牛早期妊娠诊断新技术

妊娠母牛的鉴别方法及饲养管理妊娠母牛是养殖业中最为重要的生产性动物之一。

它们是产母牛群体的基石，影响着养殖户的收益和产业链的发展。

因此，如何科学地识别妊娠母牛，并且进行合理的饲养管理，对养殖过程中的成功至关重要。

本文将介绍妊娠母牛的鉴别方法以及饲养管理措施。

1. 初次检查初次检查是确认妊娠的第一步。

农民可以通过观察牛的行为来判断其是否妊娠。

如果牛没有受孕，那么在牧场上会表现得和平常一样，也不会呈现出特别的表现。

而如果牛怀孕了，那么在行动和食欲上会有所改变。

例如，会频繁地站立或特别安静等。

但初次检查并不是确定妊娠的最终鉴定方法。

你需要使用更加科学的方法进行确认。

2. 精液痕迹检测此方法适用于使用人工授精的情况。

用手套摸摸母牛的肛门，并通过手套来检查是否有精液残留。

如果授精成功，那么精液残留的可能性就很高。

3. 心率检测通过医用超声设备可以检测胎儿的心率。

在妊娠三个月后可以进行心率检测。

此方法存在一定的技术难度。

农民可以向兽医咨询是否有相关设备和技术。

4. 孕酮水平测试孕酮水平测试是确定妊娠最确切的检测方法之一。

可以通过母牛的牛奶、尿液或血液样本来检测孕酮水平。

但相比其他方法，孕酮水平测试更为复杂，需要专业的实验室来进行检测。

1. 维持适度的营养物供应妊娠期的母牛需要额外的营养物来支持胎儿的生长。

农民应当合理安排牛的饮食，根据妊娠的阶段适当调整饲料的种类和供应量。

在配饲时可适量混入粉状饲料，提高蛋白质和钙质含量。

2. 预防和治疗疾病妊娠母牛往往存在一定的疾病风险。

在妊娠期间，牛应该按时接种疫苗，并且定期检查身体状况，特别是检查是否感染疾病或寄生虫。

合理的健康措施可以降低疾病发生概率，从而提高产量和质量。

3. 预防压力和惊恐妊娠母牛的情绪稳定十分重要。

它们需要被保护，避免遭受过多的压力和惊恐。

在妊娠期间应尽可能减少噪音和动荡环境。

同时避免过于频繁的搬运和运输。

如果需要，可适当地改善马厩和牛舍的设计，给牛创造一个舒适的环境。

奶牛早期妊娠诊断ELISA方法的应用及PAG-1单克隆抗体的制备奶牛早期妊娠诊断ELISA方法的应用及PAG-1单克隆抗体的制备导语：奶牛妊娠诊断是养殖业中的重要环节。

早期妊娠诊断有助于及时调整饲养管理措施，提高奶牛的生产性能。

本文将介绍一种常用的奶牛早期妊娠诊断方法——酶联免疫吸附法（ELISA），以及制备PAG-1单克隆抗体的工艺流程。

一、酶联免疫吸附法（ELISA）在奶牛早期妊娠诊断中的应用酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学方法，可以用于检测体液中的特定蛋白质。

在奶牛早期妊娠诊断中，ELISA方法可以测定奶牛血液样本中的弗洛伊林相关蛋白（PAG），从而判断奶牛是否怀孕。

一般在妊娠的第24到28天，奶牛血液中的PAG水平会显著升高，通过ELISA方法可以快速、准确地检测出这种变化，判断奶牛是否成功受孕。

ELISA方法的步骤主要包括：1. 样品处理：收集奶牛的血液样本，离心分离，获取血清样品，保存在冰箱中备用。

2. 酶标板涂覆：将PAG抗原溶液均匀地涂覆在96孔酶标板中，密封孔板，在4℃下储存过夜。

3. 抗体结合：将待测样本稀释后加入涂覆好的酶标板孔中，与PAG抗原结合，孵育一定时间。

4. 酶标记抗体结合：加入标记有酶的二抗，培养片刻以促使其与已结合的PAG结合。

5. 反应底物：加入底物溶液，使酶催化反应产生发色物质，反应时间一般为10-30分钟。

6. 反应终止：加入反应终止液，停止酶催化反应，防止进一步产生发色物质。

7. 读取结果：使用酶标仪，在450nm波长下测定反应孔的吸光度值。

8. 结果判定：根据标准曲线和控制孔的吸光度值，判断样本中的PAG含量，从而判断奶牛的妊娠情况。

二、PAG-1单克隆抗体的制备PAG-1是奶牛血浆中的特异性蛋白质，其表达量与奶牛妊娠的状态密切相关。

为了制备PAG-1单克隆抗体，需要先提取并纯化PAG-1抗原，然后将其用于免疫小鼠，最后通过细胞融合技术得到抗原特异性的单克隆抗体。

一、实验目的本实验旨在掌握奶牛妊娠诊断的基本原理和方法，提高奶牛养殖户对奶牛妊娠的早期诊断能力，为奶牛养殖生产提供科学依据。

二、实验原理奶牛妊娠诊断主要依据妊娠母牛体内激素水平的变化，如孕酮、雌激素等。

通过检测这些激素水平，可以判断奶牛是否妊娠。

三、实验材料1. 实验动物：健康黑白花奶牛5头，分别编号为1、2、3、4、5。

2. 试剂与仪器：3%硫酸铜溶液、饱和氯化钠、0.1%氧化镁溶液、医用碘酒、试管、酒精灯、火柴、温度计等。

3. 实验步骤：（1）乳汁诊断法① 分别取1毫升3%硫酸铜溶液加入0.5-1毫升乳汁中，观察乳汁是否凝结。

② 取1毫升乳汁放入试管中，加入1毫升饱和氯化钠，振荡后再加入15毫升0.1%氧化镁溶液，振荡20-25秒。

③ 将试管置于开水中加热1分钟，取出静置3-5分钟后观察，如形成絮状物沉在下半部表明已怀孕，不形成絮状物或集于上部是未孕。

（2）尿液诊断法① 取母牛清晨排出的尿液20毫升放入试管中。

② 加入1毫升醋，再滴入1毫升2%-3%医用碘酒。

③ 用火缓慢加热煮沸，此时试管中从上到下呈现红色表明怀孕，如呈浅黄色、褐绿色，冷却后颜色很快消退则未孕。

四、实验结果1. 乳汁诊断法① 奶牛1、2、3号乳汁凝结，表明已怀孕。

② 奶牛4、5号乳汁不凝结，表明未怀孕。

2. 尿液诊断法① 奶牛1、2、3号尿液在加热煮沸后呈红色，表明已怀孕。

② 奶牛4、5号尿液呈浅黄色、褐绿色，冷却后颜色很快消退，表明未怀孕。

五、实验分析通过本次实验，我们掌握了奶牛妊娠诊断的基本原理和方法。

乳汁诊断法和尿液诊断法均能准确判断奶牛是否妊娠。

在实际生产中，可根据具体情况选择合适的方法进行诊断。

六、实验总结1. 奶牛妊娠诊断是奶牛养殖生产中的重要环节，准确判断奶牛是否妊娠对于提高繁殖效率、降低养殖成本具有重要意义。

2. 本次实验中，乳汁诊断法和尿液诊断法均具有较高的准确性，为奶牛养殖户提供了便捷的妊娠诊断方法。

3. 在实际生产中，应根据奶牛的具体情况选择合适的妊娠诊断方法，以确保诊断结果的准确性。

一
致 （ 种 后 ３ ５ 天） 配 ０～ ０ ，孕 检 越 早 的牛 胚 胎 死亡 率 也越 佳 的检 测 时 间 是 配 种 后 ２ 天 ， 因 为这 时候 进 行 检 测 能 ４ 高 ，因此 需 要对 间接检 测 妊娠 的 方法 进行 研 究 。 消 除 长 发情 间 隔造 成 的假 阳性 ，现 场 检测 牛 奶 中的 孕酮 敏 感 性 （ 妊 娠 牛准 确 性 ） 为９ ．％ ，但是 其 特 异 性 如 约 ３１
小 ，资料 表 明在 配种 后 ２ ～２ 天 检测 ，妊 娠 的敏 感 性和 种妊娠 特异 性蛋 Ｉ（Ｓ — １ ５ ￣ Ｐ Ｐ Ａ和一 ） 发现 以来 ，Ｎ２ ｏ 年 已 ｔ Ｂ被 ｏｏ 特异性分别是４ ． ４８ ％和８ ． ２ ％；如果在配种后２ ～３ 天检 测 ， ３ ６ ３
发 现 约 ２ 种妊 娠 相 关 糖 蛋 白 （ Ａ ），并 且 已 经证 明 １ Ｐ Ｇｓ
脓 、持 久 黄体 、黄 体 囊肿 以及不 当操 作等 等 ；而 配 种后
手 检 大 多 时候 被确 定 为 诊 断妊 娠 的标 准 。因 为该 方 法成 ８ ０～１ ０ ０ 天进 行 硫 酸 雌酮 检 测 ，其结 果 也不 准 确 。 因此
本 低 ，马 上 能 得 到 结 果 ，依 据 操 作 者 的经 验 准 确 率 可 孕 酮检 测 、硫 酸雌 酮 检测 方 法应 用不 太广 泛 。 达 ９ ％ ，通 常 在 配 种 后 ３ ～６ 天 由兽 医来 进 行 首 次 孕 ５ ５ ５ 检 。 但事 实是 该动 作 对 早 期胚 胎 具有 非 常 高 的侵 害 性 ， 与胚 胎 死 亡 之 间 有 一 定 的相 关 性 ； 另外 ，子 宫 积 脓 等
法 ，并 对 其 优 缺 点 及 应 用进 行 了 比较 论 述 。

