可溶性总糖的测定原理和方法

默认分类2010-06-18 13:30:04 阅读22 评论0 字号：大中小订阅苯酚法测定可溶性糖原理：植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。

苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛（分子式见蒽酮法）能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定160min以上。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：新鲜的植物叶片。

（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 水浴锅；3. 刻度试管；4. 刻度吸管。

（三）试剂：1. 90％苯酚溶液称取90克苯酚（AR），加蒸馏水10ml 溶解，在室温下可保存数月；2. 9％苯酚溶液取3ml90％苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用；3. 浓硫酸（比重1.84）；4. 1％蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000克。

加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；5. 100μg/L 蔗糖标准液精确吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。

三、实验步骤1. 标准曲线的制：向试管内加入1ml90％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20S加入5ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8ml，在室温下放置30min，比色。

然后以空白为参比，在485nm波长下比色，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

2. 可溶性糖的提取取：取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份（或干材料），分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。

实验五_可溶性总糖的测定一、实验目的1. 学习可溶性总糖的测定方法；2. 复习化学计量法的实验方法和操作技能；3. 培养准确测量和记录实验数据的能力。

二、实验原理可溶性总糖指的是能够在水中溶解的所有糖类的总和，一般包括葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等。

在工业和农业中，可溶性总糖是一个重要的质量指标。

因此，测定可溶性总糖的含量也显得非常必要。

目前常用的测定方法包括：重铬酸盐法、酚硫酸法和硫酸亚铁法等。

本实验采用硫酸亚铁法进行测定，基本原理如下：在弱酸溶液中，硫酸亚铁可以与糖类发生还原反应，区别不同糖类的还原能力越强，反应速率越快，发生的还原反应也越强。

本实验中，使用葡萄糖标准液作为比较，计算样品中可溶性总糖的含量。

三、实验步骤1. 前期准备a. 准备好实验所需的硫酸亚铁标准液（0.05mol/L）、葡萄糖标准液（100mg/L）和蒸馏水；b. 将样品称重并加入干燥器中，加热干燥至恒定质量。

2. 样品制备a. 将称好的样品粉末加入容量瓶中，加入约100ml的蒸馏水。

注意：样品过多会导致实验误差的增大，因此加入的样品应正确控制；b. 将试管清洗干净，并使用蒸馏水冲洗干净。

用蒸馏水将等量的硫酸亚铁标准液加入试管中；c. 将试管放入加热水浴中，预热30-60秒后取出；d. 加入1ml样品溶液，并立即倒入试管中，密封试管盖，摇晃均匀，再放入加热水浴中加热约30分钟。

3. 反应终止a. 将反应物冷却至室温；b. 加入10ml饱和酸化锌溶液，摇匀，用蒸馏水冲洗实验瓶内壁，以便更好地收集浸出液。

a. 取出试管，将反应液加入移液瓶中，加入5-6滴淀粉指示剂；b. 取一只滴定管，将其充分洗净，并加入硫酸氢钾（1mol/L），加入10滴以上；c. 开始滴定，当液体从紫色变为无色时，停止滴定，记录所消耗的滴定剂的滴数。

5. 比较样品a. 重复以上实验步骤，使用葡萄糖标准液代替样品。

注意：样品和标准液的操作方法和操作条件要保持一致；b. 比较两次实验结果，计算可溶性总糖的含量。

可溶性糖的测定方法可溶性糖的测定方法有多种，常用的方法包括显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。

