两种测定蛋白质含量方法的比较(精)
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Lowry法和Bradford法测定玻璃酸钠中蛋白质含量的比较
Lowry法和Bradford法测定玻璃酸钠中蛋白质含量的比较杨桂兰郭学平Lowry改良的酚试剂法（简称Lowry法）和Bradford染料结合法（简称Bradford法）是两种常用的蛋白质测定方法。
在用于测定玻璃酸中作为杂质的蛋白质的含量时，发现两种方法的测定结果差异很大。
本文用实验和有关文献对此进行分析。
1材料考马斯亮蓝G 250，分析纯，上海化学试剂站进口分装；牛血清白蛋白（BSA），中国药品生物制品检定所；碱性蛋白酶，丹麦Novonordisk 公司；玻璃酸钠（HA），山东福瑞达精细化工有限公司。
紫外可见光分光光度计，日本岛津公司。
2方法2.1Lowry法[1，2]精密称取HA 500mg，置于100ml 量瓶中，加水溶解至刻度，依法测定。
2.2Bradford法[3，4]2.2.1考马斯亮蓝试液配制考马斯亮蓝100mg溶于95%乙醇50ml，再加85%磷酸100ml，加水稀释至800ml，过滤备用。
2.2.2标准曲线制作取BSA 10mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得100μg/ml的BSA对照品溶液。
取具塞试管6支，分别加入BSA标准液0.00、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60ml，均补加水至1.0ml，得到含BSA 0、5、10、20、40、60μg的标准系列。
分别加入考马斯亮蓝试液4ml，立即混匀，5min后在595nm波长处用1cm比色池测定吸收度，以BSA质量（μg）对吸收度作图，得标准曲线，或计算出直线回归方程。
2.2.3供试品测定取HA 500mg，精密称定，置于100ml 量瓶中，加水溶解至刻度，取1ml 于具塞刻度试管中，以下同2.2.2项下测定吸收度，从标准曲线得到蛋白质质量（μg），以此计算HA供试品的蛋白质含量。
2.3Bradford法测定HA溶液中蛋白质的回收实验取BSA 50mg，精密称定，溶于0.5％的HA溶液50ml中。
食品中蛋白质凯氏定氮法测定比较
关键词：蛋白质；凯氏定氮法；自动凯氏定氮仪法
蛋白质测定涉及企业生产和监督 检测众多领域。本次测验用凯氏定氮 法检测，在操作过程中总结出两仪器 方 法 的 适 用 条 件 及 操 作 事 项， 以 便 在 检 测 工 作 中 更 好 的 掌 握 蛋 白 质 的 检测。 1 检测试剂
所 需 试 剂 均 为 分 析 纯， 检 测 用 水 为 实 验 室 合 格 水。 混 合 催 化 剂（ 硫 酸 铜和硫酸钾），硼酸溶液（20 g/L）， 溴 甲 酚 绿 指 示 剂（10 g/L）， 甲 基 红 指 示（10g/L）， 亚 甲 基 蓝 指 示 剂 （10 g/L）， 氢 氧 化 钠（400 g/L）， 硫酸，甲基红溴甲酚绿混合指示液。 （0.050 mol/L）硫酸标准滴定溶液。 2 检测用设备
事项
7.2 凯氏定氮法操作时的注意事项
混匀的固体 0.5 g 左右、半固体 2 g
操作时注意仪器整体装置的密闭
左右、液体摇晃均匀 10 g 左右。这样 性，水蒸气烧瓶要做空蒸试验，保证
的结果比较稳定。开始时控制火力，
（下转 149 页）
147 Apr. 2021 CHINA FOOD SAFETY
测试。连续做空白测试，结果一致后， 6 结果比较
仪器稳定即可连续测试，空白结果最
以 奶 粉 为 例， 两 种 方 法 的 检 测 结
大值减去最小值小于 0.05 mL 时，仪 果见表 1。 表 1 两种方法的检测结果表
编号和方法
称取样品 质量 /g
蛋白质含量检测 结果 （/ g/100g）
质控样 浓度值
连接好 加甲基红指示剂 3 滴和硫酸 1 mL，使 蒸馏水显酸性，加热蒸馏瓶内的水保 持沸腾。
打 开 装 置 冷 凝 水， 接 收 瓶 加 入 10.0 mL 硼酸溶液及 3 滴混合滴定指 示液。接收瓶放在冷凝管的下端插入
蛋白质测定涉及企业生产和监督 检测众多领域。本次测验用凯氏定氮 法检测，在操作过程中总结出两仪器 方 法 的 适 用 条 件 及 操 作 事 项， 以 便 在 检 测 工 作 中 更 好 的 掌 握 蛋 白 质 的 检测。 1 检测试剂