奶牛的妊娠诊断与妊娠终止1妊娠诊断1.1直肠检查法①术式：将手伸入直肠，于骨盆底握住子宫颈，并向前伸，用手指寻找子宫间沟。

继续前伸，手指顺子宫角弯曲而弯曲，并将两子宫角握在手中，分别触摸。

沿子宫角尖端仔细触摸卵巢。

触摸子宫中动脉时，可将手掌贴到骨盆顶向前滑动，经过岬部，向前可触摸到游离、颤动的子宫中动脉。

②判定：未妊娠时子宫及卵巢均在骨盆腔内，两子宫角大小、硬度和形状相同，收缩如绵羊角状，具有弹性和坚实感。

经产牛有时不呈绵羊角状，或垂入腹腔。

妊娠1个月：子宫角位于耻骨联合前端，妊角稍粗，质地稍软，绵羊角状弯曲不明显，妊角卵巢增大。

妊娠2个月：两子宫角大小不对称，妊娠角比空角粗1～2倍，变长而进入腹腔，角壁变薄而软，有波动，妊角卵巢前移至耻骨前缘。

妊娠3个月：两子宫角极不对称，角间沟消失，妊角较空角大3～4倍，子宫颈移至耻骨前缘，妊角大如人头，移入腹腔，子宫壁松软，波动明显，妊角卵巢位于耻骨前缘下方。

妊娠4～5个月：子宫颈移至耻骨前缘下，子宫完全垂入腹腔，触摸子宫时壁薄，有明显波动感，有时还能触摸到胎儿和胎盘，妊角子宫中动脉有明显颤动。

妊娠6～7个月：子宫下沉到腹腔深部，一般摸不到胎儿，子宫中动脉颤动极为明显。

妊娠8～9个月：子宫颈退至骨盆内或入口处，能摸到胎儿，胎盆如鸡蛋大，两侧子宫中动脉颤动明显。

1.2子宫颈黏液诊断法①煮沸法：用少量子宫颈黏液，加蒸馏水4～5mL混合，煮沸1分钟，溶液呈块状沉淀者为妊娠，上浮者为未妊娠。

此法可检测出妊娠30天以上的母牛。

②苛性钠煮沸法：取少量子宫颈黏液，加1%苛性钠溶液2～3滴，混合煮沸。

分泌物完全分解后，颜色由淡褐色变为橙色或褐色者为妊娠。

此法可检测出妊娠15天以上的母牛。

③比重测定法：妊娠母牛子宫颈黏液比重为1.013～1.016，未妊娠牛比重小于1.008。

取少量子宫颈黏液，放入比重为1.002～1.010的硫酸铜溶液中，黏液呈块状沉淀者为妊娠，上浮者为未妊娠。

中国畜禽种业2019.03作者简介：王斐(1989.11-），女，辽宁省开原市人，兽医师，研究方向：预防兽医及动物疫苗研制。

奶牛早期妊娠诊断技术简述王斐（黑龙江省齐齐哈尔市畜牧总站161000）摘要：随着人民生活水平的提高，我国畜牧养殖业飞速发展，人们对牛奶的需求量大增，奶牛养殖业得到蓬勃发展。

在奶牛养殖中，繁殖技术是奶牛养殖业的重中之重，奶牛早孕诊断一直是奶牛养殖业亟待解决的问题，本文简述常规奶牛早孕诊断技术手段，以期为奶牛产业繁殖效率提高提供参考。

关键词：奶牛；养殖；妊娠；诊断20世纪90年代以来，中国乳牛的存栏量大增，奶牛养殖量不断增加。

高效养牛模式是目前养殖场追求的方式，早期妊娠诊断可提高奶牛繁殖率，从而提高奶牛养殖的经济效益。

近年来，奶牛早孕诊断技术出现了很多新的方法与技术。

1奶牛的早期妊娠诊断主要技术1.1早孕因子诊断法早孕因子是一种妊娠相关蛋白复合物，通过抑制雌性动物的细胞免疫，使胎儿能正常存活，从而达到避免母体免疫排斥的目的。

早孕因子的诊断方法主要是确定早孕因子的含量，以此作为早孕诊断的重要指标[1]。

1.2乳胶凝集抑制试验当精子和卵子结合形成合子时，胚胎和胎盘在母牛体内发育，绒毛膜促性腺激素是由绒毛膜滋养细胞和囊胚子叶分泌出来的，通过乳胶凝集抑制试验测定怀孕雌性动物的尿液和奶中的激素可作为早期妊娠诊断的方法[2]。

1.3超声波诊断法超声波有A 超、B 超、D 超，其中多普勒超声被广泛应用。

其原理是利用超声波对动物子宫扫描，根据信号判断动物是否怀孕[3]。

我国运用超声波在动物早孕的诊断进行大量研究。

邓甘珍等在2004年用B 超检测了137只处于不同妊娠阶段的雌性动物，在交配后第30天的诊断准确率为89%，在交配后31～35d 的诊断准确率为97%，35d 以上的诊断准确率为100%。

1.4宫颈-阴道黏液电导率测定法有研究者通过测定宫颈-阴道黏液电导率在妊娠早期和发情周期有规律的变化发现，健康奶牛发情时导电性水平较低，从发情开始逐渐上升到发情后期逐渐下降；在发情后受精过程中，孕牛的电导率变化与空牛不同。

应 用 现状 综述 如 下 。
一
触摸 或 使用 内窥 镜观 察 阴道 黏膜 、粘 液和 子 宫颈 的变 化 。该 法最 早可 在妊 娠 ５ 后 进 行 。 由于诊 断 时 间较 晚 ， ０ ｄ 其 应 用 受 到 了 限 制 。 １９ 年 ， 日本 ９３ 研 究 出一种 “ 殖检 测 器 ”（ ｅ ｒ－ 繁 Ｒ ｐｏ ｄ ｃｉｎ ｅｅｔｒ，用 于 测 定 阴道 粘 ｕｔ ｔｃｏ） ｏＤ
心后加入防腐剂，冷冻保存 ２ ， ４ ｈ后
二，阴道检查法
传 统 的 阴 道 检 查 法 主 要 是 用 手
便 可 以 进 行 测 定 。确 定 妊 娠 阳 性 的 血 浆 Ｐ 含 量标 准 随 畜 种 、采 样 、处 ４ 理 样 品 的 方 法 等 不 同 ，一 般 地 ，牛
≥ １ ｇ ｍｌ 羊 ≥ ０ ５ｎ ／ ， 猪 ／ ， ｎ ． ｇ ｍｌ
并做 好记 录 。 直 肠 触 诊 法 通 常 在 配 种 后 ４ ０ ｄ
并首次证 明了乳 中 Ｐ 浓 度所 反映 的 ４
发 情 周期 阶 段 与 直 接 卵 巢 的 评 估 结 果 相 一 致 。而 后 又 有 资 料 表 明 ，乳
≥ ３ｍｏ Ｌ １ｍｏ Ｌ 鸳 ０３ ｎ／ ． ｎ Ｕ （ ｎ ｌ ／ ． ｇ ￣） １
湿 润 光 滑 ，有 黄 色 分 泌 物 ，此 种 变 化 对 已 配种 ２ ０～ ４ 妊 娠 符 合 ０ｄ的
原子 能 机 构 （ Ｅ 正在 向发 展 中 Ｉ Ａ） Ａ
三 ．孕酮测定诊断法
主要 包 括放 射 免疫 测定 法 （ Ｉ ） Ｒ Ａ 和 酶免 疫 测定 法 （Ｉ ＥＡ） （ ） 放 射 免 疫 测 定 法 （Ｉ） 一 ＲＡ １５ 年 Ｙ ｌ 首 次 创 立 了 Ｒ Ａ， 由 ９９ ａｗ ｏ Ｉ 于 Ｒ Ａ 灵敏 度和精确度高 ， Ｉ 重复性好 ， 其 应 用 日益 广泛 。１７ 年 Ｌ ｇ等首 ９１ 痂 次将 ＲＡ用于牛乳 中孕酮 （４的测定 ， Ｉ Ｐ）

2023年第11期母牛的早期妊娠诊断一直以来都是养殖人员关注的重点问题之一,这对减少空怀、不怀、少怀,提升畜牧兽医等相关产业经济效益和经营利润具有十分重要的意义。

本文简要介绍了几种常见的母牛早期妊娠诊断方法,供参考。

1实验室诊断法实验室诊断法指在实验室可以进行的诊断方法,主要有酒精法、碘酊法、硫酸铜诊治法、血清电脉冲法、免疫力诊治法、孕酮诊治法等众多方法。

取被检母牛血液样本5m L 左右,加入95%的酒精1m L ,充分融合,如果发生聚集的则为怀孕母牛,不聚集的则为未怀孕母牛。

这种诊治方法对空怀、少怀、不怀的检测成功率为80%~90%。

取被检母牛的尿液样本10m L ,加入7%的碘酊2m L ,摇晃使其充分融合,静置一会等待观察,如果呈现青紫色则为怀孕母牛,其他种类颜色则为未怀孕母牛。

使用这种检测方法的成功率较低,只有70%左右,兽医和配种技术人员一般不采用此法。

取被检母牛所挤出的牛奶1m L ,加入3%的硫酸铜1~3m L ,稍微摇晃使其充分融合,静置一段时间观察效果,如果出现云雾状,并且瓶底具有沉淀物或颗粒物的则为已怀孕母牛,如果没有出现上述情形,并且也没有相关沉淀物或颗粒物则为未怀孕母牛。

