CD4+CD25+T细胞的扩增及其功能分析_曹东林

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人CD4 +CD25 +调节性T细胞体外扩增研究

ｏＬＡｌｔｏｉｌＡａｅｙｏｌａｅｉｌｃｎｅ，ｆＰＡ，ｆｉｅＨｓｔｃｄｍｉａｄｐａｏｆｆＭｉｔｒＭｄａｉｃｉｙｃＳｅｓ
１０７，ｈｎ００１Ｃｉａ
［ｂｔｃＪＯｊｃｖ：ｏｓｂｓｒｔａａｄｃｎｅｉｎａｐａｈａｄｅｐｒｅｔｕｄｔｎｆｅｉｖｒｅｐｎｉＤＡｓａｔｒｂｅｔｅＴｔｌｈａａｉｌｎｏｖｎｔｐｒｃｅｍｎｌｏｎａｏｒｈｉｏｘａｓｎｏＣ４ｉｅａｉｐｃｃｅｏｎｘｉａｆｉｏｔｎｔｏｆＣＹ５ｅｓｎｆｓｎｏｎｒｅｖｄＣ４Ｄ５ｅｓｒｕｕｅｔｅｔｆｃｔｇａｅｕｏｔｓｓ（ＧＨＤ．ｔｏｓＣ４ＬｃＨｄｉｕｉｆｏｏｄｒｅＤＣ２ｃｌｔｅｔａｎｏｕｅｒｔｒｓｓｄｅｅａＶ）Ｍｅｄ：Ｄ２ａｎｏｄ－ｉｏｆｆｒｒｍａｆｖｓｈａｉｈ
三春等
人Ｃ４Ｃ２＋Ｄ＋Ｄ５调节性Ｔ细胞体外扩增研究童ｌｌ０
・
９３１
ｄｉ１．６／．ｓ．００４４２１．００２ｏ：０３９ｊｉｎ１０ — ８Ｘ．０１．１９ｓ０
・
免疫学技术与方法・
人Ｃ４Ｃ２＋节性Ｔ细胞体外扩增研究① Ｄ＋Ｄ５调
７．％ ±１７％。体外抑制实验显示体外扩增的Ｃ４Ｄ５０９３．１ＤＣ２Ｔ细胞对自体和异体的Ｃ４ＤＴ细胞增殖均有明显的抑制作用，

哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达及临床意义

哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达及临床意义谭楠;吴昌归【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2007(36)1【摘要】目的:探讨哮喘患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义.方法:采用流式细胞技术检测40例哮喘患者和40例健康对照者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平,同时测定20例急性发作期哮喘患者肺功能.结果:哮喘患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比为3.02士1.85%,明显低于健康对照组(P＜0.01);急性发作期哮喘患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞明显低于非患性发作期(P＜0.01);急性发作期患者外周血CD4+CD25+T细胞百分率与FEV1呈显著正相关(r=0.5874,P＜0.01).结论:CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘的疾病活动中起着重要作用,是导致哮喘患者细胞免疫失调的重要原因.【总页数】3页(P102-104)【作者】谭楠;吴昌归【作者单位】第四军医大学西京医院呼吸内科,西安,710032;第四军医大学西京医院呼吸内科,西安,710032【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的测定及临床意义 [J], 韩雪花;郑玉龙;金跃2.胃癌患者外周血及癌组织中CD4+CD25+调节性T细胞、转录因子Foxp3的表达及临床意义 [J], 陆威;李永翔;张尚鑫;闫强3.NSCLC患者手术前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达及其临床意义[J], 刘俊彪;陈书山4.CD4+CD25+调节性T细胞在AIHA患者外周血中的表达及临床意义 [J], 肖捷;杨丽萍;肖健;黄继贤5.胃癌患者外周血调节性T细胞CD4+CD25+和CD8+CD28+/-的表达及临床意义 [J], 林秀清;陈新;金瑞放;陈周峰;薛海波;陈超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤免疫治疗的新进展【文库论文】

CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤免疫治疗的新进展======================================================================作者：翟海龙，雷丹琼，程震勇，胡敏【摘要】 CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,CD4+CD25+ Tregs)可抑制机体对肿瘤的免疫应答，导致不利于肿瘤患者的对肿瘤的免疫耐受。

以降低CD4+CD25+Tregs作用，增强对肿瘤的免疫应答为新策略的肿瘤免疫治疗探索已有初步进展。

方法包括去除CD4+CD25+Tregs、单克隆抗体、蛋白分子转移、阻断Tregs的迁移和分化、逆转Tregs的分化、阻断Tregs的功能、疫/瘤苗、将Tregs调控与其他治疗模式相组合、提升抑制效应细胞的阈值。

【关键词】 CD4+CD25+调节性T细胞; 肿瘤; 免疫治疗Abstract：CD4+CD25+ regulatory T cells(CD4+CD25+ Tregs) can suppress the useful immune response against tumors, which lead to immune tolerance to tumors in tumor patients. The tumor immunotherapy based on the new strategy which decreases the function of CD4+CD25+ Tregs and enhances the immune response against tumors has been explored. The methods were consisted of the depletion ofCD4+CD25+Tregs, monoclonal antibodies, protein molecule transfer, blocking Tregs trafficking and differentiation, subverting Tregs differentiation, blocking Tregs effector functions, vaccine, combining Treg management with other treatment modalities and raising suppressed effector cell threshold.Key words：CD4+CD25+ regulatory T cells; Tumor; Immunnotherapy调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs)包括自然Tregs(normal regulatory T cells,n Tregs)以及适应性Tregs(adaptive regulatory T cells,a Tregs)。

医学论文-CD4+CD25+调节性T细胞及其与GVHD的关联性

医学论文-CD4+CD25+调节性T细胞及其与GVHD的关联性【摘要】 CD4+CD25+调节性T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群，具更免疫无能和免疫抑制两大特性，通过细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子发挥对CD4+CD25-T细胞的抑制作用。

GVHD是异基因造血干细胞移植最严重的并发症之一，近来更关CD4+CD25+调节性T细胞与GVHD关联性的研究得出了两种截然相反的结论，即该类细胞可更效防治GVHD的发生及该类细胞与GVHD的发生率成正比。

这一研究结果的明确将为GVHD的临床治疗提供新的思路。

本文就CD4+CD25+调节性T细胞及其免疫表型、特性、免疫调节作用机制及CD4+CD25+T细胞与GVHD的关联性的一些新的研究进展作一综述。

【关键词】 CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+ Regulatory T Cells and Their Function in Graft-Versus-Host Disease ——ReviewAbstract As a functionally and phenotypically distictive T cell subpopulation，CD4+CD25+ regulatory T cells are anergic and retain their ability to suppress antigen-driven response of CD4+CD25- cells in a contact-dependent manner or through a way of secreting immunosuppressive cytokines such as IL-10 and TGF-β.Graft-versus-host disease (GVHD) is one of the major complications following allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT).Recently，some researches on the relationship between donor CD4+CD25+ regulatory T cells and GVHD severity produced two contradictory conclusions： one is CD4+CD25+ regulatory T cells that can prevent GVHD efficiently; the other is that GVHD is associated with the increased numbers of peripheral blood CD4+CD25+ regulatory Tcells.The answer to this question will provide a new ideafor clinic therapy of GVHD.In this review some new research progresses in the related area，such as the CD4+CD25+ regulatory T cells，the phenotype，characteristics，immunoregulatory mechanisms of CD4+CD25+ regulatory T cells，as well as the relation of CD4+CD25+ with GVHD were presented.Key words CD4+CD25+ regulatory T cell; CD4+CD25- T cell; GVHD异基因造血干细胞移植物中常常混含供者T淋巴细胞，这些细胞对受者同种异型抗原发生应答，而引发移植物抗宿主病（graft-versus-host disease，GVHD）。

