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高效凝胶渗透色谱法
高效凝胶渗透色谱法（Gel Permeation Chromatography，GPC），又称凝胶过滤色谱，是一种分离大分子化合物的色谱技术。
该技术基于样品分子在凝胶纳米孔道中的渗透性差异，通过溶液中大分子与凝胶孔道的相互作用，实现溶液中分子的分离。
高效凝胶渗透色谱法主要包括以下步骤：
1. 样品制备：将待分离的大分子溶于适当的溶剂中，并使用过滤器或超滤器去除杂质。
2. 色谱柱选择：根据溶液中分子的分子量范围选择合适的高分子凝胶柱。
常用的凝胶材料包括聚合物和硅胶。
3. 柱温控制：根据样品性质，可选择恒温柱柱温控制，提高分离效果。
4. 流动相选择：根据样品的性质选择合适的流动相，常用的流动相包括有机溶剂和缓冲溶液。
5. 柱体填充：将凝胶填充到柱体中，保证凝胶均匀分布。
6. 样品进样：将样品溶液注入柱体，通过凝胶孔道渗透分离。
7. 分离分析：样品分子在凝胶孔道中的渗透速度不同，根据渗透速度的大小进行分离分析。
8. 检测器检测：通过检测器检测分离后的样品，常用的检测器包括紫外-可见光谱仪和光散射检测器。
高效凝胶渗透色谱法广泛应用于聚合物、蛋白质、天然高分子等大分子的分离和纯化。
与其他色谱技术相比，高效凝胶渗透色谱法具有分辨率高、选择性好、样品制备简单等优点，是一种重要的分离技术。
[ GPC性能 ]凝胶渗透色谱(GPC)凝胶渗透色谱目录脂溶性聚合物非水相校正标准品 (4)非水相样品GPC色谱柱 (6)水溶性聚合物与小分子水相校正标准品 (14)水相样品SEC色谱柱 (16)蛋白质分析和鉴定用SEC色谱柱....... .. (18)自动进样器样品瓶LC/GC认证样品瓶 (20)TruView LCMS 认证样品瓶 (20)为您的应用选择正确的样品瓶和隔垫 (21)样品瓶瓶盖指南 (21)小技巧与常见问题溶剂因素 (24)常见问题 (26)1964年，工作于陶氏化学公司(Dow Chemical Company)的John C. Moore出版了关于凝胶渗透色谱(GPC)的著作，由此改变了科学家们研究合成聚合物和大分子的方式。
此后不久，沃特世公司从陶氏化学公司获得该项技术的授权，并生产出第一台商业化的凝胶渗透色谱仪-GPC-100。
结合具有特定用途的专门仪器与陶氏化学公司的创新技术，GPC就能够向科学们提供通过其它方法很难获得的重要信息。
四十多年来，沃特世持续精制仪器、柱装填材料和技术，用以提高GPC分析能力。
这些创新成果让GPC技术由最初的聚合物分析向外扩展到包含了从干扰基质中分离小分子和大分子的应用，比如在食物、医药制剂和天然产物中发现的那些目标分析物。
作为GPC市场的领导者，沃特世为您提供最优质的GPC产品和专家应用支持。
作为色谱仪器和耗材的主要生产厂商，我们所有的生产设施都严格遵循ISO、FDA和cGMP指导规范。
沃特世向您保证我们将不断为您提供处于分离科学前沿地位的解决方案。
[ 脂溶性聚合物 ]聚合物专用校正标准品专为不同类型的聚合物分析量身定制，这些便于使用的校正标准品为分析人员就已知分子量范围提供快速、可靠的标准品。
聚合物类型和分子量范围在以下产品指南中列出。
产品描述部件号聚丁二烯(Polybutadiene)标准品套装WAT035709 0.5 g/瓶装聚丁二烯，每瓶标准品分子量依次为：1000, 3000, 7000, 10,000, 30,000, 70,000, 100,000, 300,000, 700,000, 1,000,000聚异戊二烯(Polyisoprene)标准品套装WAT035708 0.5 g/瓶装聚异戊二烯，每瓶标准品分子量依次为：1000, 3000, 10,000, 30,000, 70,000, 100,000, 300,000, 500,000, 1,000,000, 3,000,000聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmethacrylate)低分子量标准品套装WAT035707 0.5 g/瓶装聚甲基丙烯酸甲酯，每瓶标准品分子量依次为：1000, 1700, 2500, 3500, 5000, 7000, 10,000, 13,000, 20,000, 30,000聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmethacrylate)中等分子量标准品套装WAT035706 0.5 g/瓶装聚甲基丙烯酸甲酯，每瓶标准品分子量依次为：2400, 9500, 31,000, 52,000, 100,000, 170,000, 270,000, 490,000, 730,000, 1,000,000单分子量标准物质在许多情况下，使用单个的校正标准品来确认样品混合物中的某一分子量组分或扩展现有校正方案的范围。
