UPLC法测定奈韦拉平的含量及有关物质

高效液相色谱法测定奈韦拉平的血药浓度【关键词】色谱法，高压液相；奈韦拉平；血药浓度【关键词】色谱法，高压液相；奈韦拉平；血药浓度奈韦拉平（nevirapine）是人体免疫缺陷病毒(HIV1)的非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI). 奈韦拉平与HIV1的逆转录酶(RT)直接连接并通过使此酶的催化端断裂来阻断RNA依赖和DNA依赖的DNA聚合酶活性［1-2］. 奈韦拉平不与底物或三磷酸核苷产生竞争. 我们旨在摸索一种简便、快速、专属性高的测定奈韦拉平血浆浓度的方法.1材料和方法1.1材料安捷伦1100液相色谱仪（美国安捷伦公司生产）；低温高速离心机（德国SIGMA公司生产）；振荡器（美国科尔帕默仪器公司生产）；万分之一天平（上海衡平仪器仪表厂生产）. 甲醇、乙腈，色谱纯，Merck公司生产；磷酸、磷酸二氢钠、三氯乙酸、三乙胺，AR级，上海化学试剂公司生产. 受试制剂：国产奈韦拉平胶囊剂（商品名艾极），批号0309001，每粒200 mg，浙江华海药业股份有限公司生产；国产奈韦拉平片剂（商品名艾太），批号0402004，每片200 mg，浙江华海药业股份有限公司生产；参比制剂：进口奈韦拉平片（商品名维乐命），批号304185d，每片200 mg，德国勃林格殷格翰生产；奈韦拉平标准品，批号556503002，含量99.8%，浙江华海药业股份有限公司提供.1.2方法1.2.1色谱条件色谱柱： Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm， 0.5μm）；流动相：乙腈: 0.01 mol/L磷酸二氢钠（含0.01 mol/L三乙胺，磷酸调pH至5.0）=18:82；流速： 1.0 mL/min；柱温：45℃；检测波长： 240 nm；进样量：25 μL；灵敏度： 0.01AUFS.1.2.2定性获取空白血浆、加入标准品的血浆样品和待测血浆样品的二维色谱图，比较所测成分的保留时间及检测波长是否一致.1.2.3血浆样品的预处理取0.2 mL血浆样品，加入20 μL 500 mL/L三氯乙酸，漩涡振荡，4℃下离心5 min（15000 r/min），取上清液25 μL进样，作HPLC分析.1.2.4标准曲线的制备取健康人的空白血浆0.2 mL数份，加入奈韦拉平标准品，使其浓度分别为0.1， 0.5， 1.0， 2.0， 3.5和5.0 mg/L，按血浆样品处理项处理后作HPLC分析. 以样品峰面积（A）对药物浓度（C）进行线性回归，计算回归方程.1.2.5回收率与精密度考察配制含奈韦拉平的标准品0.2， 2.5， 4.5mg/L的系列血样，日内各浓度重复进样5次，日间各浓度测定1次，连续测定5 d，以所测的浓度与已知浓度相比，计算血样中奈韦拉平的相对回收率和日内、日间精密度.1.2.6药代动力学参数计算Cmax， tmax用实测值表示，AUC0-t用梯形法计算. AUC(0-∞)=AUC(0-t)+Ct/λZ， Ct为最后一点的血药浓度，λZ为末端相消除速度常数，t1/2可按t1/2=0.693/λZ求出.2结果2.1色谱分离与定性从加入标准品的血浆样品的二维色谱图可知，奈韦拉平在12.165 min出峰，比较空白血浆、加入标准品的血浆样品和待测血浆样品的色谱图，奈韦拉平的保留时间基本一致，证明定性成功（图 1）.A：空白血浆；B：加入标准品的血浆样品；C：待测血浆样品.图1人血浆中奈韦拉平的高效液相色谱图2.2线性关系回归方程： C=81.45A+58.65，相关系数（r）=0.9995(n=6)，线性范围0.1~5.0 mg/L. 相关系数的显著性检验P<0.001，说明待测成分在所选的范围内线性关系良好. 本色谱条件下的最低检测浓度为0.1 mg/L.2.3专属性本方法专属性高，在该色谱条件下，测得奈韦拉平保留时间为12.165 min，药物峰形良好，血浆中内源性杂质不干扰奈韦拉平的测定.2.4精密度和回收率血样中奈韦拉平的相对回收率和日内、日间精密度，其结果见表1. 血样中奈韦拉平的相对回收率为99.41%~100.53%，日内、日间精密度小于10%，符合生物样品分析的有关要求.表1人血浆中奈韦拉平的精密度和回收率2.5血药浓度时间曲线采用二重3*3拉丁方设计，24名受试者按照随机顺序接受3种药物（奈韦拉平国产胶囊剂、片剂与进口片剂）200 mg后的平均血药浓度时间曲线见图2. 结果显示，血样中奈韦拉平实测浓度均在本试验线性范围内.图2奈韦拉平的平均血药浓度时间曲线3讨论测定人血浆中奈韦拉平浓度的方法有高效液相色谱法［3-4］和离子对色谱法［5］. 我们采用高效液相色谱法，血浆内源性杂质不干扰药物的测定. 采用磷酸盐缓冲溶液，调节pH=5，以获得较好的分离度和较短的保留时间. 该方法符合人体药代动力学研究生物样品测定的方法学要求.本实验中，对于流动相的选择和药物的萃取进行了大量探索工作，固相萃取可得到较高和较稳定的回收率［6］，却代价昂贵，应用500 mL/L三氯乙酸作为萃取溶剂，回收率高而且稳定，以乙腈和磷酸盐溶液作为流动相［7］，药物峰受到血浆内源性杂质峰干扰，磷酸盐溶液中加入三乙胺，消除杂质峰的干扰，实验方法有较高专属性.奈韦拉平是一种抗艾滋病新药，有较多不良反应，会引起肝毒性和耐受性［8-9］. 本次试验过程因志愿者出现不良反应而脱落4例.【参考文献】［1］ Tebas P， Yarasheski K， Henry K， et al. Evaluation of the virological and metabolic effects of switching protease inhibitor combination antiretroviral therapy to nevirapinebased therapy for the treatment of HIV infection［J］. AIDS Res Hum Retroviruses， 2004，20(6):589-594.［2］ Manosuthi W， Sungkanuparph S， Vibhagool A， et al. Nevirapineversus efavirenzbased highly active antiretroviral therapy regimens in antiretroviralnaive patients with advanced HIV infection［J］. HIV Med， 2004，5(2):105-109.［3］ Laurito TL， Santagada V， Caliendo G， et al. Nevirapine quantification in human plasma by highperformance liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry. Application to bioequivalence study ［J］. J Mass Spectrom， 2002，37(4):434-441.［4］ Lopez RM， Pou L， Gomez MR， et al. Simple and rapid determination of nevirapine in human serum by reversedphase highperformance liquid chromatography［J］. J Chromatogr B Biomed Sci Appl， 2001，751(2):371-376.［5］ Fan B， Stewart JT. Determination ofzidovudine/lamivudine/nevirapine in human plasma using ionpair HPLC ［J］. J Pharm Biomed Anal， 2002，28(5):903-908.［6］ Colombo S， Beguin A， Marzolini C， et al. Determination of the novel nonpeptidic HIVprotease inhibitor tipranavir by HPLCUV after solidphase extraction［J］. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci， 2006，832(1):138-143.［7］ Notari S， Bocedi A， Ippolito G， et al. Simultaneous determination of 16 antiHIV drugs in human plasma by highperformance liquid chromatography［J］. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci， 2006，831(12):258-266.［8］ Gokengin D， Yamazhan T. Hepatic adverse events during highly active antiretroviral therapy containing nevirapine: A casereport ［J］. Ann Clin Microbiol Antimicrob， 2002，1:1.［9］ Manosuthi W， Chumpathat N， Chaovavanich A， et al. Safety and tolerability of nevirapinebased antiretroviral therapy in HIVinfected patients receiving fluconazole for cryptococcal prophylaxis: A retrospective cohort study ［J］. BMC Infect Dis， 2005，5:67.。

