胎兔皮肤组织蛋白质组双向电泳技术的建立与分析
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家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立要瑞莉;张明顺;李宏杰;董淑云;王世鑫;冯桂玲【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2009(013)028【摘要】BACKGROUND: Rabbit serum samples are widely used in basic researches, and two-dimensional gelelectrophoresis (2-DE) is the most classic technique for protein separation. Therefore, it is of great significance to establish a stable technique system of 2-DE for rabbit serum.OBJECTIVE: To establish a 2-DE technique system for rabbit serum protein separation. DESIGN, TIME AND SETTING: A single sample observational experiment was performed at Tianjin Key Laboratory of Biomarkers for Occupational and Environmental Hazard of Chinese People's Armed Police Forces Medical College from June to July in 2008. MATERIALS: Six healthy rabbits were provided by the Animal Experimental Center of Tangshan Vocational Technical College METHODS: Health rabbit serum was dissolved in rehydration sample loading buffer before and after eliminating high abundance proteins to make proteins in it schizolysis adequately. After reductive alkylation, the samples were loaded into the rehydration tray to undergo passive rehydration for 14 hours. Isoelectric focusing (IEF) electrophoresis was followed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). After sliver staining, the gel was analyzed by PDQuest7.4. MAIN OUTCOME MEASURES: ①Efficiencyof eliminating high abundance proteins. ②Two-dimensional eleotrophoregrams (2-D electrophoregrams)RESULTS: Distinct 2-D eleotrophoregrems were obtained with high resolution and good reproducibility. The removal of high abundance proteins in serum failed to result in better 2-D electrophoregrams.CONCLUSION: We have successfully established a 2-DE technique for rabbit serum proteome, which can lay the foundation for the further study of serum proteomics of diseases.%背景:家兔血清是基础研究中常用的实验样品,双向凝胶电泳是蛋白质组学中最经典的蛋白分离技术,因此建立稳定的家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术体系非常重要.目的:建立家兔血清蛋白分离的双向凝胶电泳技术体系.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2008-06/07在武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室完成.材料:健康家兔6只,由唐山市职业技术学院动物中心提供.方法:去除高丰度蛋白前后的健康家兔血清样品,分别加入水化上样液使样品中的蛋白充分裂解,还原烷基化后上样,被动水化14 h.等电聚焦电泳后进行SDS-PAGE电泳.凝胶银染后用PDQuest7.4软件进行分析.主要观察指标:①高丰度蛋白去除效率.②2-DE图谱.