凝胶渗透色谱（GPC）1. 简介凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography，简称GPC）是一种常用的分离和分析高分子化合物的方法。
该技术基于样品中高分子与凝胶基质之间的相互作用特性进行分离，并通过检测其分子量进行定性和定量分析。
2. 原理GPC的原理基于高分子在溶剂中形成的动态螺旋结构。
在这个多孔的凝胶基质中，高分子可以通过不同的速度渗透进入孔隙中，较大分子量的高分子会更难进入孔隙，而较小分子量的高分子则相对容易进入。
因此，在GPC中，高分子化合物会根据其分子量的大小在凝胶柱中得到分离，从而实现对样品的分析。
3. 实验操作3.1 样品制备：将待分析的高分子化合物溶解在合适的溶剂中，得到样品溶液。
确保样品溶液中没有明显的悬浮物或杂质。
3.2 柱装填：将凝胶柱装入色谱柱座，并根据柱座的要求进行调整和固定。
3.3 校准：使用一系列已知分子量的标准品进行校准。
将标准品溶液以一定流速注入凝胶柱中，记录各标准品的保留时间。
3.4 样品进样：使用自动进样器或手动进样器将样品溶液以适当流速注入凝胶柱中。
3.5 分离：样品在凝胶柱中进行凝胶渗透分离，不同分子量的高分子以不同的速度通过凝胶基质，完成分离。
3.6 检测：通过不同的检测器检测凝胶柱中流出的样品，常用的检测器包括紫外-可见光谱检测器、折光率检测器等。
3.7 数据处理：根据标准品的保留时间和已知分子量，结合样品的保留时间，计算出样品的分子量。
4. 应用领域GPC广泛应用于高分子化合物的分析和研究领域。
主要应用包括但不限于以下几个方面：•分析聚合物的分子量分布：通过GPC可以获得聚合物样品的分子量分布情况，了解样品中分子量大小的范围和占比，有助于进一步研究和应用。
•聚合物纯度分析：GPC可以用于判断聚合物样品的纯度，通过检测样品中的低分子量杂质，评估样品的纯净度。
•聚合物杂质分析：GPC可以用于分析聚合物样品中的杂质物质，如副产物、残留单体等。
J2ScientificGPC凝胶渗透色谱操作指导J2 Scientific GPC凝胶渗透色谱操作指南应用部分在您阅读本指南之前，最好先熟悉仪器的操作，并已经掌握<软件中文操作手册>中的内容。
本指南旨在帮助新用户掌握仪器的维护，方法建立及简单的故障排除，北京绿绵巨贸科贸有限公司对此指南保留全部权力，任何未经允许的复制、转载及其他以赢利为目的的商业行为均构成对本公司的侵权。
凝胶渗透色谱原理简介Accuprep系统结构及工作框图注意事项如何建立适合我的应用的方法GPC柱的维护和重新装填如何备份数据常见故障分析凝胶渗透色谱原理简介凝胶渗透色谱，简称GPC，是一项比较传统的分离技术，GPC的柱子由化学惰性的中空小球组成，利用空间排阻的原理对样品进行分离，详见下图:小分子通过填料“球”中的孔大分子不能从孔中通过由于小分子化合物会从填料的孔中穿过，而大分子从填料周围的空间穿过，会造成小分子与大分子之间的行程差距，这样大分子与小分子会先后从柱中馏出，起到分离的作用。
由于这一分离技术不受样品极性的影响，所以对于色谱用户来说，是一种非常有效解决色谱柱不能分开的样品的手段，尤其是对于脂肪类，蛋白及色素类大分子干扰物，这些物质对于色谱柱，进样口来说非常危险，而在生物源样品当中的含量一般又比较高，那么在进行样品分析之前进行一步GPC净化就显得非常必要了。
Accuprep系统结构及工作框图TM是由美Accuprerp国J2 Scientific公司生产的凝胶渗透样品净化系统，早在上世纪80年代就引入中国，目前其产品型号主要有手动AccuPrepJr和自动AccuPrep两种，在2005年该公司又推出了新型TM 的AccuprerpMPS系统，体积进一步小型化，并能整合计算机及在线浓缩，SPE等多种技术，更加趋于成熟。
由于目前大家采购这一仪器主要是为了提高效率，本指南将重点放在对自动仪器的介绍方面。
TM自动系 TM手动系Accuprerp统 Accuprerp统AccuPrep MPS自动系统 AccuPrep MPS +AccuVap GPC在线浓缩系统一台完整的GPC系统包括几个部分:触摸屏，控制模块，输送泵，检测器，自动进样器和软件部分。
凝胶渗透色谱聚苯胺凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography，简称GPC）是一种分离和分析高分子化合物的有力工具。
聚苯胺（Polyaniline）是一种导电聚合物，由于其独特的电学性质和化学反应性，被广泛应用于电池、传感器、催化剂等领域。
下面就以聚苯胺为例，介绍凝胶渗透色谱的应用。
一、凝胶渗透色谱法测定聚苯胺的分子量采用凝胶渗透色谱法可以测定聚苯胺的分子量及分子量分布。
