岛津分子荧光光谱仪RF-5301PC氙灯安装及性能测试(整理的说明书)
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岛津RF-540型荧光分光光度计操作规程
岛津RF-540型荧光分光光度计操作规程1 开机1.1 打开稳压电源。
1.2 打开氙灯电源，仪器预热20min。
1.3 打开计算机主机、显示器及打印机。
1.4 双击【RF-53 XPC】图标。
1.5 仪器自检，自检通过后进入以下操作（如果先打开工作站后打开仪器使其不能自检，点击【Configure】，点击【Instrument】，弹出【Instrument Parameters】对话框，选择【Fluorometer】项，点击【On】，仪器会重新开始自检）。
2 测定样品数据2.1 设定参数单击【Acquire Mode】，单击【Quantitative】进入【Quantitative Parameters】对话框，设定激发波长、发射波长、狭缝宽度、灵敏度等参数，单击【OK】。
2.2 样品测定2.2.1 将装有试剂空白溶液的石英池放入样品室的池架上，单击【Auto Zero】图标。
2.2.2 将装有供试品溶液的石英池放入样品室的池架上，单击【Read】图标，收集数据。
2.3 数据打印单击【Manipulate】→单击【Data Print】，在弹出的对话框上单击【Printer】，进行数据打印。
3 测定样品光谱3.1 设定光谱参数3.1.1 激发光谱在【Spectrum Type】项下选择【Excitation】，然后在【EM Wavelength】项下设置发射波长、在【EX Wavelength】项下设置激发光谱的扫描范围、扫描速度，狭缝宽度、灵敏度等参数。
3.1.2 发射光谱在【Spectrum Type】项下选择【Emission】，然后在【EX Wavelength】项下设置发射波长，在【EM Wavelength】项下设置激发光谱的扫描范围、扫描速度、狭缝宽度、灵敏度等。
3.2 样品测定3.2.1 将装有试剂空白溶液的石英池放入样品室的池架上，单击【Auto Zero】图标。
3.2.2 将装有供试品溶液的石英池放入样品室的池架上，单击【Start】图标，进行光谱扫描。
RF-5301PC荧光光谱仪使用说明
RF-5301PC 荧光光谱仪使用说明
1.使用仪器之前先开机预热半小时，测样品之前要先打开氙灯；
2.测试过程中，荧光池用擦镜纸擦拭，液体一般装满荧光池的3/4，取用荧光
池接触菱角即可，注意不能接触其光面；
3.测固体荧光过程与液体荧光类似，测试之前要把支架换成固体支架；
4.测完之后务必要关闭氙灯和仪器，减少仪器的寿命损耗；
5.测完务必清洗好荧光池，溶剂一般为无水乙醇或丙酮，或者使用四氢呋喃、
氯仿等能溶解测试样品的溶剂，切不可使用碱性溶剂浸泡，以免损坏荧光池。
6.使用完后，所用配件及时放回储存处，并保持仪器周边整洁。
氙灯使用说明书
氙灯使用说明书一、概述气候环境对有机物料老化，颜料退色及金属的腐蚀有较大的影响，因此老化试验愈来愈受到校胶、塑料、油漆、石油、化工、汽车、纺织等部门的重视。
气候环境的因素很多，如太阳光照、温度、湿度、雨淋、凝露、有害气体、粉尘等。
仅仅通过某个单一环境因素的试验来评定材料的性能是不够全面的。
往往要通过多因素的组合试验，尽可能模拟自然条件方能做出较为正确的评定。
虽然室外暴露试验具有较好的真实性，但由于不同地区、不同季节气候条件各不相同，因此试验的重复性较差。
同时，随着样品材料质量的不断提高，暴露试验的周期亦越来越长，不能满足科研和生产不断发展的需要。
耐气候试验箱：具有模拟太阳光、淋雨、温度、风等五个环境因素。
各个因素可以独立调整，既可同时进行五个因素的组合试验，亦可进行单个因素的试验，因结构相对独立，进行单因素的试验尤为方便。
二、技术指标:室温加10C〜80C,:0〜60分可调: 6KW ±10%样架至氙灯距离: 350mm: 3KW:950 X 950 X 850 （W X D X H ）：360°旋转，转速1r.p.m.:三相五线制380V 50Hz:0。
〜35C:小于85%R • H:清洁的自来水，供水压力0.08〜0.2Mpa 周围环境应无强烈的振动及腐蚀性气体介质。
三、结构原理试验箱箱体外壳采用不锈钢板、内壳采用耐蚀不锈钢板制作。
试验箱由主体部分和电控部分组成。
主体下部装有氙灯冷却水箱、喷淋水箱、样架冷却水箱、减速机的油水分离器、调压阀、饱和器、电磁阀等等。
氙灯冷却水箱盛有供冷却氙灯用的蒸馏水。
由泵送入氙灯。
冷却系统中设有水压控制器，在确保有冷却水时氙灯才能启动，否则自动切断电源。
氙灯便自动熄灭。
喷淋水由自来水供给，能按设定的喷淋时间和喷淋周期自动启动，（根据金钟默勒说明书设定好淋雨时间）使试样受到周期性淋雨的目的。
由于样架与旋转轴相连，故样架可环绕氙灯作慢速旋转。
主体工作室内装有氙灯、喷淋管和样品架，可对试样进行模拟太阳光、淋雨试验，左工作室后面，设有风道、鼓风机、加热器，用于调节工作室的温度，并使工作室内温度均匀。
荧光光谱仪的使用
• 2次或3次光
– 发生在激发波长的2倍或3倍波长处
瑞利散射
颗粒的大小小于入射光的波长. 光通过样品后频率不变.由于弹性碰撞不存在能量 的转移.光线只是简单地改变方向，波长不变. 粉末、悬浮液等样品.