结果:双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好.未去除高丰度蛋白的血清2-DE图效果优于去除高丰度蛋白后的血清2-DE图.结论:成功建立家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.【总页数】4页(P5440-5443)【作者】要瑞莉;张明顺;李宏杰;董淑云;王世鑫;冯桂玲【作者单位】唐山职业技术学院基础医学部,河北省唐山市063004;武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室,天津市300162;华北煤炭医学院基础部病理生理教研室,河北省唐山63000;华北煤炭医学院基础部病理生理教研室,河北省唐山63000;武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室,天津市300162;唐山职业技术学院基础医学部,河北省唐山市063004【正文语种】中文【中图分类】R341【相关文献】1.血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化 [J], 董红;王世鑫;罗来龙;栾大伟2.寻常型银屑病血清蛋白质组学研究中双向凝胶电泳-质谱技术的初步建立 [J], 刘占奎;谭升顺;于春水;樊靖华;白转丽;李俊杰3.优化并建立双向凝胶电泳初步研究糖尿病视网膜病变血清蛋白质组 [J], 李俊;贾丽丽;陆琳娜;王悦4.血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化 [J], 张明顺;李雪华;兰晓霞;栾大伟;赵化冰;王世鑫5.血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立 [J], 李雪华;李欣;丁彦青因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
胎兔皮肤无瘢痕愈合相关蛋白的筛选与初步分析李杨目的:筛选胎兔皮肤组织无瘢痕愈合相关蛋白,并初步分析其在无瘢痕愈合过程中的作用。
方法:建立胎兔背部切割伤模型,运用蛋白质组双向电泳技术筛选胎兔皮肤伤后差异表达的蛋白质,并进行质谱和数据库检索分析。
结果:筛选出20个在伤后胎兔皮肤组织中特异高表达的蛋白质点,经过质谱和数据库检索分析后确定:伴侣素或线粒体蛋白P1前体、弹性蛋白(Vi-mentin,Vim)、微管蛋白β多肽、核不均一核糖核蛋白H(异质性胞核核糖核蛋白H)、α烯醇酶(α-磷酸丙酮酸水合酶)等无瘢痕愈合相关蛋白在胎兔皮肤伤后表达增加。
结论:上述无瘢痕愈合相关蛋白可能通过对基因转录和翻译的调控,促进胶原蛋白等的合成和正确的折叠、装配,以及促进细胞的增殖、分化和发育等,促进胎兔皮肤创伤的修复,参与其无瘢痕愈合过程。
标签:胎兔;皮肤;无瘢痕愈合;创伤:蛋白质组;基质辅助的激光解析电离/飞行时间质谱自Burrington首次发现胎儿皮肤创伤后修复无瘢痕形成,并确立了“无瘢痕愈合”(Scarless Healing、Scar-free Healing)的概念以来,“无瘢痕愈合”模式成为人们孜孜以求的理想,但至今胚胎个体“无瘢痕愈合”的具体机制还不清楚。
我们在前期的研究中发现在胎兔皮肤创伤无瘢痕愈合过程中确有基因表达的差异存在,且差异表达基因可能在其过程中具有重要的作用。
而基因最终是通过蛋白质的表达才发挥其功能,本实验运用双向电泳技术,筛选胎兔皮肤无瘢痕愈合相关蛋白,并进行初步分析。
1材料和方法1.1动物与试剂:健康雌性大耳白兔20只,体重(3.0~3.5)kg(第三军医大学大坪医院动物中心),“速眠新”合剂(长春农牧大学兽医研究所),哺乳动物总蛋白提取试剂盒(Merck公司),pH4-7、11cm固相pH梯度(Immoblilized pH gradient,IPG)预制胶条(Bio-Rad公司),银染增强型试剂盒(Bio-Rad公司)。
双向电泳的应用及研究进展摘要:双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术,具有简便、快速、高分辨率和重复性等优点。
本文重点介绍了双向电泳的基本原理及其应用。
同时对当前双向电泳技术面临的挑战和发展前景进行了讨论。
关键词: 双向电泳,应用,前景1.1双向电泳技术概述双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)是蛋白分离的黄金标准,由此可以分析生物样品的显著差别,产生的结果用于诊断疾病、发现新的药物靶标和分析潜在的环境和药物的毒性。
双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移,第一向通过电荷的不同分离,另一向通过质量的不同分离。
双向电泳协同质谱技术是正在出现的蛋白组学领域的中心技术。
双向电泳是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段,是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术,其高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分离方法所无与伦比的。
双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。