所 需 试 剂 均 为 分 析 纯， 检 测 用 水 为 实 验 室 合 格 水。 混 合 催 化 剂（ 硫 酸 铜和硫酸钾），硼酸溶液（20 g/L）， 溴 甲 酚 绿 指 示 剂（10 g/L）， 甲 基 红 指 示（10g/L）， 亚 甲 基 蓝 指 示 剂 （10 g/L）， 氢 氧 化 钠（400 g/L）， 硫酸，甲基红溴甲酚绿混合指示液。 （0.050 mol/L）硫酸标准滴定溶液。 2 检测用设备
事项
7.2 凯氏定氮法操作时的注意事项
混匀的固体 0.5 g 左右、半固体 2 g
操作时注意仪器整体装置的密闭
左右、液体摇晃均匀 10 g 左右。这样 性，水蒸气烧瓶要做空蒸试验，保证
的结果比较稳定。开始时控制火力，
（下转 149 页）
147 Apr. 2021 CHINA FOOD SAFETY
测试。连续做空白测试，结果一致后， 6 结果比较
仪器稳定即可连续测试，空白结果最
以 奶 粉 为 例， 两 种 方 法 的 检 测 结
大值减去最小值小于 0.05 mL 时，仪 果见表 1。 表 1 两种方法的检测结果表
编号和方法
称取样品 质量 /g
蛋白质含量检测 结果 （/ g/100g）
质控样 浓度值
连接好 加甲基红指示剂 3 滴和硫酸 1 mL，使 蒸馏水显酸性，加热蒸馏瓶内的水保 持沸腾。
打 开 装 置 冷 凝 水， 接 收 瓶 加 入 10.0 mL 硼酸溶液及 3 滴混合滴定指 示液。接收瓶放在冷凝管的下端插入
蛋白质的测定方法比较
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使用规范说明
优点：高分辨，高灵敏度，获得大量信息。 不足：操作容易出错。 注意事项：
LOGO
1.在适合的盐浓度下，应保持蛋合的蛋白质 复合物和共价键二硫键，使其形成一个各自多肽的溶液；
3.尽量减少核酸，多糖，脂类等干扰分子。
凯氏定氮法
LOGO
1.将蛋白质样品在硫酸铜的催化下，用氧 化性试剂消化分解转化为铵离子。 2.将含有铵溶液置于蒸馏瓶中，加高浓度 碱使铵离子转化为氨。 3.加热蒸馏，用过量的标准硼酸溶液吸收 氨气。 4.用盐酸标准溶液滴定硼酸，以甲基红作 为指示剂。 5.通过计算铵离子的量计算蛋白质含量。
微量凯氏定氮法 在外科营养支持中的应用
紫外分光光度法可快速测定液体 奶、奶粉中蛋白质含量
目的：建立非蛋白质类含氮物质对测定 结果无干扰的乳与乳制品中蛋白质的快速 测定方法。 •方法：在280 nm波长处， 分别测定乳品标样应用液 与样品稀释液的吸光度值， 基于测定液中蛋白质含量 与其吸光度值呈正比关系， 计算出样品中蛋白质的含 量。
LOGO
外科病人营养支持期间判定营养支 持效果与组织蛋白质代谢状况的一项重 要指标是氮平衡。当被测的生理样品与 浓硫酸一起加热消化后,在凯氏定氮仪中, 加入强碱碱化消化液,再经蒸汽蒸馏而被 吸收于硼酸溶液中,形成的硼酸铵再与标 准硫酸滴定,求出样品中的总氮量。
LOGO
优点：测定结果准确，重现性好， 不足：操作复杂费时，试剂消耗量大 改进：凯氏定氮法装置进行了改进，用高
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质谱法
目前质谱主要测定蛋白质一级结构， 包括分子量、肽链氨基酸排序及多肽或 二硫键数目和位置。
其原理是：通过电离源将蛋白质分子 转化为气相离子，利用质谱分析仪的电 场、磁场将具有特定质荷比值(M/Z值) 的蛋白质离子分离开来，确定离子的 M/Z值，分析鉴定未知蛋白质。
标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白质含量(精)
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量一、标准曲线一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。
因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
二、蛋白质含量测定方法1、凯氏定氮法2、双缩脲法3、Folin-酚试剂法4、紫外吸收法5、考马斯亮蓝法三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作（一）、试剂：1、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。
最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2、标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材：1、722S型分光光度计使用及原理（）。