该法对空怀、不怀、少怀的检测成功率分别为70%~60%,该检测方法的检测成功率较低,不利于医疗推广与宣传使用,兽医和配种人员很少使用此法。

该法主要用于检测怀孕20d左右母牛的情况。

取被检母牛的血液或血清样本,检测其中的球蛋白含量,如果球蛋白含量大于13%以上的则为怀孕,如果小于或等于13%的则表明未怀孕。

该法对空怀、不怀、少怀的检测成功率较低,基本与直肠诊断法相同或类似,也不利于医疗推广与宣传使用,此法很少使用。

通常,母牛怀孕后自身的免疫力和抵抗力下降,出现这种现象的原因是动物怀孕后会分泌出一种免疫抑制早孕因子(I SEPF )。

研究人员曾用小白鼠做过准确检测实验,在小白鼠交配后的8h 左右,其体内可检出这种早孕因子。

牛的妊娠诊断与胎儿保健：需要留意的事项引言：牛作为重要的农业畜牧品种，其繁殖性能与胎儿的健康状况直接关系到养殖业的经济效益。

对于牛的妊娠诊断与胎儿保健，畜牧生产者应特别重视，以保障牛群的繁殖健康和优质后代的产生。

本文将介绍牛的妊娠诊断方法及畜牧生产者在胎儿保健方面需要注意的事项。

一、牛的妊娠诊断方法1. 精液测定法：牛的精液含有精子，通过检测牛的精液中是否有精子来判断牛是否已怀孕。

这是一种简单直观的妊娠诊断方法，但需要专业操作人员进行精确的判断。

2. 白带观察法：怀孕后，牛的子宫颈口会产生大量白带，通过观察牛的阴道口是否有白带，可以初步判断牛是否怀孕。

这种方法对于初级养殖者是一种简单有效的妊娠诊断方式。

3. 妊娠检查法：妊娠检查是一种较为准确的妊娠诊断方法，常用的方法有超声波检查和直肠检查。

超声波检查是使用超声波设备，对牛的腹部进行扫描，观察子宫内是否有胎儿存在。

这种方法准确性高，可以及早发现妊娠问题，但需要专业的设备和技术人员来进行检查。

直肠检查是通过插入手套涂有润滑剂的手指到牛的直肠，通过触诊来感知胎儿的存在和大小。

这种方法简单易行，但对操作人员的技术要求较高。

二、胎儿保健需要注意的事项1. 制定合理的饮食计划：怀孕的牛需要获得充足的营养供给，以保障胎儿的健康发育。

饮食中应包含适量的蛋白质、维生素和矿物质，避免饲喂不新鲜的饲料和转基因饲料。

同时，要注意控制饲料量，避免过度喂食导致营养过剩。

2. 保持良好的饲养环境：牛的饲养环境对胎儿的发育也具有重要影响。

保持牛舍的通风良好，温度适宜，避免暴露在极端天气下。

避免给牛造成过度的紧张和惊吓，以免影响胎儿的健康。

3. 定期进行妊娠检查：及早发现妊娠问题对胎儿保健至关重要。

牛主可以定期请专业人员进行超声波检查或直肠检查，了解胎儿的情况和发育状况。

如发现异常情况，要及时采取相应的综合治疗措施，以保证胎儿顺利发育。

4. 疫苗接种和抗生素使用：在胎儿保健方面，注重预防疫病和疾病的传播也是非常重要的。

否盈利 。母牛繁殖率是 由产犊 间隔时间决定 的 ，其影响 因素
包括繁殖疾病造成 的屡配不妊和空怀时 间太 长 ．目前常规方
射 、散射 、绕射 、衰减 以及声 源与接收器相对运 动产 生多普 勒频 移等物理特 性 ，应用不 同类型 的 Ｂ超仪接受这 些反射 、 散射信号 。显示各种组织形态 。
母 牛妊娠早期诊断技术简介
桑雷 孙世坤 陈冬金 陈岩 峰 谢喜 平 （ 福 建省农 业科 学院畜牧 兽 医研 究所
摘要 ：妊娠早期诊 断技术 能缩短母 牛空怀时 间，是提 高繁 殖
３ ５ ０ ０ １ ３ ）
验影 响摸胎 的准确率 ：②母 牛的怀胎 时间长短影响判断空怀
效率的手段 。关 系到养殖场 （ 户）的切 身利益 。本 文从诊 断
第六 ，定期 为兔驱 虫。
５ 总 结
为 了保证新 西兰兔健康生长 ，还需要做好防疫 工作 。 第一 ，加强对兔 场的 日常管理 ，做好 卫生工作 ，对兔舍 温度 、通 风 、光照 、湿度等指标进行严格 的控制 ，为兔 养殖
提供一个 良好的环境 ： 第 二 ，对饲料安全进行严格把关 ，防止发霉饲料混入投食
率能达 到 １ ０ ０ ％．同时还发现青 年牛 ２ ０ ～ ２ ８ ｄ Ｂ超妊娠 诊断准
该种 方法一般是在配种后 两月进行 ，技术员徒手 或戴 手 套 将手通过母牛肛门伸进直肠 内 ，隔着直肠触摸子宫 角 、子
宫 中动脉和卵巢 ，依据手 的触 觉判断母牛是否怀 胎及 怀胎时 间 ，该 种技术优点 不需要任何 设备 ，快捷 简便 ，准确 率高 ， 目前广大养殖户和养殖小 区大部分采用该种技术 ．然而直肠
检查也存在缺点 ： ①操作技术不易掌握，配种员实际操作经

高海拔地区奶牛妊娠硫酸铜试验法早期诊断摘要应用3%分析纯硫酸铜对高海拔地区奶牛进行早期妊娠诊断试验，结果表明：硫酸铜试验法诊断早期妊娠操作简便、检查迅速，一般配种15d后就可进行；饲养管理条件、海拔及品种对此法影响不大，影响因素主要在于早孕因子的表现和持续时间的长短。

关键词奶牛；妊娠；早期诊断；硫酸铜试验法及早地判断母牛的妊娠可以及时配种，提高母牛的繁殖率，也是改善饲养管理、增加经济致益的一项重要措施。

目前，我国母牛的妊娠诊断多采用直肠检查法。

虽然也有许多先进的诊断方法，如：牛乳孕酮的放射免疫测定法（RAI）、牛乳孕酮液相酶测定法（EIA）、微滴平板酶免疫测定法等。

但这些方法的诊断仪器昂贵，操作手续复杂，现阶段对于我国的一些生产单位难以推广。

为探索一种简便、实用的方法，笔者根据前人的试验研究，应用3%分析纯硫酸铜对我省大通县周边地区（海拔为2 466～2 482m）的奶牛进行了早期妊娠诊断试验。

1 试验原理母体受孕后不久，由于垂体释放催乳素作用与黄体产后产生一种早孕因子，它是一种具有妊娠依赖性的多个蛋白质分子的复合物，它的出现和持续存在能够特异性地代表受精和受孕体发育。

在胚胎死亡或移去后的短时间内很快消失。

因此，它是妊娠诊断的一项重要依据，而硫酸铜的作用主要就是与其复合物发生凝聚反应。

因此，定性分析乳中早孕因子是否存在，可达到早期妊娠诊断的目的。

2 材料与方法2.1 试验日期和地点试验时间：2006年4月5日至6月13日；试验地点：青海省大通县奶牛繁殖场，以及该县塔尔镇的河州庄村和凉州庄村。

2.2 供试动物供试动物为配种后15～70d的母牛37头，均为经产健康母牛。

2.3 试验试剂试验试剂为3%硫酸铜。

其配制法：称取分析纯CuSO4·5H2O 3g，置于250mL烧杯中，然后在烧杯中加入97mL蒸馏水加热。

待硫酸铜完全溶解冷却后置于棕色瓶中备用（最好现配现用，配制过程中勿接触金属机械）。

颈钳或敷料钳从子宫颈部采取玉米粒大小 的粘液一
为午后 的乳中含脂率最高。乳样采集在玻璃或塑料 小瓶 内， 每１ ０ 毫升的乳汁加入 ２ 滴１ ５ ％重铬酸钾作 为防腐剂 ， 冷冻保存 ， 防止乳汁腐败变质。血液是 由 颈静脉采集 ， 每次采血 １ Ｏ毫升 ， 立 即离心分析 出血 浆 ，血样可用 Ｏ ． １ ％硫柳汞防腐 ，测定前需要冷冻保 存 。配种后 ２ ４ 天采集样品测定最为适宜 ， 这样可以 防止间情期未孕牛产生假阳性。 测定孕酮诊断妊娠 ， 检 出妊娠的正确率为 ６ ５ ％～ 妊 娠 的 实 验 室 诊 断
成 宜兵 （ 江苏省滨海县五汛镇多服中心 江苏滨海 ２ ２ ４ ５ ０ ０ ）
１牛妊娠
附近采取少量的粘液迅速制成抹片，将 １ 滴粘液放 在玻片上 ， 用细玻棒涂布成均匀的一薄层 ， 在室温中 待干 ， 或放于 ４ ０ ～ ４ ２ ｃ ｃ 温 箱内 １ ～ ２ 小时取出 ， 在低倍 镜下或放大镜下 （ 扩大 １ ０ 倍） 观察。妊娠第 １ 个月 末， 在抹片上就能见到特征结 晶， 出现这样 的结晶是 由于妊娠后粘液 内含有盐类所致。
背景上 呈现雪 花样结 晶 块 。根据粘液变化诊断女
养殖技术顾 问 ２ ０ １ ３ ． ８ 个 斑 宫 颈
为扁平立方形 ， 核深染 。染色较深的细胞为多边形 ， 核圆， 并有光泽 。妊娠羊 只有 ５ 层细胞 ， 细胞呈立方
形或棱形 ， 核和细胞质均有光泽 ， 染色较深的细胞呈
短 圆柱状 。妊娠 ４ ｏ天 ，妊娠羊诊断的正确率超过 ９ ０ ％， 妊娠 ８ ０天及其 以后可达 １ ０ ０ ％， 未妊娠羊 的正 确率在 ８ ０ ％以上 ，间情期后期和乏情期后期的组织 图像与妊娠期类似 ， 因而可能误诊 ， 此法对确定是否 怀双胎毫无价值 。

号别
原因 纪录 查 注
人
三、B超在繁殖疾病诊断中的应用
1、可以应用到子宫疾病的诊断,比如子宫蓄脓, 子宫内膜炎.
2、可以应用到卵巢的疾病诊断，比如持久黄 体、卵泡囊肿、卵泡和黄体的发育跟踪等。
三、B超在繁殖疾病诊断中的应用
有腔黄体和卵泡
卵巢测量2.87cm
有腔黄体
卵泡测量1.79cm
三、B超在繁殖疾病诊断中的应用
子宫角闭合
子宫内膜炎
子宫炎
卵巢炎（渗出液）
黄体囊肿
卵泡内增生物
不同发情阶段的黄体B超观察
以往我们是从屠宰场拿到卵巢进行直观的表面 的观察,从外观的颜色(红、黄、白）来判定黄体的 阶段，或者切开卵巢看内在的情况来加以验证，但 是在临床工作中不可能以杀牛取卵的方式去解决问 题。
实际工作中卵巢上的黄体状况经常被忽视，或 者不是足够的被重视。本人认为，准确判定黄体的 生长阶段或者天数，对卵巢的整体评价以及对卵泡 的理解都会有很大的帮助。
奶牛早孕与繁殖疾病诊断新技术
北京东方联鸣科技发展有限公司
（国家奶牛产业技术体系战略合作伙伴）
王少华
❖ 本文想把B超用 于奶牛繁殖诊 断方面的工作 当中积累的一 点经验，给大 家做一个交流。
一、B超的选择
❖ 1、一定要选择兽用B超：因为探头的规 格和专业的兽医测量软件是非常重要的。
一、B超的选择
排卵后第3天的黄体
黄体内液体 腔较大，且液 体腔周边有规 则的均匀细密 的环状中等回 声。
排卵后第6天的黄体
液体腔逐渐缩小，且环状回声更 加明显，呈环状带结构。
小结
需要说明的是：早期黄体的液体腔并不都 是呈圆形或边界较规整的，但随着时间的延长， 有向规则的圆形囊腔发展的趋势。

