ELISA试剂盒报价表附件一：猪瘟病毒抗体检测试剂盒技术参数（一）试剂数量用猪瘟病毒抗原包被的ELISA反映板5块。
（二）操作步骤在利历时，所有的试剂盒组分都必需恢复到室温18～25℃。
利用前应将各组分放置于室温至少一小时。
1.别离将50μl样品稀释液加入每一个检测孔和对照孔中。
2.别离将50μl的阳性对照和阴性对照加入相应的对照孔中，注意不同对照的吸头要改换。
3.别离将50μl的被检样品加入剩下的检测孔中，注意不同检样的吸头要分开，以防污染。
4.轻弹微量反映板或用振荡器振荡，将反映板中的溶液混匀。
5.将微量反映板用封条封锁或于湿箱中（18～25℃）孵育2小时，也能够将微量反映板用封条封锁或于湿箱中孵育留宿。
6.吸出反映孔中的液体，并用稀释好的洗涤液洗涤3次，注意每次洗涤时都要将洗涤液加满反映孔，弃去反映孔中的洗涤液并拍干反映板。
也能够用洗板机洗涤3次，每一个反映孔应加300μl左右的洗涤液。
注意洗板时要警惕，以避免样本之间的交叉污染。
7.别离将100μl的抗-CSFV酶标二抗(即取即用)加入反映孔中，用封条封锁反映板并于室温下或湿箱中孵育30分钟。
8.洗板（见6）后，别离将100μl的底物溶液加如反映孔中，并于黑暗的、室温条件下放置10分钟。
加完第一孔后即可计时。
9.在每一个反映孔中加入100μl的终止液终止反映。
注意要按加酶标二抗的顺序加终止液。
10.在450nm处测定样本和对照的吸光度值，也可用双波长（450nm和620nm）测定样本和对照的吸光度值。
空气调零。
11.计算样本和对照的平均吸光度值。
（三）计算计算被检样本的平均值OD450（＝ODTEST）、阳性对照的平均值（＝ODPOS）、阴性对照的平均值（＝ODNEG）。
依照以下公式计算被检样本和阳性对照的阻断率；（阳性对照阻断率的计算方式大体一致）ODNEG－ODTEST阻断率＝————————X 100ODNEG（四）实验有效性阴性对照的平均OD450应大于。
阳性对照的阻断率应大于50％。
（五）结果判定若是被检样本的阻断率大于或等于40％，该检样就能够够被判为阳性（有CSFV抗体存在）。
若是被检样本的阻断率小于或等于30％，该检样就能够够被判为阴性（无抗CSFV抗体存在）。
若是被检样本的阻断率在30～40％之间，就应过些天再对该动物进行重测。
附件二、猪伪狂犬gB抗体检测试剂盒技术参数（一）试剂数量PRV抗原包被的酶标板6块（二）操作步骤注意：所有试剂在利用前一概恢复至室温（20~25℃）。
试剂应该旋转或倒置混匀。
1.掏出PRV抗原包被板，在记录纸（表）上记录样品位置。
2.加100μl 2倍稀释的阴性对照血清至A一、B1孔。
3.加100μl 2倍稀释的阳性对照血清至C一、D1孔。
4.加100μl处置好样品至相应的孔。
5.全数的单一血清样本和全数的混合血清样本的测试在室温（20~25℃）孵育1小时或2~7℃留宿孵育（16-20小时）；其中从滤纸上取得的洗出液没必要稀释，每孔100ul，要在2~7℃留宿孵育（16-20小时）。
6.每孔用大约300μl稀释好的洗液洗涤微孔3~5次。
每次洗涤后，甩掉孔内的液体。
在甩掉液体后，加入酶标抗体前，幸免孔壁变干。
在最后一次甩干后，在吸水材料上轻扣板，完全去掉剩余的液体。
7.每孔加入100μl抗PRV gB酶标抗体。
8.室温（20~25℃）孵育20分钟。
9.重复步骤6。
10.每孔加100μl TMB底物溶液。
11.室温（20~25℃）孵育15分钟。