实验步骤如下：1.准备试剂和仪器：选择合适的凝胶色谱柱，如Sephadex G-100、G-25等，准备好洗脱液（如0.05 M磷酸盐缓冲液），检测器（如UV-Vis），柱后反应器，输液泵等。
2.安装色谱柱：将凝胶色谱柱安装在支架上，确保柱身垂直。
3.装填凝胶：将所选凝胶均匀地装填在色谱柱内，注意避免气泡。
4.平衡色谱柱：用洗脱液平衡色谱柱，直至基线稳定。
5.样品准备：将聚苯胺样品溶解在合适的溶剂中，浓度约为0.1 g/L。
6.进样分析：将样品溶液通过输液泵泵入色谱柱，记录各个组分的洗脱体积。
7.数据处理：根据洗脱体积和标准曲线，计算聚苯胺的分子量和分子量分布。
二、凝胶渗透色谱法研究聚苯胺的分子链结构除了测定分子量，凝胶渗透色谱法还可以用于研究聚苯胺的分子链结构。
通过对比不同分子量的聚苯胺样品的色谱图，可以观察到不同分子量组分的分布情况，从而推断出聚苯胺分子链的结构特征。
此外，结合其他表征手段如红外光谱、核磁共振等，可以对聚苯胺的化学结构进行更深入的研究。
三、凝胶渗透色谱法在聚苯胺合成中的应用在聚苯胺合成过程中，凝胶渗透色谱法可以用于监控反应进程和纯化产物。
通过实时监测色谱图中的峰形和峰强变化，可以判断反应是否进行完全，以及产物的纯度如何。
此外，利用凝胶渗透色谱法还可以对合成产物进行分级分离，得到不同分子量的聚苯胺样品，用于后续研究和应用。
综上所述，凝胶渗透色谱法在聚苯胺的分析、合成以及应用中具有广泛的应用价值。
W a t e r s-1515-2414-凝胶渗透色谱(G P C)操作规程Waters 1515-2414 凝胶渗透色谱（GPC）操作规程一、溶剂和样品准备1. 选择溶剂：尝试和选择对聚合物具有良好溶解性的THF或者DMF 作为溶剂；2. 溶剂处理：采用溶剂过滤系统（真空抽滤）对色谱纯溶剂进行过滤和脱气处理；3. 样品配制：选用处理后的溶剂配置待测样品溶液，样品体积≥4mL；样品浓度根据估算的分子量确定（Mw＝103～104，浓度为1.5～2mg/mL；Mw＝104～105，浓度为1～1.5mg/mL；Mw＝105～5 x 105，浓度为0.5～1mg/mL；Mw＝5 x 105～106，浓度为0.1～0.5mg/mL；Mw＞106，浓度为0.05～0.1mg/mL）；4. 样品溶解：提供足够时间使聚合物完全溶解（一般在室温下静止过夜）；注：可轻微摇动样品以促进溶解但不可剧烈摇动；5. 样品过滤：样品溶解后，采用一次性微孔滤膜（孔径0.22μm）对样品溶液进行过滤，保存滤液待用；注意：每个样品需要准备两个样品瓶（分别用于溶解样品和放置过滤后的溶液）和两个注射器（分别用于过滤和进样）二、仪器启动1. 将经过真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中；2. 依次打开稳压电源－计算机－泵－柱温箱－示差折光检测器开关；3. 启动Breeze软件，输入用户名Breeze；选择1515-2414系统，确定；4. 在Breeze软件系统中点击运行样品－点击流量图标设置泵流速0.2mL/min，注意：设置变化时间为2min，即以0.1mL/min缓慢增加流速，使色谱柱所受压力缓慢变化；5. 在示差折光检测器面板上，点击Temp ºC设置温度40 ºC（set/control）；再点击Home－Shift 1－显示Purge图标；此时示差检测器为Purge流路，冲洗示差检测器的样品池及参比池；点击平衡系统/监视基线图标－调用PS-purge方法－点击平衡/监视器，监控基线；Purge时间为10h；6. 10h后（此时基线已稳定），在运行样品界面点击设置泵流速1mL/min（设置变化时间8min，以0.1mL/min缓慢增加流速），平衡0.5h；7. 在示差折光检测器面板上，点击Shift 1，取消Purge（回到正常测样流路），平衡3～5min；再依次点击Diag－Optimize LED(16~17正常) －Enter－Home；三、样品测试1. 点击Breeze软件系统中的单进样图标－输入待测样品名－选择功能（宽分布进样）－选择方法组PS－输入进样体积（20μL）及样品测试时间（45min）－点击单进样，准备进样；此时窗口显示等待进样；2. 选用1mL注射器，安装色谱专用平头针头，采用过滤后样品溶液润洗进样注射器后，再抽取过滤后的样品溶液；将针口朝上排出气泡（注意针头不要有液珠，否则会污染进样口，必要时用镜头纸擦拭）；将进样阀门拨到Inject 位置（即垂直状态），将进样注射器插入进样器内并插到底（不用过于用劲），进样；进样结束后迅速将进样阀门拨到Load位置；此时窗口显示进样正在运行；注意：进样结束后，使用抽滤后的溶剂及时清洗针头；3. 到设定的运行时间后，仪器自动停止数据采集，此时窗口显示单进样结束；20min后，按步骤1和2进下一个样品；注意：实验过程中及时观察溶剂存贮瓶中溶剂量；如需补加，必须在仪器停止数据采集时（最好在泵流速为0时）添加溶剂，且砂滤头必须在液面下。
