实验二十四从牛乳中分离酪蛋白

实验报告一、实验名称：从牛奶中分离‎酪蛋白二、实验目的：1.学习从胶体中‎提取某一类物‎质的方法。

2.学习蛋白质的‎各种颜色反应‎及其原理。

三、实验原理：1.蛋白质是两性‎化合物，溶液的酸碱性‎直接影响蛋白‎质分子所带的‎电荷。

当调节牛奶的‎p H值达到酪‎蛋白的等电点‎（p l）4.8左右时，蛋白质所带正‎、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的‎溶解度最小，会以沉淀形式‎从牛奶中析出‎。

2.缩二脲反应原‎理：具有两个或两‎个以上肽键的‎化合物在碱性‎条件下与Cu‎2+反应,生成红紫色的‎络合物。

所有的蛋白质‎均有此显色反‎应。

3.蛋白黄色反应‎原理：硝酸将蛋白质‎分子中的苯环‎硝化，在加热状态下‎产生了黄色硝‎基苯衍生物，再加碱颜色加‎深呈橙黄色。

这是含有芳香‎族氨基酸特别‎是含有酪氨酸‎和色氨酸的蛋‎白质所特有的‎颜色反应。

4.茚三酮反应原‎理：蛋白质与茚三‎酮共热，产生蓝紫色的‎还原茚三酮、茚三酮和氨的‎缩合物。

此反应为一切‎氨基酸及α-氨基酸所共有‎。

四、实验步骤及现‎象：1.取50mL脱‎脂牛奶于15‎0mL烧杯中‎，用热水浴加热‎至40℃，维持此温度，边搅拌边加稀‎醋酸（1：9）溶液约2mL‎——有白色沉淀析‎出。

2.继续搅拌并使‎悬浊液冷却至‎室温，然后将混合物‎转入离心杯中‎，于3000r‎/min离心1‎5min。

3.离心完毕后，上清液倒入乳‎糖回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）搅匀，然后用布氏漏‎斗减压过滤，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗涤沉‎淀2次，每次约10m‎l，最后用5ml‎乙醚洗涤沉淀‎一次，减压过滤至干‎——得到干燥的白‎色固体。

4.将干粉铺于表‎面皿上，称量并计算牛‎奶中酪蛋白含‎量。

5.称取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氢氧化钠‎溶液的生理盐‎水（5mL）中，然后滴加3-4滴1%硫酸铜溶液，振荡试管——溶液变成紫色‎。

五、实验数据：空表面皿的质‎量m0=28.15g表面皿与酪蛋‎白的总质量m‎1=31.78g牛奶中酪蛋白‎的质量m=m1-m0=3.63g六、讨论与感想：1.牛奶是一种胶‎体，在正常情况下‎是均一稳定的‎，要想分离出其‎中的某一成分‎，就应该想办法‎使这种成分变‎成沉淀析出。

实验从牛乳中分离酪蛋白一、目的要求掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理，学会操作方法。

二、实验原理牛乳中含有多种蛋白质，它们有着不同的性质，在脱脂牛乳的蛋白质中酪蛋白约占80%，酪蛋白是一类含磷蛋白质的复杂混合物。

利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调到4.7（酪蛋白的等电点）时，酪蛋白就沉淀析出。

再用乙醇和乙醚洗涤沉淀，除去脂类杂质，便可制得纯酪蛋白。

三、实验器材恒温水浴、普通离心机、精密pH试纸或酸度计、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、离心管（80 mL）、量筒、烧杯（100 mL）、玻棒、电子天平。

新鲜牛乳。

四、实验试剂1．95%乙醇2．乙醚3．0.2 mol/L醋酸溶液4．0.2 mol /L pH 4.7醋酸–醋酸钠缓冲液，配制方法如下：先分别配制A 液和B 液：O）27.22A 液（0.2 mol / L 醋酸钠溶液）称取分析纯醋酸钠（NaAc·3H2g溶于蒸馏水中，定容至1 000 mL。

B 液（0.2 mol / L 醋酸溶液）称取分析纯冰醋酸（含量大于99.8%）12.0 g溶于蒸馏水中，定容至1000 mL。

取A液885 mL和B液615 mL混合，即得pH 4.7 的醋酸－醋酸钠缓冲液1 500 mL。

五、操作步骤1．取30 mL鲜牛乳，置100 mL烧杯中，加热至40 ℃。

在搅拌下慢慢加入预热至40 ℃、pH 4.7的醋酸–醋酸钠缓冲溶液40 mL，用精密pH试纸或酸度计检查pH，再用0.2 mol / L醋酸溶液调至pH 4.7，静置冷至室温。

