冷冻切片方法及注意事项

实验技术：组织切片的制备点击次数：350 发布日期：2009-11-9 来源：长沙赢润仅供参考，谢绝转载，否则责任自负组织切片的制备二）切片方法-细节注意1 切片方法的选择光镜和免疫组化研究的切片一般为5μm，而神经组织切片为20-100μm，有利于追踪神经纤维的走行。

1.1 冰冻切片是免疫组织化学中最常用的一种切片方法，能够最大量的保存抗原、操作简便，主要适用于不稳定的抗原（如检测细胞膜的某些抗原成分），但标本来源受限。

冰冻切片时,组织中水分易形成冰晶,影响抗原定位。

冰晶小而多，对组织结构损害大。

因此可采用以下措施减少冰晶的形成：①速冻，缩短组织从-33～-43℃的时间。

具体方法是：⑴干冰-丙酮（乙醇）法：将150-200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不冒气泡时，温度可达-70℃。

用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（乙醇）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。

将组织（约1cm×0.8cm×0.5cm）t投入异戊烷内速冻30-60s后取出，置-80℃低温保存或置恒冷冰箱内以备切片；⑵液氮法：将组织块平放于软塑料瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾。

此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。

取出组织块后立即置入-80℃冰箱贮存或作恒冷切片。

②将组织置于20%-30%蔗糖溶液中1-3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。

冰冻切片一般用恒冷切片机。

切片后如不染色，必须将切片吹干，贮存于低温冰箱内，进行短暂预固定干燥后贮存于低温。

【目的】组织标本必须首先被制成组织切片，再经过染色处理，然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。

