松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用

·实验研究·2012年12月第9卷第35期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD松茸（Tricholoma matsutake ）亦称松蕈、合菌、松蘑（朝鲜族）、松口蘑等，是担子菌纲伞菌目口蘑科（Tricholomataceae ）口蘑属（Tricholoma ）的一种与松树共生外生菌根真菌。

在我国东北地区的吉林省以及西南地区的云南、四川、西藏都有分布。

松茸菌肉肥厚，香气宜人，味道鲜美，具有较高的营养价值和药用价值，曾被誉为“食用菌之王”[1-3]。

松茸具有很高的药用价值及多种生物活性。

据文献报道，松茸具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗真菌、抗糖尿病、抗炎等功效[4]，在27种担子菌抗肿瘤食用菌中，其抗肿瘤活性居第2位[5]。

松茸作为一种具有显著抗肿瘤活性的食用菌，具有广阔的开发前景，据文献报道松茸中具有抗肿瘤活性的成分主要是多糖类化合物[5-7]，课题组对松茸抗肿瘤活性部位进行研究的过程中，发现醇提部位MTX 也能抑制肿瘤细胞的增殖，同样具有较强的抗肿瘤活性，其活性成分及作用机制值得深入研究。

1材料与方法1.1材料小鼠肉瘤S180腹水型肿瘤细胞由武汉大学基础医学院提供；环磷酰胺粉针（200mg/支，批号：10102122），由江苏恒瑞医药股份有限公司生产；昆明种小鼠，雄性，体重18～22g ，购自武汉大学动物中心，合格证号：4200592711。

1.2方法[8-9]1.2.1松茸乙醇提取物的制备取松茸约5kg ，适当粉碎，分次置5000mL 圆底烧瓶中，用10倍量95%乙醇回流提取3次，每次分别为3、2、2h ，纱布过滤，合并滤液，减压回收乙醇，继续浓缩，得松茸乙醇提取物浸膏约100.82g 。

1.2.2小鼠移植瘤模型的建立将S180小鼠腹水型肿瘤细胞株接种于腹腔，于7d 后脱颈椎处死，用75％乙醇浸泡消毒，无菌抽取腹水瘤细胞，调整细胞浓度为1.3×107/mL ，将0.2mL 细胞悬液无菌皮下接种于昆明种小鼠左后肢，观察小鼠生长情况，在接种后第6天全部出现瘤块，小鼠移植瘤模型建立成功。

1.2.3实验动物分组及给药将小鼠随机分为5组，每组10只，即肿瘤模型组、阳性对照组及松茸乙醇提取物大、中、小剂量组。

肿瘤模型组按剂量10m L/kg 灌胃给予0.5％CMC ，阳性对照组按剂量50mg/kg 灌胃给予环磷酰胺，松茸乙醇提取物大、中、小剂量组以1000、500、250mg/kg 的剂量灌胃给予松茸乙醇提取物；每日1次，连续10d ，实验过程中让小鼠自由进食和饮水，第11天停药。

1.3观察指标将小鼠称取体重后脱颈处死，分离肿瘤块、脾脏和胸腺组织，称取肿瘤重量，分别计算各组小鼠体重变化平均值、脾脏及胸腺质量分数、肿瘤生长抑制率。

肿瘤生长抑制率=（模型组平均瘤重－给药组平均瘤重）/模型组平均瘤重×100％。

松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用刘刚王辉张洪周本宏武汉大学人民医院药学部，湖北武汉430060[摘要]目的探讨松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用。

方法按标准方法给小鼠接种S180肉瘤细胞，随机分组，分别灌胃给予1000、500、250mg/kg 松茸乙醇提取物，10d 后观察肿瘤抑制率、免疫器官质量分数、体重的变化及HE 染色肿瘤组织结构。

结果不同剂量松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤的抑制率分别为41.82%、36.36%、8.48%；脾脏质量分数、胸腺质量分数与肿瘤模型组比较，差异均无统计学意义（均P >0.05）。