拉曼散射
样品吸收和发射光并伴随有能量转移的产生. 光通过样品后光的波长、频率发生了改变.
与入射光相比发射光的频率可能更高或者更低.
狭逢10nm拉曼峰S/N＞600
仪器性能
利用先进的直流式长驱动机构，可及为迅速的得到理想的 光谱 可进行高速光谱监控，最高扫描速度５５００ｎｍ／ｍｉｎ 波长范围：220-900nm及0次 狭逢：1.5、3、5、10、15、20nm6档及激发6nm半高 波长精度：± 1.5nm 波长扫描速度Survey,Super,VeryFast,Medium,Slow,Very Slow 的7段转换；Survey,约5,500nm/min.Super约3,000nm/min.
其它分子碰撞失活的机率下降，荧光量子效率提高。
如荧光素（大）与酚酞（=0）；芴（=1）与联苯（ =0.18）。
4）取代基： 给电子取代基增强荧光（p-共轭），如-OH、-OR、 -NH2、-CN、NR2等； 吸电子基降低荧光，如 -COOH、-C=O、 NO2、-NO、-X等；如苯环被卤素取代，从氟苯到碘苯，荧光逐渐
功能强大、操作简便的软件系统
功能： 激发光谱、荧光、同时光谱测定 定量分析（１－３次标准曲线） 时间扫描—动力学
检索最佳的激发光和荧光波长
只需打开Leabharlann 自动检索最佳激发光和荧光波长
从瑞利散射、拉曼散射及２次光中自动判断出荧光
使复杂的波长设置简单化
多样的数据处理
四则运算 数据变换（1-4介导数，倒数，对数） 曲线平滑 峰值检测 面积计算 活度值计算等 计算平均值
– 发生在激发波长的2倍或3倍波长处
瑞利散射
颗粒的大小小于入射光的波长. 光通过样品后频率不变.由于弹性碰撞不存在能量 的转移.光线只是简单地改变方向，波长不变. 粉末、悬浮液等样品.
拉曼散射
样品吸收和发射光并伴随有能量转移的产生. 光通过样品后光的波长、频率发生了改变.
与入射光相比发射光的频率可能更高或者更低.
狭逢10nm拉曼峰S/N＞600
仪器性能
利用先进的直流式长驱动机构，可及为迅速的得到理想的 光谱 可进行高速光谱监控，最高扫描速度５５００ｎｍ／ｍｉｎ 波长范围：220-900nm及0次 狭逢：1.5、3、5、10、15、20nm6档及激发6nm半高 波长精度：± 1.5nm 波长扫描速度Survey,Super,VeryFast,Medium,Slow,Very Slow 的7段转换；Survey,约5,500nm/min.Super约3,000nm/min.
其它分子碰撞失活的机率下降，荧光量子效率提高。
如荧光素（大）与酚酞（=0）；芴（=1）与联苯（ =0.18）。
4）取代基： 给电子取代基增强荧光（p-共轭），如-OH、-OR、 -NH2、-CN、NR2等； 吸电子基降低荧光，如 -COOH、-C=O、 NO2、-NO、-X等；如苯环被卤素取代，从氟苯到碘苯，荧光逐渐
功能强大、操作简便的软件系统
功能： 激发光谱、荧光、同时光谱测定 定量分析（１－３次标准曲线） 时间扫描—动力学
检索最佳的激发光和荧光波长
只需打开Leabharlann 自动检索最佳激发光和荧光波长
从瑞利散射、拉曼散射及２次光中自动判断出荧光
使复杂的波长设置简单化
多样的数据处理
四则运算 数据变换（1-4介导数，倒数，对数） 曲线平滑 峰值检测 面积计算 活度值计算等 计算平均值
荧光光谱仪的使用
第一章荧光分光光度分析法1.1概述1.1.1基本原理由高压汞灯或敬灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态,这些处于激发态的分子是不稳定的，在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光。
不同物质由于分子结构的不同，其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时，其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系，即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析，与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
1.1.2基本结构（1）光源：为高压汞蒸气灯或敬弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm~400nm范围内强度几乎相等，故较常用。
（2）激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。
（3）发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。
筛选出特定的发射光谱。
（4）样品室：通常由石英池（液体样品用）或固体样品架（粉末或片状样品）组成。
测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。
（5）检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器。
可将光信号放大并转为电信号。
1.1.3仪器操作规程1.1.3.1开机a.确认所测试样液体或固体，选择相应的附件。
b.先开启仪器主机电源，预热半小时后启动电脑程序RF-5301PC,仪器自检通过后，即可正常使用。
1.1.3.2测样（1）spectrum模式a.在“AcquireMode"中选择"Spectrum”模式。
仪器分析实验指导
-7-
准确吸取上述钙标准储备液 10 mL 于 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度， 摇匀备用，此为 100μg∙mL-1 钙标准溶液。 2.钙标准系列溶液的配制 钙标准溶液系列 8μg∙mL-1、12μg∙mL-1。 3.未知样品配制 吸取自来水 5mL 适量于 25mL 容量瓶中，用去离子水定容。 4.测定条件