【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术，也称为H & E染色。

冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。

因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。

冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。

将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。

2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。

3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。

4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。

将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。

-20°保存备用。

注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。

液氮适用于组织化学，较安全。

缺点：组织块易发生龟裂。

2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。

但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。

故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。

3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。

这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。

冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。

下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。

一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。

2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。

3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。

4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。

5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。

6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。

7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。

二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。

液氮和刀片冷冻架是常用的设备。

2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。

刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。

3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。

切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。

4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。

在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。

5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。

6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。

冰冻切片的操作方法有哪些冰冻切片是一种常见的食物处理技术，它可以确保食材在冷冻过程中保持原始的形状和质地。

下面是关于冰冻切片的操作方法的详细说明。

1. 准备工作在进行冰冻切片之前，首先需要准备好一些必要的工具和材料。

这些包括切菜刀、切菜板、塑料袋或保鲜膜、冷冻盒或密封袋以及适量的冰块。

2. 选择适合冰冻切片的食材不是所有的食材都适合冰冻切片。

最适合冰冻切片的食材通常是那些有较高水分含量和较低油脂含量的食材，例如水果、蔬菜和肉类。

这些食材冰冻后容易切片且切片后质地会更加口感丰富。

3. 清洗和准备食材在切片前，需要彻底清洗食材以确保其卫生。

如果有必要，去掉果皮或蔬菜的外皮。

此外，根据需要将食材切成适当大小的块状，以方便在冷冻过程中进行切片。

4. 将食材放入塑料袋或密封袋中把要切片的食材放入塑料袋或密封袋中，然后将袋子密封。

确保将食材放在一层，并尽量避免重叠。

这有助于确保冷冻后食材可以更容易地进行切片。

5. 冷冻食材将装有食材的塑料袋或密封袋放入冷冻盒或冷冻室中。

在冷冻过程中，密封袋中的食材将逐渐凝固，并且保持原始的形状和质地。

通常情况下，将食材冷冻4-6小时即可。

6. 取出食材并切片冷冻时间到达后，从冰箱中取出袋子。

使用切菜刀和切菜板，将食材迅速切成薄片。

由于食材已经冷冻，这将更容易进行。

7. 存储和使用切片食材将切片食材放回密封袋中，并将其重新放入冷冻器中。

这样可以确保食材保持新鲜和安全。

在需要使用切片食材时，只需取出所需数量即可，而无需解冻整个食材。

冰冻切片是一种方便快捷的食材处理方法，可以让食材保持原始的形状和质地。

通过以上的操作方法，您可以轻松地进行冰冻切片，并在需要时使用这些切片食材来制作各种美食。

请记住，在进行冰冻切片之前，请确保食材的新鲜和卫生，并按照适当的贮存方式保存切片食材，以确保其品质和食用安全。

一、实验前准备清理实验台及仪器。

开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20 ℃*）。

准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。

二、取材解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。

（注：取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。

甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。

）三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。

2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm间。

4、调好防卷板。

制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。

切片时，以切出完整、平滑的切片为准。

切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带,可避免组织摊片过程中皱折,保证组织结构的完整及切片的美观。