UPLC法测定注射用特利加压素中有关物质的含量Content Determination of Related Substances in Terlipressin for Injection by UPLCXUE Qiaoru，YUAN Jinye，DING Liuyang，ZHENG Weijun，DENG Feng（Guangdong Institute for Drug Control/NMPA Key Laboratory of Quality Control of Blood Products/Key Laboratory of Quality Control and Research of Blood Products，Guangzhou，*****，China）*****T *****VE：To establish UPLC method for the content determination of related substances in Terlipressin for injection. *****：UPLC method was used to determine the contents of related substances in 5 batches of Terlipressin for injection. The separation was performed on Xtimate UPLC C18 column with mobile phase A consisted of ammonium sulfate buffer （pH 2.3）-methanol （90 ∶ 10，V/V）and mobile phase B consisted of ammonium sulfate buffer （pH 2.3）-methanol （60 ∶ 40，V/V）（gradient elution）at the flow rate of 0.2 mL/min. The detection wavelength was set at 210 nm，and sample size was 5 μL. *****：The linear range of impurity A，B，C，D，F，H，I，K，L and N were 0.43-3.86，0.44-3.95，0.44-3.97，0.45-4.08，0.45-4.05，0.50-4.50，0.47-4.26，0.47-4.23，0.46-4.13，0.44-3.96 μg/mL （r≥0.999 7），respectively. The detection limits were 0.04，0.04，0.05，0.04，0.05，0.05，0.05，0.05，0.04 μg/mL. The quantitation limits were 0.13，0.13，0.14，0.13，0.15，0.14，0.14，0.14，0.13 μg/mL，respectively. RSDs of precision，reproducibility and stability tests were all lower than 8%. The average recoveries were 94.95%，97.81%，101.88%，95.26%，93.40%，102.48%，104.26%，102.31%，96.42%，90.42%，with RSDsof 1.89%，1.86%，0.68%，1.30%，1.98%，3.36%，1.26%，1.30%，1.19%，1.40% （n=9），respectively. Total contents of impurities in 5 batches of Terlipressin for injection were all lower than 4%. *****IONS：Established method is rapid，simple，accurate and specific，which can be used for the quantitative analysis for related substances in Terlipressin for injection.*****S UPLC; Terlipressin for injection; Related substance; Content determination注射用特利加压素的主成分为醋酸特利加压素（Terlipressin），其化学名为L-甘氨酰-L-甘氨酰-L-甘氨酰-L-半胱氨酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-谷氨酰氨酰-L-天冬酰氨酰-L-半胱氨酰-L-脯氨酰-L-赖氨酰-L-甘氨酰胺醋酸盐（4→9-二硫环）。

