不规则抗体检测标准操作流程
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不规则抗体筛检质控品标准操作程序(SOP)一、用途本试剂盒用于长春博迅生物技术有限责任生产的抗人球蛋白检测卡(12卡/盒)、不规则抗体检测试剂(人血红细胞)(4%,5ml/瓶)进行的不规则抗体筛检实验的室内质量控制。
二、准备工作1、将质控品从冰箱取出后平衡至室温。
2、观察检测卡外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡平衡至室温(18-25℃),再用专用离心机离心5分钟。
三、操作步骤1、将抗人球蛋白检测卡做好标记;2、将不规则抗体检测试剂(人血红细胞)用低离子强度盐溶液稀释到细胞浓度为0.8%;3、将0.8%的红细胞按照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ顺序加到抗人球蛋白检测卡1~3管和4~6管中,50μl/管。
4、分别在前3管加入样本1,后3管加入样本2,50μl/管。
5、将检测卡置37℃孵育器中15分钟。
6、即刻使用专用离心机离心5分钟(900 rpm 2分钟,1500 rpm 3分钟),取出,肉眼判定结果。
结果判定:1、本产品为非定值质控品,格局表中所提供的结果仅为定性结果,因此建议各实验室对每批号的产品自行建立相应的参考值。
2、抗体筛检:室内质控品按阳性(样本2)、阴性(样本1)设计,阳性质控品含有已知其特异性的不规则抗体,阴性质控品不含有不规则抗体。
3、质控品检测结束后,用户可将检测结果与参考值进行比较,阳性质控结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异,或阴性质控出现阳性结果时,均视为失控。
失控后要分析查找原因,必要时重复实验,确认失控原因消除后开展正常检测工作。
质控品抗A 抗B 不规则抗体样本1 + + 0样本2 0 0 +“0”代表阴性,“+” 代表阳性。
特异性及效价:O血清:与A1、B型红细胞均发生凝集,与O型红细胞不发生凝集,与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阴性,无溶血及其他不易分辨现象;O血清与A1型红细胞反应,效价≥8,与B型红细胞反应,效价≥8。
AB血清(含IgG型抗D抗体):与A1、B、O型红细胞均不发生凝集,与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阳性,无溶血及其他不易分辨现象;试管抗人球法效价为2~8;微柱凝胶法效价为4~16。
BioVue不规则抗体筛查操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称:不规则抗体筛查2.检验方法名称:柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
具有已知抗原的人红细胞将与血浆中相应的抗体发生凝集反应,BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
将试剂卡离心后,发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面,而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌:美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2.代号:BioVue -poly Cassettes3.包装规格:400卡/箱试剂卡(707300);100卡/箱试剂卡(707350)4.试剂成分:抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)检测卡有6根微柱组成,每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白,大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.01M的EDTA.成分描述第1~6柱:抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特异性抗-lgG(兔)抗-C3b(鼠单克隆)(克隆F7G3) 抗-C3d(鼠单克隆)(克隆C4C7) FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期:储存方法:2~25℃环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中,也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源(如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等)很近或阳光直射的地方。
效期:试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机;BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备:在采集标本前对病人/献血者无特殊要求,血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行,应将标本置于2-8℃保存。
六、试剂准备:抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)检测卡为即用型产品。
每一微柱中含有仅适用于一个测试的试剂。
不规则抗体筛检卡标准操作方法
(一)原理:微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验,也可称之微柱凝胶血凝试验(Microcolumn Gel Heamagglutination Assay,MGHA)在微柱凝胶管中,红细胞和相应抗体结合后,形成红细胞凝集团块。
在一定离心力下,该凝集团块位于胶表面或胶中;而红细胞未和相应抗体结合,仍为分散的
红细胞,在同样的离心力下,红细胞沉降到微柱管尖底部。
(二)操作步骤:
1、红细胞悬液的制备:将筛检红细胞或谱细胞配成0.8%浓度的悬液。
2、将准备好的不规则抗体筛检卡做好标记;
3、将配好的筛检细胞或谱细胞悬液加入标好的微管中,各一滴(或50μl);
4、分别立即加入被检者血清1滴(或50μl);
5、加样后的试剂卡,置37℃孵育器中孵育15分钟;
6、使用专用离心机离心5分钟(900rpm2分钟,1500 rpm3分钟),取出肉眼
观察结果。
(三)结果判定:根据所提供的筛检红细胞或谱细胞的反应格局来判定结果例:按Ⅰ(-)、Ⅱ(4+)、Ⅲ(-)的实验结果及提供如下的筛检红细胞反应格局来分析
阴性结果用排除法,阳性结果用可能包含法。
以前五种抗原为例:
Ⅰ(-):可排除D、C、e;
Ⅱ(4+):判断可能含有D、C、E、c、e;
Ⅲ(-):可排除D、C、c、e;
综上,可认为:此样品血清中可能含有-E。
不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体,为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。
(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应,使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。
2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷,可以中和红细胞表面的负电荷,使红细胞之间距离减少,引起正常红细胞可逆性凝集。
无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集,当加入中和液后,则凝集消散,而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集,则不能消散,以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。
3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂,红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后,在离心力的作用下不断向管底沉降,并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集,凝胶颗粒具有分子筛的作用,可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒,使其悬浮在凝胶上端,未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3),红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后,在离心力的作用下不断向管底沉降,并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集,玻璃微珠具有分子筛的作用,可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠,使其悬浮在玻璃微珠层的上端,而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。
