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简述几种测定蛋白质方法及原理蛋白质是生物体内最重要的分子之一，其功能多种多样，涉及到生命的方方面面。
了解蛋白质的性质、结构和功能非常重要。
为了实现这一目标，科学家们开发了多种方法来测定蛋白质的存在和浓度，以及研究其结构和功能。
在本文中，我们将简要介绍几种常见的测定蛋白质方法及其原理。
一、低丰度蛋白质检测方法在复杂样品中，许多蛋白质的浓度很低，因此需要采用高灵敏度的方法进行检测。
以下是两种常见的低丰度蛋白质检测方法。
1. Western blotting方法Western blotting方法是一种常用的蛋白质检测方法，通过将蛋白质转移到固体支持体上，然后使用特异性抗体来探测目标蛋白质的存在。
这个方法的原理是在电泳分离后，将蛋白质转移到聚丙烯腈膜或硝酸纤维素膜上。
样品经过特异性抗体结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗来使目标蛋白质可见。
2. 质谱法质谱法是一种利用质谱仪测定蛋白质质量的方法。
这种方法的原理是将蛋白质分解成肽段，然后通过质谱仪测定这些肽段的物质质量。
质谱法可以提供非常准确和高灵敏度的蛋白质测定结果，适用于分析复杂样本中的低丰度蛋白质。
二、蛋白质浓度测定方法蛋白质的浓度是研究蛋白质的基础，因此准确测定蛋白质浓度非常重要。
以下是两种常见的蛋白质浓度测定方法。
1. 比色法比色法是一种通过测量某种化学试剂与蛋白质之间的化学反应来测定蛋白质浓度的方法。
布拉德福德比色法使用染料染色蛋白质产生吸光度，再根据标准曲线定量测定蛋白质浓度。
这种方法简单、快速且灵敏度较高，适用于大多数蛋白质样品。
2. BCA法BCA法是一种利用受体配合反应来测定蛋白质浓度的方法。
在这种方法中，受体配体（biotin-avidin 或biotin-streptavidin）与蛋白质中的特定残基（如组氨酸等）结合生成复合物，然后通过比色反应测定复合物的吸光度。
BCA法具有高灵敏度和较低的非特异性反应。
三、蛋白质结构分析方法蛋白质的结构直接影响其功能和性质，因此了解蛋白质的结构是非常重要的。
蛋白质各种定量方法的优缺点的比较令狐采学1．蛋白质的常规检测方法1.1 凯氏（Kjeldahl）定氮法一种最经典的蛋白质检测方法。
原理：样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化,含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫酸铵。
然后加碱蒸馏放出氨,氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。
优点：范围广泛、测定结果准确、重现性好缺点：操作复杂费时、试剂消耗量大1.2 双缩脲法常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质检测。
原理：双缩脲（NH3CONHCONH3）是3 分子的脲经180℃左右加热，放出1分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物（肽键中的氮原子和铜离子配价结合），称为双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，因此可用来测定蛋白质含量。
测定范围：1~10mg（有的文献记载为1~20mg）优点：较快速，干扰物质少，不同蛋白质产生的颜色深浅相近缺点：①灵敏度差；②三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。
1.3 Folin-酚试剂法原理：Folin-酚法的原理与双缩脲法大体相同，利用蛋白质中的肽键与铜结合产生双缩脲反应。
同时也由于Folin-酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸试剂被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色的钼蓝和钨蓝的混合物。
在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比，由此可测定蛋白质的含量。
测定范围：20~250ug优点：灵敏度高，对水溶性蛋白质含量的测定很有效缺点：①费时，要精确控制操作时间；②Folin -酚法试剂的配制比较繁琐,且酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油、还原剂(二硫代苏糖醇、巯基乙醇)、EDTA和脲素均会干扰反应。
1.4 紫外吸收法原理：蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基使其在280nm处具有紫外吸收，其吸光度与蛋白质含量成正比)。