下面将详细介绍这些方法的原理和步骤。

1. 显色法：显色法是通过特定的试剂与可溶性糖发生反应，产生有色产物来测定糖含量的方法。

常用的试剂有硝酸铜和菲林试剂。

步骤：1）将待测样品与硝酸铜溶液混合，加热沸腾，反应生成红色沉淀。

2）离心沉淀，取上清液用氨水中和。

3）将中和后的溶液与菲林试剂混合，加热沸腾，产生显色反应。

4）使用分光光度计测定显色溶液的吸光度，根据吸光度与可溶性糖浓度之间的关系，计算样品中可溶性糖的含量。

2. 比色法：比色法是通过将待测样品与特定试剂反应，产生有色产物，并与标准溶液进行比色，从而计算样品中可溶性糖含量的方法。

常用的试剂有邻苯二酚、菲林试剂和磷酸重铈。

步骤：1）将待测样品与试剂混合，使其发生特定反应生成有色产物。

2）根据反应产物的颜色强度，与标准溶液的颜色强度进行比较，计算样品中可溶性糖的含量。

3. 电化学法：电化学法是通过利用可溶性糖在电极表面发生氧化还原反应，测定电流、电势或电导率的变化来确定糖浓度的方法。

常用的电化学方法有极谱法和电导法。

步骤：1）将待测样品与电解质溶液混合，形成电解质溶液。

2）将电解质溶液置于电极中，测量电流、电势或电导率的变化。

3）根据电流、电势或电导率的变化，计算样品中可溶性糖的浓度。

4. 色谱法：色谱法是通过使用色谱柱将样品中的可溶性糖分离，并通过检测分离后的峰面积或浓度来测定糖含量的方法。

常用的色谱技术有气相色谱和液相色谱。

步骤：1）将待测样品溶解，注入色谱柱。

2）通过调节流动相的组成和流速，使样品中的可溶性糖分离。

3）通过检测分离后的峰面积或浓度，计算样品中可溶性糖的含量。

总结：可溶性糖的测定方法有显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。

选择合适的测定方法需要根据具体的需求和实验条件来确定。

无论采用哪种方法，都需要在严格控制实验条件的前提下进行，以确保结果的准确性和可重复性。

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)实验目的：2. 了解可溶性总糖在不同食品中的含量。

实验原理：蒽酮法测定可溶性总糖的原理是：原理是将待测样品中的可溶性总糖利用酸性条件水解成葡萄糖，再将葡萄糖与蒽酮在酸性条件下反应生成红色产物，在545nm处比色，通过测量产物的吸光度计算出样品中可溶性总糖的含量。

实验步骤：1. 预处理样品称取25g待测样品，加入100mL蒸馏水，加热煮沸5min，冷却至室温，定容到500mL。

2. 酸水解取10mL待测样品，加热至沸腾，加入10mL 0.6mol/L HCl，再加入2mL 66% L-酒精溶液，沸腾10分钟，冷却至室温。

3. 测定葡萄糖含量取上述溶液10mL，加入20mL 蒸馏水，加入0.5g硫代硫酸钠，加1mL4%酚酞酸指示剂，用0.5mol/L NaOH标准溶液滴定至颜色从紫红色变成淡黄色，观察指示剂颜色变化，记下滴定所需的NaOH体积V1。

4. 去色取剩余的水解溶液(约50mL)，加45mL蒸馏水，加入0.5g氯化钠，用3.48×10^-3mol/L 二硫代磺酸钠溶液滴定至橙色转变为淡黄色(V2)。

5. 比色取2mL去色溶液，加0.50mL 1%蒽酮溶液，加0.50mL 4%氢氧化钠溶液，加入烧杯中，隔水加热沸腾5分钟，冷却后用0.5mol/L HCl标准溶液掉定至颜色由深红色变成粉色(V3)。

6. 计算结果计算样品中可溶性总糖的含量(y)：y=(V1-V2)×1000/6.9×V3 (单位：g/100g或mg/L)实验提示：1. 为了减小误差，应使用称量精度较高的电子天平。

2. 滴定时应慢慢加入标准溶液，用玻璃棒搅拌均匀，直到指示剂颜色变化停止。

3. 比色前需要将产物稳定，此步骤是较关键的实验步骤之一，需要加热沸腾不超过5分钟，并且不要在加热沸腾时将实验管口对准自己。

实验结果：利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，样品1(西瓜)为0.58g/100g，样品2(草莓)为0.67g/100g，样品3(苹果)为0.49g/100g，样品4(香蕉)为0.59g/100g。