12.每孔加入50μl终止液终止反映。
13.以空气作为空白对照对酶标仪进行空白设定。
14.在650nm，A（650）测量和记录样品和所有对照的吸光值。
15.计算结果。
（三）实验有效性要使实验有效，必需知足以下条件：阴性对照平均值减去阳性对照平均值，其差必需大于等于；如测定结果无效，第一应疑心是操作技术，并在认真阅读产品说明后从头检测。
针对抗原成份的抗体的存在与否，通过计算每一个样品的S/N值来决定。
（四）结果判定关于血清和全血样本：A快速模式：（1小时孵育/室温：20~25℃）1.假设S/N比值小于或等于，样品为PRV抗体阳性。
2.假设S/N比值小于或等于但大于，该样品必需被重测。
若是结果相同，那么过一段时刻后从头从动物取样进行检测。
3.假设S/N比值大于，样品那么为PRV抗体阴性。
B留宿模式：（16-20小时/2~7℃）N比值小于或等于，样品为PRV抗体阳性。
2.假设S/N比值小于或等于但大于，该样品必需被重测。
若是结果相同，那么过一段时刻后从头从动物取样进行检测。
3.假设S/N比值大于，样品那么为PRV抗体阴性。
备注：通过重复确认所有阳性样品。
滤纸片测试：A．留宿模式：（16-20小时/2~7℃）1.假设S/N比值小于或等于，样品为PRV抗体阳性。
2.假设S/N比值大于，样品那么为PRV抗体阴性。
注意：推荐对所有的阳性样本做进一步双份确认。
（五）计算方式1.阴性对照平均值的计算（NC）NC=[A1A(650)+B1A(650)]/22阳性对照平均值的计算（PC）PC=[C1A(650)+D1A(650)]/23.样品/阴性对照比率的计算（S/N）S/N=样本A(650)/NC附件三、猪瘟病毒抗原检测试剂盒技术参数（一）试剂数量Ems单克隆抗体包被的微量反映板2块。
（二）操作步骤在利用之前，所有的试剂盒组分都必需恢复到室温（18－25℃）。
1.掏出用抗体包被的微量反映板，并在纪录表上标记好每一个样本的位置。
2.在每一个反映孔中加入50μl的检测抗体。
3.在阴性对照的双孔中各加50μl阴性对照。
4.在阳性对照的双孔中各加50μl阳性对照。
5.在剩下的反映孔中别离加入50μl被检样品。
关于不同的被检样品要改换吸头。
6.轻弹微量反映板或用振荡器振荡，将反映板中的溶液混匀。
7.在37℃的条件下孵育2小时，也可在2－8℃的条件下孵育留宿（12-18小时于冰箱中）。
在孵育进程中应将微量反映板封锁或在湿盒内孵育，以防反映孔中的液体蒸发。
8.吸出反映孔中的液体物质并弃入废液缸中。
9.每一个反映孔加入约300μl的洗涤液进行洗涤，洗涤五次。
每次洗涤后吸出所有孔中的液体。
在洗涤时和在加辣根过氧化物酶标记物之前要避免反映板显现干燥现象。
在最后一次洗涤完后，将反映板在吸水性强的物质上拍干。
10.在每一个反映孔中加入100μl辣根过氧化物酶标记物。
11.在室温下（18－25℃）孵育30分钟。
12.重复步骤8和9。
13.在每一个反映孔中加入100μlTMB底物。
14.在室温（18－25℃）条件下于黑暗处孵育10分钟。
在加完第一个孔后开始计时。
15.在每一个反映孔中加入100μl的终止液终止反映。
在加终止液时要按第13步的顺序进行滴加。
16.将酶标仪在空气中调零。
17.于450nm单波长或450nm和650nm双波测定样本和对照的吸光值。
18.计算结果。
（三）结果阳性对照OD的平均值（PC x）与阴性对照OD的平均值（NC x）之差（P-N）必需大于或等于，另外阴性对照OD的平均值（NC x）必需小于或等于 OD。