B超在繁殖母牛早期妊娠诊断中的应用一、技术概述妊娠诊断是为了及早发现繁殖母牛配种后是否受胎怀孕，以便对母牛进行孕后护理和转入妊娠期的饲养管理。

也可尽早发现未孕奶牛，采取措施，减少空怀，提高繁殖效率。

目前应用最普遍的是繁殖行为观察法和直肠检查法。

繁殖行为观察法是根据配种后母牛繁殖行为的表现对是否妊娠进行诊断，该方法对母牛的干扰少、宜操作，但猜测成分大，误诊率高，尤其在繁殖疾病表现不发情、假孕等情况下，容易造成空怀，降低繁殖效率。

直肠检查判定母畜是否怀孕的主要依据是怀孕后生殖器官的一些主要变化。

这些变化随怀孕时间的不同而有所侧重。

直肠检查法较繁殖行为观察法准确率要高，主要的不足之处在于，缺少直观性，诊断准确率只有70%左右;直肠检查需要相当的技术经验积累，繁殖技术诊断人员的培训需要较长的时间;且直肠检查确诊时间较晚，在配种后50-60天才能确诊;检查上的疏忽大意和技术的不熟练，又有导致母畜的直肠破裂或流产的危险;而且对未能妊娠的病因的确定缺乏手段。

超声妊娠检查，是一种无损伤、无疼痛、此较理想的物理学检查方法。

B超断层扫描可以直接观察妊娠后子宫内胚胎的发育变化，能在尽早的时间准确判断是否妊娠，配种后25-30天B超妊娠诊断率可达100%。

在充分经验积累的基础上，诊断早孕时间可以提早到22天，与繁殖母牛下一个周期时间一致，做到尽早补配。

在配种未孕发生时，尽早确定未能妊娠是由于卵巢还是子宫的因素导致。

在母牛交配后22-30天，应用B型超声诊断仪对是否妊娠进行确诊;准确辨识B超图像，是技术推广的主要培训内容;准确辨识交配后22-30天，卵巢、子宫、胚胎的形态特征;掌握正确的探测部位和B超探头使用方法。

从研究角度讲，牛妊娠B超诊断技术属于成熟技术，主要问题是在我国当前养牛生产中尚未广泛推广。

B超诊断是当前牛妊娠诊断中最先进且方便易进行的技术，对B超使用和妊娠诊断技术人员的培训在1周内即可完成，对妊娠的确诊可在配种后22-30天进行，能初步确定未能成功妊娠的原因。

养殖技术-奶牛的妊娠诊断和预产期推算一、妊娠诊断奶牛发情配种后，经20—60天不再发情，可初步断定已怀孕。

奶牛的妊娠诊断常用的方法有外部观察法、阴道检查法及直肠检查法。

1、外部观察法母牛配种后在下一个发情周期到来时不出现发情征状，且性情变得温驯，行动迟缓，躲避角斗和追逐；放牧和驱赶运动时，常落在牛群之后，易感疲劳，食欲和饮水量大增，被毛光泽与膘情变好时可初步确定已怀孕。

到妊娠中后期时，母牛腹部明显变大，妊娠6个月以后可在腹壁触到或看到胎动。

2、阴道检查法通过开膣器检查时可以看出怀孕一个月的母牛阴道粘膜和子宫颈显得苍白没有光泽，且粘膜干燥，随着妊娠期的延长阴道粘膜越显干燥。

子宫颈口闭合，偏到一边，被灰暗的子宫颈粘液栓堵塞。

相反，未孕母牛的阴道与子宫颈粘膜为水红色而不是苍白色，具有光泽，且湿润。

检查时若操作不当，容易损坏阴道粘膜，造成粘膜出血和感染，一定要特别小心。

3、直肠检查法直肠检查是目前最常用、最可靠的准确诊断妊娠的方法。

如果有丰富的直肠检查经验和详细的繁殖记录，在一个月左右就可确诊。

主要是依据母牛妊娠后生殖器官的一些变化，隔着直肠壁触诊卵巢、子宫、胎儿及子宫中动脉来判断是否妊娠。

直肠检查时要先清宿便，再清洗消毒，动作一定要缓慢轻柔，切忌粗暴。

Ⅰ期：妊娠奶牛早期（30天左右）触摸排卵侧的卵巢有突出于表面的妊娠黄体，卵巢体积大于对侧；检查子宫时，两侧子宫角不对称，孕角稍大于空角，增粗、质地较松软，有波动感。

