HPLC测定冠心生脉丸中芍药苷的含量

食品与药品　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　２０１７年第１９卷第１期　４７　

ＨＰＬＣ￣，ＩＪ定冠心生脉丸中芍药苷的含量　

薛剑桥　

（淄博市食品药品检验研究院，山东淄博２５５０８６）　

摘要：目的建立以高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定冠心生脉丸中芍药苷含量的方法。方法色谱柱为Ｗｏｎｄａｓｉｌ　Ｃ１８　Ｓｕｐｅｒｂ（４．６　ｍｍＸ　１５０ｉ＇ｉ１１－ｎ，５　１）；流动相为乙腈一０．１％磷酸溶液（１４：８６）；检测波长为２３０　ｎｌ＇ｎ；流速为１．０　ｍＬ／ｍｉｎ。结果芍药苷在０．０５８６￣１．７５８０　范围内线性关系良好（ｒ＝１），平均回收率为９９．ｏ２‰ＲＳＤ为１．２％。　结论本法简便、快速、重复性好，可用于冠心生脉丸的质量控制。　关键词：冠心生脉丸；芍药苷；含量测定；高效液相色谱法　中图分类号：Ｒ９２７．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２．９７９Ｘ（２０１７）０１．００４７．０３　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｉｎ　Ｇｕａｎｘｉｎ　Ｓｈｅｎｇｍａｉ　Ｐｉｌｌｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ＸＵＥ　Ｊｉａｎ－ｑｉａｏ　（ＺｉｂｏＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｚｉｂｏ　２５５０８６，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｉｎ　Ｇｕａｎｘｉｎ　Ｓｈｅｎｇｍａｉ　Ｐｉｌｌｓ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｗａｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｏｎ　Ｗｏｎｄａｓｉｌ　Ｃ１８　Ｓｕｐｅｒｂ（４．６　ｍｌＴｌ×１　５０　ｍｍ，５　０ｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｔ　２３０　ｎｎ１．Ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．１％ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｒ１４：８６）．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０　ｍＬ／ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０５８６—１．７５８０　ｔｘｇ（　１）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９９．Ｏ２％ｗｉｔｈ　ＲＳＤ　ｏｆ１．２％．Ｃｏｎｅｌｕ￣ｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄ　ｃａｌｌｂｅ　ｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｘｉｎ　Ｓｈｅｎｇｍａｉ　Ｐｉｌｌｓ．　Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｇｕａｎｘｉｎ　Ｓｈｅｎｇｍａｉ　Ｐｉｌｌｓ；ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ　

冠心生脉丸为中药复方制剂，现收载于《卫　（ＨＰＬＣ）测定该制剂中芍药苷含量的方法，以　

生部药品标准》中药成方制剂第六册ｎｌ，主要由　提高药品质量标准水平，更好地控制其质量。　

人参、麦冬、丹参、赤芍等七昧药组成，有益气　１材料　

生津、活血通脉之功效。用于心气不足，心阴虚　１．１仪器　

引起的心血瘀阻，心悸气短，胸闷作痛，自汗乏ＬＣ．２０ＡＴ高效液相色谱仪，ＳＰＤ．２０Ａ　ＩⅣ／、，ＩＳ　

力，脉微结代；冠心病，心绞痛，心律不齐。其　检测器（日本岛津公司）；ＭＥＴＴＬＥＲ　ＡＥ２４０电　

质量标准中无含量测定项，因赤芍具清热凉血，　子分析天平（梅特勒．托利多仪器有限公司）；　

散瘀止痛之功效，在方中发挥重要作用，其主　ＫＳ．３００Ｅ超声波清洗机（宁波科生仪器厂）。　

要有效成分芍药苷具有保肝［２】、促进造血细胞增　１．２试药　

殖　、保护心脑血管　】、舒张血管平滑肌　及抗　芍药苷对照品（批号１１０７４９．２００７１４，含量以　

抑郁［７　等作用，故本文建立了用高效液相色谱法　９６．５％计）购自中国食品药品检定研究院；冠心　

收稿日期：２０１６．１１－０５　作者简介：薛剑桥（１９８９－），女，山东青岛人，从事中药质量控制研究Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｊｑ２００９１０１４＠１６３．ｃｏｒｎ