CD +CD25 +调节性T细胞扩增方法的研究进展

体内外研究都表明ＣＣ５Ｔｒｇ细胞具有Ｄ４Ｄ２。ｅ。
免疫调节作用，以抑制效应性Ｃ４Ｃ。Ｔ细胞可Ｄ／Ｄ８。
Ｃ。Ｄ２ＴｅＤ４。５ｒｇ细胞按其来源与特征可分为天Ｃ
然ＣＣ５Ｄ４Ｄ２Ｔｒｇ细胞和适应ＣＤＣ５Ｔｅｅ４Ｄ２ｒｇ细胞。前者来源于胸腺，过ＴＲ与ＭＨＣ Ⅱ 分子通Ｃ一类
制性两大功能特征。其免疫无能性表现在对高浓度］
Ｉ一Ｉ２的单独刺激，固相包被或可溶性ＣＤ３单抗，以及ＣＤ３单抗和Ｃ８单抗的联合作用呈无应答状态，Ｄ２也
Ｃ４Ｃ５ＤＤ２Ｔｒｇ细胞在体外扩增困难，以限制了ｅ所
ＣＤ２。节性Ｔ细胞（ｅｕａｏｙＴｃｌ，Ｄ４Ｃ５调。ｒｇｌｔｒｅｌｓ
的表达是Ｃ４Ｃ５ＴｅＤＤ２ｒｇ细胞的重要标志，其介导Ｔｅｒｇ细胞在胸腺的发育，与Ｔｒｇ细胞的抑制功能并ｅ密切相关ｌ。Ｃ２５］Ｄ５是目前应用最广泛的分离和鉴定ＣＴｒｇ细胞的标志。Ｄ４ｅ１３Ｃ４Ｃ２Ｔｅ．ＤＤ５ｒｇ细胞的功能Ｃ４Ｃ２ＴｅＤＤ５ｒｇ细胞具有免疫无能性和免疫抑
的免疫抑制性表现在经ＴＲ的信号刺激活化以后能Ｃ
够抑制Ｃ４。ＣＴ淋巴细胞的活化和增殖，种Ｄ。和Ｄ８这抑制作用为非抗原特异性，不具有ＭＨＣ限制性ｌ。７］

CD4~+CD25~+T调节细胞在慢性粒细胞性白血病中的表达及临床意义

CD4~+CD25~+T调节细胞在慢性粒细胞性白血病中的表达及临床意义摘要】目的：探究CD4+CD25+T调节细胞在慢性粒细胞性白血病中的表达及临床意义。

方法：采用流式细胞仪分别在化疗前后采集外周血样并检测CD4+CD25+T细胞表达水平，与正常体检者对照，同时分析其与临床参数之间的关系。

结果：实验组治疗前CD4+和CD8+T细胞水平与对照组接近，治疗后外周血CD4+CD25+T细胞亚群水平降低明显，与治疗前比较差异显著（P＜0.05）；分析认为与血红细胞和骨髓幼稚细胞有关。

结果：CD4+CD25+T细胞在CML中起到一定的免疫调节作用，其表达水平可用于指导临床诊疗。

【关键词】慢性粒细胞性白血病；T调节细胞；外周血【中图分类号】R55 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）29-0211-02慢性粒细胞性白血病（CML）是一种以粒系细胞慢性增殖为主要特征的恶性克隆性疾病，该类病症进入加速急变期可能与新的染色体及基因异常有关，目前免疫治疗已成为控制肿瘤生长和复发的常用方法[1]。

近年来，肿瘤免疫学领域研究取得了很大进展，调节性T细胞在CML发生发展过程中起到很大作用，本研究通过对CD4+CD25+T调节细胞在CML化疗前后外周血中变化情况进行分析，现将结果报告如下。

1.资料与方法1.1 一般资料选取我院2014年10月至2015年10月血液科收治的30例CML患者作为研究对象，均为初发初治患者，所有患者均经骨髓细胞学、免疫分型检查并确诊，其中男性17例，女性13例，年龄范围为25～42岁，平均年龄为（29.2±3.8）岁，将其列入实验组；另选20名健康体检者列入对照组，男性10例，女性10例，年龄范围为25～40岁，平均年龄为（28.5±4.2）岁。