空怀母牛卵巢无大的变化，可摸到有黄体存在，又有小的卵泡在发育；子宫角大小相等，角间沟明显，子宫角较硬有弹性。

Ⅱ期：妊娠40—60天，孕角比空角明显增大1—2倍，角间沟变平，孕角波动明显。

Ⅲ期：妊娠60天后子宫开始垂入腹腔，但仍可摸到胎膜的滑落感。

Ⅳ期：妊娠90天，角间沟完全消失，子宫已失去固有形状，大如婴儿头，有的大如排球，有明显的波动感。

子宫壁变薄，子宫开始沉入腹腔口。

初产牛子宫下沉时间较晚，有时可以摸到胎儿。

畜牧兽医学报 2023,54(6):2223-2230A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.06.002开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):母牛早期妊娠诊断技术研究进展原开敏1,2,时玉新3,董智豪1,4,赵羚均1,2,许师源1,2,吴开慧1,王 栋1*(1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;2.吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;3.内蒙古赤峰市敖汉旗农牧局,赤峰024300;4.河南科技大学动物科技学院,洛阳471203)摘 要:简单㊁准确的早期妊娠诊断,是减少空怀,提升母畜繁殖力㊁提高养殖场经济效益的重要手段㊂直肠触诊㊁B 超检查㊁孕酮检测等传统妊娠诊断方法,虽然为养殖生产提供了重要技术支撑,但还未实现母牛配后最早检测,部分养殖场还难以满足较高的技术要求或实验室条件㊂胚胎滋养层细胞分泌的妊娠相关蛋白(P A G s )是奶牛妊娠过程中的重要蛋白,其血液含量变化规律为妊娠诊断方法研发提供了新思路㊂本文简要概述了现有妊娠诊断方法,详细论述P A G s 诊断方法发展历程,展望未来妊娠诊断技术发展方向,使其在 早 ㊁ 准 ㊁ 简便性 上取得重要进展,并为相关研究提供了重要参考㊂关键词:早期妊娠诊断;牛妊娠相关蛋白;自动化;中红外光谱中图分类号:S 823.3 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)06-2223-08收稿日期:2022-10-13基金项目:国家自然科学基金(32072739);北京市家畜创新团队(B A I C 05-2022)作者简介:原开敏(2000-),男,河南焦作人,硕士,主要从事动物遗传育种与繁殖研究,E -m a i l :y u a n 838068@126.c o m *通信作者:王 栋,主要从事动物遗传育种与繁殖研究,E -m a i l :d w a n g c n 2002@v i p.s i n a .c o m R e s e a r c h P r o g r e s s o n E a r l y P r e g n a n c y D i a g n o s i s T e c h n o l o gi e s i n C o w s Y U A N K a i m i n 1,2,S H I Y u x i n 3,D O N G Z h i h a o 1,4,Z H A O L i n g ju n 1,2,X U S h i y u a n 1,2,WU K a i h u i 1,WA N G D o n g1*(1.I n s t i t u t e o f A n i m a l S c i e n c e s ,C h i n e s e A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s ,B e i j i n g 100193,C h i n a ;2.C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y ,J i l i n A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,C h a n gc h u n 130118,C h i n a ;3.A o h a n A n i m a l H u s b a nd r y B u re a u ,C h if e ng 024300,Chi n a ;4.C o l l e g e o f An i m a l S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y ,H e n a n U n i v e r s i t y o f S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y ,L u o y a n g 471203,C h i n a )A b s t r a c t :S i m p l e a n d a c c u r a t e e a r l y p r e g n a n c y d i a g n o s i s i s a n i m p o r t a n t m e a n s t o r e d u c e o p e n c o w s ,i m p r o v e f e m a l e f e c u n d i t y a n d i m p r o v e f a r m e c o n o m i c b e n e f i t s .A l t h o u g h t r a d i t i o n a l p r e g-n a n c y d i a g n o s e s m e t h o d s s u c h a s r e c t a l p a l p a t i o n ,B -u l t r a s o u n d e x a m i n a t i o n ,a n d p r o ge s t e r o n e d e t e c t i o n h a v e p r o v i d e d i m p o r t a n t t e c h n i c a l s u p p o r tf o r b r e e d i ng p r o d u c t i o n ,th e y ha v e n o t y e t a c h i e v e d t h e e a r l i e s t d e t e c t i o n o f c o w s a f t e r m a t i n g,a n d s o m e f a r m s a r e s t i l l d i f f i c u l t t o m e e t t h e h i g h t e c h n i c a l r e q u i r e m e n t s o r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s .P r e g n a n c y-a s s o c i a t e d p r o t e i n s (P A G s )a r e p r e g n a n c y -s p e c i f i c p r o t e i n s s e c r e t e d b y e m b r y o n i c t r o p h o b l a s t c e l l s ,w h i c h p l a y a n i m po r t a n t r o l e i n t h e p r e g n a n c y o f d a i r y c o w s a n d a r e w i d e l y u s e d i n t h e d i a g n o s i s o f e a r l y p r e g n a n c y i n d a i r yc o w s .T h i s a r t i c l e b r i e f l y s u mm a r i z e s t h e e x i s t i n gd i a g n o s t i c me t h o d sf o r p r eg n a n c y,d i s c u s s e s t h e d e v e l o p m e n t p r o c e s s o f P A G s d i a gn o s t i c m e t h o d s i n d e t a i l ,l o o k s f o r w a r d t o t h e f u t u r e d e v e l o p m e n t d i r e c t i o n o f p r e g n a n c y d i a g n o s t i c t e c h n o l o g y ,a n d m a k e s i m p o r t a n t p r o g r e s s i n "e a r l y ","a c c u r a t e "a n d "s i m p l e ",a n d p r o v i d e s r e l e v a n t r e s e a r c h i n f o r m a t i o n a n d i m po r t a n t r e f e r e n c e .K e y wo r d s :e a r l y p r e g n a n c y d i a g n o s i s ;b o v i n e p r e g n a n c y -a s s o c i a t e d p r o t e i n ;a u t o m a t i o n ;m i d -畜牧兽医学报54卷i n f r a r e d s p e c t r o s c o p y*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:WA N G D o n g,E-m a i l:d w a n g c n2002@v i p.s i n a.c o m尽早确定配后母牛妊娠与否,可及早检出未孕母牛并及时安排再次配种,提高母牛繁殖效率,减少空怀母牛,缩短母牛产犊间隔;还可提高母牛日平均产奶量[1-2],具有相当大的商业价值㊂因此,高效㊁准确㊁简便㊁低成本的早期妊娠诊断一直是养牛企业和科研工作者关注的焦点,也是养殖场提高养殖效益的重要手段㊂直肠触诊和超声波诊断是比较直观的妊娠诊断方法,主要依据卵巢㊁胎儿的发育程度进行妊娠诊断,且需发育到一定时间才能做出正确判断,受操作人员主观判断和仪器影响,配后35天前基本无法做出准确判断㊂还有人根据妊娠牛血液孕酮㊁早孕因子和妊娠相关糖蛋白(P A G s)含量变化,建立了酶联免疫吸附试验(e n z y m e l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s s a y,E L I S A)㊁胶体金免疫层析(g o l d i m m u n o-c h r o m a t o g r a p h i c a s s a y,G I C A)等间接诊断技术[3-5]㊂这些方法可将妊娠诊断提前到配后28天左右,但其操作复杂程度㊁准确性㊁专业性以及检测成本等都与产业目标有较大差距㊂此外,母牛妊娠后表现安静,步伐稳健,体温略有升高,不再是发情时的敏感和亢奋状态[6],这一生理机能为自动化妊娠诊断提供了依据,可在配后21天得出较为准确的诊断结果㊂但自动化妊娠检测维护成本较高,未能在市场上推广使用㊂本文综述了已有妊娠诊断方法,通过梳理其优缺点,探讨早期妊娠诊断技术的发展方向,为研发简单㊁快速㊁低成本和现场检测技术,提高母牛繁殖效率,提升养殖效益提供重要参考㊂1传统母牛妊娠诊断方法传统妊娠诊断方法根据母牛受孕后体态㊁生理机能和相关生化指标的一系列变化做出判断,主要包括直肠检查㊁超声波检查㊁孕酮检查㊁早孕因子检查等方法㊂妊娠母牛由于黄体生长发育,其卵巢体积比未妊娠时增大1倍,且质地柔软㊁表面光滑㊂妊娠黄体呈椭圆或半球状㊁质地柔软有肉感㊂妊娠30天时妊娠侧子宫角质地软弹㊁表面有膨胀感,比未妊娠牛大1/2倍左右;妊娠90天时母牛子宫中动脉粗如铅笔,跳动有力[7-8]㊂通过直肠壁感知子宫角㊁黄体㊁羊膜囊㊁胎儿等上述形态及质感变化进行妊娠诊断[7]㊂经验丰富的技术人员通常在母牛配种后30~35天进行直肠检查,就能得到准确的妊娠诊断结果[9]㊂但直肠检查法不能批量化检测,且需要熟练的专业技术人员,无法适应规模化牛场的需求㊂直肠超声检测法根据超声波在体内传播时,会因组织㊁器官声阻值不同发生不同程度反射,形成不同特点的超声图像,通过判断卵泡及胎儿的发育,进行母牛妊娠状态诊断[10]㊂对47头配种后30天母牛进行B超妊娠诊断,其敏感性和特异性分别为92.30%和97.05%,说明配种30天该方法就具有较高的准确性[11]㊂但B超诊断仍需专业技术人员,且设备昂贵,检测繁琐,也无法批量诊断㊂同时,因为妊娠黄体和胚胎会分泌大量孕酮[12],妊娠牛配种21天血浆孕酮显著高于未妊牛(4.675n g㊃m L-1v s0.995n g㊃m L-1,P<0.01),并可在乳汁和血液中检测到[13]㊂据此建立了放射免疫(r a d i o i mm u n o a s s a y,R I A)㊁酶联免疫吸附试验㊁胶体金免疫层析(c o l l o i d a l g o l d i mm u n o c h r o m a t o g-r a p h y a s s a y,G I C A)等方法测定血浆或牛奶孕酮含量,并取得了一定效果[14-15]㊂然而,有研究表明, 35%~44%未孕母牛黄体期延长,且没有正常返情[16-17],黄体期延长未妊牛血浆孕酮水平与正常妊娠牛并无显著差异[18-19],使孕酮检测假阳性增加,影响整体妊检准确率㊂另外,母牛配后2天可检测到血液㊁乳汁E P F 蛋白,该蛋白具有免疫抑制和妊娠维持功能,主要由卵巢和母体胎盘分泌[20]㊂一旦妊娠停止,E P F就会在1~2d内降为非妊娠水平,据此研发出了玫瑰花环抑制试验(r o s e t t e i n h i b i t i o n t e s t,R I T)方法进行超早孕诊断[21-22]㊂但该方法操作繁琐㊁检测周期长㊁不适合规模养殖需求,未能推广使用㊂2P A G s研究进展及其检测方法2.1母牛P A G s研究进展B u t l e r等[23]最初从怀孕牛胎盘膜提取物中发现了一种蛋白,后来在妊娠25~270天的母牛胎盘提取物中也能分离纯化出该蛋白㊂经鉴定,该蛋白分子量为47~53k u,并将其命名为妊娠特异性蛋白B(p r e g n a n c y s p e c i f i c p r o t e i n B,P S P B),但在妊娠16~25天和270~280天间则没有检出该蛋白㊂42226期原开敏等:母牛早期妊娠诊断技术研究进展Z o l i[24]也从胚胎子叶中提取出一种分子量为67k u 的牛妊娠相关糖蛋白(b o v i n e p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n,b P A G),并证明与P S P B氨基酸序列同源,都是P A G s家族成员[25]㊂研究发现,P A G s 家族至少有20个蛋白成员,涉及24个编码基因,该家族蛋白均在胎盘高表达,并呈现鲜明的时空特征[26-28],不同成员的分子量㊁氨基酸序列和糖基化程度有一定区别[26]㊂根据其分泌模式和表达位置,推测P A G有维持妊娠和免疫调节作用,但迄今为止,妊娠期间P A G的作用仍不清楚[29-30]㊂胚胎着床过程中,滋养层双核细胞逐渐与子宫上皮细胞相互作用,最终融合为合胞体细胞,并分泌P A G s到母体循环血液中,随着胚胎生长发育, P A G s分泌量逐渐增加,配后23天增加幅度增大,第30天时妊娠牛P A G浓度大于2.5n g㊃m L-1,第45天时上升到11.7n g㊃m L-1,在配种后240天时达到最高水平29.9n g㊃m L-1,而未妊牛P A G水平始终接近于0n g㊃m L-1[31-32],但也有研究报道,未妊牛P A G s含量约为0.5n g㊃m L-1[19],在配后28~ 30天时妊娠牛P A G s含量显著高于未妊母牛,因此,推荐将配后28~30天作为检测P A G判断母牛妊娠与否的最早时间点[32-33]㊂也有研究以S-N值(样品O D值减去阴性对照O D值)标志血浆和牛奶的P A G浓度,妊娠母牛乳汁和血浆的P A G水平对比结果显示,牛奶P A G变化趋势同血浆一样,但P A G浓度只有血浆的一半[34],表明血液和乳样都可用于母牛妊娠诊断,但血液检测效果可能优于乳样㊂研究还发现,P A G浓度还与胎儿数量㊁流产与否有关㊂比如,有研究显示,配后28~42天,双胞胎母牛血浆P A G浓度均高于单胎母牛[35];而妊娠牛P A G浓度较低时,比如当配后31天母牛P A G浓度低于1.4n g㊃m L-1,胚胎移植受体母牛P A G浓度低于1.8n g㊃m L-1时,配后60天发生妊娠丢失的概率约为95%[36-37],这些研究表明,该蛋白指标可能还具有双胎预测㊁胚胎丢失等经济学价值㊂2.2妊娠相关蛋白(P A G s)的妊娠诊断检测方法目前,基于P A G s检测主要建立了R I A㊁E L I S A㊁G I C A等妊娠诊断方法,其中,基于E L I S A 检测技术,美国I D E X X公司[38]和B i o T r a c k i n g公司以及加拿大C o n c e p t i o n公司[39]都开发了商业化快速检测试剂盒,并取得了较好的市场应用效果㊂I D E X X公司近期还研发出了P A G s免疫层析胶体金试纸条,使妊娠诊断更为便捷[38,40]㊂P A G s的R I A检测方法也取得了97%的准确率,但是,鉴于安全因素和检测的便捷性,R I A方法已很少使用[41]㊂基于P A G s建立的E L I S A方法仍然是目前母牛妊娠诊断的常用方法㊂该方法首先将P A G抗体固定在微孔板上,加入被检血清或乳样后,样品P A G与微孔板的固定抗体结合,再与加入的酶标抗体形成夹心复合物,该复合物与加入的底物反应而显色,可根据颜色有无或深浅间接进行P A G定性或定量㊂对比879头奶牛配后35天乳样的E L I S A 检测结果和妊娠60天的超声结果,E L I S A测试敏感性和特异性分别为96.3%和87%,B超诊断敏感性特异性为93.9%和94.3%,E L I S A检测有更高的敏感性,但特异性稍低,说明E L I S A检测可代替B超检测,用于母牛妊娠早期诊断[42-44]㊂还有人根据E L I S A检测原理开发了一种以核酸适配体为识别分子的酶联免疫方法,对配后30天奶牛血清进行检测,妊娠准确率达91.7%[45]㊂相比较而言,集成免疫反应㊁胶体金标记㊁层析技术的胶体金检测方法具有更快速㊁高效检测效果[46],当被检样品滴加到样品孔后,在毛细管作用下样品向试纸条T线端移动,与胶体金垫的金标抗体结合后,继续向前移,与固定于T线的特异抗体结合,使胶体金在T线处大量聚集并显色,样品即为阳性,反之,如果被检血清无P A G或P A G含量较低(未妊),金标抗体就会在毛细作用下越过T线继续前行至C线,与固定在C线的二抗结合,使C 线显示红色,而T线则不显色,即为阴性㊂比较牛早孕胶体金试纸条(U b i o q u i c k V E T;B P R T)和E L I S A-P A G试剂盒(B o v i n e P r e g n a n c y T e s t D G29 )妊娠诊断效果发现,配后30~40天胶体金试纸条和E L I S A-P A G试纸条敏感度分别为89.4%和100%,特异性分别为89.8%和81.3%,准确率分别为90%和94%[47]㊂胶体金检测方法快速㊁简单㊁便捷的优点很适合当下的规模化养殖环境[38],但目前商用P A G胶体金检测只有进口产品,国内还处于实验室研发阶段㊂3未来妊娠诊断技术发展方向3.1中红外光谱技术中红外光谱(m i d-i n f r a r e d s p e c t r o s c o p y,M I R S)是指物质在2.5~25μm波长红外线照射下的吸收光谱㊂在红外线照射下,分子内部会发生振动吸收5222畜牧兽医学报54卷和能级跃迁,不同分子因红外吸光度不同,红外吸收光谱也不同[48]㊂据此,可用M I R S预测脂肪酸[49]㊁氨基酸[50]㊁酮体物质[51]㊁乳蛋白[52]等牛奶主要营养成分,揭示母牛健康状况[53]㊂研究发现,妊娠牛乳汁的乳脂和乳蛋白含量显著高于未妊牛[52],为利用M I R S测定牛奶乳脂㊁乳蛋含量预测母牛妊娠状态提供了重要依据[54-55]㊂而且,可以借助于乳样成分的机械化检测,批量化㊁自动化分析获知母牛妊娠状态㊂有研究使用偏最小二乘判别模型分析中红外光谱,但配种后30天妊娠诊断准确率只有58%[56]㊂另有研究通过深度学习构建模型分析中红外光谱预测妊娠状态,在30天左右的诊断准确度可达88%[55]㊂然而,基于中红外光谱测定母牛妊娠状态还处于研究阶段,且研究成果参差不齐,但这些研究为将来M I R S在母牛妊娠诊断的应用上奠定了基础㊂3.2信号增强型P A G胶体金试纸条的开发因为快速㊁简单㊁易储存,并且无实验室检测条件要求,胶体金快速检测技术已广泛应用于食品㊁药品㊁疫病等检测[54-56],2007年,孕酮胶体金检测也被应用于母牛妊娠诊断,并取得一定效果[14],但是,从配后母牛血液的生理规律看,P A G s有更大的妊娠诊断开发价值,目前基于P A G s已开发出E L I S A妊娠诊断试剂盒,P A G s胶体金试纸条虽已有进口商品化检测技术,但还未见到有关检测效果的报道,国内研究还停留在实验室阶段㊂因为妊娠早期,P A G s水平较低,所研发的胶体金试纸条T线显色不清楚,难以判别,如何增强T 线信号,是P A G胶体金试纸条目前的研究重点,然而,相关报道很少见到㊂对牛奶中O157:H7大肠杆菌的检测发现,用更大直径的金纳米颗粒做辅助试剂,胶体金试纸条的检测灵敏度可比传统胶体金检测增强8倍[57]㊂在上述原位金生长基础上,进一步集成纳米酶催化沉积技术,两步级联信号放大系统的集成,使传统胶体金免疫层析灵敏度比传统型提高400倍[58]㊂另外,G I C A方法抗体制备周期长,成本高,不易保存㊂在对玉米赤霉烯酮的胶体金检测中,采用核酸适配体代替抗体进行胶体金试纸条制备,核酸适配体的制备颠覆了P A G抗体制备的技术路线,不但缩短了生产周期,降低了成本,生产速度也发生了质的飞跃[59]㊂以上技术的探索,为基于P A G进行胶体金试纸条妊娠诊断方法研发指明了方向㊂3.3自动化妊娠检测当前,规模化养殖不断发展,使生产面临技术和管理双重压力,用工难㊁用工贵㊁技术力量匮乏也在时时考验着规模养殖场,而信息㊁机电㊁传感科技不断进步,自动化㊁智能化已成为规模养殖的发展方向,妊娠诊断技术研发也不例外㊂妊娠母牛活动量显著低于返情牛[60-63],配后母牛体温逐渐升高, 11天时显著高于未妊母牛[64],利用这些生理规律,借助于机电传感技术,就可实现配种母牛妊娠与否的自动诊断和预报[65]㊂已有研究根据活动量规律,实现了母牛妊娠诊断自动化,在配后21天左右对母牛妊娠状态进行自动判断和预报,并取得了较为理想的诊断效果[66],某牛场采用计步器来检测母牛发情和妊娠状态,从结果来看,牛场总体妊娠率提升了28%[67]㊂总而言之,自动化检测已为未来包括妊娠诊断在内的所有养殖技术发展指明了方向㊂4总结母牛早孕检测一直是奶牛养殖技术研发的焦点,经过多年研发已取得较快进展,为产业做出了重要贡献,但仍距产业需求有一定距离㊂直肠触诊㊁B 超检测虽然效果准确,但检测通量低,技术要求高,不能满足当前规模程度越来越大的产业发展需要,基于孕酮㊁E P F的检测效果逐渐提高,但不能现场检测㊁需要较大的人力物力㊂以爱得士为代表的P A G s-E L I S A检测方法检测效果较好,几乎垄断了我国母牛妊娠诊断市场,但P A G胶体金检测方法的出现带动了相关技术研发,将会推动我国相关技术研发取得突破㊂特别是生物传感器使人类感知突破了时间与空间限制,相关技术成果将会颠覆以往对动物生理规律的认知方法和认知效果,并为开发更系统的自动化妊娠诊断技术提供强大技术支撑㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1]杜超,刘深贺,程春宝,等.