原理：
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

步骤：
. 5%苯酚溶液：取适量苯酚(A.R)，高温蒸馏，收集180℃馏分，称取50.0g，用水溶解，最后定容于1000m1棕色容量瓶中，冷藏避光保存。

. 葡萄糖标准液(200mg/L)，精称110℃恒重的葡萄糖20.0mg，用水溶解，定容至100m1。

精密吸取2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml分别置于100ml量瓶中加水定容至刻度，摇匀得葡萄糖稀释液。

. 标准曲线的制备：分别精密量取上述各稀释液2 ml置具塞试管中，同时精密量取水2.0 ml置另一具塞试管中，各管分别加5%苯酚溶液（新制）1 ml，摇匀，然后迅速加入浓硫酸5.0ml，立即摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冷水浴中5 min。

以上述2.0ml 水所制得的空白溶液做参比，于490nm波长处测定各溶液吸收度，以葡萄糖稀释液的浓度（μg/ml）为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。

. 样品的测定：吸取已定容的水解样（必要时可稀释到一定体积）2.0ml置于25ml 比色管中，加5%苯酚试剂1.0ml，迅速滴加5.0ml浓硫酸，摇匀后在室温下静置30min；每个样品做三个平行样。

于490nm处用空白调零测吸光度，然后代入标准曲线算出其总糖含量。

实验八可溶性总糖的测定食品中的总糖通常是指具有还原性的糖(葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等)和在测定条件下能水解为还原性单糖的蔗糖的总量。

总糖是食品生产中常规分析项目。

它反映的是食品中可溶性单糖和低聚糖的总量，其含量高低对产品的色、香、味、组织形态、营养价值、成本等有一定影响。

总糖是麦乳精、糕点、果蔬罐头、饮料等许多食品的重要质量指标。

一、实验目的掌握食品中可溶性总糖的测定方法。

二、实验原理样品经处理除去蛋白质等杂质后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，以直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。

三、仪器试剂及玻皿配置1. (1＋1)盐酸溶液。

2. 0.1％甲基红乙醇溶液：称取0.1g 甲基红，用70％乙醇溶解并定容到100mL。

3. 30％氢氧化钠溶液。

4. 0.1％转化糖标准溶液：准确称取105℃烘干至恒重的纯蔗糖1.0526g 于锥形瓶中，用100mL 水溶解后，加(1＋1)盐酸5mL，在68～70℃水浴中加热15min，取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂 2 滴，用30％NaOH 溶液中和至中性，转移至1000mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀。

此溶液每毫升含转化糖1mg。

5. 其他试剂、仪器及玻皿配置（同直接滴定法测定还原糖）。

四、测定方法1.样品处理：同直接滴定法测定还原糖。

2.测定：称取一定量样品，按直接滴定法中的样品提取方法处理，吸取处理后的样液50mL，放入100mL 容量瓶中。

加入5mL(1＋1)盐酸溶液，置68～70℃水浴中加热15min，取出迅速冷却至室温，加2 滴甲基红指示剂，用30% NaOH 溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。

然后按直接滴定法测定还原糖含量。

五、结果计算式中：F——10mL 酒石酸钾钠铜溶液相当的转化糖的质量，mg；V1——样品溶液定容体积，mL；V2——测定时消耗样品水解液的体积，mL；m——样品质量，g；六、说明与讨论1. 总糖测定结果一般以转化糖计，但也可以以葡萄糖计，要根据产品的质量指标要求而定。