凝胶渗透色谱(GPC)凝胶渗透色谱(GPC)是一种高效液相色谱法，广泛应用于聚合物、复合材料、生物大分子等高分子化合物的分析和分离。
凝胶渗透色谱法主要利用高分子溶液在凝胶固相中的渗透性差异来实现分离和分析的目的，能够测定分子量、分子量分布、聚集度、分子间交联数等多种参数。
仪器设备凝胶渗透色谱法的通用仪器设备包括高压液相色谱系统、检测器、分离柱等。
常见的高压液相色谱系统包括光学检测系统、荧光检测系统等，用于检测高分子材料在凝胶固相中的渗透性变化并测定相应的分子量和分子量分布等物理性质。
分离柱是凝胶渗透色谱法的核心组成部分，其材料和结构对分离效果和分辨能力具有很大的影响。
聚合物样品通过某种特定的凝胶材料分离柱经过一定的时间，根据分子量的不同，所渗透的凝胶固相大小不等，从而实现分离和分析。
操作方法1.准备溶液：通常情况下，GPC的流动相溶液只需用纯化水或其他合适的溶剂（如THF或DMF等）稀释或调节pH值即可。
但是，对于需要进行聚合反应的样品，则需要加入相应催化剂等反应剂进行调制。
2.校正仪器：先放出空气，制备高质量系统凡是都有很多门道。
最重要的环节是确保准确的样品体积可以被注入到必要的系统中，而不影响正常运行。
人们了解到，凝胶色谱仪在每个运行周期之前都需要进行一次校准，以确保该系统可以精确地量测介质的浓度。
3.样品预处理：准备悬浮在液相中的聚合物溶液，然后将其过滤以去除异物。
对于有机可溶性聚合物，最好使用1.0微米的滤膜。
而对于水溶性聚合物，则采用更小的孔径（如0.2微米）以去除微生物。
4.样品加载：先进行无样品加载的注射活性运行，对系统进行预洗。
在流经分离柱之前，样品应注射到GPC中。
在操作过程中必须遵守系统的卫生要求。
5.数据整理：在获得出口的溶液波峰后，必须对测得的结果进行分析。
在此期间，数据应根据您需要的参数（例如，相对分子质量、纯度、平均浓度等）进行处理。
保养规程1.洗涤清洗：经过了几个运行周期后，凝胶固相就会被损耗、许多样品会残留在分离柱中。
排阻色谱SEQ分析排阻色谱SEQ分为GPC（凝胶渗透色谱）和GFC（凝胶过滤色谱）GPC主要用于聚合物领域，GFC主要用于生物科学领域。
以下介绍岛津GPC分析系统特点：★以分子量大小分离：分子量大的先洗出，小的后洗出。
按保留时间计算分子量分布。
★专用色谱柱分类：●以分子量大小分类（表明分离线性范围）。
●以流动相分类使用四氢呋喃作流动相。
使用DMF作流动相。
（二甲基甲酰胺）使用氯仿作流动相。
使用水性溶液作流动相。
根据色谱柱线性分布，色谱柱可以串连使用，先连接分子量大的，再接分子量小的。
岛津GPC Vol.1.02软件操作首先，在CLASS-VP中对标准品进行色谱分析，优化积分后，得到理想的色谱图和数据，即去掉杂质峰和负峰（Method∈ Integration Events中Min Area最小峰面积，Intergate off 禁止积分，WIDTH半峰宽等等）。
然后进入GPC分析软件：出现下面对话框：在CLASS-VP中由色谱文件（***。
dat）转换成的对应GPC文件起名（如DLSICA。
D01）。
在窗口中有以下七个处理功能图标：GPC GPC Mol GPC Super Single File configuration Method Weight Batch Impose Chrmatogram ManagerGPC配置GPC方法分子量批处理叠加单色谱文件管理上述图标中选择GPC GPC方法即可以满足日常分析应用。
Method2．下面再返回到CLASS-VP工作站中操作，先将其它界面最小化，如图：如图：选择File∈Data∈Open打开标准品色谱数据选择Analysis∈Analyze 分析计算该标准品一次。
3．点击最下方图标栏中的进入下面界面：双击GPC方法图标，进入下面菜单：该菜单分为三部分：Calibration Curve Table为校准曲线表，编辑标准品保留时间Time，分子量Molecular等参数Calibration Curve（Linear）标定后，显示校准曲线。
gpc凝胶渗透色谱仪制样流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 样品溶解，切取约 5-10 mg 样品，溶解于适宜的溶剂中，使样品浓度为1-5 mg/mL。
凝胶渗透色谱(GPC)凝胶渗透色谱（GPC）又称凝胶色谱，是高分子化合物的分子量测定和分布分析的重要方法之一。
GPC是一种以凝胶过滤为基础的分离技术，通过溶液中高分子量化合物在凝胶柱的过滤作用下发生分离和分子量分布测定。
GPC是一种广泛使用的技术，涉及到工业、生产等多个领域，因此设备的安全操作至关重要。
下面介绍凝胶色谱设备的操作规定。
设备安全操作规定一、设备安装1.在设备安装前，应仔细阅读设备的说明书，并根据说明进行安装。
2.安装地点应选择平稳、通风、无尘、无环境振动和电磁干扰的地方。
