细胞培养流程

自体血分血及DC、CIK细胞培养流程

1、 采集新鲜的自体外周血入血液采集袋（含28mL枸橼酸纳抗凝剂），将血液采集登记表标记细胞编号，用铅笔在采集袋表面空白处也标记细胞编号。

2、 热合机在血液采集袋输入管1/3处热和一个封口，用酒精喷血液采集袋表面，将血液采集袋放入传递窗。

3、 准备好50mL离心管、3mL抗凝管、生理盐水、10mL移液管、T-75瓶、T-25瓶、淋巴细胞分离液、废液缸。

4、 采集袋拿进超净台之前再喷酒精。拧扭输出管使管中的血液回流到采集袋中。

5、 用止血钳夹住采血袋输出管，用酒精棉球擦拭输出管管表面，剪刀剪去封口，剪成斜口（方便倒出），准备好两个50mL离心管，输出管口火焰灭菌后，用止血钳控制管口将全血倒入50mL离心管，记下全血体积，取0.5mL全血进行细胞计数。

6、 配平后3000rpm离心15min，得自体血清，4℃静置15min-2h，56℃灭活补体30min，4℃静置过夜，之后3000rpm离心15min，4℃保存备用。用生理盐水重悬血细胞到原全血体积。

7、 准备好数个50mL离心管，分别加入20mL淋巴细胞分离液，各将20-25mL全血缓慢加入淋巴细胞表面。

8、 2000rpm，离心20min。

9、 取出离心管，弃掉最上层的血浆层。

10、准备两个干净的50mL离心管，旋转吸取单核细胞层（白膜层）加入离心管，全部吸完后，记下单核细胞体积。

11、准备几个新的50mL离心管，每管分装10mL单核细胞，生理盐水分别加至50mL（与生理盐水1:4），混匀后1800rpm，10min离心，洗涤细胞第一次。

12、取出离心管，倒掉上清，取10-15mL生理盐水依次重悬单核细胞，再取10-15mL生理盐水洗涤单核细胞离心管，减少细胞损失，将单核细胞重悬入一个或两个离心管，生理盐水加至40或80mL（细胞浓度太大时加至80mL），细胞计数仪计数。

13、1800rpm，10min离心，洗涤细胞第二次。

细胞株(系)细胞复苏

(1)戴手套，从液氮罐中取出冷冻管。

(2)迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化。

(3) 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。将所需的培养基确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培养基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在距离酒精灯最近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。

然后在无菌下取出细胞。冻存管用75%酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加10ml培养液。

(4)在1000r/min速度下离心5～10分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×109/L，置37℃温箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代。或无需离心直接将细胞加入瓶中，并加入培养基贴壁培养12～24小时后，充去上清，换入新鲜培养基继续培养。加入的培养液的量依冻存的细胞数量，如果冻存数量为106，则稀释10倍使细胞达到105即可。

注意事项

在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安瓿或冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好。然而，由于冻存的细胞还受其他因素的影响，有时也会有部分细胞死亡。此时，可将不贴壁、飘浮在培养液上(已死亡)的细胞轻轻倒掉，再补以适量的新培养液，也会获得较为满意的结果。

细胞换液

（1）贴壁细胞（包括半贴壁细胞的换液）

紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。将所需的培养基确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培养基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在距离酒精灯最近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。即弃去旧液，加入与原培养液相同的等量完全培养基。将培养瓶放于37℃,5%CO2的培养箱内培养

免疫细胞培养流程

下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!

并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!

Download tips: This document is carefully compiled by

theeditor. I hope that after you download them,they can help

yousolve practical problems. The document can be customized

andmodified after downloading,please adjust and use it according

toactual needs, thank you!

In addition, our shop provides you with various types

ofpractical materials,such as educational essays,

diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic

articles,topic composition,work summary,word parsing,copy

excerpts,other materials and so on,want to know different data

formats andwriting methods,please pay attention! 免疫细胞培养流程

一、准备工作阶段。

在进行免疫细胞培养之前，要做好充分的准备。

细胞培养基本步骤

细胞培养是一项重要的生物技术，涉及到多个步骤。以下是细胞培养的基本步骤：

1. 准备细胞培养环境：细胞培养需要在无菌的环境中进行，因此需要准备无菌操作台、培养箱、显微镜、细胞计数器等设备，确保培养环境符合要求。

2. 细胞复苏：从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的细胞，快速转移到37℃水浴中解冻。然后将细胞移至培养瓶中，加入适量培养基，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布。

3. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代。将原培养瓶中的培养基吸出，加入适量胰蛋白酶，轻轻摇动培养瓶，使胰蛋白酶与细胞接触。等待几分钟，待细胞变圆并从瓶底脱落，将胰蛋白酶吸出。然后加入新配置的培养基，用吸管吹打细胞团块，使其分散成单个细胞。最后将细胞悬液移至新的培养瓶中，放在培养箱中继续培养。

4. 细胞冻存：当需要进行长期保存时，可以将细胞冻存。将细胞从培养箱中取出，离心收集，用适量细胞冻存液重悬细胞。然后将细胞悬液分装到冻存管中，放入-80℃冰箱或液氮中保存。

5. 细胞观察：在细胞培养过程中，需要定期观察细胞的生长情况。通过显微镜观察细胞的形态、密度等指标，判断细胞的生长状态和是否发生异常。如发现异常情况，应及时采取措施处理。

6. 细胞计数和活力检测：采用细胞计数器或血球计数板进行细胞计数，同时检测细胞的活力。一般采用台盼蓝染色法或荧光染色法进行检测。

7. 细胞换液和传代：根据需要，定期更换新鲜的培养基，以保证细胞的营养需求。同时，在传代过程中要注意细胞的消化程度和生长情况，避免过度生长或未充分消化导致细胞状态不佳。

总之，细胞培养是一项技术性很强的工作，需要严格的操作规程和细致的观察。通过不断实践和总结经验，可以提高细胞培养的成功率和稳定性。