2、移液管使用（）。
（三）、标准曲线制作：1、2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
1）、利用标准曲线查出回归方程。
2）、用公式计算回归方程。
3）、或用origin作图，测出回归线性方程。
即A595nm=a×X( )+6一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。
4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
（四）、蛋白质含量的测定：样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。
（五）、注意事项：1、玻璃仪器要洗涤干净。
2、取量要准确。
3、玻璃仪器要干燥，避免温度变化。
蛋白质测定常用的几种方法
I. 紫外分光光度法测定蛋白质的含量一、实验目的掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。
二、实验原理蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。
该法操作简单、快捷，并且测定的样品可以回收，低浓度盐类不干扰测定，故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。
但此方法存在以下缺点：1．当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大是会产生一定的误差，故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。
2．若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物，就会出现较大的干扰。
但核酸的吸收高峰在260nm，因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值，通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。
但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽经校正，测定结果还存在着一定的误差。
三、实验器材1．紫外分光光度计2．移液管3．试管及试管架4．石英比色皿四、材料与试剂1．标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮校正的牛血清清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。
2．待测蛋白溶液：酪蛋白稀释溶液，使其浓度在标准曲线范围内。
五、操作方法1．标准曲线的制作按表1加入试剂。
表1 标准曲线的制作度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出血清蛋白的标准曲线。
2．未知样品的测定取待测蛋白质溶液1mL，加入3mL蒸馏水，在280nm下测定其吸光度值。
并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。
II. Bradford法测定蛋白质的含量一、实验目的学习考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的原理和方法。
二、实验原理1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的原理，迅速而准确的定量蛋白质的方法。
染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变，从465nm变为595nm。
蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1μg）。
实验蛋白质含量测定
生物化学与分子生物学基础实验
实验一 几种蛋白质定量测定方法的比较
单击此处添加副标题
单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，请尽量言简意赅的阐述观点。
生物化学与分子生物学基础实验
实验目的
