083016-冰冻切片注意事项

冰冻切片机使用步骤1、按电源开关I/O侧的I（开）侧，接通仪器电源。

待仪器进行短暂时间的初始化（屏幕上将显示一个沙漏标志）后，请检查上方显示屏是否亮起，是否显示语言选择菜单。

2、请检查速冻台、冷冻箱及其切片厚度是否为实验所需要的相关数据，通常速冻台为-35℃，冰冻箱为-20℃，切片厚度为6µm。

如若不是，在屏幕上点击或调节到需要的数据。

调节好后，等待机器降到要修改的事项，用3、将手轮手柄旋转到12点钟的位置，然后进行制动。

将样品利用冰冻胶固定在样本托上，并放于速冻台上降温。

10min后，将带样品的样本托从速冻台取出，然后用样本夹钳将其固定在切片机头上。

4、取下护刀架，如果样本运行指示器上显示有足够“剩余移动距离”，那么，您可以使用仪器左侧控制面板上的样本推进按键，使样本向刀架方向前进。

另外您也可以采用，将手轮旋转到3点钟，并且将其锁定在该位置。

将刀架左下方（黑色）的操控杆拉向你，然后小心地将刀架底座沿着滑槽向远离你的方向（前方）滑动，直至刀片快要接触到样本。

将操控杆沿着远离你的方向推动，将刀架锁定在适当位置上。

如果需要，可使用控制旋钮将样本精确定位在靠近刀架的位置。

每旋转控制钮一个刻度，可将样本移动8µm。

5、打开手轮柄锁，顺时针（朝前）均力旋转摇手柄轮一圈，即出一张相应厚度的切片。

待切到样品位置时，放下防卷板再次切片。

切好后，请将手轮锁定在6点或12点位置，使样本头移动到最低或最高位置便于取出切片，掀起玻璃防卷板用载玻片上靠，切片立即附着在载玻片上。

玻璃防卷板可以用螺丝左右调节平行。

如刀上或防卷板上粘有脏东西，可用冷冻台内的毛笔刷干净。

6、当把最后一个组织切片取走后，请放好刀片护刀架，然后握住样本托的手柄将其从夹钳处取出。

锁定手轮，使用冰冻台内的刷子扫除多余组织碎片，将其清扫到后面的废物铲上，并清理出冰冻箱体。

7、关闭仪器。

按开关的I/O侧的O（关）侧，即可把仪器的电源关闭。

冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。

因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。

冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。

将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。

2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。

3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。

4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。

将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。

-20°保存备用。

注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。

液氮适用于组织化学，较安全。

缺点：组织块易发生龟裂。

2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。

但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。

故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。

3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。

这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。

冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。

下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。

一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。

2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。

3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。

4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。

5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。

6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。

7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。

二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。

液氮和刀片冷冻架是常用的设备。

2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。

刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。

3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。

切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。

4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。

在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。

5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。

6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。

划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~冰冻切片定义冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在冰冻切片机上进行切片的一种方法。

冰冻切片特点：操作简单，耗时短，对组织抗原损伤小，对环境污染小。

冰冻切片流程（10-15min内即可完成）：取材→包埋（<30s）→冷冻（1-3min）→切片（2-5min）→固定（10-15s）→染色（4-5min）→封片（<1min）1、取材（1）新鲜组织取材不能遇水，如果组织自身带水较多，可用滤纸吸干（目的是为了防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生）；（2）取材的工具也要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域；（3）取材组织大小要合适，厚度尽量在3mm，最多不要超过5mm（组织过大切片时阻力加大，易产生刀痕和褶皱）。

2、包埋（1）包埋机一般使用OTC或普通胶水，OTC包埋剂质感细腻，对刀片损伤小，有利于切片；（2）包埋时要将包埋剂涂抹均匀，确定好组织的包埋方向，例如管腔、皮肤、囊壁等要竖立包埋；（3）包埋体积较小的组织，可以先挤压少许的包埋剂形成一个平台，再放入小组织进行包埋。

3、冰冻温度与时间（1）冰冻温度与时间是冰冻切片的关键步骤，要根据组织的类型和大小来调节；（2）冰冻温度过低，会造成组织过硬，切片碎裂；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片；（3）不同组织冰冻切片适宜温度：4、切片（1）在组织和包埋剂冷冻到发白后即可开始切片；（2）切片时右手摇动手轮要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度控制在5um左右，左手持毛笔在切片形成时轻按住组织边缘，使其不发生卷曲；（3）将切片展平粘贴在干净的载玻片上，应立即放入固定液中固定，如果固定不及时，会发生细胞退变，切片中细胞核模糊不清呈雾状。

5、染色流程：固定（95%乙醇）→苏木素→水洗→盐酸乙醇分化（0.5~1%）→水洗→温水返蓝→伊红→梯度酒精→二甲苯透明→封片6、注意事项（1）纤维及结缔丰富的组织，应顺着纤维纹理切片，否则容易崩裂；（2）较硬较脆的组织应尽量切的薄一些；（3）选择合适的固定液（95%乙醇、甲醛、甲醇、丙酮），且固定液要保持新鲜，及时更换固定液；（4）组织尽量快速冷冻，组织间隙的自由水易冷冻凝结形成冰晶，组织冷冻越缓慢，冰晶形成的数量越多，体积越大。