对照两者的吸光度值，若试验 1 吸光度值大于试验 2，则试验 1 条件即为最 优化条件。若试验 2 吸光度值大于试验 1，则应再改变因素 C 的水平（本实验中 可设计为 13nm 或 14 nm） ，继续做对照实验，直至达最佳结果。
五、记录数据
灯电流为 mA 狭缝宽度 nm 火焰高度 nm
六、注意事项
-5-
可溶性盐类，取下移入 250mL 容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度并摇匀，静置澄 清。同时对样品空白作同样处理，与标准溶液同时测定。 4.测定 设定仪器检测实验条件。
波长 324.8nm 灯电流 6mA 狭缝宽度 0.7nm 燃烧器高度 7nm
五、实验结果
1.记录实验数据 1 c A 2.计算未知溶液中铜的含量。 绘制浓度－吸光度工作曲线，根据样品溶液吸光度在工作曲线查出相应的浓 度 c，按下式计算样品中铜的含量。 1.0μg∙mL-1 2 2.0μg∙mL-1 3 3.0μg∙mL-1 4 4.0μg∙mL-1 未知样品
三、仪器与试剂材料
1.仪器: AA-6300 原子吸收分光光度计 空气压缩机 2.实验材料: 纯铜粉 浓盐酸 浓硝酸 铜空心阴极灯 日本岛津公司
四、实验步骤
1.铜标准溶液制备: 准确称取 0.1000g 纯铜粉于 100mL 烧杯中，加入 5mL 浓硝酸溶解，移入 100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 1.000mg∙mL-1 铜标准 贮备液。 准确移取上述铜标准贮备液 5.00mL 于 100mL 容量瓶中， 用蒸馏水稀释至刻 度，摇匀，此为 50μg∙mL-1 铜标准溶液。 2.标准系列溶液的配制 分别准确移取 50μg∙mL-1 铜标准溶液 1.00，2.00，3.00，4.00 ，5.00mL 置于 50mL 容量瓶中， 2.0， 用去离子稀释至刻度， 摇匀。 此标准系列铜浓度分别为 1.0、 3.0、4.0、5.0μg∙mL-1，与样品溶液同时测定。 3.未知样品的处理 准确称取矿物样品 0.10～0.20g，置于 200mL 烧杯中，用水润湿，加浓盐酸 15mL，在通风厨内，置于电热板上加热溶解，待硫化氢气体逸出后，再加硝酸 5mL，继续加热蒸发至湿盐状，取下冷却，加盐酸 5mL，加水 10mL，加热溶解
准确吸取上述钙标准储备液 10 mL 于 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度， 摇匀备用，此为 100μg∙mL-1 钙标准溶液。 2.钙标准系列溶液的配制 钙标准溶液系列 8μg∙mL-1、12μg∙mL-1。 3.未知样品配制 吸取自来水 5mL 适量于 25mL 容量瓶中，用去离子水定容。 4.测定条件
对照两者的吸光度值，若试验 1 吸光度值大于试验 2，则试验 1 条件即为最 优化条件。若试验 2 吸光度值大于试验 1，则应再改变因素 C 的水平（本实验中 可设计为 13nm 或 14 nm） ，继续做对照实验，直至达最佳结果。
五、记录数据
灯电流为 mA 狭缝宽度 nm 火焰高度 nm
六、注意事项
-5-
可溶性盐类，取下移入 250mL 容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度并摇匀，静置澄 清。同时对样品空白作同样处理，与标准溶液同时测定。 4.测定 设定仪器检测实验条件。
波长 324.8nm 灯电流 6mA 狭缝宽度 0.7nm 燃烧器高度 7nm
五、实验结果
1.记录实验数据 1 c A 2.计算未知溶液中铜的含量。 绘制浓度－吸光度工作曲线，根据样品溶液吸光度在工作曲线查出相应的浓 度 c，按下式计算样品中铜的含量。 1.0μg∙mL-1 2 2.0μg∙mL-1 3 3.0μg∙mL-1 4 4.0μg∙mL-1 未知样品
三、仪器与试剂材料
1.仪器: AA-6300 原子吸收分光光度计 空气压缩机 2.实验材料: 纯铜粉 浓盐酸 浓硝酸 铜空心阴极灯 日本岛津公司
四、实验步骤
1.铜标准溶液制备: 准确称取 0.1000g 纯铜粉于 100mL 烧杯中，加入 5mL 浓硝酸溶解，移入 100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 1.000mg∙mL-1 铜标准 贮备液。 准确移取上述铜标准贮备液 5.00mL 于 100mL 容量瓶中， 用蒸馏水稀释至刻 度，摇匀，此为 50μg∙mL-1 铜标准溶液。 2.标准系列溶液的配制 分别准确移取 50μg∙mL-1 铜标准溶液 1.00，2.00，3.00，4.00 ，5.00mL 置于 50mL 容量瓶中， 2.0， 用去离子稀释至刻度， 摇匀。 此标准系列铜浓度分别为 1.0、 3.0、4.0、5.0μg∙mL-1，与样品溶液同时测定。 3.未知样品的处理 准确称取矿物样品 0.10～0.20g，置于 200mL 烧杯中，用水润湿，加浓盐酸 15mL，在通风厨内，置于电热板上加热溶解，待硫化氢气体逸出后，再加硝酸 5mL，继续加热蒸发至湿盐状，取下冷却，加盐酸 5mL，加水 10mL，加热溶解
RF-5301PC荧光光谱仪使用说明
RF-5301PC 荧光光谱仪使用说明
1.使用仪器之前先开机预热半小时，测样品之前要先打开氙灯；
2.测试过程中，荧光池用擦镜纸擦拭，液体一般装满荧光池的3/4，取用荧光
池接触菱角即可，注意不能接触其光面；
3.测固体荧光过程与液体荧光类似，测试之前要把支架换成固体支架；
4.测完之后务必要关闭氙灯和仪器，减少仪器的寿命损耗；
5.测完务必清洗好荧光池，溶剂一般为无水乙醇或丙酮，或者使用四氢呋喃、