3.在安装凝胶色谱柱时，切勿使柱子接触到有机溶剂，以免磨损和污染。
4.在连接系统管路时，要求密封性好，避免泄漏和外界污染。
二、操作前准备1.确认设备电源、水源和气源等是否正常，并根据实际需要进行调整和适当调节。
2.准备好实验所需试剂、溶剂、标准品等，并按要求进行标记和分类。
3.检查柱子封头是否紧固，柱温控制是否正常，出样口和检测器设备是否连接正常。
三、样品准备1.样品需先过滤，去掉杂质和颗粒，然后进行适当的稀释处理，以避免过高的浓度造成的毛刺。
2.样品的溶剂应与流动相相同，以避免对流动相造成干扰和影响。
3.在进行样品预处理和进样前，必须先清洗进样器和采样针，以避免样品交叉污染和干扰。
四、操作过程中的注意事项1.注意保持操作环境干净，避免灰尘、污染物等杂质进入柱子和系统中。
2.切勿突然关闭机器或脱离电源，应按照说明书要求进行操作，避免对设备和数据造成损伤和误差。
3.在操作过程中，随时监测输出信号，注意记录相关的参数和数据，便于后期的分析和处理。
4.如果设备出现异常情况，应立即停止操作，寻找问题并解决，以免对实验数据造成影响和误差。
总结凝胶渗透色谱是一种常用的高分子量分析技术，应用广泛。
在进行实验操作时，设备的安全是至关重要的。
在操作过程中，我们需要仔细阅读说明书，按要求进行设备安装和调试，准备好富有经验的工作人员，保持设备和操作环境的干净和整洁，随时注意操作中的细节注意事项。
凝胶净化系统（GPC)操作规程1.准备1.1.流动相：乙酸乙酯：环己烷（1：1），超声脱气。
1.2.样品：样品需要用流动相置换溶剂，并过滤膜(0.45 µm），方可上机。
2.凝胶净化系统(GPC)操作流程2.1.开机：将仪器及电脑各部分电源打开。
电脑登录密码为“labtech”。
原则上先开启GPC电源，待检测器自检通过（约2分钟）后，再打开仪器工作站（）“GStation Workstation”。
工作站显示连击通讯成功。
2.2.清洗与平衡：点击工作站主界面左边的【手动控制】，选择【GPC信息】窗口，点击【馏分】。
注射泵<体积>输入“8”mL，点击【清洗】。
注射泵清洗完成后，在输液泵<流量>输入“5”mL/min，点击【运行】（注：色谱柱平衡时间一般为30分钟即可，若长期未使用需要适当延长平衡时间）。
同时点击【填充进样口】。
进样口填充完毕，点击【关闭】返回主界面。
2.3.方法查看：在工作站主界面左上角的<功能导航>选择【方法管理】，点击【go】。
在方法列表中点击方法文件名，点击【打开】，即可查看方法参数。
2.4.批表编辑：点击【新建】新建批表，在“方法”栏下拉菜单选择运行方法。
点击【添加】可添加样品，更改样品名称编号。
（进样管、收集起始管和收集结束管系统会根据运行的方法自动填入。
）点击【保存】保存当前批表。
点击【载入】，液体工作站会显示样品管与收集管位置，检查摆放的样品管与收集管位置是否与界面显示的位置一致（注意检查样品管支架位置是否正确、平稳）。
2.5.运行：平衡好色谱柱后，点击【批运行】2.6.关机操作：使用结束后，点击【手动操作】，选择“GPC”信息，点击“输液泵”中的【停止】按钮，将输液泵关闭后，再关闭工作站，然后分别将仪器及电脑的电源关闭。
3.新方法的建立：(1)点击工作站主界面左上角的<功能导航>选择【方法管理】，点击【go】。
凝胶渗透色谱gpc分子量测试
凝胶渗透色谱（GPC）是一种用于测量分子量和分子尺寸的常用技术。
它基于分子在凝胶中的扩散行为，通过比较不同分子在凝胶中的迁移速率来确定其分子量。
以下是GPC分子量测试的基本步骤：
1. 样品准备：首先，你需要将待测样品溶解在适当的溶剂中。
对于聚合物，常用的溶剂是四氢呋喃（THF）、氯仿或二甲基甲酰胺（DMF）。
确保样品完全溶解并过滤以去除任何杂质。
2. 校准曲线：使用已知分子量的聚合物标准品进行校准。
这些标准品通常具有窄分子量分布，例如聚苯乙烯（PS）或聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。
将标准品溶解在相同的溶剂中，并在GPC仪器上进行分析。
根据标准品的保留时间和分子量之间的关系，建立校准曲线。
3. 样品加载：将待测样品加载到GPC柱上。
这可以通过注射器或自动进样器完成。
确保样品在加载过程中不会发生气泡形成或其他污染。
4. 分离和检测：将样品溶液通过GPC柱，柱子中的凝胶会选择性地吸附和分离不同大小的分子。
流动相（通常是溶剂）以恒定的流速通过柱子，使分子逐渐分离。
分离后的分子通过检测器进行检测，常用的检测器是折射率检测器、紫外可见光检测器或示差折光检测器。
5. 数据分析：根据校准曲线和样品的保留时间，可以计算出样品的分子量。
GPC软件通常会提供分析结果，包括分子量分布图、平均分子量等。
需要注意的是，GPC测试的结果受到许多因素的影响，如样品浓度、溶剂选择、柱类型和温度等。