1.2 方法均抽取清晨空腹静脉血3ml，EDTA抗凝，采用荧光直接标记法检测CD4+CD25+T细胞亚群水平；取外周血15μl置于流式进样管中，置入鼠抗人单克隆抗体PE，记录CD4 M、CD8 M和CD25 M。

CD4 +CD25 +调节性T细胞在不同肝脏肿瘤中的表达及意义

ｓｌｃｅｒｔｅｃｎｒｌｒｕ．ｈｘｒｓｉｎｏｒｇｃｌｉｅｅｔｕｒｓｉｅｓｅｅｔｄｂｏｂｅＥＬＳｆｍｍｕｏｅｅｔｄｆｏｔｏｐＴｅｅｐｅｓｏｆｅｅｌｉｄｆｒｎｍｏｌｓｗａｔｃｅｙｄｕｌＩＡｏｏｈｏｇＴｓｎｆｔｃｄｉｎ— ｈｓｏｈｍｉａｔｉｉｇＴｅｅｐｅｓｏｆｒｇｃｌｓｏａｅｅｗｅＮＨ，ｉｔｃｅｃｌａｎｎ．ｈｘｒｓｉｎｏｅｅｌｗａｍｐｒｄｂｔｅｎＦｓＴｓｃＡＡＨｎＣｇｏｐ．ｈｆｕｎｉｇｆｃａｄＨＣｒｕｓＴｅｉｌｅｃｎ — ｎａｔｒｆｒｇｃｌｒｎｌｚｄｂｔｅｒｕｓｉｏｓｏｅｅｌｗｅｅａａｙｅｅｗｅｎｇｏｐｎＨＣＣｇｏｐ．ｓｌ：ｅｅｗａｏｅｐｅｓｏｆｒｇｃｌｏｍａｖＴｓｒｕｓＲｅｕｔＴｈｒｓｎｘｒｓｉｎｏｅｅｌｉｎｒｌｉ — ｓＴｓｎｌｅｓｕｎＮＨｇｏｐＴｅｅｗｅｅｐｓｉｅｅｐｅｓｏｓｏｒｇｃｌｒｔｓｅａｄＦｒｕ．ｈｒｒｏｉｖｘｒｓｉｎｆｅｅｌｉＡＡＨｎｉｔＴｓｎａｄＨＣＣｇｏｐａｄｔｅｅｗａｉｎｆａｔｒｕ，ｎｈｒｓａｓｇｉｃｎｌｉｙ
天津医药２１年４月第４０２０卷第４期
３３７
ｄｉ０３６￣ｉｎ０５－８６０２０．１ｏ：．９．ｓ．２３９９．１．０１９ｓ２４１

扩张型心肌病患者外周血CD4+CD25+T细胞变化及临床意义

Ｃ４ｅｓｗｓｏｎｅｓｎｃｔｗｒｎＤＭｇｏｐ（．３±１６）］ｔａｈｓｆｏｔｌｒｕ（１４土Ｄ＋ｃｉａｕｄｔｂｇｉａｌｌｅＣｒｕ［８５Ｔｌｆｏｉｆｎｙｏｉｉ．４％ｈｎｔｏｅｏｎｒｏｐ［１．ｃｏｇ
山东医药２１００年第５Ｏ卷第５期