注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。

常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。

B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。

（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。

）②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。

冰冻切片免疫组化染色步骤引言冰冻切片免疫组化染色是一种常用的实验方法，用于研究细胞和组织的分子表达。

它结合了冷冻样本的切片技术和免疫组织化学染色的原理，能够可视化特定分子在组织中的位置，从而帮助我们理解生物过程和疾病机制。

本文将介绍冰冻切片免疫组化染色的步骤和注意事项。

步骤一：样本制备1.收集组织样本，根据需要进行切割和处理。

2.快速冷冻组织样本，可用液氮或乙醚等方法冷冻，并保存在低温环境中。

步骤二：切片制备1.取出冷冻样本，将其置于切片机或切片冷冻器中。

2.进行组织切片，通常厚度为5-10微米，利用切片刀或者切片冷冻器的微调装置。

3.将切片收集在清洁的载玻片上，可以使用专门的载玻片来增强切片与载玻片间的附着力。

步骤三：固定和脱水1.将载玻片上的切片放入4%的中性缓冲福尔马林缓冲液中固定细胞和蛋白质。

2.固定15-30分钟后，用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将福尔马林去除。

3.将切片脱水，使用逐渐浓度的乙醇和脱水溶液，如70%乙醇、95%乙醇和100%乙醇。

步骤四：抗原修复1.对于有些抗原，如细胞核抗原，需要进行抗原修复。

这可以通过热、酸或酶消化等方法进行。

2.一种常用的抗原修复方法是将切片置于高温或高压下进行热诱导抗原修复。

步骤五：阻断和孵育1.使用蛋白质阻断剂，如牛血清蛋白、BSA等，在切片上进行孵育，以防止非特异性结合。

2.孵育时间通常为30分钟至1小时。

步骤六：一抗孵育1.加入一抗，即特异性抗体，与切片上的靶分子结合。

2.一抗浓度和孵育时间根据实验需要和抗体质量进行优化。

步骤七：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的一抗去除。

2.洗涤时间和次数根据实验要求和抗体特性进行优化。

步骤八：二抗孵育1.加入荧光标记的二抗，与一抗结合形成复合物。

2.二抗可以识别一抗的种类，常见的二抗有荧光标记的抗鼠IgG、抗兔IgG等。

步骤九：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的二抗去除。

肿瘤组织冷冻切片步骤肿瘤组织冷冻切片是一种常用的组织学技术，用于研究和诊断肿瘤。

它可以快速制备组织切片，保留细胞和组织的形态特征，并可进行进一步的染色和分析。

本文将介绍肿瘤组织冷冻切片的步骤以及相关注意事项。

步骤一：取样首先，需要从患者体内获取肿瘤组织样本。

这可以通过手术或活检等方式进行。

在手术过程中，医生会尽可能地采集到代表性的肿瘤组织，并将其放入含有生理盐水的容器中。

步骤二：固定为了保持组织的形态结构和化学成分，需要对取得的样本进行固定处理。

最常用的固定剂是10%缓冲福尔马林溶液（10% formalin），它能够使蛋白质凝固并保持其形态。

将取得的样本浸泡在足够量的10%缓冲福尔马林溶液中，通常需要固定24小时。

固定时间的长短可以根据样本的大小和类型进行调整。

步骤三：包埋在固定完成后，需要将样本进行包埋以便后续处理。

包埋是将组织置于固化剂中，使其形成坚固的块状，方便切片。

首先，将固定好的组织样本转移到70%乙醇溶液中进行脱水处理。

随后，使用清洁的毛刷将组织表面上的血液和其他污物清洗干净。

接下来，将组织样本浸泡在甘油溶液中进行透明化处理。

透明化是为了去除乙醇并使组织更易于渗透冷冻剂。

最后，将透明化处理后的组织样本放入冷冻剂（如液氮）中进行冷冻。

冷冻过程应尽量快速以避免组织损伤。

步骤四：切片在完成冷冻过程后，可以开始制备切片。

这里使用的是冷刀法（cryostat method），即利用一台设备称为“冷刀”来制备切片。

首先，将经过冷冻处理的组织块放入冷刀中，并调整刀片的角度和厚度。

通常，切片的厚度为4-6微米。

然后，启动冷刀设备，使其开始制备组织切片。

冷刀会通过低温和微震动的方式将组织块切割成薄片，并将其收集在载玻片上。

步骤五：染色和分析制备好的组织切片可以进行进一步的染色和分析。

最常用的染色方法是荧光染色和免疫组化染色。

荧光染色可以通过使用荧光标记的抗体来检测特定蛋白质或核酸序列。

这种方法可以提供高度特异性和灵敏度，并可用于观察细胞内分子的定位和相互作用。

冰冻切片注意事项冰冻切片是一种常用的实验技术，在科学研究、医学诊断和药物开发中起着关键作用。

这种技术可以将组织样本以无损坏的方式保存，并用于后续的显微镜观察和分析。

然而，要获得高质量的冰冻切片需要注意一些重要的事项。

以下是一些关键的注意事项。