可见双向电泳在蛋白质组学研究中的重要性。
就像Fey和Larsen在他们的综述中提到:“尽管人们都想有新技术取代它,可是如果希望对细胞活动有全面的认识,其他技术无法在分辨率和灵敏度上与双向电泳相媲美”。
1.2双向电泳基本原理1975年,意大利生化学家O’Farrell发明了双向电泳技术[1],双向电泳是指利用蛋白质的带电性和分子量大小的差异,通过两次凝胶电泳达到分离蛋白质群的技术。
双向电泳技术依据两个不同的物理化学原理分离蛋白质。
第一向电泳依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质进行分离。
在此基础上进行第二向的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,它依据蛋白质分子量的不同将之分离。
双向电泳所得结果的斑点序列都对应着样品中的单一蛋白。
因此,上千种蛋白质均能被分离开来,并且各种蛋白质的等电点,分子量和含量的信息都能得到。
双向电泳操作步骤双向电泳是一种常用的蛋白质分离和纯化方法。
下面是一篇超过1200字的双向电泳操作步骤:双向电泳是一种通过两个不同方向的电场来进行蛋白质分离的方法。
它可以更好地区分具有不同等电点和分子质量的蛋白质,并用于研究蛋白质组学以及生物化学等领域。
以下是一般的双向电泳操作步骤:1.确保准备充足的电泳装置,包括双向电泳槽、平衡缓冲液、电泳缓冲液、电泳细胞等。
2.准备样品:将待分离的蛋白质样品进行适当的前处理,包括样品提取、蛋白质浓缩、去除干扰物等。
将样品溶解在适当的电泳缓冲液中。
3.将样品加载到电泳槽中:在准备好的电泳缓冲液中加入样品,然后将样品加载到电泳槽中的样品孔中。
注意,为了保持电泳稳定性,在样品孔加载样品后,要尽快将缓冲液加入到其他储备槽以保持全面和均匀的电解质浓度。
4.进行等电点电泳:将电泳槽中的样品浸没在平衡缓冲液中,并在两侧分别连接正负极。
设置合适的电流和电压,开始进行等电点电泳。
在等电点电泳过程中,蛋白质根据它们的等电点被定向地分离。
5.停止等电点电泳:根据需要进行电泳时间的设定,一般情况下为2-3小时。
等电点电泳时间结束后,关闭电源,并小心地取出电泳舱。
6.水平电泳:停止等电点电泳后,将样品塘从上清洗掉,并用水平电泳缓冲液进行冲洗。
然后,在两侧连接正负极,设置合适的电流和电压,开始水平电泳。
在水平电泳过程中,蛋白质根据它们的分子质量被定向地分离。
7.停止水平电泳:根据需要进行电泳时间的设定,一般情况下为4-5小时。
水平电泳时间结束后,关闭电源,并小心地取出电泳舱。
8.染色和图像采集:将分离完毕的样品进行染色,常用的染色方法包括银染和荧光染色。
然后,使用图像采集系统获取电泳图像,可根据需要调整采集参数。
9.数据分析和解释:通过对电泳图像的分析,包括珠状图、分子质量标准物的修正和待测蛋白质的标定等,将分离出来的蛋白质鉴定和定位。
10. 验证和验证:对其中感兴趣的蛋白质进行验证和验证。
双向电泳技术研究进展摘要:双向电泳(two dimensional electrophoresis , 2-DE)技术是获得细胞、组织或器官等蛋白表达图谱的主要手段,是蛋白质组学研究的三大核心技术之一。
本文主要从双向电泳技术的发展,主要操作步骤及其面临的主要挑战等方面对改技术的研究进展进行综述。
关键词:双向电泳;研究1.双向电泳技术的发展蛋白质双向电泳源于1975年O,Farrell. Klose.Scheele 对大肠杆菌、老鼠及几尼猪蛋白质的研究。
它首先根据样品中蛋白质等电点不同进行等电聚焦(IEF)作为第l向,然后再按照蛋白质分子量大小不同进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)作为第2向,经染色后可以在凝胶上得到大量的蛋白质点,从而得到样品的蛋白质表达图谱。
根据双向电泳中第l向等电聚焦方法的不同,双向电泳主要分为2个主要类型,ISO-DALT(等电点一道尔顿)IPG.DALT ( 固相pH梯度一道尔顿)双向电泳。
1.1 ISO-DALT双向电泳技术传统的ISO-DALT双向电泳中,首先将载体两性电解质添加在丙烯酰胺凝胶中,凝胶聚合后在电场作用下形成连续的DH值梯度,两性电解质以游离的形式分布于聚丙烯酰胺凝胶的网孔中。
通常采用圆柱状电泳,IEF凝胶制备在圆柱型玻璃管中,可以将样品加在未凝固的凝胶溶液中,也可在凝胶凝固后在玻璃管顶端加样,然后进行等电聚焦,通常在50~100V电压下聚焦1~2 h,让样品进入IEF胶条,然后在200 ~400V或更高电压下进行聚焦,直到电流接近零时为止。
等电聚焦结束后取下凝胶柱,向玻璃管中凝胶与管壁间注水,将凝胶条吹出,用缓冲液平衡凝胶条,主要目的是充分打断多肽链间及多肽链内部的二硫键并使其与SDS充分结合,然后将胶条用琼脂包埋于第2向电泳的凝胶板中,进行第2向SDS-PAGE,SDS-PAGE 可以使用均一的分离胶浓度,也可采用不连续梯度胶或者连续梯度胶。
双向电泳法双向电泳法(Bidimensional Electrophoresis,2-DE)是一种常用的蛋白质分离技术,可以同时分析样品中上千种蛋白质。
本文将详细介绍双向电泳法的原理、步骤和应用。
原理双向电泳法结合了等电聚焦(IEF)和SDS-PAGE两种技术,通过两个维度的分离将复杂的蛋白质混合物分解为一系列单独的斑点。
在第一维度中,根据蛋白质的等电点(pI)进行分离;在第二维度中,根据蛋白质的分子量进行分离。
通过将这两个维度的分离结果叠加,可以获得高分辨率的蛋白质图谱。