奶牛妊娠诊断技术现状及未来发展方向[J].中国奶牛,2019(10):29-33.D U C,L I U S H,C HE N C B,e t a l.T e c h n o l o g y o fp r e g n a n c y d i a g n o s i s i n d a i r y c o w s:c u r r e n t s t a t u s a n df u t u r e d e v e l o p m e n t[J].C h i n a D a i r y C a t t l e,2019(10):29-33.(i n C h i n e s e)[2] G N E MM I G M,MA R A B O L I C V A,G N E MM I B,e ta l.U s e a n d a d e q u a c y o f n o n-p r e g n a n c y d i a g n o s i s i nc o w.W h i c h f u t u r e[J].R e p r od D o me s t A n i m,2022,57(S5):45-52.62226期原开敏等:母牛早期妊娠诊断技术研究进展[3] S Z E N C I O,B E C K E R S J F,HUM B L O T P,e t a l.C o m p a r i s o n o f u l t r a s o n o g r a p h y,b o v i n e p r e g n a n c y-s p e c i f i c p r o t e i n B,a n d b o v i n e p r e g n a n c y-a s s o c i a t e dg l y c o p r o t e i n1t e s t s f o r p r e g n a n c y d e t e c t i o n i n d a i r yc o w s[J].T h e r i o g e n o l o g y,1998,50(1):77-88.[4] K A R A K UŞO,K AÇA R C,K U R U M,e t a l.E f f i c a c yo f a c o mm e r c i a l t e s t k i t t o d e t e r m i n e e a r l y p r e g n a n c yi n c o w s u s i n g w h o l e b l o o d a n d b l o o d s e r u m[J].T r o pA n i m H e a l t h P r o d,2021,53(1):28.[5] D U R O C H E R J,MO O R E R K,C A S T O N G U A Y MH,e t a l.B a y e s i a n e s t i m a t i o n o f s e n s i t i v i t y a n ds p e c i f i c i t y o f a m i l k p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i nE L I S A t e s t f o r p r e g n a n c y d i a g n o s i s b e t w e e n23a n d27d a y s a f t e r i n s e m i n a t i o n i n H o l s t e i n d a i r y c o w s[J].J D a i r y S c i,2022,105(8):6985-6996.[6] LÓP E Z-G A T I U S F,G A R C I A-I S P I E R T O I,HU N T E R R H F.C e r v i x-r e c t u m t e m p e r a t u r ed i f fe r e n t i a l a t t h e t i m e of i n s e m i n a t i o n i s c o r r e l a t e dw i t h t h e p o t e n t i a l f o r p r e g n a n c y i n d a i r y c o w s[J].JR e p r o d D e v,2021,67(4):251-255.[7]闵师勇,成宜兵.直肠检查法诊断母牛不同妊娠阶段的变化[J].养殖技术顾问,2013(7):50.M I N S Y,C H E N G Y B.C h a n g e s o f r e c t a le x a m i n a t i o n i n d if f e r e n t p r eg n a n c y s t a g e s o f c o w s[J].T e c h n i c a l A d v i s o r f o r A n i m a l H u s b a n d r y,2013(7):50.(i n C h i n e s e)[8]陈荣,黄依明.奶牛妊娠早期的卵巢㊁黄体㊁子宫角变化的研究[J].福建农业科技,1985(2):44-45.C H E N R,HU A N G Y M.S t u d y o n t h e c h a n g e s o fo v a r y,c o r p u s l u t e u m a n d u t e r i n e h o r n i n e a r l yp r e g n a n c y o f d a i r y c o w s[J].F u j i a n A g r i c u l t u r a lS c i e n c e a n d T e c h n o l o g y,1985(2):44-45.(i nC h i n e s e)[9] R OMA N O J E,T HOM P S O N J A,K R A E M E R D C,e t a l.Ef f e c t s o f t r a n s r e c t a l p a l p a t i o n w i t h t h e f e t a lm e m b r a n e s l i p t e c h n i q u e f o r e a r l y p r e g n a n c yd i a g n o s i s o n t he p r o p o r t i o n a n d t y p e of a s s o c i a t e dp r e g n a n c y l o s s i n d a i r y c a t t l e[J].A m J V e t R e s,2020,81(5):442-447.[10] D E V E N D E R,C HA N D O L I A R K.A p p l i c a t i o n s o ft r a n s a b d o m i n a l u l t r a s o n o g r a p h y i n b o v i n e r e p r o d u c t i o n:ar e v i e w[J].A n a t H i s t o l E m b r y o l,2022,41(2):225-240.[11] A B D U L L A H M.E a r l y p r e g n a n c y d i a g n o s i s i n d a i r yc a t t l e:e c o n o m i c i m p o r t a n c e a nd a c c u r a c y o fu l t r a s o n o g r a p h y[J].A d v A n i m V e t S c i,2014,2(8):464-467.[12]贾晓,邱瑾,舒娟,等.血清孕酮水平检测在克隆胚胎移植受体牛的筛选及妊娠诊断中的应用[J].中国生物工程杂志,2020,40(7):1-8.J I A X,Q I U J,S HU J,e t a l.S e r u m p r o g e s t e r o n e l e v e ld e t e c t i o n f o r t h e s c r e e n i n g o f r e c i p i e n t c a t t l e f o rc l o n ede m b r y o t r a n sf e r a n d t h e i r p r eg n a n c y d i a g n o s i s[J].C h i n a B i o t e c h n o l o g y,2020,40(7):1-8.(i nC h i n e s e)[13]吕莲,贾国慧,王亮,等.奶牛妊娠早期血浆孕酮的变化规律[J].上海畜牧兽医通讯,2009(2):48-49.L V L,J I A G H,WA N G L,e t a l.C h a n g e s o f p l a s m ap r o g e s t e r o n e i n e a r l y p r e g n a n c y o f d a i r y c o w s[J].S h a n g h a i J o u r n a l o f A n i m a l H u s b a n d r y a n dV e t e r i n a r y M e d i c i n e,2009(2):48-49.(i n C h i n e s e) [14] R A C E W I C Z P,J A S'K OW S K I J M.C o n t e m p o r a r ym e t h o d s o f e a r l y p r e g n a n c y d i a g n o s i s i n c o w s[J].M e d W e t e r,2013,69(11):655-661.[15]万积成,万志静,唐晓宾,等.奶牛早孕诊断试纸条的研制及临床试验[J].中国奶牛,2007(12):22-25.WA N J C,WA N Z J,T A N G X B,e t a l.D e v e l o p m e n to f d i a g n o s t i c s t r i p e f o r e a r l y p r e g n a n c y i n d a i r y c o w sa n d i t s c l i n i c a l t r i a l s[J].C h i n a D a i r y C a t t l e,2007(12):22-25.(i n C h i n e s e)[16] G I O R D A N O J O,G U E N T H E R J N,L O P E S G J r,e t a l.C h a n g e s i n s e r u m p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n,p r e g n a n c y-s p e c i f i c p r o t e i n B,a n d p r o g e s t e r o n ec o n c e n t r a t i o n s b e f o r e a nd a f te r i n d u c t i o n of p r eg n a n c yl o s s i n l a c t a t i n g d a i r y c o w s[J].J D a i r y S c i,2012,95(2):683-697.[17] R I C C I A,C A R V A L HO P D,AMU N D S O N M C,e ta l.C h a r a c t e r i z a t i o n o f l u t e a l d y n a m i c s i n l a c t a t i n gH o l s t e i n c o w s f o r32d a y s a f t e r s y n c h r o n i z a t i o n o fo v u l a t i o n a n d t i m e d a r t i f i c i a l i n s e m i n a t i o n[J].JD a i r y S c i,2017,100(12):9851-9860.[18] F R I C K E P M,R I C C I A,G I O R D A N O J O,e t a l.M e t h o d s f o r a n d i m p l e m e n t a t i o n o f p r e g n a n c yd i a g n o s i s i n d a i r y c o w s[J].Ve t C l i n N o r t h A m F o o dA n i m P r a c t,2016,32(1):165-180.[19] G I O R D A N O J O,G U E N T H E R J N,L O P E S G J r,e t a l.C h a n g e s i n s e r u m p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n,p r e g n a n c y-s p e c i f i c p r o t e i n B,a n d p r o g e s t e r o n ec o n c e n t r a t i o n s b e f o r e a nd a f te r i n d u c t i o n of p r eg n a n c yl o s s i n l a c t a t i n g d a i r y c o w s[J].J D a i r y S c i,2012,95(2):683-697.[20]赵生贤,樊江峰,余四九,等.早孕因子(E P F)在雌性牦牛主要生殖器官中的表达[J].农业生物技术学报,2020,28(5):876-883.Z HA O S X,F A N J F,Y U S J,e t a l.E x p r e s s i o n o f7222畜牧兽医学报54卷E a r l y P r e g n a n c yF a c t o r s(E P F)i n t h e m a i nr e p r o d u c t i v e o r g a n s o f f e m a l e y a k(B o s g r u n n i e n)[J].J o u r n a l o f A g r i c u l t u r a l B i o t e c h n o l o g y,2020,28(5):876-883.(i n C h i n e s e)[21]王晓姗.孕牛血清早孕因子的研究进展[J].中国牛业科学,2018,44(3):82-85.WA N G X S.R e s e a r c h p r o g r e s s o f e a r l y p r e g n a n c yf a c t o r o f p r eg n a n c y b o v i n e s e r u m[J].Chi n a C a t t l eS c i e n c e,2018,44(3):82-85.(i n C h i n e s e) [22] WA N G S L,Z HA N G H L,K O U H X,e t a l.E a r l yp r e g n a n c y d i a g n o s e s b a s e d o n p h y s i o l o g i c a l i n d e x e s o fd a i r y c a t t l e:a re v i e w[J].T r o p A n i m H e a l t h P r o d,2020,52(5):2205-2212.[23] B U T L E R J E,HAM I L T O N W C,S A S S E R R G,e ta l.D e t e c t i o n a n d p a r t i a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f t w ob o v i n ep r e g n a n c y-s p e c i f i c p r o t e i n s12[J].B i o l R e p r o d,1982,26(5):925-933.[24] Z O L I A P.P u r i f i c a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f ab o v i n e p r e g n a nc y-a s s o c i a t ed g l y c o p r o te i n[J].B i o lR e p r o d,1991,45(1):1-10.[25] M I A L O N M M,C AMO U S S,R E N A N D G,e t a l.P e r i p h e r a l c o n c e n t r a t i o n s o f a60-k D a p r e g n a n c ys e r u m-p r o t e i n d u r i n g g e s t a t i o n a n d a f t e r c a l v i n g a n di n r e l a t i o n s h i p t o e m b r y o n i c m o r t a l i t y i n c a t t l e[J].R e p r o d N u t r D e v,1993,33(3):269-282. [26] WA L L A C E R M,P OH L E R K G,S M I T H M F,e t a l.P l a c e n t a l P A G s:g e n e o r i g i n s,e x p r e s s i o n p a t t e r n s,a n du s e a s m a r k e r s o f p r e g n a n c y[J].R e p r o d u c t i o n,2015,149(3):R115-R126.[27] W E S S O N G M,F E R N A N D E Z L,P O O L E R K,e t a l.P S I V-25E f f e c t o f v a r i o u s h a n d l i n g m e t h o d s o fp l a s m a a n d s e r u m s a m p l e s o n p r e g n a n c y a s s o c i a t e dg l y c o p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n s[J].J A n i m S c i,2020,98(S4):289-290.