Agilent 1260液相色谱仪场地准备.

安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。

2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。

3.有关责任：化验室精密仪器室4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材5.规程内容：5.1开机前准备5.1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。

5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。

5.2.采样前准备5.2.1打开计算机,进入Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。

5.2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。

5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。

5.2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。

5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。

5.2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。

(查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。

)5.2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。

Agilent 1260液相色谱仪+Vector柱后衍生仪标准操作规程一、Agilent 1260液相色谱仪1 操作程序1.1 操作前准备1.1.1 样品过滤1.1.1.1 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解。

1.1.1.2 过滤样品确保样品中不含固体颗粒。

1.1.1.3 进样量尽量小。

1.1.2 流动相过滤不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的性能。

遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命。

1.1.2.1 使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。

1.1.2.2 流动相使用HPLC级。

1.1.2.3 用滤膜过滤溶剂去除微生物（滤膜最大0.45μm，最好0.22μm）。

1.1.2.4 每二天更换或过滤。

1.1.2.5 避免溶剂瓶直接日照。

1.2 仪器组成1.2.1 Agilent 1260高效液相色谱系统主要由工作站、在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱和检测器等部件组成。

1.2.2 各部分的操作及数据处理均由工作站计算机控制完成，其操作系统为Windows 7，工作站软件名称为Control Panel。

1.3 开机操作1.3.1 接通电源，打开计算机及工作站其他各部件开关，约30s后，各部件预热完毕，进入待机状态，指示灯为黄色。

1.3.2 打开Agilent ChemStations，进入仪器1联机状态，约30s后，计算机进入工作站的操作页面。

该页面主要由以下几部分组成：1.3.2.1 最上方为命令栏，依次为文件，运行控制，仪器等；命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件、保存文件……等；1.3.2.2 左边为样品信息栏；1.3.2.3 中部为工作站各部件的工作流程示意图，依次为进样器——输液泵——柱温箱——检测器——数据处理——报告；1.3.2.4 中下部为动态监测信号；1.3.2.5 右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

安捷伦1260全自动高效液相操作规程
1.样品的准备：最好使用流动相溶解样品；进样前样品需过滤膜，除去悬浮不溶杂质。

2.流动相的选择和处理：使用高纯度试剂，所有含盐或含水溶剂必须膜过滤，100%色谱纯有机试剂，滤膜过滤后方可使用；流动相现配现用，剩余的流动相（水相）及时清理，实验间隔>2天，建议倒掉；任何溶剂，如果有可见悬浮物、菌丝，不可使用；更换流动相之前，必须事先阅读色谱柱的说明书；除非有说明，反相柱不得使用100%水。

3.开机注意事项：先开HPLC仪器开关、脱气机、泵和紫外检测电源；等各电源开启后（30s），打开在线软件；冲柱子和平衡时，暂不开紫外灯；平衡完后，打开紫外灯，设置梯度和波长或引用方法。

4.实验结束：C18反相柱应用色谱甲醇保存，不能含任何酸、盐；用甲醇替换通道，四个过滤头均存放于有机溶剂瓶中，以防长菌；流速调零，再关闭软件，最后依次关闭脱气机、泵和紫外检测器的电源。

Agilent 1260 液相色谱仪操作规程一、准备工作a)启动计算机：打开计算机,登陆windows操作系统。

b)启动工作站：开启Agilent 1260各模块电源，待Agilent 1260各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击LC1260(联机)。

c)开启工作站：进入工作站，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”。

打开仪器控制视图：选择“视图->系统视图”，即可显示仪器控制视图。

d)配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中。

设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上单击鼠标左键，点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积，也可设定低体积关泵；溶剂要求：色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇，二次蒸馏水。

e)冲洗流动相管路：反时针旋开泵模块上的溶液排空阀。

右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为5ml/min。

对于G1311X(四元泵)分别将A,B,C,D 四个通道设置“溶剂”为100%，冲洗至管线内无气泡为止; 设置溶剂比例为初始比例，“流速”为1ml/min，关闭Purge阀。

f)开启模块：开启模块：鼠标右键点击每个模块的空白处都会弹出提示框，选择“控制”即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模块。

也可在仪器视图中选择“打开”。

g)监视基线：点击“视图->在线信号”打开“在线图谱”。

h)平衡色谱柱、进样分析：监视压力和信号基线等待平稳后，可以进样采集分析。

二、数据采集方法编辑a)方法编辑：在“方法和运行控制”状态下，单击“方法”菜单，选择菜单中“新建方法”，调用化学工作站的默认方法DEF-LC.M ，选择“方法”菜单下的“编辑完整方法”，设置好泵参数、进样方式、柱箱温度、波长、积分参数等，即可开始编辑一个完整地方法。

b)方法存贮：在“方法和运行控制”状态下，单击“方法”菜单，选择菜单中“方法另存为”选项，方法以检测项目名存贮。

三、样品信息编辑a)运行单个样品：在“方法和运行控制”状态下，单击“运行控制”菜单，选择“样品信息”进行样品信息编辑。

安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。

如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。

流动相选择注意事项：①避免使用高粘度的溶剂作为流动相；②所选用的流动相一定要与样品相溶；③各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

b.反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.准备工作①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。