扩张型心肌病患者外周血ＣＺｃＴ细胞ＤＤ变化及临床意义
吴海 ’ 廖钦展，慧娟，，贺陈世德，文宏，刘艳丽（西医科大学第一附属医院，广南宁５０２）３０１
摘要：目的
探讨扩张型心肌病（Ｃ患者外周血ＣＺＣＴ细胞变化及临床意义。方法ＤＭ）ＤＤ
０ＣＭ．ｆＤ
ＫｙｗｒｓｄｌｅａｄｏｏａｙＣ：ＤＴｃｌ；ｕｏｍｕｅｅｏｄ：ｉｔｄｅｒｉｐｔ；ＤＣｅｓａｔｍｎａｍｙｈｌｉ
研究显示 ¨ ，Ｊ免疫应答异常等因素与扩张型心肌病（Ｃ的发生密切相关，ＤＭ）尤其是自身免疫机制
ＮＨＹＡ分级 Ⅱ级９例， Ⅲ级９例，级１。均符 Ⅳ ２例合２００７年中华医学会心血管病学分会提出的心肌
ＤＭ患者Ｃ；ｃＴ细胞比ＣＤＤ
中图分类号：５２２Ｒ４．
文献标志码：Ａ
文章编号：０２２６２１）５００－２１０－６Ｘ（０００－９００
ＳｎｉｎｅｏｔｅｃａｇｆＤＤｅｌｉｐｔｎｉｉｔａｄｍｏａｈｉｉａｃｆｈｈｎｅｏＣ；Ｃ之Ｔｃｌａｉｔｗｔｄｌｅｃｒｉｙｐｔｇｆｃｓｎｅｓｈａｄｏｙ

CD4^+CD25^+调节性T细胞体外扩增的研究进展

CD4^+CD25^+调节性T细胞体外扩增的研究进展周海涛;杨志刚【期刊名称】《中国实验血液学杂志》【年(卷),期】2011(19)1【摘要】CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的研究已有30多年的历史,主要在体内发挥免疫抑制功能,很多自身免疫疾病的发生都与Treg的数量减少或功能失调有关,如多发性硬化、非肥胖性糖尿病(NOD)及红斑狼疮等,而在移植免疫领域内也有着十分重要的意义。

这些特性使得应用Treg防治自身免疫性疾病和器官移植的排斥备受关注,然而体内有限的数量使得它们的应用和研究受到影响。

目前,许多体外扩增技术已被建立起来,从而可以克服体内细胞数量不足的问题。

最近的研究表明,树突状细胞(dentritic cells,DC)扩增的抗原特异性Treg比用抗CD3/CD28抗体扩增的多克隆Treg显示更有效的免疫抑制作用,是当前研究的热点。

本文主要对调节T细胞的扩有关增手段和相关的作用机制等进行回顾与比较。

【总页数】9页(P260-268)【关键词】调节T细胞;免疫调节;体外扩增;免疫磁珠分选;树突状细胞【作者】周海涛;杨志刚【作者单位】广东医学院临床检验学院;广东医学院附属医院血液内科【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.甲泼尼龙对哮喘患者外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞影响的体外研究 [J], 鞠云飞;孙立锋;胡华;杨燕;滕格玲2.不明原因复发性流产机制中Th17细胞和CD4^+CD25^+调节性T细胞的研究进展 [J], 文妍琪;杨菁3.致敏小鼠CD4^+ CD25^+调节性T细胞磁珠分选及体外扩增 [J], 潘莉;翁文骏;许吕宏;魏菁;方建培4.离体CD4^+CD25^+调节性T细胞的扩增和混合淋巴细胞反应研究 [J], 翟海龙5.CD4^+CD25^+调节性T细胞体内外培养扩增方法的研究进展 [J], 王永磊;朱志军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外扩增CD4CD25Treg细胞的效果比较及体外免疫抑制功能鉴定[1]

