ATP生物发光检测方法

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优点
• 目前生物荧光反应法被广泛用于食品加工
条件的快速评价和食品中微生物的快速检 测，同时在HACCP管理中也被广泛用于关 键控制点检测，与传统检测方法不同之处 在于几分钟内可获得结果，而且荧光光度 计是便携式的，使用方便，适合现场检测， 不仅可以检测微小的污染物水平，还能检 测食品加工设备及其表面的清洁程度。
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• 。该检测仪在对现有产品进行分析的基础上，选
择H5773-02光电倍增管作为光电转换器件，其检 测波长与生物发光反应所释放荧光波长一致，可 有效提高检测灵敏度。
• 采用自动加样技术，在暗室内加入发光反应试剂，
消除了外界光的干扰，且获得了反应最初的信号。
• 将检测仪与计算机连接测量，获得了各反应所释
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检测仪器
• 结构原理 • 主要有三部分：自动进样单元、光电转换
单元和信号采集处理及控制单元
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• 其中，自动进样单元包括三套蠕动泵 。根据测试需要，
蠕动泵在控制单元控制下，向光电转换单元中的样品池加 入对应反应试剂。光电转换单元包括检测样品池和光电转 换器件。为消除外界光的干扰，整个光电转换单元被密封 在暗盒中。光电转换器件将反应释放荧光转化为电信号， 由信号采集处理单元采集并处理，并对测试结果进行实时 显示和存储。
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• 在反应中，加入发光反应试剂时，体系中样品浓
度相对较高，因此在短时间内即迅速反应释放大 量荧光，此时荧光光强较强，因此测量结果可能 会超出系统的测试量程。由于本仪表的最大输出 电压为2500 mV，反应初期释放的荧光可能会超 出该范围，在图中表现为前端的水平直线。随着 反应进行，体系中样品和试剂的浓度逐渐降低， 所释放荧光随之逐渐衰减。由图可见，不同样品 浓度的ATP随反应进行，进入测量量程的时间不 同，浓度越高，衰减越慢，进入测量量程的时间 越长，反之越短。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
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• 实验选择标准ATP样品作为检测对象，浓度
范围为10-6～10-14mol／L，实验中所用荧 光素及荧光素酶购自美国普洛麦格公司。 实验采用联机测量方式，将本检测仪与计 算机通过。RS232接口相连接，仪表信号采 集单元采集荧光信号后直接上传至计算机 并将测试结果实时显示。测量结果如图4所 示。
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• 图中各响应曲线400 s内的测量值进行积分，作为各浓度
样品的输出信号。输出信号与浓度的关系如图5所示。由 图可以看出，输出信号随浓度增加而增加，且有明显梯度， 两者的线性相关系数达到0.986。这一结果说明本检测系 统可以对ATP浓度进行快速检测。由于细菌细胞中所含 ATP含量基本一致，因此，本检测仪可实现对细菌总数的 现场快速检测。
放荧光强度的时间响应曲线。
• 本设计的针对细菌总数的检测仪具有检测速度快、
自动化程度高、操作简单、小型便携等特点，在 口岸、卫生监管部门、食品生产部门等对产品、 环境等的卫生状况进行现场快速检测领域具有很 好的应用前景。
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质
• 检测ATP含量的一种方法是用荧光光度计法，生物发光是
活细胞在荧光素酶催化下发出的荧光，目前使用的荧光素 酶来源于北美的萤火虫，相对分子质量为62000的蛋白质
• 萤火虫荧光素酶简称虫光素酶，是一种能将化学能转变为
光能的活性蛋白质，即生物催化剂。ATP在虫光素酶的催 化作用下，与荧光素在有氧环境及二价镁离子作用下，反 应释放出荧光。当荧光素及虫光素酶过量情况下，释放的 荧光与ATP在一定范围内成线性关系，因此可以通过测量 荧光光强检测样品中的ATP，进而检测其中的细菌总数。
ATP生物发光检测方法
ATP生物发光技术以生物体内的ATP作为检测 对象，不仅包括细菌（大肠杆菌，沙门氏菌， 志贺氏菌等），也包括体细胞在内的食品残 渣等食品污染物，因此适合在食品卫生检测 领域对卫生状况进行快速检测。 ATP生物发光检测方法具有检测速度快、成本 低、易于操作等特点
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检测原理
• ATP即三磷酸腺苷，是广泛存在于生物体内的一种能量物