因此，在进行GPC测试时，需要仔细控制实验条件，并遵循标准操作程序。
GPC凝胶色谱操作规程GPC凝胶色谱（Gel Permeation Chromatography）是一种用于分离和测定高分子聚合物分子量分布的方法。
下面是一份简要的GPC凝胶色谱操作规程，包括样品准备、仪器操作、数据处理等步骤。
一、样品准备1. 将待测样品溶解在适量的溶剂中，使其浓度达到适合测定的范围。
2. 溶液中的固体颗粒应尽量去除，可通过过滤或离心操作来完成。
二、仪器操作1. 打开仪器电源，启动GPC系统。
2. 检查仪器各个部分的连接是否紧密，确保没有泄漏。
3. 检查流动相的质量和纯度，必要时进行更换。
4. 使用适当的毛细管或注射器将样品注入到色谱柱中。
5. 设置流动相的流速和温度，一般情况下，流速根据实验需要选择，温度一般设置在室温下进行。
6. 开始运行GPC实验，记录运行开始的时间。
三、GPC实验运行1. 设定好GPC柱的温度、流速和检测器的灵敏度等参数。
2. 打开检测器的电源，选择合适的检测波长或检测器类型。
3. 开始样品分离，记录分离过程中的响应信号，并保存数据。
四、数据处理1. 使用专用的GPC数据处理软件对得到的数据进行处理。
2. 根据响应信号与时间的关系曲线，计算出不同分子量的聚合物峰面积。
3. 将样品的峰面积与标准聚合物的峰面积进行比较，计算出待测样品的分子量分布。
4. 根据实验需要，可以生成相关的分子量分布曲线或分子量平均值等结果。
五、注意事项1. 在操作过程中，应注意保持实验环境的洁净，并避免灰尘和异物的污染。
2. 使用前应检查样品是否有异常，如有溶解不完全、有颗粒物等，应予以处理或更换。
3. 注意操作时的安全性，避免与有毒或腐蚀性物质接触。
4. 操作结束后，及时将仪器清洗干净，并进行必要的维护。
以上是一份简要的GPC凝胶色谱操作规程，但实际操作中可能因仪器和实验需求的不同会有一些细微的差距，因此在操作时应根据具体情况进行调整。
另外，此规程也建议参考实验室的操作指南和相关文献，以确保操作的准确性和可重复性。
安捷伦凝胶渗透色谱安捷伦凝胶渗透色谱（GPC）是一种用于分离和表征高分子化合物的方法，如聚合物、蛋白质、多糖等。
以下是关于安捷伦凝胶渗透色谱的详细说明：1. 仪器组成：安捷伦凝胶渗透色谱系统由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据采集系统和计算机等组成。
2. 工作原理：凝胶渗透色谱的原理是基于分子大小不同，通过多孔凝胶固定相的孔径大小，按分子大小依次分离样品中的各个组分。
在分离过程中，大分子物质先被洗脱，小分子物质后被洗脱。
3. 实验操作流程：凝胶渗透色谱实验的一般流程包括以下步骤：样品准备：将待分析的样品进行适当处理，以便于后续的色谱分离。
流动相准备：选择合适的流动相，一般使用THF、DMF、水相、氯仿、三氯苯等作为流动相。
样品进样：将样品通过进样器注入色谱柱。
洗脱分离：使用高压输液泵将流动相通过色谱柱，按分子大小顺序分离样品中的各个组分。
检测和记录：使用检测器检测各个组分的信号，并通过数据采集系统记录数据。
结果处理：通过计算机处理数据，得到各个组分的分子量分布和浓度等信息。
4. 应用范围：安捷伦凝胶渗透色谱广泛应用于高分子化合物的分析，如聚合物、蛋白质、多糖等。
其应用范围包括高分子聚合物分子量的测定、线性高分子化合物多分散指数的测定、聚合物稳定性的评价及降解过程分析、高分子材料产品质量控制等方面。
5. 注意事项：在进行凝胶渗透色谱实验时，需要注意以下几点：样品准备要适当，以利于后续的色谱分离。
流动相的选择要合适，根据不同的样品选择不同的流动相。
实验过程中要保持严格的温度和流速控制，以保证实验结果的准确性。
对于某些样品，可能需要使用不同的色谱柱或流动相来达到最佳的分离效果。
安捷伦凝胶渗透色谱是一种非常有效的分析高分子化合物的方法，可以提供关于样品分子量分布、分子大小等信息，帮助研究人员深入了解样品的性质和组成。
凝胶渗透色谱操作手册一． 高聚物的分子量及分子量分布对于小分子化合物，无论有机的或无机的，都有固定的分子量，并且可以通过分子式直接计算出来。
但对于高聚物来说，除了少数几种蛋白质之外，分子大小都是不一样的，它是由许多具有相同链节结构，但不同链长即不同分子量的各种大小分子所组成的混合物。
所以，高聚物的分子量实际上是各种大小不同高分子的分子量的统计平均值。
高聚物的分子量具有多分散性，每一个高聚物都有它的分子量分布。
常用的高聚物的平均分子量有四种表示方法：数均分子量，重均分子量，Z 均分子量和粘均分子量。
1． 数均分子量M n数均分子量被定义为在一个高聚物体系中，高聚物的总重量（以克为单位）除以高聚物中所含各种大小分子的总摩尔数，即数均分子量是高聚物体系中各种分子量的摩尔分数与其相应的分子量的乘积所得的总和。
它是按分子数的统计平均。