冰冻切片时的注意事项1、防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。

有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。

因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

2、多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。

3、放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。

4、组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。

临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。

如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。

这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也渗入组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。

5、当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。

另者，调高冰冻点。

6、用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。

因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。

如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。

7、冰冻切片的快速染色法冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。

以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。

根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。

冰冻切片注意事项冰冻切片是一种常用的实验技术，在科学研究、医学诊断和药物开发中起着关键作用。

这种技术可以将组织样本以无损坏的方式保存，并用于后续的显微镜观察和分析。

然而，要获得高质量的冰冻切片需要注意一些重要的事项。

以下是一些关键的注意事项。

1.选择合适的切片仪器和材料：要获得最佳的切片效果，应选择高质量的切片仪器和材料。

切片仪器应具备高速度和高精度的切割能力，并且能够保持适宜的温度和湿度。

切片材料应选择具有较好的冷冻保护性能和切割性能的材料。

2.适当的标本处理：在进行冰冻切片前，标本应进行适当的处理。

首先，标本应被固定以保持其形态和结构的稳定性。

常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和生理盐水固定等。

其次，在进行冷冻切片前，标本应进行充分的去水处理，以使切片的质量更好。

3.适宜的切片温度：切片温度是决定切片质量的重要因素。

一般情况下，切片温度应尽量低，以减小标本的结构变形和切割的损伤。

通常，切片温度应控制在-20℃至-30℃之间。

4.适当的切片速度：切片速度是决定切片厚度和切片质量的关键因素。

切片速度过快会导致切片厚度不均匀，切片速度过慢则容易引起标本的变形和损伤。

一般情况下，切片速度应适中，并且应根据不同的标本类型进行调整。

5.切片后的处理：切片后，切片应立即进行处理，以防止切片的结构变形和氧化。

处理方法包括立即放入冷冻保存或石蜡包埋等。

6.切片的储存和保存：冰冻切片在使用前需要进行储存和保存。

一般情况下，切片应保存在低温环境中，以保持其形态和结构的稳定性。

冷冻切片的保存时间一般较短，通常为几天至几周。

7.切片质量的评估：为了确保冰冻切片的质量，应对切片进行适当的评估。

评估的方法包括显微镜观察和组织学染色等。

通过评估，可以发现切片中存在的问题，并采取相应的措施进行改进。

总之，冰冻切片技术在科学研究和医学诊断中具有重要的应用价值。

遵循上述的注意事项，可以获得高质量的冰冻切片，从而提高实验和诊断的准确性和可靠性。

冰冻切片机的使用指南及注意事项引言：冰冻切片机是一种常见的食品处理设备，广泛应用于餐饮业、食品加工厂和家庭厨房等场所。

它能够快速将食材切成均匀的薄片，提高烹饪效率和食品的美观度。

然而，使用冰冻切片机时需谨慎操作，以确保安全和提高工作效率。

本文将为您介绍冰冻切片机的使用指南及注意事项，以帮助您正确使用和保养该设备。

一、冰冻切片机的使用指南1. 准备工作在使用冰冻切片机之前，需要做好以下准备工作：- 清洁切片机：确保切片机表面和刀片都是干净的。

使用温水和少量洗洁精清洗，然后彻底冲洗干净，并用干净的布擦干。

- 准备食材：根据需要，选择合适的食材进行切割。

确保食材新鲜、干燥且无破损。

- 调整切片机设置：根据需要调整切片机的厚度和速度设置。

注意在操作过程中，确保切片厚度合适，以免造成浪费或食材过于薄片，影响食品质量。