（四）计算被检样品的计算公式：S-N=样品A450-NC x A450（五）结果判定1.被检样品的S-N值等于或小于的，判为阴性。
2.被检样品的S-N值大于，小于或等于，判为可疑。
3.被检样品的S-N值大于的，判为阳性，需采纳加倍特异的猪瘟检测方式确认。
附件四、猪蓝耳病抗体检测试剂盒技术参数（一）包装规格：5板/盒。
（二）操作步骤所有试剂均应在室温下回温平稳30分钟。
孵育的时刻和说明书所要求的不能相差10%。
建议利用一次性的容器进行样品处置（样品稀释液、酶标记二抗、底物溶解液、终止液等）。
1.样品和对照血清的排布揭去反映板上的粘贴膜，添加50ul 的对照血清： 2.添加阳性对照50ul （Vial Nº5）到A 一、B1 3.添加阴性对照50ul （Vial Nº6）到C 一、D14.血清样品用样品稀释液（Vial Nº1）进行200倍稀释。
-添加5ul 的已稀释20倍的样品于待检样品孔内。
-添加45ul 样品稀释液于待稀释的孔内。
5.轻轻震荡均匀后贴上新的封板膜置于37℃±2℃孵育1小时。
6.洗板去膜，用配制好的洗液每孔约300ul 洗3遍，甩掉液体后在吸水纸上使劲拍干，以去除孔内的残留液体，或用自动洗板机以每孔300ul 洗3遍。
7.添加酶标二抗在每一个孔中添加50ul 酶标二抗（Vial Nº2）。
震荡均匀后用新的封板膜封板，在37℃±2℃孵育1小时。
8.重复步骤6 9．显色每孔添加底物溶解液50ul （Vial Nº3），轻摇板2秒。
将平板放在黑暗条件下在21±4℃ 作用10分钟。
不用盖封板膜。
每孔添加50ul （Vial Nº6）终止液，添加终止液的顺序应与添加其他样品的顺序一致，轻敲平板2秒以混匀。
10．读数用软布将板底部的尘埃等杂物擦拭干净后进行读数。
用450nm 波长或双重450-620nm 波长的滤光片进行读数。
30分钟内读数均有效。
（三）计算计算平均阴性值，平均阳性值，计算样品的IRPC 值。
100 x) OD OD () OD (OD IRPC 450 450450450⎥⎦⎤⎢⎣⎡--=阴性对照平均值阳性对照平均值阴性对照平均值样品（四）实验的有效性阳性对照的平均值OD450 > ，而且阳性对照平均值/阴性对照平均值 > 。
若是实验不成立，认真查看说明书后再重复实验。
（五）结果判定：IRPC小于或等于为阴性，IRPC大于为阳性。
附件五、猪伪狂犬gE抗体检测试剂盒(一)包装规格：5板/盒（二）检测步骤1.试剂的预备：所有的试剂在利用前，必需回温到室温。
阳性对照、阴性对照、酶标二抗、样品稀释液、底物和终止液可直接利用。
2样本的预备阳性对照，阴性对照别离做2孔。
-别离在A1和B1孔内加入50ul阴性对照-别离在C1和D1孔内加入50ul阳性对照。
-在剩余孔内加入50ul样品-然后再所加对照和样品孔内均加入50ul样品稀释液盖上膜，在37℃作用60分钟。
3.洗板进程去膜，用300ul（1 X ）的洗液洗4遍，并在吸水纸上将平板弄干，最后一次将板孔内液体尽可能拍干。
4.加入酶标二抗在每一个孔中加入100ul 酶标抗体，盖上膜在37℃反映30分钟。
5．洗板进程去膜，用300ul（1 X ）的洗液洗4遍，并在吸水纸上将平板弄干，最后一次将板孔内液体尽可能拍干。
6．加入底物在每一个孔中加入100ul的底物。
将包被板放在黑暗中在18-25℃作用15分钟。
7.加入终止液8.加入100ul的终止液，轻敲包被板混匀。