氯仿等能溶解测试样品的溶剂，切不可使用碱性溶剂浸泡，以免损坏荧光池。
6.使用完后，所用配件及时放回储存处，并保持仪器周边整洁。
RF-5301PC荧光分光光度计验证方案讲解学习
R F-5301P C荧光分光光度计验证方案RF-5301PC荧光分光光度计验证方案（编号：）起草人：部门：起草日期：年月日审核人：、、（验证领导小组）部门：、、审核日期：年月日批准人：部门：批准日期：年月日**公司2012年03月验证目录01.验证项目02.概述03.验证目的04.验证条件05.验证合格标准06.验证范围07.验证人员08.验证内容与方法09.验证数据分析10.验证结论与偏差说明11.再验证12.验证时间安排13.附件1.验证项目RF-5301PC荧光分光光度计验证方案2.概述：2.1 RF-5301PC荧光分光光度计：设备编号：QC-016某些物质受到光照射而被激发之后，会发射出比照射波长稍长的光，这种光称为荧光。
对于给定物质来说，当激发光的波长和强度固定、液层的厚度固定、溶液的浓度较低时，荧光强度与荧光物质的浓度c有如下关系：F=kc荧光分光光度计就是根据上述原理，对可发射荧光的物质进行定性、定量测量的分析仪器。
我公司的荧光分光光度计是于2010年7月购置，其生产厂为日本岛津公司，主要用于铝的检测。
2.3技术参数：型号：RF-5301PC电源电压：220V，50HZ体积：长667×宽530×高270mm工作时间：连续工作环境条件：环境温度：15～35℃相对温度：40%～80%电压波动：220V±10%无影响仪器使用的振动和电磁干扰生产厂家：日本岛津公司。
3.验证目的按照GMP的要求，需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和日常分析测试工作的需要。
4.验证条件4.1验证前必须对设备所用仪表进行校验，且在有效期内。
4.2验证试验过程中所用的标准溶液、空白溶液在使用前必须符合规定。
4.3验证试验所用的清洁器具和玻璃容器应按SOP程序清洁并符合要求。
荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸实验
实验五 荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸学号36010712 姓名 张中豪 实验日期 2009 年 3 月 16 日 第 一 组同组姓名 张雪、张琳琳、傅磊、洪延 1. 学习荧光分析法的基本原理和操作；教师评定 .【实验目的】2. 用荧光分析法进行多组分含量的测定。
【实验原理】1、荧光分析法原理：当被测物质受到光照后，被测物分子吸收了具有特征频率的辐射能，分子从基态上升到激发态，分子在较高能级的激发态时，它可能处于激发态中各种振动状态的一种。
然而由于分子通过与溶剂分子、同类分子或其他分子的碰撞，而失去振动能级，降低至激发态时的最低振动能级，在此过程中并不发光。
但当分子从激发态的最低振动能级，即第一电子激发态的最低振动能级跃迁至基态的各个不同的振动能级时，则以光的形式辐射出能量，所辐射出的光既是荧光。
荧光物质的荧光强度与其浓度、分子结构和化学环境（如体系的pH 、温度）有关。
而且与体系所吸收的激发光强度成正比，则：0()F I I =Φ−式中，F 为荧光强度；0I 为入射光的强度；I 为通过厚度为b 的介质后的光强度；Φ为量子效率，为发射的光子与吸收的光子之比。
又比尔定律可得：0(110)bc F I ε−=Φ−式中，ε为荧光分子的摩尔吸光系数；b 为液槽的厚度；c 为荧光物质的浓度。
对于很稀的溶液，投射到样品溶液上被吸收的激发光不到2%时，即bc ε<0.05时，则上式可近似写为：02.303F I bc ε=Φ当入射光强度一定时，实验条件一定时，则 ： F Kc =即在低浓度时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系，这就是荧光定量分析的基础。
荧光强度和溶液浓度呈线性关系只限于极稀的溶液，对于较浓的溶液，其吸光度超过0.05时荧光强度与浓度的线性关系将发生偏离。
2、激发光谱和发射光谱： （1）激发光谱：荧光是光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，这可以从它们的激发光谱曲线来确定。
D05-P1008 岛津RF-20A荧光分光检测器确认方案(验证文件)
验证文件岛津RF-20A荧光分光检测器确认方案一、概述：RF-20A荧光分光检测器为株式会社岛津制作所生产的产品,与我公司岛津LC-2030C 3D Plus高效液相色谱仪串联使用，为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，计划对该仪器进行必要的确认。
二、确认目的：确认RF-20A荧光分光检测器的运行、性能确认符合相应的要求，为日常检验提供准确的检测结果。
三、范围：本验证方案适用于公司RF-20A荧光分光检测器的验证，验证内容包括对RF-20A荧光分光检测器进行设计确认、安装确认、运行确认、性能确认。
四、验证小组成员及职责姓名部门/职务责任质量部/经理1、负责验证方案及验证报告的审核及批准，并监督实施；2、负责对验证中出现的问题提出指导意见、执行偏差调查、批准变更；3、负责审核、发放验证证书等。
质量部/QA主管1、参与验证方案的讨论，确立；2、参与验证数据的收集、分析和评估。
3、协调进行验证中可能出现的偏差调查、完成变更书面记录、完成验证报告。
质量部/QC主管1、负责起草验证方案并对相关人员进行培训。
2、参与验证数据的收集、分析和评估。
3、负责完成验证中规定的检验项，同时将检验过程和结果记录或附在本方案设计的记录中（包括检验中产生的任何打印记录）。
4、协调进行验证中可能出现的偏差调查、完成变更书面记录、完成验证报告。