双向电泳法的关键步骤如下:1.等电聚焦(IEF):在第一维度中,使用等电聚焦技术将样品中的蛋白质按照其等电点进行分离。
等电聚焦是一种基于蛋白质在电场中向氧化物离子(OH-)或氢离子(H+)方向移动的分离方法。
在等电聚焦过程中,蛋白质会在pH梯度中向其等电点迁移,直到净电荷为零。
通过控制pH梯度和应用的电压,可以将蛋白质在等电聚焦过程中分离开。
2.SDS-PAGE分离:在第二维度中,将第一维度的等电聚焦凝胶与SDS-PAGE凝胶垂直叠加。
在SDS-PAGE凝胶中,蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶的孔隙随着电场的作用向阳极迁移。
由于SDS(十二烷基硫酸钠)的存在,蛋白质在SDS-PAGE凝胶中的迁移速度与其分子量成反比。
因此,蛋白质在SDS-PAGE 凝胶中会根据其分子量进行分离。
3.染色和分析:经过双向电泳分离后,凝胶可以通过染色方法显示出一系列斑点,每个斑点代表一个蛋白质。
常用的染色方法包括银染法、荧光染色、贵金属染色等。
对于银染法,它在灵敏度和线性范围上具有优势。
染色后可以使用成像设备捕捉图像并进行定量分析。
通过对斑点的比较和定量,可以识别不同样品之间的差异和变化。
步骤双向电泳法的步骤如下:1.样品制备:将待分析的生物样品(如细胞提取物)进行蛋白质提取,并使得蛋白质在石蜡中可溶解。
常用的方法包括总蛋白提取、亲和层析、激光捕获等。
2.等电聚焦(IEF):将蛋白质样品与具有连续pH梯度的凝胶进行接触。
兔子宫内膜组织的双向电泳
王水莲;薛立群;刘自逵
【期刊名称】《中国兽医学报》
【年(卷),期】2006(26)4
【摘要】为了有效地研究胚泡附植的分子机制,本研究建立了一套适合兔子宫内膜蛋白分析的双向电泳技术体系,包括蛋白质含量测定、第1向IEF-PAGE和第2向SDS-PAGE的凝胶配方及电泳参数的选择、电极溶液的选择,并运用该技术体系分析了未孕兔和受孕2、4、6、9 d兔子宫内膜蛋白。
结果表明,在给定的时期内,兔子宫内膜蛋白质的含量有变化,但差异不显著;用所建立的双向电泳体系分析子宫内膜蛋白质后发现,双向电泳图谱的重复性好,蛋白质点的分辨率高,共同蛋白质点多,差异蛋白质点少。
【总页数】4页(P451-453)
【关键词】兔;子宫内膜;蛋白质;双向电泳;附植
【作者】王水莲;薛立群;刘自逵
【作者单位】湖南农业大学动物医学院
【正文语种】中文
【中图分类】S858.291
【相关文献】
1.兔股骨头蛋白质双向电泳样品制备方法的比较 [J], 胡峰;赵劲民;李晓峰;梁晓南;陆荣斌
2.兔晶状体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究 [J], 刘奕志;张敏;柳夏林;黄强;刘欣华;夏朝霞;吴明星
3.应用双向电泳、免疫印迹和质谱技术筛选子宫内膜异位症标志物 [J], 张虹;牛屹东;冯捷;郭慧方;叶雪
4.18例子宫内膜间质肉瘤的组织学和兔疫组织化学研究 [J], 丁长林;米粲;李圆圆因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
胎兔皮肤无瘢痕愈合相关蛋白的筛选与初步分析邱俊;周继红;张波;李杨【期刊名称】《中国美容医学》【年(卷),期】2007(16)1【摘要】目的:筛选胎兔皮肤组织无瘢痕愈合相关蛋白,并初步分析其在无瘢痕愈合过程中的作用.方法:建立胎兔背部切割伤模型,运用蛋白质组双向电泳技术筛选胎兔皮肤伤后差异表达的蛋白质,并进行质谱和数据库检索分析.结果:筛选出20个在伤后胎兔皮肤组织中特异高表达的蛋白质点,经过质谱和数据库检索分析后确定:伴侣素或线粒体蛋白P1前体、弹性蛋白(Vi-mentin,Vim)、微管蛋白β多肽、核不均一核糖核蛋白H(异质性胞核核糖核蛋白H)、α-烯醇酶(α-磷酸丙酮酸水合酶)等无瘢痕愈合相关蛋白在胎兔皮肤伤后表达增加.结论:上述无瘢痕愈合相关蛋白可能通过对基因转录和翻译的调控,促进胶原蛋白等的合成和正确的折叠、装配,以及促进细胞的增殖、分化和发育等,促进胎兔皮肤创伤的修复,参与其无瘢痕愈合过程.【总页数】4页(P11-14)【作者】邱俊;周继红;张波;李杨【作者单位】第三军医大学野战外科研究所四室全军交通医学研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学野战外科研究所四室全军交通医学研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学野战外科研究所四室全军交通医学研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;重庆市第九人民医院【正文语种】中文【中图分类】R6【相关文献】1.P物质和降钙素基因相关肽在胎兔皮肤无瘢痕愈合中的作用 [J], 谢江;赖西南;王正国;王丽丽;向德兵;黄晖;陈辉2.神经纤维在胎兔皮肤无瘢痕愈合中的变化 [J], 谢江;赖西南;李华强;王丽丽;向德兵3.兔胚胎皮肤伤口无瘢痕愈合机制研究 [J], 吴国强;李耀辉;刘晓艳;柳大烈;杨果凡4.胎兔皮肤创伤消减文库构建与瘢痕愈合基因的初步筛选 [J], 张波;王正国;朱佩芳5.神经肽SP在胎兔皮肤无瘢痕愈合中的作用 [J], 谢江;赖西南;王正国;王丽丽;向德兵;黄晖;陈辉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。