HPLC法测定奈韦拉平的血药浓度
周细根;陈汇
【期刊名称】《实用临床医学》
【年(卷),期】2006(007)009
【摘要】目的:建立高效液相色谱法测定奈韦拉平血药浓度的方法.方法:采用Hypersil C18柱(150 mm× 4.6 mm,0.5μm);流动相;乙腈:0.01 mol/L磷酸二氢钠(含0.01 mol/L三乙胺,磷酸调pH至5.0)=18:82;流量:1.0mL/min;检测波
长:240nm.结果:线性范围0.1～5.0 mg/L(r=0.9996);最低检测浓度为0.1 mg/L;日内、日间相对标准差(RSD%)均小于10%;低、中、高三个浓度的提取回收率分别为99.98%、99.41%和100.53%.结论:该法简便、快速、准确,专属性高,适用于奈韦拉平药动学和生物等效性研究.
【总页数】3页(P16-17,19)
【作者】周细根;陈汇
【作者单位】井冈山学院医学院,江西,吉安,343000;华中科技大学同济医学院临床药理系,湖北,武汉,430030
【正文语种】中文
【中图分类】R917.1
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4.UHPLC-MS/MS法测定氟苯尼考明胶纳米药物在小鼠体内的血药浓度 [J], 亓馨怡;侯冰玉;李建科;姚霄月;黄晶晶;李臣贵
5.用HPLC法测定奈韦拉平含量的不确定度评定 [J], 张平;余杰
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用HPLC法测定奈韦拉平含量的不确定度评定
张平;余杰
【期刊名称】《药学服务与研究》
【年(卷),期】2007(7)6
【摘要】目的:对HPLC法测定奈韦拉平含量的测量不确定度进行分析,以期找出影响不确定度的因素,为评价检测报告提供科学依据。