n---摩尔数 w---重量 N---摩尔分数 M---分子量∑∑∑∑∑===−−iii ii i i n M N n M n n wM 2． 重均分子量M w在一个高聚物体系中，各种大小分子的重量分数与其相应的分子量相乘，所得的各个乘积的总和，定义为重均分子量。
它是按重量统计平均的。
W---重量分数∑∑∑∑∑===iii ii i i 2i i w __M W w M w M n M n M 3． Z 均分子量M zZ 均分子量是按Z 量的统计平均。
Z 的定义为Z=w i M i 。
Z 均分子量的定义为：一个高聚物试样中，各分子量的Z 值的分数及其相当的分子量的乘积的总和。
∑∑∑∑∑∑===2i i 3i i i i 2i i i i i z __M n M n M w M w Z M Z M 由于Z=w i M i 没有具体的物理意义，因此Z 均分子量也没有具体的物理意义。
4． 粘均分子量M η用溶液粘度法测得的平均分子量为粘均分子量。
定义为：∑=α1αi i η__)M W (Mα为[η]=kM α公式中的指数。
对于同一高聚物样品，采用不同的统计平均方法进行数据处理时，所得到的平均分子量数值是不相同的。
一般情况下，M n <M η<M w <Mz 。
程度的定量描述，用多分散指数M w /M n 来表二． 地进行分离的。
其固定相为化学惰性多孔物质――聚苯乙烯型交联共聚物凝胶。
凝胶内具有一定大小的孔穴，体积大的分子不能渗透到孔穴中去而来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后ferential Refractometersorbance Detector1． 7位置时装样，此时进样环与流动相的流路N 进样环与流路相通，样品被带入到色谱柱中进行分离。
高聚物分子量分布宽度是高聚物分散征分子量分布宽度。
M w /M n 比值愈大，说明分子量分布愈宽。
M w /M n 又称为高聚物分子量分布系数或分散度。
凝胶渗透色谱仪凝胶渗透色谱（GPC ）是液相分配色谱的一种，它是按溶液中溶质分子体积（确切说是按流体力学体积）大小被排阻，较早地被淋洗出洗出色谱柱。
这样，样品分子基本上按其分子大小、排阻先后由柱中流出，而不是依赖于试样、流动相和固定相三者之间的相互作用。
凝胶渗透色谱可用来测定高聚物的分子量及分子量分布。
凝胶渗透色谱仪主要由进样系统、高压泵、色谱柱、检测器及计算机组成。
本实验室凝胶渗透色谱的配置为：Waters 515 HPLC PumpWaters 2410 Dif Waters Styragel Columns （THF 系统、DMF 系统）Waters 2487 Dual λ Ab Millennium 32 操作系统窄分布聚苯乙烯标样进样器725手动进样器为六通式进样器，在LOAD 断开。
在I JECT 位置，2． 515泵流速范围在0.00－10.00mL/min ，但对于GPC 柱子，流速不能超过1.0mL/min 。
3．色谱柱yragel 柱填充物为多孔的交联苯乙烯－二乙烯基苯共聚物颗粒。
适用于中前，中级仪器实验室使用的柱子为：：Waters Styragel HT4 分子量 5000--600000。
4．来测定样品浓度。
只要被一种通用型的，也是凝胶色谱中必备检测器。
Waters St 等范围分子量的高分子，是分子量测定的最通用的柱子。
目THF 系统 HT3 分子量 500--300000HT2 分子量 100-- 10000DMF 系统：HT4、HT3，分子量范围同上2410示差折光检测器示差折光检测器是通过连续地测定淋出液的折光指数变化测样品与淋洗剂折光指数不同均能检测。
它是的2410示差折光检测器的流路图如下：5． 2487三． 溶剂和样品的准备双波长紫外可见检测器工作波长为190－700nm ，可选择单波长检测或双波长检测。
1． 溶剂 除水GPC 系统应使用色谱纯的溶剂，以保证测试结果的重现性，更保证整个系统良好THF 、DMF ，均需严格的除水处理。
处理方法如下：剂中加入适量CaH 2，观察气泡情况，若有大气泡冒起，说明此溶剂中含水较先用分子筛脱水后再加CaH 2回流；若冒起的气泡较小，说明含水较少，可直 脱运转。
所以，对于分析纯的先在溶多，需接加CaH 2回流。
需回流8小时以上，然后再蒸馏。
注意蒸馏溶剂时，绝对不能蒸干，否则会引起爆炸。
四氢呋喃很容易在贮存时生成过氧化物，特别在日光的作用下生成更快。
因此，溶剂应随用随蒸，蒸馏后封好口存放到保干器中。
但放置时间过长，仍需重新蒸馏。
气不管哪一种溶剂都溶有一定量的空气，因此，流动相溶剂在进入高压输液泵之前，柱或检测系统产生气泡。
气泡一经形成，往往很难排除，结果造成泵压波动，必须预先脱气，以免由于柱后压力下降使溶解在流动液中的空气自动脱出而形成气泡，从而影响检测器的正常工作。
而且，溶剂中的气体不脱除，还会导致泵、色谱特别是进入色谱柱的气泡会严重影响柱分离效率，使实验无法进行。
