分子荧光分析法

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分子荧光分析法

分子荧光分析法的发展史和发展趋势

分子荧光光谱的发展经历了很长的一段时间,由于荧光的短暂性使得他的发展与应用经历了较长的时间。,第一次记录荧光现象是在1575年,西班牙内科医生、植物学家莫纳德斯(N. Monardes )提到:一种木头切片的水溶液呈“可爱的天蓝色”。17世纪,波义尔(Boyle)和牛顿(Newton)等再次观察到荧光现象并给予了更详细的描述。1852年,斯托克斯(G.G.Stokes)用分光光度计考察奎宁和叶绿素时发现:λ吸

1867年,瑞士,高贝尔斯莱德(F.Goppelsr?der)进行了首次的荧光分析工作,应用铝-桑色素配合物的荧光进行铝的测定。1880年,莱伯曼(Liebeman)提出了最早关于荧光与化学结构关系的经验法则。19世纪末,人们已经知道了600种以上的荧光化合物。20世纪以来,荧光现象的研究就更多了: 1905年,伍德(Wood)发现共振荧光。1914年,弗兰克(Frank)和赫兹(Hertz)利用电子冲击发光进行定量研究。1922年,Wawillous 进行荧光产率的绝对测定。1926年,盖维奥拉(Gaviola) 进行了荧光寿命的直接测定。

分子发光在很多领域都有广泛的的应用。分子发光包括荧光,磷光,化学发光,生物发光和散射光。而各种分子发光都有其重要的应用。在这里主主要介绍的是分子荧光分析的应用。

分子荧光分析方法具有具有灵敏度高,选择性强,试样量少方法方便以及物理参数较多的特点。采用直角检测的方法,其灵敏度要比紫外—可见分光光度法高2~4个数量级,它的测定下限在0.1~0.001μg·cm-3之间。荧光强度计算是为If=2.3ΦI0εlc 由此可以看出提高I0能够提高灵敏度,另外荧光强度是一个绝对量,不像紫外-可见光谱是相对值,因此他就有更高的灵敏度。他的强选择性因为荧光法既能依据特征发射,又能依据特征吸收来鉴定物质。假如某几个物质的发射光谱相似,可以从激发光谱的差异把它们区分开来,而如果它们的吸收光谱相同,则可用发射光谱将其区分。

荧光分析法

0T1

吸收发射荧光发射磷光系间跨越内转换振动弛豫

能量

l l l3外转换

l2T2内转换

振动弛豫第一节荧光分析法的基本原理（2）(二) 有机化合物分子结构(molecular structure)与荧

光(fluorescence)的关系

1. 分子产生荧光必须具备的条件

（1）具有合适的结构：强的紫外-可见吸收；

（2）具有一定的荧光效率。

2. 有机化合物的结构与荧光

(1）跃迁类型：→ *跃迁的荧光效率高，系间跨越过程的

速率常数小，有利于荧光的产生；(2）共轭效应：提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移

(3）刚性平面结构：可降低分子振动，减少与溶剂的相互作

用，故具有很强的荧光。如荧光素和酚酞有相似结构，荧光素有很强的荧光，酚酞却没有。

(4）取代基效应：芳环

上有供电基团，使荧光增强。

综上所述：具有π→π*跃迁，

长的共轭结构，刚性平面以

及具有供电子基团的一类化

合物，有利于荧光的产生。(三) 荧光试剂：为了提高测定的灵敏度和选择性，

常使弱荧光物质与某些荧光试剂作用，以得到强荧

光性产物，扩大荧光分析法的应用范围。常用的荧

光试剂有：

1 荧光胺(fluorescamine)：能与脂肪族和芳香族伯胺

形成高度荧光衍生物；

2 邻苯二甲醛(OPA)：

3 1-二甲氨基-5-氯化磺酰萘(Dansyl-Cl，丹酰氯）：

4 测定无机离子的荧光试剂：三影响荧光强度的外部因素：

1.溶剂的影响：一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增强

而长移，荧光强度也增强。

2.温度的影响：荧光强度对温度变化很敏感，温度增加，外

转换去活的几率增加，使荧光效率和荧光强度降低。

3. 溶液pH：对酸碱化合物，溶液pH的影响较大，需要严格

控制；

4. 荧光熄灭剂：又称荧光猝灭，是指荧光物质分子与溶剂分

子或其他溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。

引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂(quenching medium)。

如果荧光熄灭强度与荧光熄灭剂的浓度呈线性关系，

药物分析中的荧光定量分析方法

荧光定量分析是一种基于荧光现象进行药物分析的方法，它具有高灵敏度、高选择性和高精确性等特点，被广泛应用于药物研究与分析领域。本文将介绍药物分析中常用的荧光定量分析方法，包括分子荧光光谱法、生物分子荧光光谱法和荧光标记技术在药物分析中的应用等。

一、分子荧光光谱法

分子荧光光谱法是一种基于分子在受激发态和基态之间跃迁导致荧光发射的定量分析方法。常用的激发光源包括紫外线、可见光和激光等。在药物分析中，分子荧光光谱法常用于药物含量测定、药物相互作用研究和药物质量控制等方面。

二、生物分子荧光光谱法

生物分子荧光光谱法是一种基于生物分子（如蛋白质、核酸等）在特定条件下产生荧光信号的定量分析方法。与分子荧光光谱法相比，生物分子荧光光谱法在药物分析中更多地应用于生物样品的分析，如药物代谢产物的检测、毒性评估和药物在生物体内的分布等研究领域。

三、荧光标记技术在药物分析中的应用

荧光标记技术是一种通过将荧光染料与目标物质（如药物分子、蛋白质和细胞等）进行结合，实现对目标物质的定量分析的方法。荧光标记技术具有灵敏度高、特异性强和操作简便等特点，在药物分析中有着广泛的应用。例如，荧光标记药物可以用于药物输送系统的研究和药物靶向治疗的监测等方面。

四、荧光定量分析方法的优势和挑战

荧光定量分析方法在药物分析中具有许多优势，如高灵敏度、高选择性和无损分析等特点。然而，荧光定量分析方法也面临一些挑战，如荧光信号的干扰、荧光染料的选择和荧光标记的稳定性等。因此，在实际应用中需要仔细设计和优化荧光定量分析方法，以确保准确性和可靠性。

总结：

荧光定量分析方法是药物分析领域中常用的定量分析方法之一，它在药物含量测定、药物相互作用研究和药物质量控制等方面发挥着重要作用。分子荧光光谱法、生物分子荧光光谱法和荧光标记技术等方法都是药物分析中常见的荧光定量分析方法。然而，荧光定量分析方法仍然面临一些挑战，需要进一步研究和改进。希望本文能够对读者了解荧光定量分析方法在药物分析中的应用有所帮助。