方法:用HPLC法测定原料药奈韦拉平的含量,并根据《(JJF1059-1999)测量不确定度评定与表示》中有关规定评估其不确定度。

结果:本次实验的不确定度评估为1.2%。

结论:本次实验的不确定度主要由供试品溶液峰面积的重复性测量引起的。

【总页数】3页(P436-438)
【关键词】奈韦拉平;色谱法,高压液相;测量不确定度
【作者】张平;余杰
【作者单位】上海市崇明县食品药品检验所;上海三维生物技术有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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丽
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5.HPLC-示差折光检测法测定盐酸克林霉素棕榈酸酯分散片含量的不确定度评定[J], 庞赛;刘晶晶;李玉兰;刘敏;王铁杰
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奈韦拉平简介目录•1拼音•2英文参考•3奈韦拉平药典标准o 3.1品名▪ 3.1.1中文名▪ 3.1.2汉语拼音▪ 3.1.3英文名o 3.2结构式o 3.3分子式与分子量o 3.4来源（名称）、含量（效价）o 3.5性状o 3.6鉴别o 3.7检查▪ 3.7.1有关物质▪ 3.7.2残留溶剂▪ 3.7.3水分▪ 3.7.4炽灼残渣▪ 3.7.5重金属o 3.8含量测定▪ 3.8.1色谱条件与系统适用性试验▪ 3.8.2测定法o 3.9类别o 3.10贮藏o 3.11制剂o 3.12附杂质o 3.13版本•4参考资料1拼音nài wéi lā píng2英文参考Nevirapine[湘雅医学专业词典]3奈韦拉平药典标准3.1品名3.1.1中文名奈韦拉平3.1.2汉语拼音Naiweilaping3.1.3英文名Nevirapine3.2结构式3.3分子式与分子量C15H14N4O 266.303.4来源（名称）、含量（效价）本品为11环丙基5,11二氢4甲基6H二吡啶并[3,2,b:2',3'e] [1,4]二氮杂䓬6酮。

按无水物计算[1]，含C15H14N4O应为98.0%～102.0%。

3.5性状本品为白色或类白色结晶性粉末；无臭。

本品在乙醇或甲醇中微溶[1]，在水中几乎不溶。

3.6鉴别（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》1159图）一致。

3.7检查3.7.1有关物质取含量测定项下的供试品贮备液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液50μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的25%。

作者简介（通讯作者）：王宏亮，男，工程师，研究方向：药品、食品检验检测技术，E -mail ：********************作者单位：1.317000临海，临海市食品药品检测中心（王宏亮，何计龙）；2.317600台州，玉环县食品药品检验检测中心（陈盼盼）奈韦拉平是一种非核苷类逆转录酶抑制剂，与抗逆转录病毒药物和抗蛋白酶药物（如齐多夫定、司他夫定和拉米夫定等）联合使用，用于治疗获得性免疫缺陷综合征（艾滋病）病毒感染时，可显著减少病毒载量［1-2］。

奈韦拉平收载于《中国药典》2010年版二部［3］，在日常检验中我们发现，依照“检查”项下有关物质检查方法，存在漏检杂质的问题。

为此，笔者通过比较《中国药典》2010年版第二增补本、《美国药典》USP35-NF30和《欧洲药典》EP 7.5奈韦拉平有关物质检查的方法，并检测奈韦拉平定点生产企业生产的3个连续批次的奈韦拉平，证明《中国药典》2010年版第二增补本确实存在漏检杂质的情况。

本文为该增补本奈韦拉平的有关物质检查方法修订提供依据。

1材料与方法安捷伦1260高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器、Open LAB 工作站，美国安捷伦科技有限公司；Waters 2695高效液相色谱仪：配2489紫外检测器、EMPOWER 工作站，美国沃特世科技有限公司；2010年版《中国药典》奈韦拉平有关物质检查存在问题的探讨王宏亮1，陈盼盼2，何计龙1［摘要］目的研究《中国药典》2010年版第二增补本奈韦拉平有关物质检查的方法，探讨存在的问题。

方法深入剖析《中国药典》、《美国药典》和《欧洲药典》中关于奈韦拉平的检测方法，实际检测某药厂生产的3个连续批次的奈韦拉平原料药，比较有关物质检查检测情况。

结果按《中国药典》方法检测出3个杂质，按美国、欧洲药典检测出4个杂质，《中国药典》漏检最大的单个杂质。

结论证明《中国药典》2010年版第二增补本奈韦拉平有关物质检查方法，存在漏检杂质的情况，建议修订奈韦拉平有关物质检查方法。