此外，蛋白质溶液在280nm的吸光度值与肽键含量成正比，利用一定波长下蛋白质溶液的吸光度值与蛋白质浓度的正比关系可以测定蛋白质含量。
蛋白质的测定方法有哪些蛋白质测定是一个重要的生物化学实验，用于确定样品中蛋白质的含量和纯度。
目前常用的蛋白质测定方法主要有生物化学方法、光谱法、免疫学方法和质谱法等。
下面将详细介绍这些方法。
1. 生物化学方法：生物化学方法是一种常用的蛋白质测定方法，主要包括低里氏法、比色法和滴定法等。
低里氏法基于酵素反应测定蛋白质含量，其中最常用的是双维小麦胚芽过氧化物酶法。
比色法是通过染色剂和蛋白质的反应来测定蛋白质浓度，常用的比色剂有考马斯亮蓝G-250和布拉德福棕色R-250等。
滴定法是通过滴加蛋白质溶液的滴定剂，如硝酸银溶液和碘溶液等，来测定蛋白质的含量。
2. 光谱法：光谱法是利用蛋白质在特定波长下吸收光线的特性来测定蛋白质的含量和纯度。
UV-Vis吸收光谱法是最常用的光谱法之一，根据蛋白质在280 nm处吸收的特性来测定蛋白质浓度。
近红外光谱法也可以用于蛋白质浓度的测定，因为蛋白质的结构可以在近红外区域引起光的散射和吸收。
3. 免疫学方法：免疫学方法是利用抗体与特定蛋白质发生特异性反应来测定蛋白质的含量和纯度。
常用的免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫印迹法（Western blotting）和免疫沉淀法等。
ELISA是一种高灵敏度的蛋白质测定方法，通过抗原与特异性抗体在单克隆板上的特异性结合来测定蛋白质的含量。
Western blotting是一种常用于检测特定蛋白质的方法，通过电泳分离蛋白质，然后用特异性抗体检测目标蛋白质。
免疫沉淀法利用特异性抗体与目标蛋白质结合，然后通过共沉淀或差速离心的方式将目标蛋白质从混合物中分离出来。
4. 质谱法：质谱法是一种高分辨率的蛋白质测定方法，主要有质谱光查法（MS）和质谱对比法（MS/MS）两种。
质谱光查法通过蛋白质在质谱仪中的分子离子质量和电荷比来确定蛋白质的分子量和浓度。
质谱对比法则是将待测蛋白质与已知质量的蛋白质进行比较，从而确定样品中蛋白质的含量和纯度。
蛋白质测定方法蛋白质是生物体内一种重要的有机物质，对于生物体的生长、发育和代谢具有重要作用。
因此，蛋白质的测定方法显得尤为重要。
本文将介绍常见的蛋白质测定方法，希望能够为相关研究和实验提供帮助。
一、Lowry法。
Lowry法是一种常用的蛋白质定量方法，其原理是利用蛋白质与铜离子和碱性试剂在碱性条件下发生的还原反应，生成紫色络合物，通过比色测定蛋白质含量。
该方法具有灵敏度高、线性范围广、稳定性好的特点，适用于多种类型的蛋白质样品。
二、BCA法。
BCA法是一种基于铜离子的蛋白质测定方法，原理是蛋白质与试剂中的碱性铜离子在碱性条件下发生蓝色产物，通过比色测定蛋白质含量。
相比于Lowry法，BCA法具有操作简便、快速、灵敏度高的特点，适用于高通量的蛋白质测定。
三、Bradford法。
Bradford法是一种基于染料结合的蛋白质测定方法，原理是蛋白质与染料结合后产生颜色变化，通过比色测定蛋白质含量。
该方法具有操作简便、快速、灵敏度高的特点，对于一些含有胶体物质或其他干扰物质的样品，Bradford法的选择性更好。
四、UV吸收法。
UV吸收法是一种常用的蛋白质测定方法，原理是利用蛋白质特有的氨基酸在紫外光区域的吸收特性，通过测定蛋白质在280nm处的吸光度来定量测定蛋白质含量。
该方法操作简便、快速，适用于纯化后的蛋白质样品的测定。
五、荧光法。
荧光法是一种基于蛋白质荧光特性的测定方法，原理是蛋白质在特定激发波长下产生荧光信号，通过测定荧光强度来定量测定蛋白质含量。
该方法具有灵敏度高、选择性好的特点，适用于高通量的蛋白质测定。
六、总蛋白法。
总蛋白法是一种常用的蛋白质测定方法，原理是利用蛋白质与试剂中的染料结合后产生颜色变化，通过比色测定蛋白质含量。
该方法操作简便、快速，适用于多种类型的蛋白质样品。
总结。
蛋白质的测定方法多种多样，选择合适的方法需要根据样品的特性、实验的目的和仪器设备的条件来综合考虑。
希望本文介绍的蛋白质测定方法能够为相关研究和实验提供参考，促进科研工作的开展。
![蛋白质含量测定方法汇总[整理]](https://img.taocdn.com/s1/m/cc657e44a55177232f60ddccda38376baf1fe02d.png)
蛋白质含量测定方法汇总[整理]蛋白质含量测定是一种用于测定任何生物样品中蛋白质含量的有效测试方法。
此外，蛋白质含量也可以被用于检测不同生物样品中的样本污染程度的指标，以及生物样品中某种从另一个样本污染的量。
现今，存在许多蛋白质含量测定的方法，通常称作“蛋白质测定方法”，它们常用于检测各种类型的高分子生物物质，如蛋白质、核酸、多糖、脂类等。
下面总结了一些常见的蛋白质含量测定方法：1、分子吸光法：分子吸光法是一种常用的蛋白质测定方法，它利用液体或气体样品中分子的光吸收特性来测量蛋白质的含量。