(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。
(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。
不规则抗体检查不规则抗体检查也称红细胞抗体检查.不规则抗体是指抗A、抗B以外的血型抗体.ABO系中的亚型,变异型抗A1或某种抗B等抗体,也称为不规则抗体。
其多为IgG抗体。
主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应.临床上通常所称的“同型血”实际上是指ABO血型系统和Rh血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ABO血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。
红细胞血型抗体检查适用于下列情况:1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时;2、供血者血清抗体筛检;3、输血前受者血清抗体检查;4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时;5、孕妇血清的抗体检查;6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查;7、直接抗球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。
1。
原理利用筛选细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应,如果出现凝集表示血清中存在不规则抗体。
2。
试剂2.1 5%筛选细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操作步骤3.1 取试管三支,标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清(血浆)2滴,加5%筛选细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)各1滴。
3。
2 各加LIM0。
7ml,混合均匀后,再各加Polybrene 溶液2滴,并混合均匀。
3.3 用BASO专用离心机1000G离心力,离心10秒,然后把上清液倒掉,不要沥干,让管底残留约0。
1ml液体。
3。
4 轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则必须重作.3.5 最后加入Resuspending 2滴,轻轻转动试管混合并同时观察结果。
如果凝集散开,表示是由Polybrene引起的非特异性聚集,抗体筛检结果为阴性;如凝集不散开,则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应,抗体筛检结果为阳性,应进一步作抗体鉴定。
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行,这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定,发现临床上有意义的抗体,避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套)起反应,以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后,再进行不规则抗体鉴定,即利用谱红细胞(11套鉴定细胞)与待检者的血清反应,根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml,分离血清,48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞:由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂,每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原:D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)进行抗体筛选,见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞:除包括常见的抗原以外还有:C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定,见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂:多特异性抗球蛋白血清(IgG、C3d)。
5.4.致敏红细胞(质控细胞)。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1.取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2.对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%~5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴,37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒,观察凝集和溶血情况,并记录反应情况于表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性,继续做以下试验。
红细胞不规则抗体检测操作规程1.0 目的规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作,保证临床用血的安全性及有效性。
2.0 适用范围适用于输血科(血库)抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。
3.0 材料抗球蛋白试剂、筛选细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管。
4.0 设备普通离心机、血型血清专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。
5.0 抗体筛选操作步骤5.1 取试管3支,分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,各加入患者血清2滴,再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞2滴。
5.2 混匀,37℃孵育1h。
5.3 1300g离心15s。
5.4 轻轻悬浮细胞,肉眼观察凝集结果并记录。
若肉眼不见凝集,以显微镜检查。
5.5 对没有凝集的试管,用盐水充分洗涤3次。
5.6 最后一次洗涤后,离心去上清,将试管边缘盐水用滤纸吸干。
5.7 按试剂说明书加最适释度抗球蛋白试剂1滴,充分混合。
5.8 1300g离心15s。
轻轻悬浮细胞,肉眼观察凝集反应,记录结果。
6.0 抗体鉴定步骤6.1 抗体筛选阳性,应作抗体鉴定试验以确定其特异性。
6.2 依据谱细胞数量的多少(一般由8~16个单人份的已知血型表型的O型红细胞组成)取相应数目的试管,分别标记序号,各加入患者血清2滴,再分别加入谱细胞2滴。
6.3 混匀,37℃孵育1h。
6.4 1300g离心15s。
6.5 轻轻悬浮细胞,肉眼观察凝集结果并记录。
若肉眼不见凝集,以显微镜检查。
6.6 对没有凝集的试管,用盐水充分洗涤3次。
6.7 最后一次洗涤后,离心去上清,将试管边缘盐水用滤纸吸干。
6.8 按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂1滴,充分混合。
6.9 1300g离心15s。
轻轻悬浮细胞,肉眼观察凝集反应,记录结果。
7.0 注意事项7.1 按《临床输血技术规范》第十七条要求,必须对交叉配血不合时,对有输血史、妊娠史或短期内接受多次输血者进行抗体筛选试验。
7.2 抗体筛选有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体,并可在配血前有足够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液,避免由于寻找不到相合的血液而造成患者不能及时输血。
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程(SOP)
目的:输血前进行检验查,可对有妊娠史,多次输血史,大量输血的病人进行不完全抗体的初选.