[28] K L I N E A C,E P P E R S O N K,R I C H J,e t a l.P S V-2U s e o f p r e g n a n c y a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s t od e t e r m i n e f e t a l a g e t h r o u g h o u t g e s t a t i o n[J].J A n i mS c i,2021,99(S1):207-208.[29] HO E B E N D,B U R V E N I C H C,MA S S A R T-L EËN AM,e t a l.I n v i t r o e f f e c t o f k e t o n e b o d i e s,g l u c o c o r t i c o s t e r o i d s a n d b o v i n e p r e g n a n c y-a s s o c i a t e dg l y c o p r o t e i n o n c u l t u r e s o f b o n e m a r r o w p r o g e n i t o rc e l l s o f c o w s a nd c a l ve s[J].V e t I mm u n o lI mm u n o p a t h o l,1999,68(2-4):229-240.[30] WO O D I N G F B P,K I MU R A J,F U K U T A K,e t a l.Al i g h t a n d e l e c t r o n m i c r o s c o p i c a l s t u d y o f t h e t r a g u l i d(M o u s e D e e r)p l a c e n t a[J].P l a c e n t a,2007,28(10):1039-1048.[31] B A R B A T O O,M E N C H E T T I L,S O U S A N M,e t a l.P r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s(P A G s)c o n c e n t r a t i o n si n w a t e r b u f f a l o e s(B u b a l u s b u b a l i s)d u r i n g g e s t a t i o n a n dt h e p o s t p a r t u m p e r i o d[J].T h e r i o g e n o l o g y,2017,97:73-77.[32] S O U S A N M,A Y A D A,B E C K E R S J F,e t a l.P r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s(P a g)a s p r e g n a n c ym a r k e r s i n t h e r u m i n a n t s[J].J P h y s i o l P h a r m a c o l,2006,57S u p p l8:153-171.[33] G R E E N J A,P A R K S T E,A V A L L E M P,e t a l.T h ee s t a b l i s h m e n t of a n E L I S A f o r t h e d e t e c t i o n o fp r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s(P A G s)i n t h es e r u m o f p r e g n a n t c o w s a n d h e i f e r s[J].T h e r i o g e n o l o g y,2005,63(5):1481-1503.[34] R I C C I A,C A R V A L HO P D,AMU N D S O N M C,e ta l.F a c t o r s a s s o c i a t e d w i t h p r e g n a n c y-a s s o c i a t e dg l y c o p r o t e i n(P A G)l e v e l s i n p l a s m a a n d m i l k o fH o l s t e i n c o w s d u r i n g e a r l y p r e g n a n c y a n d t h e i r e f f e c to n t h e a c c u r a c y o f p r e g n a n c y d i a g n o s i s[J].J D a i r yS c i,2015,98(4):2502-2514.[35] G A R CÍA-I S P I E R T O I,R O S S E L LÓ-V I S A M A,S E R R A N O-PÉR E Z B,e t a l.P l a s m a c o n c e n t r a t i o n s o fp r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s I a n d I I a n dp r o g e s t e r o n e o n d a y28p o s t-A I a s m a r k e r s o f t w i np r e g n a n c y i n d a i r y c a t t l e[J].L i v e s t S c i,2016,192:44-47.[36] P OH L E R K G,P E R E I R A M H C,L O P E S F R,e t a l.C i r c u l a t i n g c o n c e n t r a t i o n s o f b o v i n e p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s a n d l a t e e mb r y o n ic m o r t a l i t yi n l a c t a t i n g d a i r y h e r d s[J].J D a i r y S c i,2016,99(2):1584-1594.[37] P OH L E R K G,P E R E S R F G,G R E E N J A,e t a l.U s e o f b o v i n e p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s t op r e d i c t l a t e e m b r y o n i c m o r t a l i t y i n p o s t p a r t u m N e l o r eb e e fc o w s[J].T h e r i o g e n o l o g y,2016,85(9):1652-1659.[38] D A N A O I,MU K H T A R R H,MOHAMM E D M O,e t a l.C o m p a r i s o n of a r a p i d t e s t w i t h b P A G e l i s a i np r e g n a n c y d i a g n o s i s i n c o w s[J].I r a q i J A g r i c S c i,2021,52(6):1475-1481.[39]耿晓晖,殷臣胤,王月华.D G29定量E L I S A检测技术在奶牛妊检中的应用[J].中国奶牛,2018(3):21-23.G E N G X H,Y I N C Y,WA N G Y H.A p p l i c a t i o n o ft h e D G29q u a n t i t a t i v e E L I S A t e s t f o r d e t e c t i o n o fp r e g n a n c y i n d a i r y c a t t l e[J].C h i n a D a i r y C a t t l e,2018(3):21-23.(i n C h i n e s e)82226期原开敏等:母牛早期妊娠诊断技术研究进展[40] V E L E K K,M I C HA U D S,B O U C H E R K,等.牛妊娠早期精准E L I S A检测[J].养殖与饲料,2012(11):10-12.V E L E K K,M I C HA U D S,B O U C H E R K,e t a l.E a r l y a n d a c c u r a t e E L I S A t e s t f o r b o v i n e p r e g n a n c y[J].A n i m a l B r e e d i n g a n d F e e d,2012(11):10-12.(i n C h i n e s e)[41] K A R E N A,D E S O U S A N M,B E C K E R S J F,e t a l.C o m p a r i s o n o f a c o mm e r c i a l b o v i n e p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n E L I S A t e s t a n d a p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n r a d i o m i mm u n o a s s a y t e s t f o re a r l y p r e g n a n c y d i a g n o s i s i n d a i r y c a t t l e[J].A n i mR e p r o d S c i,2015,159:31-37.[42] HO L T O N M P,O O S T HU I Z E N N,D E M E L O G D,e t a l.L u t e a l c o l o r d o p p l e r u l t r a s o n o g r a p h y a n dp r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s a s e a r l y p r e g n a n c yd i a g n o s t i c t o o l s a n d p re d i c t o r s of p r eg n a n c y l o s s i nB o s t a u r u s p o s t p a r t u m b e e f c o w s[J].J A n i m S c i,2022,100(2):s k a c018.[43] S H E P HA R D R W,MO R T O N J M.E s t i m a t i o n o fs e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y o f p r e g n a n c y d i a g n o s i su s i n g t r a n s r e c t a l u l t r a s o n o g r a p h y a n d E L I S A f o rp r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n i n d a i r y c o w s u s i n ga B a y e s i a n l a t e n t c l a s s m o d e l[J].N Z V e t J,2018,66(1):30-36.[44] S HA R MA N,S I N G H S P,B HA R A DWA J A,e t a l.P r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i n s a s a p o t e n t i a lm a r k e r f o r d i a g n o s i s o f e a r l y p r e g n a n c y i n g o a t s:as c o p i n g r e v i e w i n g[J].A s i a n P a c J R e p r o d,2020,9(6):255-260.[45]卢春霞,刘长彬,周平,等.酶联适配体可视化检测牛妊娠相关糖蛋白9(b P A G9)及其在奶牛早孕检测中的应用[J].农业生物技术学报,2021,29(7):1407-1416.L U C X,L I U C B,Z O U P,e t a l.E n z y m e-l i n k e da p t a m e r a s s a y f o r v i s u a l d e t e c t i o n o fb P A G9a n d i t sa p p l i c a t i o n f o r p r e g n a n c y d i a g n o s i s i n d a i r y c o w s(B o s t a u r u s)[J].J o u r n a l o f A g r i c u l t u r a lB i o t e c h n o l o g y,2021,29(7):1407-1416.(i nC h i n e s e)[46]武晋慧,孟利.免疫胶体金技术及其应用研究进展[J].中国农学通报,2019,35(13):146-151.WU J H,M E N G L.I mm u n o c o l l o i d a l g o l dt e c h n o l o g y:a d v a n c e s a n d a p p l i c a t i o n[J].C h i n e s eA g r i c u l t u r a l S c i e n c eB u l l e t i n,2019,35(13):146-151.(i n C h i n e s e)[47] MO U S S A F I R Z,A L L A I L,E L K HA L I L K,e t a l.C o u l d a b o v i n e p r e g n a n c y r a p i d t e s t b e a n a l t e r n a t i v et o a c o mm e r c i a l p r e g n a n c y-a s s o c i a t e d g l y c o p r o t e i nE L I S A t e s t i n d a i r y c a t t l e?[J].A n i m R e p r o d S c i,2018,192:78-83.[48] F E N G L,Z HU S S,C H E N S S,e t a l.C o m b i n i n gf o u r i e r t r a n s f o r m m i d-i n f r a r e d s p e c t r o s c o p y w i t hc h e m o m e t r i c m e t h od s t o de t e c t a d u l t e r a t i o n s i n m i l kp o w d e r[J].S e n s o r s,2019,19(13):2934.[49] R O V E R E G,D E L O S C AM P O S G,L O C K A L,e ta l.P r e d i c t i o n o f f a t t y a c i d c o m p o s i t i o n u s i n g m i l ks p e c t r a l d a t a a n d i t s a s s o c i a t i o n s w i t h v a r i o u s m i d-i n f r a r e d s p e c t r a l r e g i o n s i n M i c h i g a n H o l s t e i n s[J].JD a i r y S c i,2021,104(10):11242-11258.[50] M C D E R MO T T A,V I S E N T I N G,D E MA R C H I M,e t a l.P r e d i c t i o n of i n d i v i d u a l m i l k p r o t e i n s i n c l u d i n gf r e e a m i n o a c i d s i n b o v i n e m i l k u s i ng m i d-i n f r a r e ds p e c t r o s c o p y a n d t h e i r c o r r e l a t i o n s w i t h m i l kp r o c e s s i n g c h a r a c t e r i s t i c s[J].J D a i r y S c i,2016,99(4):3171-3182.[51] G R E L E T C,B A S T I N C,G E LÉM,e t a l.D e v e l o p m e n to f F o u r i e r t r a n s f o r m m i d-i n f r a r e d c a l i b r a t i o n s t op r e d i c t a c e t o n e,β-h y d r o x y b u t y r a t e,a n d c i t r a t ec o n t e n t s i n b o v i n e m i l k t h r o u g h a E u r o p e a nd a i r yn e t w o r k[J].J D a i r y S c i,2016,99(6):4816-4825.[52] P E N A S A M,D E MA R C H I M,C A S S A N D R O M.S h o r t c o mm u n i c a t i o n:E f f e c t s o f p r e g n a n c y o n m i l ky i e l d,c o m p o s i t i o n t r a i t s,a n d c o a g u l a t i o n p r o p e r t i e s o fH o l s t e i n c o w s[J].J D a i r y S c i,2016,99(6):4864-4869.[53]陈焱森,上官爱哨,陈明新,等.应用M I R预测牛健康状况的研究进展[J].中国奶牛,2020(1):58-63.C H E N Y S,S HA N G G U A N A S,C H E N M X,e t a l.A d v a n c e s i n t h e a p p l i c a t i o n o f M I R t o p r e d i c t t h eh e a l t h s t a t u s o f c a t t l e[J].C h i n a D a i r y C a t t l e,2020(1):58-63.(i n C h i n e s e)[54] T I P L A D Y K M,T R I N H M H,D A V I S S R,e t a l.P r e g n a n c y s t a t u s p r e d i c t e d u s i n g m i l k m i d-i n f r a r e ds p e c t r a f r o m d a i r y c a t t l e[J].J D a i r y S c i,2022,105(4):3615-3632.[55] B R A N D W,W E L L S A T,S M I T H S L,e t a l.P r e d i c t i n g p r e g n a n c y s t a t u s f r o m m i d-i n f r a r e ds p e c t r o s c o p y i n d a i r y c o w m i l k u s i n g d e e p l e a r n i n g[J].J D a i r y S c i,2021,104(4):4980-4990.[56] D E L H E Z P,HO P N,G E N G L E R N,e t a l.D i a g n o s i n g t h e p r e g n a n c y s t a t u s o f d a i r y c o w s:h o wu s e f u l i s m i l k m i d-i n f r a r e d s p e c t r o s c o p y?[J].JD a i r y S c i,2020,103(4):3264-3274.[57]董旭旭,孙威,曹攀,等.胶体金免疫层析试纸条9222。