质量部/QC检验员参与验证数据的收集、检验项目的操作、分析。
五、验证所需具备的条件：进行验证前，与验证有关的所有仪器、仪表、计量器具等应校验合格，且在有效期内；设备、仪器等应建立相应的操作规程、维护保养规程，保证样品检验的规范性和有效性。
序号仪器名称型号检定证书编号有效期至检定单位1 电子天平2 高效液相色谱仪5.2验证引用主要文件引用文件文件编号是否为现为版岛津LC-2030C 3D Plus高效液相色谱仪使用、维护保养操作TB-215型电子天平使用及维护保养操作规程六、验证计划与进度整个验证活动分为四个阶段完成：序号完成项目时间1 安装确认2 运行确认3 性能确认七、确认依据及标准：《药品GMP指南》2010年版《岛津LC-2030C 3D Plus使用、维护保养操作规程》《中国药典》2015年版八、确认判断标准：1．运行确认判断标准：安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。
岛津分子荧光光谱仪RF-5301PC氙灯安装及性能测试(整理的说明书)
岛津分子荧光光谱仪 RF-5301PC 氙灯安装和性能测试岛津分子荧光光谱仪RF-5301PC 氙灯安装和性能测试摘要：介绍了岛津分子荧光谱仪RF-5301PC的氙灯安装和仪器的灵敏度，S/N，波长准确度测试，及荧光谱仪的结构和一些主要构件。
面向的对象：主要是化验人员的仪器维护和初次接触荧光光谱仪的工程人员。
另一个目的也是自己以后维护便于查看。
这个仪器接触不多，也希望其他朋友帮助指正。
目录：一些安全问题------------------------------------------------------1楼仪器的一个不能和计算机通信的问题解决------------------------1楼RF-5301的通信设置---------------------------------------------------2楼灯的安装及位置的校准------------------------------------------------3楼仪器灵敏度的调整（增益调整）------------------------------------4楼仪器性能测试（S/N的测试）----------------------------------------5楼校准波长准确度---------------------------------------------------------6楼分子荧光光谱仪介绍---------------------------------------------------7楼参考文献：图片后面的【x】表示引用的文献。
仪器专场展示：分子荧光光谱圆二色光谱拉曼光谱关键词：岛津安装氙灯性能测试PC一、一些安全问题.1.RF-5301的氙灯保证flicker 500小时。
说明书中是说，当使用时间超过1000小时时，可能会爆炸(burst) 。
2.由于氙灯内有高压气体，如果氙灯被硬物撞击存在爆裂的危险，所以安装氙灯时，要带上安全眼镜，手套，长袖子衣服。
实验八荧光分光光度法测定诺氟沙星片的含量
荧光是物质在吸光之后发射出的波长 较长的辐射，因此，溶液的荧光强度(F) 与该溶液的吸光程度及溶液中荧光物质的 荧光量子产率有关。荧光定量分析基于下 式公式： OΦεbC=kC
式中:F为荧光强度, Io为入射光强度，Φ 为物质的荧光量子产率，ε为摩尔吸光系 数，b为光程，C为荧光物质的浓度。以FC或logF-logC作图，即得标准曲线。样品 测其F值后，根据标准曲线查得相应浓度， 即可计算出含量。
3.计算出药片中诺氟沙星含量。
六、思考题
1、荧光强度测量与吸光度测量有何不同？ 为什么？ 2诺氟沙星片的含量
仪器名称
荧光分光光度计
国别厂家：日本岛津公司
仪器型号：RF-5301PC
一 概述 什么是荧光呢？当紫外光照射到某些物质的时候，
这些物质会发射出各种颜色和不同强度的可见光， 而当紫外光停止照射时，这种光线也随之很快地消 失，这种光线称为荧光。第一次发现荧光现象的是 16世纪西班牙的内科医生和植物学家,提出到在含有 一种称为“Lignum Nephriticum”的木头切片的水 溶液中，呈现了极为可爱的天蓝色。
20世纪以来，荧光现象被研究得更多了， 发现了共振荧光、增感荧光，能够进行荧光产 率得绝对测定，还进行了荧光寿命的直接测定 等等。
荧光分析方法的发展，与仪器应用是分不 开的。19世纪以前，荧光的观察是靠肉眼进行 的，直到1928年，才由Jette 和West提出了第 一台光电荧光计。1948年由Studer推出了第一 台自动光谱校正装置，到1952年才出现商品化 的校正光谱仪器。
按照受激方法的不同，分子发光可分 为不同类型。如果分子因吸收外来辐射的 光子能量而被激发，所产生的发光现象称 为光致发光；如果分子的激发能量是由反 应的化学能或由生物体释放出的能量所提 供，其发光现象分别称为化学发光和生物 发光。
荧光光谱仪的使用
标准表与标准曲线
荧光分光光度计 原理和结构
荧光分光光度计示意图
激发单色器 光源
PM
分束器
— —光闸 光闸
PM
发射单色器
样品池
主要部件
光源：氙灯、高压汞灯、激光； 光源：氙灯、高压汞灯、激光； 样品池：石英（低荧光材料）； 样品池：石英（低荧光材料）； 两个单色器：选择激发光单色器； 两个单色器：选择激发光单色器； 分离荧光单色器； 分离荧光单色器； 两个检测器：光电倍增管。 两个检测器：光电倍增管。
瑞利散射
颗粒的大小小于入射光的波长. 颗粒的大小小于入射光的波长
光通过样品后频率不变.由于弹性碰撞不存在能量 光通过样品后频率不变 由于弹性碰撞不存在能量 由于弹性碰撞不存在 的转移.光线只是简单地改变方向 波长不变. 光线只是简单地改变方向， 的转移 光线只是简单地改变方向，波长不变
粉末、悬浮液等样品 粉末、悬浮液等样品.