它通过测量样品当量吸收辐射的强度来测量含量，并通过分子结构及激发能获取分子吸收率。
2、酶标法：酶标法是一种常见的蛋白质测定方法，它使用特定酶将蛋白质转化为可测试物质来准确估算样品中蛋白质含量。
此外，也可以用其他物质作为指示物来改变酶反应的速率，从而获取蛋白质含量。
3、体外测定法：体外测定法是一种常见的蛋白质测定方法，它可以任意选择探测，即特定蛋白质向特定外部刺激物反应的速率，以反映样品中的蛋白质含量。
它在分析较新的样品以及批量定量分析中有很大的优势。
4、表面增强拉曼光谱：表面增强拉曼光谱是一种新的蛋白质测定方法，它利用光的调制前后产生的均方根像素来测量蛋白质的含量，这种方法可在低浓度范围内准确定量样品中的蛋白质含量。
5、比多肽配体应答行为水平测定：比多肽配体应答行为水平是一种常见的蛋白质测定方法，它利用特指性多肽核酸探针乙酰化后，在特定条件下发生应答强度及反应速率的改变，从而测量样品中的蛋白质含量。
这是一种可以在短时间内实现高灵敏度和高精度的测定方法。
6、限制性酶体系：限制酶体系是一种常见的蛋白质测定方法，它利用限制性酶来切割或降解蛋白质链，从而得到可用于测定蛋白质含量的切片产物。
限制酶体系也能够有效地检测末端特异性蛋白质种类，以及它们的分布情况。
测定蛋白质常用方法印迹法是一种常见的定性分析方法，主要是通过利用电致沉淀效应，将蛋白质物质在电场中集中，形成一个凝胶层，以提取出蛋白质。
在实验中，先制备一个有活性、有保留度和有稳定性的蛋白质样品，然后将其放入体外，在受到电场作用下，蛋白质物质会被电致沉淀，形成一个凝胶层，从而获得蛋白质。
该方法的特点是准确度高，样品消耗量少，可以高效地完成蛋白质的测定，但对于那些含有非蛋白质物质的样品，其测定效果不理想。
（二）酶探针法酶探针法是一种定性分析，利用一种特殊酶和一种特殊探针，运用其特异性以及特殊的结构，来测定蛋白质的特殊部位。
实验中，首先选择一种酶，如DNase I、DNase II、RNase A，然后将其与相应的探针（如荧光标记的核酸或多肽）相结合，这样结合的物质会与蛋白质产生特异性的结合作用，从而可以测定蛋白质的特定位点。
优点是准确度高，可以测定蛋白质的特定位点，但由于其方法复杂，在一定程度上增加了实验技术难度。
二、定量分析（一）荧光法荧光法是一种常用的定量分析方法，主要利用某种荧光探针和荧光激发光，以及荧光探针的特异性与蛋白质的特异性，激发一定的荧光，从而测定蛋白质的含量。
实验过程中，首先将荧光探针结合到蛋白质上，然后把探针/蛋白质混合物放入荧光仪中，将一定强度的荧光激发光照射到探针/蛋白质混合物上，从而发生特定的荧光反应，通过记录荧光发射强度，就可以测定蛋白质的含量。
优点是准确度较高，可以在不同范围内快速地进行测定，而且样品消耗量少，但该方法的应用范围较窄，只能用于测定那些可以与荧光探针发生特异性结合的蛋白质。
（二）比色法比色法是一种定量分析方法，它利用蛋白质与一定比例的钠稀释液发生相互作用，产生稳定的色谱，从而测定蛋白质的含量。
实验过程中，先将蛋白质样品与钠稀释液做混合，然后在420nm的色谱仪上测定色谱，测定出其颜色深浅，然后利用已知的标准曲线，计算出蛋白质的含量。
比色法的优点是灵敏度高，可以在较低消耗的样品情况下完成蛋白质的测定，而且在实验中只需要使用普通的外设，操作简便，但是存在一定的滞后度，不能测定出瞬时变化的蛋白质含量。
测定蛋白质的方法蛋白质是生物体内重要的有机大分子，对维持生命活动起着重要的作用。
因此，测定蛋白质的含量和性质对于生物学、医学和食品科学等领域具有重要意义。
下面将介绍几种常用的测定蛋白质的方法。
一、紫外吸收法。
紫外吸收法是一种常用的测定蛋白质含量的方法。
蛋白质在紫外光下有较强的吸收作用，因此可以通过测定蛋白质在特定波长下的吸光度来确定其含量。
这种方法操作简便，结果准确，广泛应用于蛋白质含量的测定。
二、比色法。
比色法是通过蛋白质与某些化学试剂发生反应后产生色素，再利用分光光度计测定其吸光度来测定蛋白质含量的方法。
常用的比色试剂有布拉德福试剂、洛文斯试剂等。
比色法对于含有多种物质的样品也能准确地测定蛋白质的含量。
三、氨基酸分析法。
氨基酸分析法是通过水解蛋白质得到氨基酸，再利用色谱等方法对氨基酸进行分析，从而测定蛋白质含量的方法。
这种方法能够准确地测定不同氨基酸的含量，对于分析蛋白质的组成和结构具有重要意义。
四、免疫学方法。
免疫学方法是利用抗体与特定蛋白质结合的原理来测定蛋白质含量的方法。
常用的免疫学方法有酶联免疫吸附实验（ELISA）和免疫印迹等。
这种方法对于特定蛋白质的测定具有高度的特异性和灵敏度。
五、质谱法。
质谱法是利用质谱仪对蛋白质进行分析，从而测定蛋白质的含量和结构的方法。
这种方法能够准确地确定蛋白质的分子量、氨基酸序列和翻译后修饰等信息，对于蛋白质的深入研究具有重要意义。
总结。