为此，GPC 所用溶剂均必须进行脱气处理。
本实验室采用真空抽滤脱气，用0.45μm 的滤膜真空过滤，脱除溶剂内的气泡，同时滤除溶剂中的微量杂质。
加液经以上处理后的溶剂，方可加入到仪器的贮液瓶中。
加溶剂时，应将泵的流速（留下适量溶剂作滤头及注射器清洗之用）。
调为0.0mL/min ，使用漏斗加液，防止溶剂洒到仪器和台面上。
同时，随时注意贮液瓶中的砂滤头不能脱离液面。
2．太大发生淋出体积后移的所谓“超载”现象。
所以实验时进样浓度在检测器灵敏要注意的是：过滤头为易耗品，使用中须密切注意滤头状态，随时可能会出3．配上长针头，取干净溶剂专用；磨口塞的小锥形瓶1个，盛放适量干净溶剂，清洗进样用注射器、过滤注射器及密封胶条，存放过滤后的样品溶液。
四． 1．处理及真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中（注意：加溶剂时泵流速必须为到液瓶中。
开关）、泵及示差检测器（或紫外可见检测器）的电源开关，将3．in 递增调节泵的流速至1.0mL/min 。
注意：必须缓慢地增加或降低流速，TER 钮二次，将光标打到小数点后第一位上，按▲或▼4．面板上，按2nd/Func 钮＋ Purge/9钮，显示Purge ，此时示差检测5．样品凝胶色谱中浓度检测器常用的是示差折光检测器，这种检测器虽然通用性较好，但是检测灵敏度并不太高，比之紫外吸收检测器在灵敏度上大约低二个数量级左右，所以试样的浓度不能配制太稀。
但是另一方面，色谱柱的负载不能过高，浓度了容易度允许的范围内应尽可能低。
对分子量比较大的试样，更应该在低浓度下测试。
理论上，进样浓度按分子量大小的不同在0.05—0.3%范围以内配制，实际上，常按10mg/mL 配制，但分子量较大或粘度较大的试样，溶液浓度应降低。
由于高分子样品溶解性能特殊（个别样品在溶解后可能出现凝聚现象），所以应在测试前一天将样品溶液配好（须使用经除水处理的溶剂），待完全溶解后，室温下静置过夜，第二天观察溶液情况，确认无沉淀、凝絮或增稠等现象，方可过滤、测试。
样品溶液的过滤使用0.45μm 过滤头。
在装有过滤头的注射器内倒入样品溶液，缓慢推动注射器，将样品溶液通过过滤头滤到干净的小试管中。
然后用干净的溶剂清洗过滤头数次。
需现穿滤或堵塞。
或发现过滤时压力明显减小或过滤速度加快，即为滤头穿滤；若过滤阻力很大，很有可能是滤头堵塞。
无论是穿滤还是堵塞，都必须马上更换滤头重新过滤。
为规范GPC 测样，请准备以下物品：2 mL 注射器配上过滤头，过滤样品用；2 mL 注射器具过滤头；与样品数相对应的干净小试管，加塞或加仪器启动将经脱水零，砂滤头必须在液面下），检查确认溶剂的流路已正确连接，二根出口管路插入废2．打开总电源（空气泵的流速设置为0.0mL/min ，按RUN/STOP 打开泵；再打开柱温箱开关（只能在有流量时才能打开柱温箱）。
以0.1mL/m 使色谱柱所受压力缓慢变化；另外，泵的流速不能超过 1.0mL/min ，否则会损坏色谱柱中的凝胶。
流速调节方法：按EDIT/EN 将流速提高或降低0.1mL/min ，确认流速数值正确后，按MENU 确定。
重复此操作，将泵的流速调节到所需流速。
在示差检测器的器为Purge 流路，冲洗示差检测器的样品池及参比池。
Purge 时间约1小时。
再按2nd/Func 钮＋ Purge/9钮，结束Purge 过程，回到正常测样流路。
6． 开计算机打开计算机，双击Millennium 32快捷键，出现Login Window ；点Login ，输入Password ：manager ，OK ；从Project 框中，选择自己课题组的Project 。
五． 1．R-2410-T （THF 系统）或L-2410（DMF。
2．点Single ，输入样品名，选择inject broad samples ，选择method set （与Project 同名体积及样品测试时间（THF 系统，3根柱子，35分钟；DMF 系统，23． 5．ct 钮，待窗口底栏出现Single平圆，不能使用尖针头注射器！）缓慢抽取样品液，将针口朝上排出气泡，（注意针头上不要有液珠，否则会污染进样口，保没有气泡进入进样环。
进样量与所配溶液的浓度有关。
6． 到设7． 若有能进行下一个样品的测试。
六． 2．的样品通道，点Review 钮，调出谱图；． 点File-Open-Method-方法名（选择有最新工作曲线的方法名）-Open（处理方法向导钮），选择最窄的峰确定峰宽，点Next ；选择一段基。
点Results测试样品在Millennium 32主窗口，双击Run Samples ，选择系统）或UV （紫外检测器），进入QuickSet 窗口 ），输入进样根柱子，25分钟）。
在Instrument Method 中，选择410.instr （或UV ）。