掌握紫外吸收法、Folin－酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量的原理和方法 掌握分光光度计的原理和使用方法
生物化学与分子生物学基础实验
紫外吸收法
蛋白质在紫外光区（190nm-360nm）有两个强烈吸收峰：280nm和190nm。
280nm有吸收的电子所需能量较少，因为这些光子存在于芳香环的共轭双键中，色氨酸(Trp)、和酪氨酸(Tyr)有芳香环，可吸收280nm波长的光子，苯丙氨酸（Phe）、组氨酸（His）也有微弱吸收。蛋白质的吸收强度与上述几种氨基酸的含量有关，因此相同浓度的不同种类蛋白质，其280nm的吸收值差别很大(图1)。
生物化学与分子生物学基础实验
选择合适的蛋白质含量测定方法主要基于几点考虑：
有多少样品可供分析; 蛋白质样品浓度大约是多少; 样品中含有哪些可能影响定量的化学物质； 所选方法是否简单、可靠； 含量测定的专一性要求是否很高。
生物化学与分子生物学基础实验
常用的方法
物理性质：紫外吸收法 化学性质：Folin－酚试剂法（Lowry法），BCA法（Bicinchoninic acid 法），凯氏定氮法，双缩脲法（Biuret法），胶体金测定法，等等 染色性质：考马斯亮蓝染色法（Bradford法）、银染法 测定绝对含量应用凯氏定氮法（蛋白质的含氮量为16％）。
03
单击此处添加小标题
Folin-酚试剂乙
05
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未知蛋白溶液
实验一 几种蛋白质定量测定方法的比较
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生物化学与分子生物学基础实验
实验目的
掌握紫外吸收法、Folin－酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量的原理和方法 掌握分光光度计的原理和使用方法
生物化学与分子生物学基础实验
紫外吸收法
蛋白质在紫外光区（190nm-360nm）有两个强烈吸收峰：280nm和190nm。
280nm有吸收的电子所需能量较少，因为这些光子存在于芳香环的共轭双键中，色氨酸(Trp)、和酪氨酸(Tyr)有芳香环，可吸收280nm波长的光子，苯丙氨酸（Phe）、组氨酸（His）也有微弱吸收。蛋白质的吸收强度与上述几种氨基酸的含量有关，因此相同浓度的不同种类蛋白质，其280nm的吸收值差别很大(图1)。
生物化学与分子生物学基础实验
选择合适的蛋白质含量测定方法主要基于几点考虑：
有多少样品可供分析; 蛋白质样品浓度大约是多少; 样品中含有哪些可能影响定量的化学物质； 所选方法是否简单、可靠； 含量测定的专一性要求是否很高。
生物化学与分子生物学基础实验
常用的方法
物理性质：紫外吸收法 化学性质：Folin－酚试剂法（Lowry法），BCA法（Bicinchoninic acid 法），凯氏定氮法，双缩脲法（Biuret法），胶体金测定法，等等 染色性质：考马斯亮蓝染色法（Bradford法）、银染法 测定绝对含量应用凯氏定氮法（蛋白质的含氮量为16％）。
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Folin-酚试剂乙
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未知蛋白溶液
大豆蛋白质检测方法
大豆蛋白质检测方法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以按照以下方式进行编写：在此文中，我们将关注大豆蛋白质的检测方法。
大豆蛋白质是一种重要的植物蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用领域。
因此，准确、快速地检测大豆蛋白质的含量和质量对于农业生产、食品工业以及药品生产等领域非常关键。
随着科学技术的不断发展，大豆蛋白质检测方法也得到了不断完善和创新。
文章将介绍两种主要的大豆蛋白质检测方法，并详细阐述它们的原理和步骤。
在第一种方法中，我们将了解到它基于某种特定的原理来进行大豆蛋白质的检测，通过特定的步骤来获取准确的结果。
而在第二种方法中，我们将探讨它采用的另一种不同原理来进行大豆蛋白质的检测，并且与第一种方法进行对比，分析它们各自的优缺点。
通过对这两种方法的介绍和比较，我们希望能提供给读者们一个全面了解大豆蛋白质检测方法的视角，以便在实际应用中选择最适合的方法。