2．悬浮液出现大量沉淀后，转移至离心管中，在3 500 r / min下离心10 min，弃去上清液，所得沉淀为酪蛋白的粗制品。

3．用40 mL蒸馏水洗涤沉淀，将沉淀搅起，同上离心分离职，弃去上清液。

加入30 mL 95%乙醇，把沉淀充分搅起至成悬浊液，将其转移到布氏漏斗中抽滤，先用30 mL 95%乙醇洗涤，再用30 mL乙醚洗涤，最后抽干制得酪蛋白。

牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。

牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。

酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。

乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。

本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。

2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。

但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。

3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。

考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。

当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。

在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。

三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。

从牛奶中提取酪蛋白实验报告实验目的：通过牛奶中的酪蛋白提取实验，学习酪蛋白的结构、性质和提取方法，掌握酪蛋白的分离技术和纯化技术，进一步了解蛋白质的基本研究方法。

实验原理：酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质成分，它具有重要的营养和功能作用。

酪蛋白是一种具有多种构象和功能的复合蛋白质，在水溶液中可形成多种不同类型的聚集体，如微胶粒、聚集和凝胶，这些聚集类型与酪蛋白的结构和功能密切相关。

酪蛋白具有一定的疏水性，分子内具有四个疏水和一个亲水的疏水环和亲水链结构，酪蛋白还含有大量的氨基酸残基，其中包括5%左右的带电氨基酸。

牛奶中的酪蛋白可以通过离心、酸沉淀、盐析和凝胶过滤等方法进行分离和纯化。

酸沉淀法是目前常用的分离和提取方法，其原理是在酸性条件下，酪蛋白分子失去电荷平衡，发生凝固，形成凝胶状物，从而与其他物质分离。

实验步骤：1、准备工作(1) 将所有试剂和设备准备好，并洗涤干净。

(2) 将牛奶样品加热至80℃，进行杀菌处理。

2、酸沉淀法提取酪蛋白(1) 取适量的牛奶样品置于容器中，加入适量的盐酸调节至pH值为4.6，搅拌均匀。

(2) 加入同等体积的乙醇，混合均匀。

(3) 离心分离出沉淀，用纯净水洗涤数次，使沉淀中的酸性物质除去。

(4) 将沉淀转移到干燥皿，放置于低温干燥箱中干燥。

(5) 称取干燥后的酪蛋白样品重量，计算得到收率。

3、检测酪蛋白的含量和纯度(1) 构建标准曲线，按照酪蛋白样品体积一定比例浓度溶液进行稀释，分别取10μl、20μl、30μl、40μl、50μl的样品，加入PBS缓冲液中，浓度从高到低依次用Bradford 法进行检测吸光度，并通过标准曲线计算出待测样品的酪蛋白含量。

(2) 通过SDS-PAGE方法检测酪蛋白的纯度和电泳图谱。

将待测样品和已知浓度的酪蛋白标准品一同进行SDS-PAGE电泳，经过染色和脱色处理后，观察分离出的蛋白条带，利用比色、图像分析软件等工具进行定量测定，并计算出待测样品中酪蛋白的纯度和分子大小。

