干微孔中的残余液体，否则将降低精确度，造成吸光度升高的假象。实验完毕后，应及时将试剂盒放回，2～8℃冰箱。使用微孔反应板应注意干燥保存，避免受潮。贮存和使用显色液B时应避免光线直接照射。实验过程中，实验室的温度应保持在18～28℃。 AFP是原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上，或含量有不断增高者，更应高度警惕。肝癌患者血清AFP含量变化的速率和程度与肿瘤组织分化程度高低有一定相关性，分化程度较高的肿瘤AFP含量常大于200μg/L。AFP的动态变化与病情有一定的关系。AFP含量上升提示病情恶化，其动态变化是显示治疗效果的一项敏感指标。原发性肝癌患者在检测AFP时出现阴性或假阴性可能与测定方法、癌肿类型、原发部位等因素有关[4]。肝细胞肝癌血清甲胎蛋白的水平高低与肝细胞分化程度有关，I级肝癌细胞分化接近正常细胞，故甲胎蛋白量尚不足以测出，Ⅳ级者由于分化极差，已失去类似胚胎细胞的功能，也不能从血清中检出甲胎蛋白，Ⅱ、Ⅲ级癌细胞认为是和胚胎肝细胞相似的幼稚细胞能产生甲胎蛋白，阳性率较高，由于肝细胞癌的分化程度不同，甲胎蛋白含量也有差异，是阳性率不高的原因之一。在非肝细胞癌的胆管细胞癌等也不产生甲胎蛋白。 【参考文献】 [1]郑定容,刘仿.ELISA与ICA法对甲胎蛋白检测的比较[J]. 中国医药科学,2011,01(9):153-154. [2]殷正丰.甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用[J]. 实用肿瘤杂志,2004,19(1):1-4. [3]贾志凌,王莉,刘畅,等.甲胎蛋白异质体对肝癌诊断的临床意义[J].中国肿瘤,2010,19(10):686-688. [4]胡敏华,陈燕,李筱莉,等.甲胎蛋白异质体的临床意义[J]. 诊断学理论与实践,2006,5(3):258-259.
血清甲胎蛋白检测操作规程 一．检验原理 根据酶联免疫双抗体夹心法的作用原理，利用抗原、抗体反应的特异性与酶的高效催化性研制而成，其原理是将特异性抗体吸附到固相载体上。加入待测的样品，与吸附于固相载体上的特异性抗体反应后，洗去未反应的样品，加入酶标记的特异性抗体与抗原反应，生成抗体－抗原－酶标抗体复合物，再加入底物和显色剂，生成可显色的产物，进行检测。 二．试剂盒组成 96人份/盒： 1.AFP标准品：5IU/ml、10IU/ml、20IU/ml、50IU/ml、100IU/ml、200IU/ml 各一瓶 2.包被条96孔: AFP单抗； 3.酶结合物（1号液）1瓶：酶标记单抗； 4.洗液（2号液）1瓶：乳化剂OP； 5.底物(3号液) 1瓶：过氧化脲； 6.显色剂（4号液）1瓶：TMB； 7.终止液1瓶：硫酸； 8.说明书：1份 不同批号的试剂不能混用。 三．储存条件及有效期 本试剂盒在2-8℃保存，有效期为一年；打开包装后在4℃保存一个月。四．适用仪器 酶标仪、恒温培养箱、100μl移液器、1000μl移液器。 五．样本要求 1.样本应为新鲜的血清。 2.溶血样本不可使用。 3.样本未能在24小时内使用时应-20℃保存。 4.样本使用前应恢复至室温。 5.禁止反复冻溶。 六．操作方法 使用前试剂盒应恢复至室温，将冻干标准品各加入1ml蒸馏水，待完全溶解后与待测样品同时进行操作。 1.加样:将包被孔编号，每孔加标准品或待测样品各100μl。 2.孵育:37℃孵育，20分钟。 3.洗涤:在各孔中加入洗液2滴，轻轻摇动几下，弃之。然后用蒸馏水或自来水加满各孔，甩掉，反复5次（洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗涤过猛过急而导致假阴性），最后在吸水纸上拍干。 4.加酶:每孔加酶结合物2滴（100μl）。 5.孵育:37℃孵育，15分钟。 6.洗涤:重复步骤“3”。 7.显色:加入底物1滴，随即加入显色剂1滴，轻轻摇动几下，室温反应2～5分钟。 8.终止:每孔加2滴（100μl）终止液。