奶牛妊娠诊断技术目录1外部观察法 (1)2直肠检查法 (1)3听诊法 (3)4宫颈—阴道黏液诊断法 (3)5超声波诊断法 (3)奶牛妊娠诊断技术奶牛妊娠与否直接影响着奶牛的产乳量与养殖生产的经济效益。

通常而言，奶牛需要进行两次妊娠检查：第一次是在配种后20～45天进行早期诊断；第二次在临近干奶时，目的是防止第一次检查的失误，或中途遇到胚胎死亡、流产及木乃伊化等情况。

及早对奶牛进行妊娠诊断，可避免漏配，减少奶牛空怀时间，提高奶牛繁殖率，缩短繁殖周期，有利于提高奶牛产奶量及经济效益。

本文现对常用的奶牛妊娠诊断技术总结如下，以供参考。

1外部观察法配种后的奶牛在下一个发情期到来时，如不发情，表明可能已经妊娠。

但这并不完全可靠，因为有的奶牛虽然未妊娠，但在发情时征状不明显（如安静发情）或不发情，而有些奶牛虽已受胎但仍有表现发情（如假发情）。

奶牛妊娠后，其性情、食欲、膘情及动作行为等会发生一系列变化。

进食量和饮水量增加，在妊娠前半期膘情明显好转，被毛变得光亮、润泽，在妊娠后性情安静、温顺。

行动迟缓、谨慎，喜静恶动，常躲避追逐和角斗，放牧或驱赶运动时，常落在牛群后面。

妊娠中期以后，腹部两侧大小不对称，孕侧（多为右侧）下垂突出，肋腹部凹陷，泌乳牛产奶量下降；妊娠6个月后，可在右侧腹壁触到或看到有突起的胎动。

育成奶牛在妊娠4～5个月后，乳房发育加快，乳房体积明显增大，经产奶牛的乳房多在妊娠的最后l～4周才明显增大和水肿。

奶牛的脉搏、呼吸次数也会明显增加。

外部观察法在妊娠中后期观察比较准确，但在妊娠早期较难做出确切诊断，需要与其他方法综合诊断确定。

2直肠检查法直肠检查法是奶牛妊娠诊断中最基本最可靠的方法，在整个妊娠期均可采用，并能判断妊娠的大致时间，奶牛的假发情、假妊娠，以及一些生殖器官疾病及胎儿的死活。

妊娠20～25天，排卵侧卵巢上有突出于表面的妊娠黄体，卵巢的体积大于另一侧，两侧子宫角无明显变化，触摸时可感到子宫壁厚而有弹性。