文章的结论部分还将总结分析这两种方法的优缺点，以及它们在实际应用中的可能应用前景。
通过深入研究大豆蛋白质检测方法，我们可以更好地了解大豆蛋白质的特性和含量，为大豆相关产品的研发和质量控制提供科学依据。
同时，这也为食品安全领域和农业生产提供了重要的支持，促进了行业的健康发展。
总而言之，本文旨在探讨大豆蛋白质检测方法，既介绍了两种常用的方法，又对它们的原理和步骤进行了详细说明。
通过对这两种方法的分析和比较，我们可以更好地理解并选择最合适的方法来进行大豆蛋白质的检测。
这对于大豆相关产业的发展和食品安全具有重要意义。
1.2文章结构文章结构是指文章整体的框架和组织，它决定了文章的逻辑性和连贯性。
本文的目的是介绍大豆蛋白质检测方法，为了使读者能够清晰地了解这个主题，本文将分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分将首先对大豆蛋白质检测方法进行概述，介绍大豆蛋白质在食品工业和农业中的重要性以及对其质量检测的需求。
随后，将说明本文的结构和各部分的内容，以使读者对文章有一个整体的了解。
四种蛋白质含量测定方法的比较研究
四种蛋白质含量测定方法的比较研究蛋白质是生物体内的重要成分，其含量的测定对于生物学、医学、食品科学等领域具有重要意义。
目前常用的蛋白质含量测定方法主要有四种，包括生物素-亲和法、BCA法、Lowry法和Bradford法。
下面将对这四种方法进行比较研究。
一、生物素-亲和法生物素-亲和法是一种基于亲和层析原理的蛋白质含量测定方法。
该方法利用生物素与亲和基团之间的非共价作用，将生物素标记的探针与目标蛋白质结合，通过洗脱和检测来测定蛋白质的含量。
该方法具有高灵敏度、高特异性和高重复性等优点，但需要使用生物素标记的试剂，成本较高。
二、BCA法BCA法是一种基于铜离子还原能力的蛋白质含量测定方法。
该方法利用蛋白质与铜离子的络合作用，还原离子中的铜离子，生成紫色络合物，通过比色法测定蛋白质的含量。
该方法具有灵敏度高、线性范围广、操作简便等优点，但受到还原剂和蛋白质成分的影响，结果易受到误差。
三、Lowry法Lowry法是一种基于蛋白质与酸性铜离子的还原反应的蛋白质含量测定方法。
该方法利用蛋白质与酸性铜离子的还原反应，生成紫色络合物，通过比色法测定蛋白质的含量。
该方法具有灵敏度高、线性范围广、重复性好等优点，但需要多个试剂的配制和操作，较为繁琐。
四、Bradford法Bradford法是一种基于染料结合的蛋白质含量测定方法。
该方法利用染料与蛋白质之间的非共价作用，形成蓝色复合物，通过比色法测定蛋白质的含量。
该方法具有灵敏度高、操作简便、适用于多种蛋白质的测定等优点，但受到盐离子和其他成分的影响，结果易受到误差。
综上所述，四种蛋白质含量测定方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据实际需求和实验条件进行综合考虑。
蛋白质定量方法对比
蛋白质定量方法对比全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：蛋白质是生物体内重要的有机分子，负责着细胞结构的建立和维持以及体内新陈代谢的进行。
因此，研究蛋白质的定量方法对于生命科学领域具有重要意义。
本文将比较几种常见的蛋白质定量方法，包括BCA法、Lowry法、Bradford法和Spectrophotometric method，分析它们各自的优缺点和适用场景。
首先，BCA法是一种基于铜蛋白络合物比色反应的蛋白质定量方法。
该方法具有高灵敏度和广泛线性范围，适用于多种类型的蛋白质样本。
然而，BCA法也存在一些缺点，包括受到干扰物质的影响、反应条件较为复杂等。
与BCA法相比，Lowry法是一种较为经典的蛋白质定量方法。
该方法利用费里酚蓝与蛋白质中的酚类物质在碱性条件下形成的复合物来定量蛋白质含量。
Lowry法具有较高的准确性和稳定性，但需要较长的反应时间和较大的标准曲线范围。
另一种常见的蛋白质定量方法是Bradford法，该方法利用共价结合蛋白质中的氨基酸残基与染料之间的相互作用来定量蛋白质。
与前两种方法相比，Bradford法具有操作简便、灵敏度高的特点，但对于具有不同氨基酸组成的蛋白质可能存在测定误差。
最后，Spectrophotometric method是一种利用紫外可见分光光度计进行蛋白质定量的方法。
通过测定蛋白质溶液在特定波长下的吸光度来计算蛋白质的浓度。
这种方法操作简单、速度快，但对于含有其他物质的样品可能存在测定误差。