可溶性糖测定方法可溶性糖测定方法是一种常用的分析方法，用于测定食品、饮料、果汁等中的可溶性糖含量。

可溶性糖是指在水中能够溶解的糖类化合物，如葡萄糖、果糖、蔗糖等。

测定可溶性糖含量可以帮助我们了解食品的甜味程度，还可以用于质量控制和产品开发等方面。

目前常用的可溶性糖测定方法主要包括比色法、光度法和高效液相色谱法等。

下面我将分别介绍这些方法的原理和步骤。

首先是比色法。

这种方法基于可溶性糖分子与特定试剂的反应，生成具有一定颜色的复合物。

比色法最常用的试剂是菲龙试剂、安利试剂和硝酸铜试剂等。

测定步骤一般包括样品的准备、试剂的配制和比色测定。

样品的准备通常是将食品或饮料样品经过适当处理后，将溶液通过滤纸滤除杂质。

试剂的配制则是根据给定的比例将试剂与溶剂混合。

比色测定时，则是将样品溶液和试剂溶液混合，并在一定时间内测量其吸光度。

根据比色复合物的吸光度与可溶性糖含量的关系，即可计算出样品中可溶性糖的含量。

其次是光度法。

这种方法是利用可溶性糖溶液对特定波长的光的吸收特性进行测定的。

光度法需要使用专用的光度计或分光光度计进行测量。

测定步骤与比色法类似，首先是样品的准备和试剂的配制，然后将试剂与样品溶液混合，并将混合溶液转移到光度计中进行测量。

光度计会根据样品溶液对光的吸收情况，输出吸光度值。

根据吸光度与可溶性糖浓度的相关关系，可以计算出样品中可溶性糖的含量。

最后是高效液相色谱法。

这种方法需要使用高效液相色谱仪进行分析。

高效液相色谱法是通过样品中可溶性糖与色谱柱中的填料分离，进而进行测定的。

测定步骤包括样品的制备和高效液相色谱仪的设置。

样品的制备一般涉及样品的提取和净化等过程。

提取过程通常使用有机溶剂将可溶性糖从样品中提取出来，净化过程则是通过固相萃取等手段去除杂质。

高效液相色谱仪的设置则是根据样品特性，选择合适的色谱柱，并设置适当的流动相条件和检测波长。

测定时，样品溶液会经过自动进样器注入色谱柱，可溶性糖在柱中与填料相互作用而分离，然后通过检测器检测吸收峰面积或浓度，最终计算出样品中可溶性糖的含量。

植物组织可溶性总糖的测定2015-8-16一、目的：测定植物组织中总糖（可溶性碳水化合物），用以研究体内能量储藏和渗透物质积累情况，检测范围为10-100ug/ml。

因淀粉在超过45度可能糊化水解，如果已知样品含淀粉较多，应考虑70%乙醇提取或冷水提取（不包括淀粉）或1:4盐酸水解（包括淀粉）。

二、样品前处理：鲜样要称重后105度烘干，称干重，计算含水量，粉碎。

三、可溶性总糖的提取：干样测定完含水量后，称取样品0.25g，或鲜样2.50g，放入250ml 消煮管中，加水100ml，调整消煮炉温度约150-160度，煮沸30分钟，冷却，加水定容，取上清液过滤，滤液或离心上清液以水稀释适当倍数（5-10倍左右）待测。

注：西红柿总糖：取1ml匀浆，用水稀释1000倍，取2ml测定。

四、测定4.5.1试剂配制：4.5.1.1 80%硫酸：200ml水加入到1000ml烧杯中，在搅拌和水冷条件下，缓慢加入800ml浓硫酸，冷却备用。

4.5.1.2 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到1000ml 80%（V/V）硫酸中，搅拌均匀，冷却后备用。

蒽酮试剂当日配制使用。

4.5.1.3 100μg/ml 葡萄糖标准液制作：称取0.0100g无水葡萄糖（分子量180.16）或者1水葡萄糖（分子量198.18）0.0110g溶于水中，加0.5ml浓硫酸，定容100ml。

4.5.2标准曲线浓度μg/ml(ppm) 0 20 40 60 80 100 样品ml葡萄糖标准液（ml） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 22 水 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0蒽酮试剂ml 84.5.3 总糖测定：取2ml提取液于试管中，在冷水浴中加8ml蒽酮试剂，沸水浴5分钟，取出迅速冷却，于625nm测定含糖量。

同时取上表标准液2ml加8ml蒽酮同样测定。

如果含糖量太低，可适当减低稀释倍数，如果糖含量太，可适当增加稀释倍数。

此方法适于含糖量1-10%样品的测定，如果超过此含量，需稀释后测定，低于此含量，需增加称量样品。