1.选择合适的切片仪器和材料：要获得最佳的切片效果，应选择高质量的切片仪器和材料。

切片仪器应具备高速度和高精度的切割能力，并且能够保持适宜的温度和湿度。

切片材料应选择具有较好的冷冻保护性能和切割性能的材料。

2.适当的标本处理：在进行冰冻切片前，标本应进行适当的处理。

首先，标本应被固定以保持其形态和结构的稳定性。

常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和生理盐水固定等。

其次，在进行冷冻切片前，标本应进行充分的去水处理，以使切片的质量更好。

3.适宜的切片温度：切片温度是决定切片质量的重要因素。

一般情况下，切片温度应尽量低，以减小标本的结构变形和切割的损伤。

通常，切片温度应控制在-20℃至-30℃之间。

4.适当的切片速度：切片速度是决定切片厚度和切片质量的关键因素。

切片速度过快会导致切片厚度不均匀，切片速度过慢则容易引起标本的变形和损伤。

一般情况下，切片速度应适中，并且应根据不同的标本类型进行调整。

5.切片后的处理：切片后，切片应立即进行处理，以防止切片的结构变形和氧化。

处理方法包括立即放入冷冻保存或石蜡包埋等。

6.切片的储存和保存：冰冻切片在使用前需要进行储存和保存。

一般情况下，切片应保存在低温环境中，以保持其形态和结构的稳定性。

冷冻切片的保存时间一般较短，通常为几天至几周。

7.切片质量的评估：为了确保冰冻切片的质量，应对切片进行适当的评估。

评估的方法包括显微镜观察和组织学染色等。

通过评估，可以发现切片中存在的问题，并采取相应的措施进行改进。

总之，冰冻切片技术在科学研究和医学诊断中具有重要的应用价值。

遵循上述的注意事项，可以获得高质量的冰冻切片，从而提高实验和诊断的准确性和可靠性。

冷冻切片机使用注意事项
冷冻切片机是一种常见的实验室设备，主要用于制备组织切片。

正确使用冷冻切片机不仅能够提高切片质量，还能延长设备的使用寿命。

下面将介绍一些使用冷冻切片机的注意事项。

使用冷冻切片机前，必须先进行设备的准备工作。

正确操作冷冻切片机也是非常重要的。

首先，将待切割的组织样本冷冻至适当的温度，以保持样本的完整性和切片质量。

然后，将冻结的样本固定在切片机的刀座上，并将切片刀片调整到合适的位置。

在切片过程中，要保持手部稳定，避免晃动或用力过猛，以防止切片时产生的抖动或切割不平整。

同时，要注意切片速度的控制，过快或过慢都会影响切片质量。

第三，切片后的样本需要进行适当的处理。

切片完成后，将切好的样本放置在适当的载玻片上，并用适量的生理盐水或缓冲液进行浸泡。

然后，可以根据需要进行染色或其他后续处理步骤。

在处理过程中，要避免样本受到外界环境的污染或损坏。

使用完冷冻切片机后，要进行及时的清洁和维护。

首先，将切片刀片和刀座取下，用生理盐水或缓冲液清洗干净。

同时，要注意清洗过程中的安全，避免刀片或刀座造成伤害。

然后，将冰盒和其他部件进行清洗和消毒，保持设备的卫生和无菌性。

通过以上的注意事项，我们可以正确使用冷冻切片机，提高切片质量，并保护设备的使用寿命。

同时，在使用过程中要注意安全，避免发生意外事故。

希望本文对大家使用冷冻切片机有所帮助。

冰冻切片机使用说明一、前言二、产品组成配件包（切片刀、导向条、收纳盒等）三、使用方法1.准备工作-确认工作环境干燥、通风，并确保有充足的操作空间。

-检查电源电压是否符合器具要求，是否接地良好。

-将主机放置在稳定的平坦台面上，确保主机处于水平状态。

-打开器具箱，将配件包中的切片刀、导向条等取出。

2.安装-将主机的钢带插槽对准配件包中的导向条，轻轻将导向条插入主机中。

-确认导向条安装牢固，无松动。

3.切片准备-将待切片的食材洗净、去皮，并将其切割成适合器具进料口的大小。

-将切片刀放置在配件包中的收纳盒中，提前冷冻至-18℃。

-待切割食材入冷冻刀片之前，先将其放入冰箱冷冻室进行冷冻，待其表面结冰。

4.开始切割-先将主机连接电源，并将电源开关打开。

-将待切割的食材缓缓放入刀片之间，使用推料器帮助推送食材。

-如遇到切片时食材粘附在刀片上，可停止机器运行，清理刀片，然后继续操作。

-使用完毕后，及时停止机器运行，并将电源开关关闭。

5.清洁和维护-在清洁和维护之前，务必断开电源，并等待切片刀完全停止转动。

-用湿布擦拭机器外壳和刀片，不要使用有机溶剂或者腐蚀性清洁剂。

-定期检查导向条的稳定性和切片刀的锋利程度，如有问题及时更换或维修。

-将切片刀放回配件包中的收纳盒中，保证器具的整洁。

四、注意事项-请勿用手直接接触切片刀，以免造成伤害。

-在使用过程中，注意保持适当的距离，避免刀片和身体接触。

-请勿将机器放在不稳定的位置，以免发生意外。

-在清理和维护过程中，务必断开电源，避免发生电击。

-请勿将机器用于除食品外的其他物品切割，以免损坏机器和产生危险。

-请勿将机器用作其他目的，以免发生意外。

五、故障排除故障：刀片无法转动解决办法：断开电源，检查机器内是否有食材卡住，清理食材，并重新启动。

故障：刀片转速慢解决办法：断开电源，检查机器内是否有异物卡住切片刀，清理异物，并重新启动。

故障：切片后食材较粗解决办法：查看切片刀是否磨损，如磨损应及时更换。