操作:
1、取3—5名“O”型正常人抗凝血(新鲜血常规抗凝血)进行等量混合。
2、用无菌生理盐水洗涤3—5次。
3、配制成2%红细胞悬液(上述离心沉淀红细胞1ml加生理盐水49mL混匀)待用。
4、取病人(受血者)血清或血浆100mL和2%红细胞悬液100mL等到量混合,然后离心,侄去上清液,混匀,倒在玻片上,显微镜观察是否凝集。
5、如有凝集,说明该受血者体内存在不规则抗体,毅然交叉配血不能进行。
6、如无凝集才能配血。
XXX医院不规则抗体筛查试验操作规程1.目的为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作,保证检查结果准确和临床输血安全、有效,依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。
2.适用范围本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。
3.职责输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定,但只对所筛选或鉴定的标本负责。
4.相关文件试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序5.相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录6.实验原理采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清(血浆)与筛选红细胞反应,检测受检者血清(血浆)中是否存在红细胞不规则抗体,红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应,根据反应格局鉴定抗体特异性。
7.仪器设备和检测环境7.1.仪器设备等:玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
7.2. 检测环境:室温应控制在18~27℃,湿度应保持在30~70%。
8.试剂①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d),均为有合格证件的正品。
②市售O型筛选红细胞:为三支以上不同人份的3%筛选红细胞,均为有合格证件的正品。
或自制O型筛选红细胞:选择已确认ABO血型为O型的健康者,采集EDTAK抗凝血2标本离心,取少许红细胞置于试管中,用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/分钟(1000g),每次离心1分钟,离心后将上清液全部倒出],再取30µl游离红细胞加入到标记为Ⅰ号的试管中,然后加入1ml生理盐水混匀,即得Ⅰ号O型3%的筛选红细胞;依同样方法分别制备不同人份的Ⅱ号和Ⅲ号O型3%的筛选红细胞。
不规则抗体筛查试验操作规程1.目的为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作,保证检查结果准确和临床输血安全、有效,依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。
2.适用范围本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。
3.职责输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定,但只对所筛选或鉴定的标本负责。
4.相关文件试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序5.相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录6.实验原理采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清(血浆)与筛选红细胞反应,检测受检者血清(血浆)中是否存在红细胞不规则抗体,红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应,根据反应格局鉴定抗体特异性。
7.仪器设备和检测环境7.1.仪器设备等:玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
7.2. 检测环境:室温应控制在18~27℃,湿度应保持在30~70%。
8.试剂①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d),均为有合格证件的正品。
②市售O型筛选红细胞:为三支以上不同人份的3%筛选红细胞,均为有合格证件的正品。
或自制O型筛选红细胞:选择已确认ABO血型为O型的健康者,采集EDTAK2抗凝血标本离心,取少许红细胞置于试管中,用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/分钟(1000g),每次离心1分钟,离心后将上清液全部倒出],再取30µl游离红细胞加入到标记为Ⅰ号的试管中,然后加入1ml生理盐水混匀,即得Ⅰ号O型3%的筛选红细胞;依同样方法分别制备不同人份的Ⅱ号和Ⅲ号O型3%的筛选红细胞。
9.血标本的处理将受检者血标本离心分离出血清(血浆)和压积红细胞,血清(血浆)备用;再吸取30µl 压积红细胞中的游离红细胞,加入1ml生理盐水中,混匀配成3%的自身对照红细胞悬液备用。
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程(SOP)
目的:输血前进行检验查,可对有妊娠史,多次输血史,大量输血的病人进行不完全抗体的初选.
操作:
1、取3—5名“O”型正常人抗凝血(新鲜血常规抗凝血)进行等量混合。
2、用无菌生理盐水洗涤3—5次。
3、配制成2%红细胞悬液(上述离心沉淀红细胞1ml加生理盐水49mL混匀)待用。
4、取病人(受血者)血清或血浆100mL和2%红细胞悬液100mL等到量混合,然后离心,侄去上清液,混匀,倒在玻片上,显微镜观察是否凝集。
5、如有凝集,说明该受血者体内存在不规则抗体,毅然交叉配血不能进行。
6、如无凝集才能配血。