RF-5301PC光路图 光路图
仪器性能
高水平灵敏度：蒸馏水的拉曼峰 比为150以上 高水平灵敏度：蒸馏水的拉曼峰S/N比为 以上 灵敏度 比为 （EX350nm，狭逢 ，狭逢5nm ） 狭逢10nm拉曼峰 拉曼峰S/N＞600 狭逢 拉曼峰 ＞
仪器性能
利用先进的直流式长驱动机构， 利用先进的直流式长驱动机构，可及为迅速的得到理想的 光谱 可进行高速光谱监控， ５５００ｎｍ／ｍｉｎ 可进行高速光谱监控，最高扫描速度５５００ｎｍ／ｍｉｎ 波长范围：220-900nm及0次 波长范围： 及 次 狭逢： 、 、 、 、 、 档及激发6nm半高 狭逢：1.5、3、5、10、15、20nm6档及激发 档及激发 半高 波长精度： 波长精度：± 1.5nm 波长扫描速度Survey,Super,VeryFast,Medium,Slow,Very Slow 波长扫描速度 的7段转换；Survey,约5,500nm/min.Super约3,000nm/min.
荧光分光光度计验收细则
岛津RF-5301PC 荧光分光光度计的验收方案一、荧光分光光度计的方法原理某些物质由于受到光照射而被激发之后，会发射出比照射波长稍长的光（荧光），荧光强度与该物质的浓度有如下关系：0(1)Lc F k I e εφ'-=-式中：F —荧光强度；'k —仪器常数；φ—荧光量子效率 0I —激发光强 度ε—荧光物质的摩尔吸收系数L —荧光物质液层的厚度 c —荧光物质的浓度对于某个给定物质，激发光波长和强度固定，液层厚度固定，溶液浓度较低时，荧光强度和荧光物质的浓度有如下关系：F kc = 二、试剂1、试剂及标准物质：2、标准溶液的配制：1）0.05mol/L硫酸标准溶液将1000mL的容量瓶中加入适量的二次蒸馏水，用滴定管取浓硫酸2.7mL，注入容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，并混合均匀后放置备用。
2）500mL1×10-5g/mL的硫酸奎宁标准溶液将硫酸奎宁固体在干燥器中放置24h以上。
在分析天平上称准至5.00mg的硫酸奎宁标准物质至于500mL容量瓶中，用适量的0.05mol/L硫酸标准溶液溶解，然后再用0.05mol/L 硫酸标准溶液稀释至刻度，摇匀即可。
注：用深色玻璃瓶储存高浓度的标准液。
溶液应低温、避光、密封储存。
稀标准溶液应该现配现用。
浓溶液有效期为半年。
3、设备及器材三、验收标准及验收方法（仅对于色散型单色器（光栅））一）、波长示值误差及重复性1、标准：波长示值最大误差±2.0nm；波长重复性≤1.0nm。
2、验证方法：氙灯亮线法1)激发侧单色器波长示值误差和重复性将发色侧单色器置零级位置，将漫反射板（或无荧光的白色滤纸条）放入样品室，仪器的响应时间设置为：“快”，扫描速度设置为“中”，狭缝宽度为1.5nm ，对激发侧单色器在（350~550nm ）的波长范围内进行扫描，在谱图上找到450.1nm 处的光谱峰，并确定其峰值位置。
连续测量三次，按照式（1）和式（2）分别计算波长示值误差和重复性。
RF5301简单操作步骤
RF5301 快速操作说明一、仪器的连接接通仪器和氙灯电源，双击桌面RFPC软件，初始化进行以下一系列检查和初值，点击OK。
二、软件的设置进入软件，在菜单栏中选择Configure →PC Configuration，出现以下对话框设置导出的保存路径，点击OK三、光谱测定菜单栏中Acquire Mode→Spectrum→Configure Parameters，弹出光谱参数对话框，设置测量光谱类型以及合适的激发光、发射光的固定波长或范围，显示范围，扫描速度，采样间隔，狭缝宽，灵敏度，反应时间，点击OK确定。
四、数据采集放入待测样品，点击开始测试，测定完毕弹出以下对话框输入文件名称，点击Save五、数据的保存和删除通道测完单击右键，弹出以下对话框，Radar→Both Axes ，同时保存X和Y两轴的数据。
保存（两个通道）：1、菜单栏中File→Date Translation →ASCII Export保存通道，弹出对话框选定要保存的文件，点击OK2、菜单栏中File→Channel →Save Channel保存通道，弹出对话框选定要保存的文件，点击OK删除：菜单栏中→File→Channel →Erase Channel删除通道，弹出对话框选定要删除的文件，点击OK六、寻峰菜单栏中Manipulate→Peak Area，弹出一对话框显示对应峰值。
七、定量测量1、参数设定菜单栏中Acquire Mode→Quantitative→Configure Parameters，弹出参数对话框选择方法，激发和发射波长，狭缝宽度，反应时间，单位，浓度及强度范围，点击OK确定。
2、测样放入样品，点击右下方的read开始测样。
保存方式同上。
荧光分析法测定邻羟基苯甲酸和间羟基苯甲酸实验
实验五 荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸学号36010712 姓名 张中豪 实验日期 2009 年 3 月 16 日 第 一 组同组姓名 张雪、张琳琳、傅磊、洪延 1. 学习荧光分析法的基本原理和操作；教师评定 .【实验目的】2. 用荧光分析法进行多组分含量的测定。
【实验原理】1、荧光分析法原理：当被测物质受到光照后，被测物分子吸收了具有特征频率的辐射能，分子从基态上升到激发态，分子在较高能级的激发态时，它可能处于激发态中各种振动状态的一种。