　４８　食品与药品　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　２０１７年第１９卷第１期　

生脉丸，市售，同一厂家三批样品，批号分别为　

１２１２０４，１２０２０７，１１０５１２；乙腈为色谱纯，水为　

超纯水，其余试剂均为分析纯。　

２方法与结果　

２．１色谱条件　

色谱柱为ＷｏｎｄａＳｉ１　Ｃ１　８　ＳＵＰｅｒｂ（４．６　ｍｍＸ　１５０ｍｍ，５岬）；流动相为为乙腈一０．１％磷　

酸溶液（１４：８６）；流速为１．０　ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长　

２３０ｎｌｎ；柱温４Ｏ℃。　

２．２溶液的制备　２．２．１对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，　

精密称定，置入１００　ｍＬ量瓶，加甲醇制成每ｌ　ｍＬ　

含０．１１７３　ｍｇ溶液，作为对照品储备溶液。临用　

时，精密吸取对照品储备溶液５　ｍＬ，置入１０　ｍＬ　

量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每ｌ　ｍＬ　

含芍药苷为０．０５８６　ｍｇ）。　

２．２．２供试品溶液的制备取本品适量，剪碎，混　

匀，取约２　ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精　

密加入稀乙醇２５　ｍＬ，密塞，称定重量，放置使　

溶散，超声处理（功率２２０　Ｗ，频率３３　ｋＨｚ）３０　

ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的　

重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　

２．２．３阴性对照溶液的制备按处方组成，取除白　

芍外的其他药味，按冠心生脉丸制备方法制成缺　

白芍的阴性样品，按“２．２．２”项下的方法操作，　

制备阴性对照溶液。　

２．３专属性试验　分别精密吸取“２．２”项下的对照品溶液、供　

试品溶液和阴性对照溶液各１０　，注入高效液相　

色谱仪，按规定的色谱条件进样测定，记录色谱　

图。供试品色谱图中，呈现与芍药苷对照品色谱　

峰保留时间一致的色谱峰，其他组分对测定无干　

扰（图１）。　Ａ．对照品；Ｂ．供试品；Ｃ．阴性对照；１．芍药苷　图ｌ冠心生脉丸ＨＰＬＣ　

２．４线性关系考察　

分别精密吸取“２．２．１”项下的对照品溶液１，　

５，１０，２０，３０　，注入高效液相色谱仪，按规　

定的色谱条件进样测定，测定峰面积。以进样量　

（　）对峰面积（　）进行线性回归，得芍药苷回　

归方程为Ｙ＝２Ｘ１０　．１１　１９８，尸＝ｌ。结果表明，芍　

药苷在０．０５８６－－１．７５８０　范围内线性关系良好。　

２．５精密度试验　

分别精密吸取对照品溶液ｌ０　，按规定色谱　

条件连续进样６次，记录峰面积。结果芍药苷峰　

面积的ＲＳＤ为０．３８％，表明仪器具有良好的精密　

度。　

２．６重复性试验　

取同一批冠心生脉丸（批号为１２１２０４）样品　

６份，按“２．２．２”项下的方法制备供试品溶液，　

分别精密吸取ｌ０　，注入高效液相色谱仪，按规　

定的色谱条件进行测定并计算芍药苷的含量。结　

果芍药苷平均含量为０．９６３０　ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．６％，　

表明用本法测定芍药苷含量的重复性良好。　

２．７稳定性试验　

取同一批冠心生脉丸（批号为１２１２０４）样品　

６份，按“２．２．２”项下的方法制备供试品溶液，　

分别于放置０，２，４，６，８，１０，１２　ｈ精密吸取１０　

，注入高效液相色谱仪，按规定的色谱条件进　

行测定，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的ＲＳＤ　

为０．２６％，表明供试品溶液在１２　ｈ内有良好的稳　●

　食品与药品　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　２０１７年第１９卷第ｌ期　４９　

定性，可用于测定。　

２．８加样回收试验　

分别取同一批冠心生脉丸（批号１２１２０４，　