结论松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤的生长有抑制作用。

[关键词]松茸；S180肉瘤；肿瘤抑制[中图分类号]R730.51[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）12（b ）-0032-03Inhibition of ethanol extract of tricholoma matsutake on mouse sarcoma S-180cell proliferation in vivoLIU Gang WANG Hui ZHANG Hong ZHOU BenhongDepartment of Pharmacy,the People ′s Hospital of Wuhan University,Hubei Province,Wuhan 430060,China[Abstract]Objective To study the inhibitory effects of EtOH extract of the Tricholoma matsutake for the S180sarcoma cells in mice.Methods S180sarcoma cells were inoculated into the mice according to the standard approach,and the mice were randomly divided and performed by intragastic administration with 1000,500,250mg/kg dosages of EtOH extract of the Tricholoma matsutake.The growth inhibitory ratio of the S180sarcoma cells,mass weight of immune organs,spleen-body ratio and HE staining intumor were observed after 10days.Results The different dosages of EtOH extract of the Tri -choloma matsutake inhibitory rates for the tumor were 41.82%,36.36%,8.48%,respectively,and compared with S180con -trol group,the chest gland-body ratio and spleen-body ratio was no significant difference (all P >0.05).Conclusion EtOH extract of the Tricholoma matsutake can inhibit the growth of S180sarcoma cells transplanted in mice.[Key words]Tricholoma matsutake;S180sarcoma;Tumor Inhibition[基金项目]国家自然科学基金资助项目（31100253）；湖北省自然科学基金资助项目（2010CDB06907）。

[作者简介]刘刚（1976-），男，湖北武汉人，博士，副教授；研究方向：天然药物化学。

322012年12月第9卷第35期·实验研究·CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报各组肿瘤组织标本按照常规方法固定，包埋和切片，HE 染色进行观察。

1.4统计学方法采用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析。

计量资料数据以均数±标准差（x ±s ）表示，采用方差分析，两组间比较采用t 检验。

以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2结果2.1实验动物的生长情况昆明小鼠接种S180后，从生长情况来看，肿瘤模型组小鼠精神状态较差，进食量显著减少，行动呆滞，皮毛无光泽。

而阳性对照组及松茸乙醇提取物给药组的小鼠，其进食量及运动状态均好于肿瘤模型组，皮毛顺滑。

给药前后各组小鼠体重变化见表1。

由表1可见松茸乙醇提取物大、中、小剂量组及阳性对照组小鼠体重与肿瘤模型组比较，差异均无统计学意义（均P >0.05）。

表1松茸乙醇提取物对S180小鼠体重的影响（x ±s ，g ，n =10）2.2对免疫器官质量的影响实验对动物脾脏质量分数和胸腺质量分数的影响结果见表2。

由表2可知，阳性对照组与肿瘤模型组比较，差异有统计学意义（P <0.05），松茸乙醇提取物各剂量组与肿瘤模型组比较，差异均无统计学意义（均P >0.05）。

表2松茸乙醇提取物对S180小鼠免疫器官质量分数的影响（x ±s ，n =10）注：与肿瘤模型组比较，*P <0.052.3对小鼠S180肉瘤的生长抑制作用松茸乙醇提取物大、中剂量组小鼠瘤重与肿瘤模型组比较显著降低，差异均有统计学意义（均P <0.05），且肿瘤抑制率均高于30%。

松茸乙醇提取物小剂量组小鼠瘤重与肿瘤模型组比较有下降趋势，但差异无统计学意义（P >0.05）；各剂量组对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用见表3。

2.4小鼠S180肉瘤组织病理学观察肉瘤组织经HE 染色后于显微镜下观察，肿瘤模型组肿瘤细胞生长旺盛，侵犯深层肌肉组织，大量新生血管形成，肿瘤细胞大小不一，细胞核有较为明显的异型性，可见瘤组织呈片状或巢状生长，无明显坏死，并可观察到癌巢之间微血管较为丰富，周围有不同程度的炎症细胞浸润；阳性对照组有明显的肿瘤细胞坏死区域，瘤组织呈团状或片状生长，癌细胞核浆比例较肿瘤模型组小，染色较浅，核型较规整，可见不同程度的片状坏死区及大量核碎裂，伴白细胞浸润；松茸乙醇提取物大剂量组可见部分片状坏死区域，且瘤组织内微血管减少，周围有不同程度的炎症细胞浸润。