然而由于分子通过与溶剂分子、同类分子或其他分子的碰撞，而失去振动能级，降低至激发态时的最低振动能级，在此过程中并不发光。
但当分子从激发态的最低振动能级，即第一电子激发态的最低振动能级跃迁至基态的各个不同的振动能级时，则以光的形式辐射出能量，所辐射出的光既是荧光。
荧光物质的荧光强度与其浓度、分子结构和化学环境（如体系的pH 、温度）有关。
而且与体系所吸收的激发光强度成正比，则：0()F I I =Φ−式中，F 为荧光强度；0I 为入射光的强度；I 为通过厚度为b 的介质后的光强度；Φ为量子效率，为发射的光子与吸收的光子之比。
又比尔定律可得：0(110)bc F I ε−=Φ−式中，ε为荧光分子的摩尔吸光系数；b 为液槽的厚度；c 为荧光物质的浓度。
对于很稀的溶液，投射到样品溶液上被吸收的激发光不到2%时，即bc ε<0.05时，则上式可近似写为：02.303F I bc ε=Φ当入射光强度一定时，实验条件一定时，则 ： F Kc =即在低浓度时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系，这就是荧光定量分析的基础。
荧光强度和溶液浓度呈线性关系只限于极稀的溶液，对于较浓的溶液，其吸光度超过0.05时荧光强度与浓度的线性关系将发生偏离。
2、激发光谱和发射光谱： （1）激发光谱：荧光是光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，这可以从它们的激发光谱曲线来确定。
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岛津分子荧光光谱仪 RF-5301PC 氙灯安装和性能测试岛津分子荧光光谱仪RF-5301PC 氙灯安装和性能测试摘要：介绍了岛津分子荧光谱仪RF-5301PC的氙灯安装和仪器的灵敏度，S/N，波长准确度测试，及荧光谱仪的结构和一些主要构件。
面向的对象：主要是化验人员的仪器维护和初次接触荧光光谱仪的工程人员。
另一个目的也是自己以后维护便于查看。
这个仪器接触不多，也希望其他朋友帮助指正。
目录：一些安全问题------------------------------------------------------1楼仪器的一个不能和计算机通信的问题解决------------------------1楼RF-5301的通信设置---------------------------------------------------2楼灯的安装及位置的校准------------------------------------------------3楼仪器灵敏度的调整（增益调整）------------------------------------4楼仪器性能测试（S/N的测试）----------------------------------------5楼校准波长准确度---------------------------------------------------------6楼分子荧光光谱仪介绍---------------------------------------------------7楼参考文献：图片后面的【x】表示引用的文献。
仪器专场展示：分子荧光光谱圆二色光谱拉曼光谱关键词：岛津安装氙灯性能测试PC一、一些安全问题.1.RF-5301的氙灯保证flicker 500小时。
说明书中是说，当使用时间超过1000小时时，可能会爆炸(burst) 。
2.由于氙灯内有高压气体，如果氙灯被硬物撞击存在爆裂的危险，所以安装氙灯时，要带上安全眼镜，手套，长袖子衣服。
3.安装氙灯时，必须关掉电源，拔掉电源线。
因为关机后，氙灯电极上仍然存有充电电压，所以，关掉电源后，要等5分钟或更长，才能换灯，不然有触电危险。
4.氙灯工作时温度非常高。
关机后，必须等1个小时才能更换。
5.氙灯启动时有3KV高压加在氙灯的电极上，所以，开机前，保证盖子盖好。
6.氙灯工作时，灯光很强，其射线会损伤视网膜，紫外线会损伤眼角膜，所以，应该避免直视光源。
7.手印问题二。
仪器的一个不能和计算机通信的问题解决。
先说说仪器RF5301的保险丝位置。
仪器保险丝的位置：1.仪器后盖处的保险丝。
这里有两个。
这两个保险丝电子市场一般买不到，但是只要粗细和长短一致，电气参数一致即可。
如下图：2. 仪器内部：打开盖子，在一个竖着的板子上有一个保险丝。
普通类型。
另外主板上有一排，大概五六个。
为了更换主板上的保险丝，必须拿出主板。
说说主板的拆出问题。
图中两个红色圈圈圈住得螺丝钉，拧开，可以拔出主电路板（拔出前，一定要打开仪器盖子，拔掉连接主板的一个排线，并保证没有其他的接插线在拔出主板时，会被拉坏。
）主电路板上有一排保险丝。
在一些故障时，可以先看看这些保险丝的通断。
三、RF-5301的通信设置：1.打开仪器电源，打开计算机。
2.点击计算机上的工作站软件RFPC，在主菜单里，点击Configrue。
3.点击“PC Configuration",弹出4. 设置使用的串口，点击OK。
仪器就会开始跟计算机建立通信。
如果没有，可以点击菜单"Configure-Instrument",弹出，Fluorometer选择On，仪器开始和计算机建立通信。
当通信建立后，仪器显示自检画面，并设置仪器参数。