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶小组成员：实验时间：一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析二：报告撰写者三、小组成员实验仪器 温度计、布氏漏斗（*）、pH 试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml 的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm ×8cm 厚度120nm ）成品（*）、培养皿9—10cm （*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm （*）、752型分光光度计（*）、细布（*）0.5ml 、1.0ml 、2.0ml 、5.0ml 的移液管、试管、试管架、 四、实验材料牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml 、金典200ml 、1.66g 巴比妥（*）、12.76g 巴比妥钠（*）、0.5g 氨基黑10B （*）、50ml 甲醇AR （*）、100ml 冰醋酸AR （*） 、95%的乙醇250ml （*)、95%的乙醚100ml （*）、0.2mol/L 的乙酸100ml （*）、0.2mol/L 的乙酸钠100ml （*）、25g 氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg 五水硫酸铜（*）、60mg 酒石酸钾钠（*） 所需试剂配制方法：乙醇乙醚混合液的配制： 10ml95%的乙醇10ml95%的乙醚乙醇钠缓冲液的配制： 0.2mol/L 的乙酸51ml0.2mol/L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制： 巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g染色液的配制： 0.5g 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制： 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水透明液的配制： 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR0.05mol/L 氢氧化钠溶液的配制： 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制： 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制：15mg 五水硫酸铜60mg 酒石酸钾钠标准酪蛋白溶液A 的配制（10mg/ml ）： 用0.05mol/L 氢氧化钠溶液配制10ml从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液1、2的配制（2-9mg/ml ）：配制巴比妥钠缓冲液（pH8.6,0.06mol./L ）,将上述二者混合后定容于1000ml+40ml 蒸馏水，混匀既得染色液配制乙醇乙醚1:1的混合液配制pH4.6的乙酸钠缓冲液（0.2mol/l ）混匀得染色液混匀得透明液溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，加入10%氢氧化钠溶液3ml ，用蒸馏水稀释到10ml ，用棕色瓶避光保存用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制10ml标准酪蛋白溶液B的配制（1500μg/ml）：用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液3、4的配制（50-1500μg /ml）：用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制七、实验目的1.掌握从牛奶中提取酪蛋白的方法2.了解蛋白质分离纯化的基本办法3.学习电泳的基本原理及掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离酪蛋白的具体操作4.掌握双缩脲法和紫外吸收法测定蛋白质含量的原理及操作方法并比较两种方法5.熟悉分光光度计的原理和操作6.比较特仑苏与金典中的酪蛋白含量八、实验原理酪蛋白在其等电点时静电荷为零，同种电荷的相互排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调节到PH4.6，酪蛋白就可以从牛乳中分离出来。

牛奶中提取酪蛋白的实验报告牛奶中提取酪蛋白的实验报告一、引言牛奶是我们日常生活中常见的饮品，而酪蛋白则是牛奶中的重要营养成分之一。

酪蛋白是一种高质量的蛋白质，对人体具有重要的营养和生理功能。

提取牛奶中的酪蛋白并对其进行实验分析具有重要的理论和应用意义。

本文将从实验方法、实验步骤、实验结果以及个人理解等方面进行深入探讨。

二、实验目的本次实验的主要目的是通过简单的化学方法，从牛奶中提取酪蛋白，并对其进行分析和检测。

通过实验，我们旨在掌握酪蛋白的提取方法，加深对其性质和结构的理解，同时培养实验操作的能力和科学精神。

三、实验方法1. 实验仪器：酪蛋白提取仪、离心机、紫外-可见分光光度计等。

2. 实验试剂：硫酸、乙醇、盐酸、酚酞指示剂等。

3. 实验步骤：（1）取适量牛奶，加入盐酸搅拌，使牛奶凝固。

（2）用离心机离心，将凝固的混合物分离。

（3）将分离得到的固体与乙醇反复洗涤。

（4）用酚酞指示剂检测酪蛋白。

四、实验结果通过实验操作，我们成功地从牛奶中提取得到了酪蛋白的固体物质，并经过乙醇洗涤后，得到了较纯净的酪蛋白样品。

经过紫外-可见分光光度计检测，酪蛋白在特定波长下呈现出明显的吸收峰，证明其成功提取。

经过比色法测定，我们得到了酪蛋白的溶液浓度，为XX mg/L。

五、个人理解通过本次实验，我深刻理解了酪蛋白在牛奶中的提取方法和技术，并对其在生物学和营养学领域的重要作用有了更加深入的认识。

酪蛋白的提取实验也启发我对科学研究的兴趣，我希望能在未来的学习和实验中进一步探索酪蛋白的性质和功能，为人类健康和营养贡献自己的一份力量。

六、总结本次实验通过从牛奶中提取酪蛋白的过程，让我们更加直观地了解了酪蛋白的存在和特性。

实验结果也验证了酪蛋白的成功提取，并为我们以后的相关研究提供了基础和参考。

希望通过今后的努力，能进一步挖掘和应用酪蛋白这一珍贵的营养成分。

在本文中，我们根据提供的内容和主题，详细介绍了牛奶中提取酪蛋白的实验过程和结果，同时分享了个人对这一实验的理解和展望。

实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。

2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。

二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。

四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。

B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。

取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。

4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。

五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。

观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。

2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。

3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。