注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。

安捷伦1260操作规程安捷伦（Agilent）1260操作规程一、仪器概述安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于液相色谱分析的仪器，具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。

该仪器由进样器、色谱柱、色谱泵、检测器等组成。

二、仪器准备1. 确保仪器的电源已连接并接通。

2. 检查进样器、色谱柱和检测器是否安装正确。

3. 检查液相色谱仪的液相系统是否已进行适当的液相填充，以及是否有足够的溶剂。

三、方法设置1. 打开色谱软件，并选择合适的方法模板。

2. 根据分析需求，在方法设置中输入样品信息、进样量、流速等参数。

3. 设置检测器的波长、增益和测量范围。

四、进样操作1. 打开进样器的盖子，将待测样品加入样品瓶中。

2. 点击软件中的进样按钮，设置样品名称和进样量。

3. 将样品瓶放入进样器，并关闭盖子。

4. 点击软件中的进样按钮，开始进样。

5. 进样完成后，从进样器中取出样品瓶，并将它放入垃圾桶中。

五、色谱柱操作1. 打开色谱柱的阀门，并将柱端与色谱柱连接。

2. 检查色谱柱是否没有泄漏，如果有泄漏，则需重新连接。

3. 检查色谱柱的温度，确保它处于合适的温度范围内。

六、液相泵操作1. 打开液相泵的电源，并连接到电脑上。

2. 设置合适的流速和梯度梯度。

3. 点击软件中的启动按钮，开始进行分析。

七、数据分析1. 使用色谱软件进行数据采集和分析。

2. 根据需要选择适当的数据处理方法，如峰面积计算、定量分析等。

3. 导出分析结果并保存。

八、仪器维护1. 分析结束后，关闭液相泵、进样器、色谱柱和检测器等设备的电源。

2. 清洗色谱柱和进样器，保持其清洁。

3. 定期检查仪器的连接线和电源线是否有松动或损坏。

九、安全操作1. 在操作仪器时，注意安全，避免接触到有害化学品。

2. 在操作过程中，严禁随意触摸仪器或移动连接线。

3. 在操作过程中，如遇到异常情况，请及时停止分析并向管理员报告。

通过以上操作规程，可以有效地使用安捷伦1260高效液相色谱仪进行样品分析。

Agilent1260液相色谱仪器操作规程一.生产厂家：美国Agilent二.到货日期：2011年1月三.附件：电脑、打印机四.使用范围：用于三聚氰胺，维生素A、D、E,β-胡萝卜素，牛磺酸，山梨酸、苯甲酸，乳糖、蔗糖等的检测五.工作环境：温度15℃~30℃，湿度20%~80%六.操作步骤:1.开机前准备：1.1.打开仪器室的空调。

1.2.配制流动相（按国标）,准备好蒸馏水、乙腈和甲醇。

2.开机：2.1.打开1260液相色谱仪器的进样器、泵、柱温箱和检测器的电源。

2.2.打开计算机。

2.3.打开“仪器1联机”图标，各模块完成自检。

2.4.点击“打开”图标，进入化学工作站。

3.设置运行模块和方法3.1.进样器（自动进样器）3.1.1.设置进样量，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，按照国标，检测不同物质，设定不同的进样量。

反相：最大进样量为100ul，抽取速度一般设定200ul/min。

正相：最大进样量为500ul，抽取速度一般设定200~500ul/min。

3.1.2.设置进样器停止时间，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，如标样的出峰时间为7分钟，停止时间可以设置为8分钟以上。

3.2.泵（四元泵或单泵）3.2.1.泵的流速：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，按照国标要求，如设置1.00ml/min。

3.2.2.如果是四元泵，可选择溶剂瓶，输入需要使用的各溶液的比例，如B 蒸馏水90%，C乙腈10%，点击“确认”。

3.2.3.在“泵”的模块中点击鼠标右键，点击“控制”，选择“泵”（打开），确认。

3.2.4. 设置泵停止时间：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与进样器一致/无限制”。

3.2.5. 压力限值：最小值一般设0bar，最大值一般设100bar。

3.3.柱温箱3.3.1.设置柱温箱的温度：在“柱温箱”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，左边按照国标要求可设置，比如35度，一般右边设置同左边。

标准操作规程STANDARD OPERATING PROCEDURE的准确性，特制定此规程。

2 范围：本规程适用于Agilent 1260高效液相色谱仪的使用、维护和保养。

3 责任者：化验员4 程序：4.1 开机4.1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows 7画面。

4.1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。

待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。

（注意：在“仪器1脱机”关闭的情况下，“仪器1联机”方能打开。

）4.1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。

4.1.4 保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。

单击“确定”。

（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。

4.1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。

右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量，从0 ml/min 逐渐变为3ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。

右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。

4.1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。

4.2 数据采集方法、系列编辑：4.2.1 编辑完整方法：4.2.1.1 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。

4.2.1.2 方法信息：在“方法注释”中写入方法的相关信息。

一、开机1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。

A瓶：为水相B瓶：为有机相。

2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。

3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。

4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；——中下部为动态监测信号；——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。

二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。

2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。

单击OK，进入下一画面。

3、泵参数设定：进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。