芍药苷含量为０．９５０５　ｍｇ／ｇ）样品适量，剪碎，混　

匀，取约ｌ　ｇ，精密称定，共９份，３份分别精密加　

入对照品储备溶液５　ｍＬ及稀乙醇２０　ｍＬ，３份分别　

精密加入对照品储备溶液１０　ｍＬ及稀乙醇１５　ｍＬ，　３份分别精密加入对照品储备溶液１５　ｍＬ及稀乙　

醇１０　ｍＬ，按“２．２．２”项下的方法制备供试品溶　

液，分别精密吸取１０　，注入高效液相色谱仪，　

按规定的色谱条件进行测定，记录峰面积，计算　

芍药苷的含量，并计算加样回收率。结果芍药苷　

的平均回收率为９９．０２％，ＲＳＤ为１．２％。结果表　

明，本法的准确度较好（表１）。　

表１芍药苷加样回收率试验　

２．９样品测定　

取３批冠心生脉丸（批号分别为１２ｌ２０４，　

１２０２０７，１１０５１２），分别按“２．２．２”项下的方法　制备供试品溶液，分别精密吸取１Ｏ　，注入高　

效液相色谱仪，按规定的色谱条件进行测定，记　

录峰面积，并计算芍药苷的含量，结果分别为　

０．９５０５，０．９００８，０．９７７５　ｍｇ／ｇ。　

３讨论　

芍药苷的含量测定，现多采用反相高效液相　色谱法，采用的流动相有不同比例的乙腈一水［８】、　

甲醇．０．２％磷酸溶液　、乙腈．０．１％磷酸溶、液【ｍ　及　

乙腈．０．０５　ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液Ⅲ　等。本文采用　

乙腈．０．１％磷酸溶液（１４：８６）作为流动相，取得　

了较理想的分离效果。　提取溶媒多采用甲　ｍ　和稀乙　¨】，本文中　

采用稀乙醇，因样品为蜜丸，采用稀乙醇更易溶　

散，便于提取。同时考察溶媒用量及提取时间，　

结果表明，加入稀乙醇２５　ｍＬ，超声处理３０　ｍｉｎｆ￣　

提取完全。　

参考文献　

［１】中华人民共和国卫生部．卫生部药品标准中药成方制剂【Ｓ】．第　六册．１９９２：１３４．　【２】Ｌｉｕ　Ｄ　Ｆ，ＷｅｉＷ，Ｓｏｎｇ　Ｌ　Ｈ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ　ｐｌｕｓ　ｌｉｐＯｐＯｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｕｍｏｕｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ－　ａｌｐｈａ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一６ＭＲＮＡ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，　２００６，３３（４）：３３２－３３５．　［３】郭平，王继峰，王升启．芍药苷对放射线致血虚证小鼠骨髓　Ｅｐｏ和Ｇ—ＣＳＦ基因表达的影响【Ｊ】．山东中医药大学学报，２００５，　２９（３）：２３９—２４３．　［４】孙蓉，吕丽莉，孙虎，等．芍药苷对大鼠全脑缺血模型的影响【Ｊ］．　中国中药杂志，２００７，３２（２３）：２５１８—２５２２．　【５】刘旭春韦颖梅．芍药苷预处理对大鼠离体缺血再灌注损伤心脏　的保护作用【Ｊ】．中西医结合心脑血管病杂志，２００９，７（１Ｏ）：１１７７－　１ｌ７９．　［６】彭珍香，黄海定，邓时贵．芍药苷对大鼠离体胸主动脉血管环的　作用及其机制［Ｊ】．中国实验方剂学杂志，２０１　１，ｌ７（７）：１９０—１９４．　【７】崔广智，金树梅．芍药苷对利血平诱导抑郁模型的影响［Ｊ］．中国　实验方剂学杂志，２０１２，１８（２２）：２７２．２７４．　［８］丁仕强．ＨＰＬｃ测定前列安通胶囊中芍药苷的含量［Ｊ］．中国实验　方剂学杂志，２０１２，１８（２３）：６１－６３．　［９】于密密，傅欣彤．小败毒膏质量标准研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂　志，２０１２，１８（２３）：７９－８２．　［１Ｏ】王明星，于秀华，刘永强．ＨＰＬＣ￣ｔ］定利胆止痛胶囊中芍药苷的　含量【Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１２，１８（２２）：１４２－１４４．　【ｌ１］邓双炳，石岩，胡玉花，等．ｍ，Ｌｃ测定脾肾两助丸中芍药苷的含　量［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１３，１９（５）：１２３—１２５．