见图1。

A ：肿瘤模型组；B ：阳性对照组；C ：松茸乙醇提取物大剂量组图1各组肿瘤组织HE 染色（×100）3讨论目前临床常用的肿瘤放化疗药物大多具有毒副作用，对人体正常细胞损害较大，因此进一步开发安全、低毒、有效的抗肿瘤药物一直是国内外学者研究热点之一。

松茸作为一种药食两用菌，其抗肿瘤活性已经成为国内外研究热点，据文献报道，其抗肿瘤活性部位多为多糖类成分，但本课题组在研究过程中发现其醇提物同样具有抗肿瘤活性，且其在动物整体抗肿瘤方面的研究少见报道，因此，松茸醇提部位的抗肿瘤作用及其机制值得深入研究。

人体肿瘤裸鼠移植模型对抗肿瘤药的反应，对临床疗效有预告价值。

因此本实验通过观察松茸醇提部位对昆明小鼠S180肉瘤的抑制作用，研究松茸提取物的抗肿瘤活性。

研究结果表明，松茸乙醇提取物大、中剂量组对小鼠S180肉瘤的抑制率均高于30%，与肿瘤模型组比较差异有统计学意义，但作用不及环磷酰胺，提示松茸乙醇提取物中含有抗肿瘤活性成分。

此外，松茸乙醇提取物大、中、小剂量组对小鼠脾脏肿瘤模型组阳性对照组松茸乙醇提取物大剂量组中剂量组小剂量组21.36±0.6720.95±0.8921.32±1.0421.12±0.5920.86±0.7629.88±2.3131.25±3.4030.85±2.5631.05±4.0229.65±3.128.52±3.3510.30±4.109.53±3.259.93±4.328.79±3.86组别给药前体重给药后体重体重增加值肿瘤模型组阳性对照组松茸乙醇提取物大剂量组中剂量组小剂量组20mL/kg 5010005002505.86±2.313.59±1.40*6.02±1.655.98±1.866.15±1.792.03±0.701.21±0.19*2.65±0.862.47±0.672.55±0.77组别给药剂量（mg/kg ）脾脏质量分数（×10-3）胸腺质量分数（×10-3）表3松茸乙醇提取物对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用（n =10）注：与肿瘤模型组比较，*P <0.05；“-”为无数据肿瘤模型组阳性对照组松茸乙醇提取物大剂量组中剂量组小剂量组20mL/kg 5010005002501.65±0.310.76±0.30*0.96±0.45*1.05±0.48*1.51±0.71-53.94*41.82*36.36*8.48组别给药剂量（mg/kg ）瘤重（x ±s ，g ）抑制率（%）（下转第40页）ABC33·实验研究·2012年12月第9卷第35期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD（上接第37页）（上接第35页）（上接第33页）[2]张明雪，常艳鹏，曹洪欣.温阳活血中药复方调控冠心病（心）阳虚血瘀证大鼠血小板内受体、信号转导的作用机制研究[J].中华中医药杂志，2008，23（6）：494-497.[3]李昌，胡巍巍，高玮，等.益气化痰瘀方对冠心病大鼠的保护作用[J].河北中医药学报，2010，25（1）：3-5.[4]朱明燕，柳景景，石雷.血管紧张素转换酶抑制剂研究进展与临床应用[J].中国医药导报，2011，8（1）：9-10.[5]Burstein B ，Nattel S.Atrial fibrosis ：mechanisms and clinical relevancein atrial fibrillation [J].J Am Coll Cardiol ，2008，51：802-809.[6]曹辉，卢长虹，聂广邻.血栓通治疗冠心病心绞痛的临床观察[J].中国医药导报，2011，8（21）：14-16.（收稿日期：2012-09-24本文编辑：张瑜杰）注损伤肺组织均有保护作用。