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家庭医药 2016.0540用药之道·选药指南用药编辑/赵欣****************降尿酸药物不少，其中别嘌醇是痛风患者再熟悉不过的药物。
作为目前上市时间最长、价格最为低廉、应用最为广泛的降尿酸药物，可以说别嘌醇在人类对抗痛风这场战争中立下了汗马功劳。
直至今日，别嘌醇仍在临床广泛应用。
然而，别嘌醇虽然疗效肯定，它也有明显的不良反应。
剥脱性皮炎，让医生都“怕”别嘌醇1966年被美国食品和药品管理局（FDA）批准用于痛风和尿酸性关节炎治疗。
目前在美国和欧洲约有25%～30%的痛风患者接受别嘌醇的治疗。
别嘌醇耐受性较好，不良反应发生率为3%～5%，有皮肤系统反应、胃肠道反应、转氨酶升高等，其中以皮肤系统不良反应发生率最为严重。
其中，剥脱性皮肤坏死症是一种严重的皮肤超敏反应，发生率大约为0.1%～0.4%。
其主要引起皮肤剥脱和黏膜的破坏，还会累积到器官系统，死亡率高达20%～30%。
由于这一严重皮肤不良反应，业内甚至出现医生“不敢第一个开别嘌醇”的顾虑，严重影响到医生对别嘌醇的用药决策和患者的依从性，也增加了临床使用的风险。
不过，别嘌醇发生剥脱性皮炎的风险，并非人人平等，而是与患者是否携带一个叫做HLA-B5801的基因有关。
HLA-B5801已被多种指南认定为是别嘌醇严重皮肤反应的最大危险因素和特异性基因标志物。
HLA-B5801在不同种族间分布存在差异性，中国汉族人和泰国人该基因频度较高，达到8%左右；白种人和日本人的基因频率仅为1%和0.5%。
如果携带该基因，使用别嘌醇发生严重过敏反应风险的可能性更大。
早在 2008 年，中国台湾地方行政部门就已经发布指令，在服用别嘌醇前必须进行HLA-B5801 检测。
美国风湿病学会在2012年的痛风诊治指南中也建议，特殊人群在服用别嘌醇前检测HLA-B5801基因，这些人群包括：有3级以上的慢性肾脏病（CKD）的韩国裔；所有的中国汉人、泰国裔。
人类HLA基因图及其遗传特征在人类MHC称为HLA（human leucocyte antigen)，是迄今为止所知的人类最复杂的基因族。
除成熟的红细胞外，HLA抗原几科分布于人体的各种有核细胞以及血小板。
由于此组抗原首先在人外周血白细胞上发现，同时表达抗原水平较高，目前多采用外周血淋巴细胞来检测这类抗原的型别，故称为人类白细胞抗原（HLA)。
(一)HLA基因定位HLA基因群定位于第6号染色体的短臂。
至1991年底，HLA基因座位已确定确定近60个，正式命名的等位基因278个。
这些基因分类的方式主要有以下两种。
（1)传统的分类法，即把HLA分为与小鼠H-2相似的I类、Ⅱ类和Ⅲ基因，（2)1991年Bodmer建议将它重划分的三类：第一类包括传统分类中的HLA-Ⅰ类和Ⅱ类，还包括一对DMA和DMB；第二类称为免疫功能相关基因，包括C4、Bf、C2、TNFA、TNFB、HSP70、TAP1、TAP2和TAP7等；第三类是一些与上述无关的基因。
本章仍按传统分类法进行介绍。
HLA占第6号染色体很窄的一个区带，估计占人体整个基因组的1/3000，长约3500kb（图6-3、6-4)。
利用交换率越大基因座位距离越远，交换率越小基因座位距离越近的原理，可以通过交换率的计算作基因图，经过家谱分析和交换率的计算作基因图，A-B座位的交换率为0.8分摩（centi Morgan,cM。
是基因交换率在基因图上的图距单位，重组频率在1%的两个连锁基因之间的距离为1cM)，A-C为0.6cM，B-C为0.2cM，B-D为0.8cM，HLA基因群全长距离约为4cM。
自1964年以来，每隔3-4年召开一次国际组织相容性工作讨论会（International Histocompatibility Workshop,IHW),最近一次于1991年11月在日本横滨召开，并预定于1995年在法国召开第12次IHW。
经过这些会议陆续报告了HLA的许多基因及大量的行装位基因。
HLA-B*5801单克隆抗体的制备及特异性检测目的:痛风是一种由单尿酸钠结晶沉积而引起的炎性关节炎,近年来,随着饮食结构等因素的改变,发病率逐渐增高,已成为严重危害人类健康的疾病之一。
别嘌呤醇作为临床治疗痛风的一线药物,自1963年用于治疗痛风性关节以来,疗效肯定。
然而临床应用中发现别嘌呤醇的诸多不良反应,研究表明别嘌呤醇的过敏反应与HLA-B*5801基因有着密切的联系。
因此,基因型的检测为于展开个体化用药,减少药物不良反应提供依据。
本研究的目的在于研究制备一种靶向于HLA-B*5801多肽的单克隆抗体,鉴定其特异性和敏感性,并探讨其作为检测HLA-B*5801基因的单克隆抗体的检测抗体的可能性。