综上所述，不同的蛋白质定量方法各有优劣，研究人员在选择适合的方法时应该根据具体需求和样品特性来进行选择。
在进行蛋白质定量时，应根据实验要求和条件选择最适合的方法，以确保结果的准确性和可靠性。
希望本文的比较能够帮助读者更好地理解各种蛋白质定量方法的特点和适用范围，提高实验的效率和准确性。
第二篇示例：蛋白质是生物体内重要的基本组成部分，具有多种生理功能。
准确测定蛋白质的含量对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。
蛋白质含量的测定方法
蛋白质含量的测定方法
蛋白质的含量是指在样品中蛋白质的质量或浓度。
测定蛋白质含量是许多生物学和生化实验中常用的实验方法之一，以下是一些常见的测定方法：
1. 布拉德福德法（Bradford法）：该方法利用布拉德福德蛋白
质染料与蛋白质形成复合物，并产生特定的颜色，通过比色法测定颜色强度从而确定含量。
2. 低里氏法（Lowry法）：该方法基于在碱性条件下，蛋白质
与碱性铜离子复合生成紫色产物的原理，通过比色法定量测定。
3. BCA法（Bicinchoninic Acid法）：该方法利用BCA试剂与
蛋白质中的蛋白质产生螯合，形成紫色到蓝色的产物，并通过光度计测定吸光度从而测定含量。
4. 还原硝酸银法：该方法是通过硝酸银与蛋白质中的氨基酸中的硫原子反应产生黑色沉淀，通过沉淀的重量或者比色法测定吸光度来确定蛋白质含量。
5. 紫外吸收法：蛋白质具有特定的紫外吸收峰，在特定波长下进行测定，可以通过比较样品吸光度与标准曲线来计算蛋白质含量。
以上只是一些常见的测定方法，根据具体需要和实验条件的不同，可以选择适合的方法进行蛋白质含量的测定。
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V
其中,Y为标准曲线查得ห้องสมุดไป่ตู้白质得浓度（mg/mL），N为稀释倍数， V为血清样品所取的体积（mL），c为样品原浓度（mg/mL）。
注意事项
（1）须于显色后30min内比色测定。各管由显色到比色的 时间应尽可能一致。 （2）有大量脂肪性物质同时存在时，会产生浑浊的反应混 合物，这时可用乙醇或石油醚使溶液澄清后离心，取上清液 再测定。 （3）由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，显 色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只 适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。此外 蛋白溶液中存在核酸或核苷酸时也会影响紫外吸收法测定蛋 白质含量的准确性。
• 试剂：
双缩脲试剂：
试剂和器材
• 材料
1. 标准蛋白溶液 两种浓度的结晶牛血清白蛋白
溶液(BSA)。
2. 待测蛋白质溶液 人血清（稀释适当倍数，使其浓 度在标准曲线测试范围内。）
操作方法
一、制作标准曲线 二、样品测定
三、计算 取两组测定的平均值计算：
YxN 血清样品蛋白质含量（mg/100mL）=
紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速，简便，不消耗样品， 低浓度盐类不干扰测定。因此，广泛应用在柱层析分离中蛋白质洗 脱情况的检测。
此法的缺点是：（1）对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色 氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差；（2）若样品中核酸 等吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不同的，即使经过校正，测 定结果也还存在一定的误差。但是可作为初步定量的依据。该法可 测定蛋白范围应在0.1~1.0mg /mL。
思考题
1．干扰双缩脲实验的因素有哪些？ 2．若样品中含有核酸类杂质，应该如何校正实验结
果？ 3. 试比较两种常用蛋白质定量测定方法的优缺点。
• 蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也 能与Cu2+形成紫红色络合物。其颜色深浅与蛋 白质浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基 酸的组成无关，该法测定蛋白质的浓度范围适 于1~10mg /mL。双缩脲法常用于蛋白质的快速 测定。