以上介绍了几种常用的测定蛋白质的方法，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据需要选择合适的方法来测定蛋白质的含量和性质，从而更好地开展相关研究和应用。
希望本文能对您有所帮助。
检验蛋白质的方法
第一种方法是生物素标记法。
生物素标记法是通过将生物素与蛋白质结合，然后用生物素与酶的结合作用来检测蛋白质的存在。
这种方法具有灵敏度高、特异性强的特点，适用于检测蛋白质的存在和纯度。
第二种方法是免疫沉淀法。
免疫沉淀法是通过将抗体与蛋白质结合，然后用沉淀剂将蛋白质沉淀下来，最后通过洗涤和电泳等步骤来检测蛋白质的存在。
这种方法适用于检测蛋白质的结构和相互作用。
第三种方法是质谱法。
质谱法是通过将蛋白质进行分子质量的测定，然后通过质谱仪来检测蛋白质的存在和结构。
这种方法具有高灵敏度、高分辨率的特点，适用于检测蛋白质的组成和修饰。
除了以上介绍的方法，还有许多其他的方法可以用来检验蛋白质，比如酶联免疫吸附试验、免疫荧光染色法等。
这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法来进行蛋白质的检验。
总的来说，检验蛋白质的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行蛋白质检验时，我们可以根据需要选择合适的方法来进行检验，以确保检验结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法对大家有所帮助，谢谢阅读！。
检验科常见蛋白质检测方法解析蛋白质作为细胞的基本组成部分，扮演着生命活动中至关重要的角色。
在检验科中，蛋白质的检测是一项重要的内容，对于疾病的诊断、治疗以及生物学研究都具有重要意义。
本文将对检验科常见的蛋白质检测方法进行解析，包括免疫测定法、电泳法和质谱法。
一、免疫测定法免疫测定法是一种常用的蛋白质检测方法，其原理是利用特异性抗体与待测蛋白质发生免疫反应，从而实现蛋白质的定量或定性测定。
免疫测定法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）以及免疫印迹法（Western blot）等。
1. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种高灵敏度和高专一性的免疫测定法，广泛应用于临床检验和科研领域。
ELISA通常分为间接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA等不同类型。
其基本步骤包括：涂布抗原或抗体、加入样品、加入检测抗体和添加染色底物等。
2. 放射免疫测定法（RIA）RIA利用放射性标记的抗体或抗原与待测蛋白质进行竞争结合，从而测定样品中蛋白质的含量。
由于放射性同位素的高灵敏度，RIA适用于低浓度蛋白的测定。
3. 免疫印迹法（Western blot）Western blot是一种常用的蛋白质定性和半定量分析方法，用于检测蛋白质的分子量和定位。
其基本步骤包括：蛋白质分离电泳、膜传递、膜孔封闭、一抗结合、二抗结合和蛋白质可视化等。
二、电泳法电泳法是一种根据蛋白质在电场中迁移速度差异进行分离和检测的方法。
常见的电泳法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、SDS-PAGE和两性离子电泳等。
1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）PAGE是一种常用的蛋白质分离方法，通过不同分子量的蛋白质在电场中的迁移速度差异进行分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分为非变性PAGE和变性PAGE两种类型，根据样品的性质选择相应的方法。
2. SDS-PAGESDS-PAGE是一种基于蛋白质分子量的凝胶电泳方法，通过添加带负电荷的SDS（十二烷基硫酸钠）来线性化蛋白质，使其能够按照分子量大小进行迁移。
四种蛋白质含量测定方法的比较研究蛋白质是生物体内的重要成分，其含量的测定对于生物学、医学、食品科学等领域具有重要意义。
目前常用的蛋白质含量测定方法主要有四种，包括生物素-亲和法、BCA法、Lowry法和Bradford法。
下面将对这四种方法进行比较研究。
一、生物素-亲和法生物素-亲和法是一种基于亲和层析原理的蛋白质含量测定方法。
该方法利用生物素与亲和基团之间的非共价作用，将生物素标记的探针与目标蛋白质结合，通过洗脱和检测来测定蛋白质的含量。
该方法具有高灵敏度、高特异性和高重复性等优点，但需要使用生物素标记的试剂，成本较高。
二、BCA法BCA法是一种基于铜离子还原能力的蛋白质含量测定方法。
该方法利用蛋白质与铜离子的络合作用，还原离子中的铜离子，生成紫色络合物，通过比色法测定蛋白质的含量。
该方法具有灵敏度高、线性范围广、操作简便等优点，但受到还原剂和蛋白质成分的影响，结果易受到误差。