方法:合成HLA-B*5801胞外段超变区域多肽,将该多肽作为抗原,免疫BALB/c小鼠,经细胞融合技术,产生融合的杂交瘤细胞,ELISA筛出分泌目的抗体特异性较高的细胞孔,经多次亚克隆,获得稳定分泌靶向于HLA-B*5801胞外段区域单克隆抗体的细胞株。
常规方法制备腹水并用蛋白G柱亲和层析纯化该单克隆抗体,Western blot 鉴定纯化抗体的纯度。
倍比稀释法检测该单克隆的效价,单克隆抗体亚类检测试剂盒检测抗体的亚类,ELISA和Western blot检测其特异性。
结果:经单克隆技术和亚克隆筛选获得稳定表达HLA-B*5801的单克隆抗体细胞株,经腹水法生产获得单克隆抗体,将该抗体命名为1E1、2A3,鉴定其亚类为IgGl、κ型,验证其抗体效价为1E1—1014,2A3—1010,并通过HLA-B*5801基因检测试剂盒筛选HLA-B*5801阳性患者及阴性患者,通过ELISA及Western blot 鉴定该抗体特异性结合HLA-B*5801蛋白,筛选阳性及阴性患者。
结论:筛选所获得的亚克隆抗体,经ELISA和Western blot验证,其可特异性的与HLA-5801多肽结合,并具有较高的效价,提示该抗体可作为临床筛选对别嘌呤醇过敏的痛风患者。
专利名称：用于检测HLA-B*5801等位基因的试剂盒及其检测方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：叶绍云,万楠,刘国凤,杨小娟,蒋峻峰,袁海琴,孟浩浩,叶强
申请号：CN201810499371.7
申请日：20180523
公开号：CN108624676B
公开日：
20220401
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了用于检测HLA‑B*5801等位基因的试剂盒及其检测方法和应用，属于生物检测技术领域。
所述试剂盒包括用于确定待检测样本分型为HLA‑B*58的引物，以及用于确定所述检测的HLA‑B*58样本分型为HLA‑B*5801的引物；本发明通过设计待检测目的片段的引物，先将其通过PCR扩增富集，再通过扩增的待检测目的片段的检测引物，PCR扩增检测，能够减少假阳性率；并且通过设计的两对特异引物和其对应的两对检测引物能够使检测结果更为准确，其中第一对特异引物和第一检测引物可以确定待测样本为分型为HLA‑B*58；第二对特异引物和第二检测引物可以确定待检测样本分型为HLA‑B*5801；排除非特异扩增的干扰能力强。
申请人：健路生物科技(苏州)有限公司
地址：215000 江苏省苏州市工业园区生物纳米园星湖街218号B2栋505-506单元
国籍：CN
代理机构：苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：李艾
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hla基因分型报告解释HLA（人类白细胞抗原）基因分型报告是通过分析个体的HLA基因，确定个体的HLA基因型。
这对于移植医学、免疫学研究以及疾病的发生和治疗都具有重要意义。
HLA基因是人体免疫系统中最重要的基因之一，它编码了HLA分子，这些分子的主要功能是在免疫细胞表面呈现抗原片段，以便免疫系统识别和攻击外来物质。
HLA基因分型报告主要包括两个部分：HLA-A、B、C和HLA-DRB1、DQB1。
其中，HLA-A、B、C是人体主要组织相容性复合体（MHC）I类分子的亚型，而HLA-DRB1、DQB1是MHC II类分子的亚型。
HLA基因分型报告通常以数字和字母的组合表示，如HLA-A*02:01，其中“A”表示基因家族，"*02"表示亚型分组，":01"表示具体亚型。
不同的HLA基因型与个体的免疫功能密切相关，包括免疫应答的强度、易感性和疾病的发展等方面。
HLA基因分型报告的解释包括以下几个方面：1. HLA型别：报告会明确个体的HLA-A、B、C、DRB1和DQB1基因的具体型别，方便进行群体匹配和移植配型。
2. 基因家族：报告会显示个体所属的不同HLA基因家族，例如A、B、C家族属于MHC I类基因，DRB1、DQB1家族属于MHC II类基因。
3. 分辨率：报告中的型别可能具有不同的分辨率，更高的分辨率表示更具体的亚型信息，可以更准确地进行配型。
4. 频率：报告中通常会给出所测定HLA型别在特定人群中的频率信息，这对于移植匹配的评估非常重要。
5. 相容性：通过比较个体的HLA基因型与患者、供体之间的基因型，可以评估移植匹配的相容性，以减少排斥反应的发生。
通过解读HLA基因分型报告，可以了解个体的HLA基因型，并根据不同的基因型进行移植匹配和疾病风险评估，有助于指导临床治疗和预防。