紫红色铜双缩脲复合物分子结构为：
二、紫外吸收法：
蛋白质分子中所含酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使 蛋白质在280nm波长处有最大吸收值。在一定浓度范围内，蛋白质 溶液的光吸收值（A280）与其含量成正比关系，可用作定量测定。
两种测定蛋白质含量方法的实验比较
目的要求
（1）学习双缩脲法测定蛋白质的原理和方法。 （2）学习紫外吸收法测定蛋白质的原理和方法。 （3）比较两种测定蛋白质方法的优缺点。
实验原理
一、双缩脲法：
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。 在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫好色复 合物其最大光吸收在540nm处。
其中,Y为标准曲线查得ห้องสมุดไป่ตู้白质得浓度（mg/mL），N为稀释倍数， V为血清样品所取的体积（mL），c为样品原浓度（mg/mL）。
注意事项
（1）须于显色后30min内比色测定。各管由显色到比色的 时间应尽可能一致。 （2）有大量脂肪性物质同时存在时，会产生浑浊的反应混 合物，这时可用乙醇或石油醚使溶液澄清后离心，取上清液 再测定。 （3）由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，显 色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只 适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。此外 蛋白溶液中存在核酸或核苷酸时也会影响紫外吸收法测定蛋 白质含量的准确性。
• 试剂：
双缩脲试剂：
试剂和器材
• 材料
1. 标准蛋白溶液 两种浓度的结晶牛血清白蛋白
溶液(BSA)。
2. 待测蛋白质溶液 人血清（稀释适当倍数，使其浓 度在标准曲线测试范围内。）
操作方法
一、制作标准曲线 二、样品测定
三、计算 取两组测定的平均值计算：
YxN 血清样品蛋白质含量（mg/100mL）=
紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速，简便，不消耗样品， 低浓度盐类不干扰测定。因此，广泛应用在柱层析分离中蛋白质洗 脱情况的检测。
此法的缺点是：（1）对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色 氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差；（2）若样品中核酸 等吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不同的，即使经过校正，测 定结果也还存在一定的误差。但是可作为初步定量的依据。该法可 测定蛋白范围应在0.1~1.0mg /mL。
思考题
1．干扰双缩脲实验的因素有哪些？ 2．若样品中含有核酸类杂质，应该如何校正实验结
果？ 3. 试比较两种常用蛋白质定量测定方法的优缺点。
• 蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也 能与Cu2+形成紫红色络合物。其颜色深浅与蛋 白质浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基 酸的组成无关，该法测定蛋白质的浓度范围适 于1~10mg /mL。双缩脲法常用于蛋白质的快速 测定。
紫红色铜双缩脲复合物分子结构为：
二、紫外吸收法：
蛋白质分子中所含酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使 蛋白质在280nm波长处有最大吸收值。在一定浓度范围内，蛋白质 溶液的光吸收值（A280）与其含量成正比关系，可用作定量测定。
两种测定蛋白质含量方法的实验比较
目的要求
（1）学习双缩脲法测定蛋白质的原理和方法。 （2）学习紫外吸收法测定蛋白质的原理和方法。 （3）比较两种测定蛋白质方法的优缺点。
实验原理
一、双缩脲法：
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。 在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫好色复 合物其最大光吸收在540nm处。