ｔｈｅＴｒｅｇｃｅｌｌｓｆｒｏｍ
ａｌｌｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ
ｒａｔｅ
ｅｘｐａｎｄｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒ２ｗｅｅｋｓ．ＩｎｔｈｅＣＤ４＋Ｔｃｅｌｌｓｇｒｏｕｐ．ｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
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ｗａｓ（７７．８±５．３２）
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ｆｒｏｍ（７６．９２±１．７２）％ｔｏ（７５．３３±２．１１）％ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｈｅｒｅ
ｗｅｒｅｎｏｔ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅｃｅｌｌｐｕｒｉｔｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐａｎｄｅｄＣＩＭ＋ｃｅｌｌｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．Ｉｔｉｓ
（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
Ｔ
好的细胞悬液进入磁珠自动分选仪的磁场，阴性选择出ＣＩＭ＋Ｔ细胞；将收集的ＣＤ４＋Ｔ细胞（ＣＤ２５＋Ｔ标有ＰＥ）加入抗ＰＥ的磁珠，所有ＣＤ２５＋Ｔ细胞都标记有磁珠，细胞悬液经过磁珠自动分选仪的磁场阳性选择ＣＩＭ＋ＣＤ２５＋Ｔｍｇ细胞，阴性选择ＣＤ４＋ＣＤ２５一Ｔ细胞。具体按ＣＤ４ｌ＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ细胞的分选试剂盒说明书进行操作。０．４％台盼蓝染色后检测细胞活性，流式细胞术检测细胞纯度及表型标记
Ｙａｔ－Ｓｅｎ１Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏ
ｏ，ＦＡＮＧＪｉａｎ．Ｐｅｉ．ＸＵＬｇｔ—Ｈｏｎｇ
ＭｅｍｏｒｉａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｕｎＹａｔ－ＳｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０１２０，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ；
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，砌Ｐ豫ｆ坩Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ

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曹东林1，陈伟2，王玲2
Expansion and function analysis of CD4+CD25+ T cells
Cao Dong-lin1, Chen Wei2, Wang Ling2
1Institute of Genetic Engineering, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China; 2Department of Hematology, Second People’s Hospital, Guangzhou 510317, Guangdong Province, China
transplantation. OBJECTIVE: To investigate the proliferation of CD4+CD25+T cells from C57BL/6 mice and function changes in vitro.
DESIGN, TIME AND SETTING: The cytology in vitro study was performed at the Department of Hematology, Zhujiang Hospital,
;CD25+ T 细胞增殖能力低，且在人外周血中仅占单个核细胞的 4%左右。若能在体外高效扩增 CD4+CD25+ T 细胞，并保持其免疫调节特性，将会对临床移植产生积极的影响。目的：观察 C57BL/6 小鼠来源的 CD4+CD25+ T 细胞体外增殖情况及其扩增后的功能变化。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于 2007-10/2008-05 在南方医科大学珠江医院血液科完成。材料：SPF 级 C57BL/6 及 BALB/C 雄性小鼠购自南方医科大学动物所。小鼠白血病细胞 EL9611 由珠江医院血液科惠赠。方法：利用免疫磁珠法分选小鼠 CD4+CD25+ T 细胞；以抗鼠 CD3ε单抗、抗鼠 CD28 单抗、鼠重组白细胞介素 2 及辐射过的 BALB/C 小鼠脾细胞为共刺激因子，通过实时定量 RT-PCR 检测扩增后 CD4+CD25+ T 细胞 FoxP3 基因 mRNA 表达变化，以确定增殖效率；3H-TdR 掺入法检测扩增后的 CD4+CD25+ T 细胞对 CD4+CD25-T 细胞增殖的影响；LDH 释放法检测扩增后的 CD4+CD25+ T 细胞对 CD4+CD25-T 细胞杀伤小鼠白血病细胞 EL9611 的影响，以 CD4+CD25-T 细胞为效应细胞，以 EL9611 细胞为靶细胞。结果：经免疫磁珠分选可获得高纯度及较强活性的 CD4+CD25+ T 细胞。扩增后 CD4+CD25+T 细胞 FoxP3 基因 mRNA 的表达平均为扩增前的 5.46 倍，最高可达 14.39 倍。扩增后 CD4+CD25+T 细胞可明显抑制 CD4+CD25-T 细胞的增殖，且随着 CD4+CD25+T 细胞数的增加，这种抑制增殖的能力也逐渐增强，当两者比例为 1:1 时抑制率最大，达 62.05%。与单纯 CD4+CD25- T 细胞对 EL9611 细胞杀伤率比较，效靶比为 10:1 时扩增后的 CD4+CD25+ T 细胞联合 CD4+CD25- T 细胞的杀伤率无明显变化（t=2.199，P > 0.05）；效靶比为 5:1 时扩增后的 CD4+CD25+ T 细胞联合 CD4+CD25- T 细胞的杀伤率则明显降低（t=5.839，P < 0.05）。结论：单抗加异源性抗原能有效扩增 CD4+CD25+T 细胞；扩增后的 CD4+CD25+T 细胞比新鲜分离的 CD4+CD25+T 细胞能更有效地抑制 CD4+CD25-T 细胞的增殖，其对 CD4+CD25-T 细胞杀伤白血病细胞的作用则取决于其与 CD4+CD25-T 细胞的相对比例。
Supported by: the Scientific and Technological Plan Program of Guangzhou City, No. 005Z3-E0371*
Received: 2008-05-21 Accepted: 2008-08-10
Abstract BACKGROUND: CD4+CD25+ T cells have low proliferation ability, and are about 4% of mononuclear cells in the peripheral blood. To amplify CD4+CD25+T cells in a high level and with its immunological regulation in vitro can have active effects on clinical
Southern Medical University from October 2007 to May 2008.
MATERIALS: The SPF, C57BL/6 and BALB/C male mice were purchased from Animal Room of Southern Medical University.
Cao Dong-lin☆, Studying for doctorate, Lecturer, Institute of Genetic Engineering, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China caodl＠
Cao DL, Chen W, Wang L.Expansion and function analysis of CD4+CD25+ T cells.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu
Linchuang Kangfu 2009;13(1):96-100(China)
基础医学
中国组织工程研究与临床康复第 13 卷第 1 期 2009–01–01 出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research January 1, 2009 Vol.13, No.1
CD4+CD25+ T细胞的扩增及其功能分析*☆
关键词：T 细胞；体外增殖；功能
曹东林，陈伟，王玲.CD4+CD25+ T 细胞的扩增及其功能分析[J].中国组织工程研究与临床康复，2009，13(1):96-100 [ ]
Correspondence to: Wang Ling, Doctor, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Hematology, Second People’s Hospital, Guangzhou 510317, Guangdong Province, China gzlwang@
monoclonal antibody, anti-mouse CD28 monoclonal antibody, mouse recombinant interleukin-2 and irradiated spleen cells from
BALB/C mouse were employed as co-stimulating factors. Following real time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, CD4+CD25+T cells FoxP3 mRNA expression changed to define proliferation efficiency. The inhibitory effect of CD4+CD25+ T on CD4+CD25-T cells was detected by 3H-thymidine incorporation assay and on CD4+CD25-T cells killing leukemic cells EL9611 was assayed by LDH cytotoxicity assay. CD4+CD25-T cells were used as effector cells, and EL9611 cells as target
Leukemic cell EL9611 was presented by Department of Hematology, Zhujiang Hospital. METHODS: Immunomagnetic beads sorting method was used to separate CD4+CD25+T cells from mice. Anti-mouse CD3ε
cells. RESULTS: After sorting, CD4+CD25+T cells with high purity and cell vitality rate were collected. The relative expression of FoxP3 mRNA in expanded CD4+CD25+ T cells was averagely 5.46 times than that of freshly CD4+CD25+ T cells, and the highest 14.39 times. After amplification, CD4+CD25+T cells obviously inhibited the CD4+CD25-T cell proliferation in vitro. The inhibitory rate increased with the more CD4+CD25+T cells and achieved to maximum in coculture of CD4+CD25+ T cells together with CD4+CD25-T cells (ratio of 1∶1), and the inhibitory rate was about 62.05%. There was no significantly difference between CD4+CD25+T cell plus CD4+CD25-T cell group and CD4+CD25-T cell group when effect-target ratio was10:1（t=2.199，P > 0.05）. But there was significantly difference between this two groups when effect-target ratio was 5:1 （t=5.839，P < 0.05）. CONCLUSION: CD4+CD25+T cells can be expanded by monoclonal antibody and heterogenetic antigen. Expanded CD4+CD25+T cells can obviously inhibit the proliferation of CD4+CD25-T cells compared to freshly CD4+CD25+ T cells. Its effect on CD4+CD25-T cells to EL9611 leukemic cells depend on the ratio to CD4+CD25-T cells.