仪器初始化完成后，可以点击菜单"Configure--Parameters"或者用快捷键"Ctrl+P" >仪器初始化完成后，可以点击菜单"Configure--Parameters"或者用快捷键"Ctrl+P"，弹出输入文件名，点击"Save"，通信参数保存为缺省文件。
四、灯的安装及位置的校准：1.拧松图中两个螺钉，打开灯室。
2.拧松下图螺钉，移动可移动板。
3. 用仪器自带的工具，插入下图中孔的靠下位置，逆时针转动，拧松氙灯紧固螺钉。
4. 从包装盒中取出氙灯，去掉在正负极上的防护件。
5. 使负极上的黑色或者红色标记朝向灯紧固螺钉方向。
把氙灯插入光室。
6. 用工具插入下图位置，顺时针方向紧固氙灯。
7. 关上可移动盖子，拧紧螺钉。
把氙灯正极接上正电极线，并用螺钉紧固（只允许用手拧，用工具可能损坏氙灯）灯位置粗调：（仪器预先预热30分钟）1.打开工作站RFPC，右下角的"Go To WL"2. 设置激发波长(Ex Wavelength)为500nm。
3. 打开样品室，在样品室中放一个白纸，应该可以看到一个绿色光斑。
4. 用工具调整灯的水平位置，使绿色光斑最亮。
（一定要先调整灯的水平位置！）5. 调整灯的垂直位置，使绿色光斑最亮。
6. 这样灯位置的大概位置就调好了。
灯位置的精细调整：1. 拿掉白纸，样品室中放入盛有蒸馏水的比色皿，盖上盖子。
2. 点击菜单”Configure-Instrument“,弹出3. 点击"Lamp Align"的"Perform"，弹出（注：灯使用时间的复位也在这里）然后，a.用工具调整灯的水平位置，使上图中的数值最大b.用工具调整灯的垂直位置，使上图中的数值最大这样灯的位置就完全调好了。
如果是新安装的灯，可以按一下上图中的Reset键，这样灯的使用时间就可以从零开始记录。
五、仪器灵敏度的调整（增益调整）：先看看几个相关的调节钮的位置。
如下图VR0: 增益调整。
用户可以做。
VR1:厂家设置。
不建议用户自己动。
这个是当负高压控制关闭时，用来调整检测灵敏度。
VR2：厂家设置。
不建议用户自己动。
这个是当灯补偿（lamp compensation）开启时，用来调整检测灵敏度。
”灯补偿“，我在整个说明书里都没见提到怎么设置。
可以看到的一个增益调整：1. 点击菜单"Acquire Mode”-“Spectrum"，如下图2.弹出，并设置参数如下图：3.点击菜单”Configure”-“Instrument“,弹出并设置参数如下图：4.点击工作站右下角的" >4.点击工作站右下角的"Go To WL"5.弹出对话框如下图，设置EM Wavelength 为450nm。
6.点击”Set“关闭对话框。
7.点击图16中的”Auto Zero“---”Start“。
得出的光谱图如下图8.在谱图上，点击鼠标右键，选择”Cross hair“,会弹出一个子菜单，如下图，选择显示，在谱图上，会出现一个十字光标，用这个光标可以获得蒸馏水拉曼峰的峰值波长（大概397nm）和峰值强度。
当峰值强度的值在10±2时，可以不用调整VR0.当峰值强度不在这个范围时，调整VR0。
然后再重复上面灵敏度测试的方法。
六、仪器性能测试（S/N的测试）当安装了新灯后，要进行仪器性能测试。
1.仪器预热30分钟。
2.点击菜单"Configure-Instruement",弹出3.在对话框中，点击" >3.在对话框中，点击"S/N Ratio Check"的"Perform",弹出下图：4. 按提示，在样品室中放入盛蒸馏水的比色皿后，点击OK。
仪器会测量蒸馏水的拉曼峰高，并显示出来。
这个峰值会测量10分钟，考虑到峰值的稳定性。
基于拉曼峰，仪器噪声会被估算。
然后计算出S/N ratio。
如下图规定，S/N ratio应该大于150。
假如上图中的Peak Height 不在10±2的范围内，要按上面的调整灵敏度的放大调整VR0.S/N ratio<150，用户可以看看，灯有没安装好，灯寿命是否到了，或者蒸馏水问题。
七、校准波长准确度（遗憾的是说明书上没有修正波长误差的方法）校准发射单色器：利用荧光灯的汞发射谱线（435.8nm）操作：1.打开仪器样品室盖，使荧光灯照射样品室，拿掉样品室中的比色皿。
2.点击：”Acquire Mode-Spectrum“3. 点击”Configure-Instrument“,弹出"HV Control"和"PMT Protect"选择”off“4.点击"Configure-parameters" >4.点击"Configure-parameters" >4.点击"Configure-parameters",弹出对话框，并设置为如下：5.点击工作站右下角的"Start" >5.点击工作站右下角的"Start" >5.点击工作站右下角的"Start"。
完成扫描后，会显示出谱图6.利用工作站的寻峰功能([Peak Pink]),找到峰值对应的波长。
合格范围是：435.8±1.5nm。
如果峰的强度过高，可以调节在灵敏度调节里提到的VR1。
校准激发单色器：粗测：用蒸馏水；精确测量：用汞灯。
使用蒸馏水校准的方法。
操作：1.将盛有蒸馏水的比色皿放入样品室，盖上盖子。
2.点击”Configure-Instrument“,弹出"HV Control"和"PMT Protect"选择”On “3. 点击"Configure-parameters",弹出对话框，。