2. 正确使用冰冻切片机下面是使用冰冻切片机的正确步骤：- 将食材放置在切片机上的进料口位置，并通过压力杆将其固定。

- 开启切片机的电源开关，并设置合适的切片机厚度和速度。

- 将手握在固定手柄上，并将切片机的刀片沿着食材轻轻移动，实现切片的过程。

- 使用完成后，关闭切片机电源开关，并等待刀片停止旋转后再进行下一步操作。

3. 清洁与维护冰冻切片机使用后需要进行清洁和维护，以延长其使用寿命和确保卫生。

- 关闭冰冻切片机电源，并拔掉电源插头，确保刀片停止旋转。

- 使用温水和少量洗洁精清洗切片机的外部表面和刀片。

避免使用金属刷或刮板，以免损坏切片机表面。

- 清洁完成后，用干净的布擦拭干燥。

- 定期检查和保养冰冻切片机的各个零部件，确保其正常运行。

如发现有磨损或松动的部件，及时修复或更换。

二、冰冻切片机的注意事项1. 注意安全使用冰冻切片机时，务必注意安全，避免发生意外伤害。

- 确保刀片停止旋转后再进行任何操作，以免被刀片切伤。

- 使用切片机时，避免将手指或其他物体靠近刀片，以免发生意外。

- 在清洁和维护切片机时，务必切断电源并拔掉电源插头。

冷冻切片方法及注意事项冷冻切片是一种常用的组织学研究方法，它能够帮助研究人员观察和分析生物组织的结构和功能。

下面将详细介绍冷冻切片的方法及注意事项。

1.组织采集：首先需要选择适当的生物组织样本，可通过手术切取、尸检或动物献体等方式获得。

2.组织处理：取出组织样本后，应立即进行处理，以防止样本脱水和坏死。

可将组织放入理化盐水或生理盐水中，避免干燥、坍塌或变形。

3.固定组织：使用适当的固定剂对组织进行固定，以保持组织结构的完整性。

常用的固定剂有福尔马林、戊二醛、乙醛等。

固定时间应根据组织大小和厚度进行调节，较小的组织可以固定2-4小时，而较大的组织可能需要24小时以上。

4.预冷冻：固定后的组织应在冷冻前进行预冷冻处理，以提高冷冻切片的质量。

预冷冻的方法包括放入冷冻剂中（如液氮、干冰等）或将其放入冰盒中进行冷藏，使组织完全冷却。

5.冷冻切片：使用冷冻切片机将预冷冻的组织切成薄片。

为了获得更好的切片结果，刀片的角度和厚度需要进行适当的调整。

同时，切制时需要快速而轻柔地移动切片机，以防止组织被拉伸或损坏。

6.切片收集：将切片收集在玻片上，通常使用细长形的切片夹或切片板来收集切片。

确保切片不受损并保持平整。

7.切片保存：将切片放入适当的保存溶液中，如PBS（磷酸盐缓冲液）或甘油等，以防止切片干燥和变形。

可以根据需要选择冷藏或冷冻保存。

冷冻切片需要注意以下事项：1.样本质量：选择新鲜、完整的组织样本，避免坏死、变性或损伤的组织。

2.固定剂选择：选择适当的固定剂进行组织固定，以保持组织结构的完整性。

3.冷冻速度：组织应尽快冷却，以避免组织脱水或破坏。

冷冻速度过慢可能会导致晶体形成，影响切片质量。

4.切片机状态：保持切片机的良好状态，定期检查刀片的锋利度和调整角度，以确保切片的质量。

5.切片技巧：需要轻柔、均匀地切片，避免组织被拉伸或扭曲。

同时，切片过程中需要快速操作，以减少冰晶对组织的破坏。

6.切片收集：收集切片时要避免切片叠加或悬浮，以免影响切片的观察和分析。

冰冻切片机的使用指南及注意事项一、使用指南1.准备工作在使用冰冻切片机之前，需要进行一些准备工作。

首先，确保设备干净整洁，无杂物。

然后，检查冰箱和切片机的运行状态，确保其正常工作。

2.切片样本准备将生物组织样本置于切片盒中，并用注射器将组织浸泡在切片液中。

切片液可以是生理盐水、甘油或带有冰冻保存剂的缓冲液。

3.冰冻切片机设置根据需要调节冰冻切片机的温度和切片厚度。

通常，切片温度为-18°C至-20°C，切片厚度为5μm至20μm。

根据不同的样本类型和研究需求，可以进行相应的调整。

4.切片操作将切片盒放入切片机的切片台上，并将切片刀置于切片盒的顶部。

轻轻按下切片刀，开始切片操作。

切割的速度应适中，避免过快或过缓。

同时，可以根据需要调整切片盒和刀片的位置，以获得更好的切片效果。

5.切片收集切片完成后，定期检查切片质量。

可以用显微镜观察切片的清晰度和厚度，并进行调整。

一般来说，切片应具有适度的厚度和清晰的细胞结构，以便于后续的染色和分析。

二、注意事项1.安全操作在使用冰冻切片机时，应注意安全操作。

避免在操作过程中将手指或其他部位靠近切片刀，以防止意外伤害。

切片机工作时产生的低温也可能对皮肤造成损伤，因此应注意保护。

2.设备维护定期检查和维护冰冻切片机的状态，以确保其正常工作。

例如，清理切片机的内部和切片盒，检查切片刀的磨损情况，并及时更换。

3.样本处理在切片样本前，应对生物组织进行适当的处理。

例如，定期更换切片液，以防止细菌污染。

另外，如有需要，可以对样本进行染色和固定处理，以增加切片的清晰度和对比度。

4.隔离措施为避免交叉污染，应在使用冰冻切片机时采取隔离措施。

例如，使用专用的手套、口罩和实验室外套。

同时，定期消毒切片机和切片区域，以防止病菌的传播和污染。

5.数据记录总结：使用冰冻切片机需要一定的操作技巧和经验，同时还需要注意安全操作和设备维护。

正确的使用和维护冰冻切片机将能够提高切片的质量和效率，对于研究和诊断工作具有重要意义。