三、Lowry法Lowry法是一种基于蛋白质与酸性铜离子的还原反应的蛋白质含量测定方法。
该方法利用蛋白质与酸性铜离子的还原反应，生成紫色络合物，通过比色法测定蛋白质的含量。
该方法具有灵敏度高、线性范围广、重复性好等优点，但需要多个试剂的配制和操作，较为繁琐。
四、Bradford法Bradford法是一种基于染料结合的蛋白质含量测定方法。
该方法利用染料与蛋白质之间的非共价作用，形成蓝色复合物，通过比色法测定蛋白质的含量。
该方法具有灵敏度高、操作简便、适用于多种蛋白质的测定等优点，但受到盐离子和其他成分的影响，结果易受到误差。
综上所述，四种蛋白质含量测定方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据实际需求和实验条件进行综合考虑。
分析化学
结课作业
常见蛋白质测定方法的总结与比较
材料科学与技术学院
林化13-1班
刘旺衢
130534106
常见蛋白质测定方法的总结与比较
刘旺衢
（北京林业大学材料科学与技术学院林化13-1班 130534106，10083）
蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。
食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源。
具有糖类和脂肪不可替代的作用。
蛋白质与营养代谢、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关,是对人类最重要的物质之一。
准确精密的测定蛋白质，关乎人类的生产、生活、生存。
目前测定蛋白质含量的方法有多种,如凯氏定氮法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝染色法、酚试剂法等几种方法,下面本文将总结比较这五种蛋白质的测定方法。
一、凯氏定氮法
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。
即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。
由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。
蛋白质是含氮的有机化合物。
蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数计算蛋白质含量，即含氮量*6.25=蛋白含量。
凯氏定氮法具有灵敏度高, 样品用量少，最低可检出0.05mg氮；精密度、准确度高,平行误差一般小于0.5%；应用范围广,适用于一切形态的食品与生物样品；仪器装置简单,试剂廉价的优点。
但也存在操作比较繁琐费时,特别是蒸馏定氮过程的效率低,不利于大批样品的测定；定氮的结果既包括有机氮,也包括无机氮,有机氮中除蛋白氮外,还包括非蛋白氮,测定的结果只能是粗蛋白质的含量；在蛋白质氨基酸构成有差异的
情况下,特别是大量含碱性氨基酸、氨基酸酞氨和小分子量氨基酸的蛋白质,其含氮量就高,必须要根据不同的样品选择对应的换算系数。
但处理未知样品时,其误差就有变大的危险,一般可产生几个百分数的误差等缺点。
总结：凯氏定氮法是标准的测蛋白质的含量的方法，有着较高的准确度和精密度，其对实验试剂、器材要求叫低，是一种适合广泛使用的蛋白质含量粗测方法。
但由于将测蛋白质的含量转化为测氮的含量，这一替代的过程，使得可以通过添加三聚氰胺之类物质虚增蛋白质，危害食品安全和人民健康。
总的来说，凯氏定氮法有优点也有缺陷，实际运用中可结合其他方法尽量减少缺陷。
二、双缩脲法
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。
含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。
蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色化合物。
其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行测定。
由于双缩脲法是通过测蛋白质中的肽键的含量来测定蛋白质的含量，所以此方法的准确性比凯氏定氮法高。
其次，它用来吸光光度法来测定含量，精确度高。
但用双缩脲法测的灵敏度低，测定范围窄，样品需要量大。
只能用于测定还有两个或两个以上肽键的蛋白质，有一定局限性。
总结：双缩脲法的优点在于它用双缩脲试剂作为显色剂，用吸光光度法来测量蛋白质中肽键的含量，与凯氏定氮法相比已经有了改进，更精准的测定了蛋白质的含量。
但它只能用于测定还有两个或两个以上肽键的蛋白质，且分析实验仪器较为复杂，不利于推广，仅使用于定性检测，不适用于定量检测。
三、紫外吸收法
蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质,吸收峰在280 nm 处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。
此外,蛋白质溶液在 238 nm 的光吸收值与肽键含量成正比。
利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。
紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定。
特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，利用280nm进行紫外检测，来判断蛋白质吸附或洗脱情况是最常用的方法。
紫外吸光法特点是测定蛋白质含量的准确度较差，干扰物质多，在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。
故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。
若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰。
核酸的干扰可以通过查校正表，再进行计算的方法，加以适当的校正。
但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的，虽然经过校正，测定的结果还是存在一定的误差。
总结:紫外吸收法有很多优点，它简便、灵敏、快速，不消耗样品，而且测定后仍能回收使用。
其通过蛋白质中特定的键对光的吸收性质来测量，可以避免加含氮物质虚增蛋白质的发生。
但是实验测定时干扰较多，往往不能精确测定。
四、酚试剂法
此法的显色原理与双缩脲法是相同，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。
这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
Folin—
酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物）。
在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的含量成正比。
酚试剂法由于添加了Folin—酚试剂，以增加显色量，比双缩脲法灵敏的多。
但是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。
对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰反应。
总结：酚试剂法是对双缩脲法的一种改进，它的灵敏度很高，但是时间长，显色剂不易制取，操作精度难度要求较大，且同样容易受干扰。
五、考马斯亮蓝法
考马斯亮蓝法是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。
考马斯亮蓝是一种有机染料，在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中与蛋白质的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基结合后变为蓝色，其最大吸收波长从 465 nm 变为 595 nm, 蛋白质在 1-1 000 μg 范围内, 蛋白质－色素结合物在 595 nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝与蛋白质结合反应十分迅速而稳定,2 min 左右即达到平衡,其结合物室温下 1 h内保持稳定，且在 5-20 min 之间,颜色的稳定性最好。
该法方法简便,易于操作,所用试剂较少,显色剂易于配制。
干扰物质少,如糖、缓冲液、还原剂和络合剂等均不影响显色。
用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用γ球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。
标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer 定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。
总结：考马斯亮蓝法也是吸光光度法来测量蛋白质含量的方法。
它的灵敏度与其他测蛋白质的方法相比是最高的，用时很短且结合稳定。
但是由于试剂及仪器还是相对复杂，在生产生活中的应用可能受限。
总的来说，五种蛋白质含量的测定方法各有有缺，有的简单易行，有的精确，有的廉价。
在实际运用中，如果需要准确的定性定量检测蛋白质，确保安全，不妨可以多种方法一起使用，相互比较避免诸如凯氏定氮法不能区分含氮物质还是蛋白质，几种吸光光度的分析方法容易被干扰等劣势，从而准确精密的测出蛋白质的含量。
