细胞活体染色技术24页PPT

（三）人口腔粘膜上皮细胞线粒体 1、取清洁载玻片放在37摄氏度的恒温水浴锅 的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B 2、用牙签取上皮细胞，将刮下的粘液状物放 入载玻片染液中，染色10-15分钟（不可干 燥），盖上盖玻片，吸去多余的溶液，镜 检
三、台盼蓝鉴别死活细胞 抽取小鼠腹腔水细胞涂于载玻片上，滴台盼蓝 一滴，盖上盖玻片观察 四、注意事项 1、在从小鼠体内取肝组织块时要尽量快，从而能够 保证它更高的活性。 2、染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可 完全 淹没，以便使线粒体酶系得到氧化。 3、在选取肝组织片时要在处于边缘，且为由薄到厚 的地方选取。 4、观察前要将肝组织充分剪碎，制片时要吸取上悬 液，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，而要避 免吸取稍大的组织块
生物系
实验目的
• 学习细胞的染色方法
• 观察动植物细胞内的线粒体某些无毒的或毒性较小的 染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下 显示细胞的天然构造。 • 詹纳斯绿B能够活染线粒体为蓝色（细胞色 素酶系）
• 中性红能够活体染色液泡系为红色（专一 性） • 台盼蓝可以使死细胞着色（鉴别）
2、打开腹腔，在横隔膜的下方，在胃的前方 找到深红色的肝脏 3、取出肝脏，在肝脏的边缘较薄的地方剪一 小块，放在盛有Ringer氏液的表面皿中洗去 血液 4、将肝组织洗净后吸去血液，加入1/5000的 詹纳斯绿B染色30分钟，不可将组织完全浸 没 5、染色后撕开组织块，用吸管吸取溶液，放 在载玻片的Ringer氏液中，垫两根头发，加 盖玻片，镜检
二、线粒体的活体染色 （一）植物细胞中的线粒体 1、用镊子撕取洋葱内表皮一小块，放在载玻 片上用1/5000詹纳斯绿B染色30分钟 2、吸取染液，滴加Ringer氏液，盖上盖玻片， 镜检观察线粒体的分布、颜色、形态

二、实验原理： 健纳绿B（Janus Green B）对线粒体具有专一性染
色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶 系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色， 在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。
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• 三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞 • 四、步骤及方法 • 1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer
鼠肝边沿较薄组织小块放入盛有ringer15000janusgreen染液倒入另一培养皿中将肝组织移入其内但不可将组织块完全淹没要让组织上面部分半裸露在染液外面这样细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化线粒体才易染色一般染3040分钟组织块边缘染成蓝绿色即可
实验七、线粒体的活体染色和观察
一、实验目的： 了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。
• 3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手， 用一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍 稍用力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细 胞群和组织块分离。
• 4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央 的Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片， 液体不要太多。
• 5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋， 使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料 总得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非 常清楚。
氏液的培养皿内，洗去血液。 • 2、将1/5000Janus Green B 染液倒入另一培
养皿中，将肝组织移入其内，但不可将组织块 完全淹没，要让组织上面部分半裸露在染液外 面，这样，细胞内的线粒体的酶系可充分得到 氧化，线粒体才易染色，一般染30-40分钟 （组织块边缘染成蓝绿色即可）。
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• 6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线 条状，在细胞核周围分布得特别多。

未溶血
溶血后
• 非极性化合物易溶于脂溶剂，
但在水中溶解度很小。碳链越长，
脂溶性越大。
•
分配系数 —— 一种化合物在脂溶
剂中的溶解度与其在水中溶解度之比
• 各种非电解质溶液，只要单位
体积中的分子数相同，渗透压亦相
同。
• 若电解质溶液，如NaCl与葡萄
糖分子数相同时，NaCl的渗透压要大 得多。
•
等渗系数 —— 具有相同渗透压的某
溶质
1/8 1/9 1/10 1/12 1/13 1/14 1/16 1/18 葡萄糖
NaCl
一、实验目的
学习细胞活体染色的 方法
观察动、植物活细胞 内线粒体，液泡系的 形态、数量与分布
二、实验原理
一般的生物材料不能穿透细胞 膜，只有当细胞被固定后，细 胞膜被破坏，染料才能进入细 胞内部。但是，有一些染料 （称“活体染料”）却能进入 活细胞，它们是一些无毒或毒 性很小的染色剂，能使细胞中 某些特定结构着色。活体染料 基本上不影响或很少影响细胞 的生命活动。
较为常见的活体染色剂
•詹纳斯绿：专一用于线粒体的染色。它可以和 线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，保持氧化状 态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中 染料被还原,成为无色状态。
必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才 能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色
• 在实验过程中务必保持所取的材料 的活性。通常，需要把生物材料置于 ０℃～４℃的冰水浴低温中，并且操 作要迅速。
实验四 细胞膜的通透性及 细胞活体染色技术
细胞膜的通透性 细胞活体染色技术
一、实验目的
了解相对分子质量、 脂溶性大小、电解质 和电解质溶液对细胞 膜透性的影响

(2)将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹 纳斯绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹 没。
(3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一 些细胞或细胞群。
(4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏 液中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜检。
(5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断 地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使
液。
3、1／5000詹纳斯绿B
先配制1％詹纳丝绿B溶Ringer氏溶液，方法同上。
4、台盼蓝染色液
将l克台盼蓝溶于100毫升生理盐水中
5、香柏油、二甲苯、蒸馏水等。
实验方法：
(一)液泡系的中性红活体染色 l、用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l一 2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄且均匀。 2、在载玻片中央滴加中性红染料。使 材料在其中染色5一10分钟。 3、吸去染料，滴加Ringer氏液一滴， 盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色， 其形态、大小如何、分布位置。
(二)线料体的活体染色 l、用植物细胞观察线粒体的活体染色 (1)用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块
(约lcm2)，放在载玻片上用1/5000詹纳斯 绿B染色约30分钟。 (2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、
镜检，注意观察线粒体分布及所呈形 状。
2、用Байду номын сангаас物细胞观察线粒体的活体染色。
(1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛 有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。
谢谢！
xiexie!
实验四 细胞活体染色技术
讲解者：张学娇 学 号：01011034 日 期：2019/10/26
基本介绍 实验目的 概念 实验原理 实验用品 实验方法 注意事项
基本介绍：

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• 细胞化学染色一般包括固定、显示、复染等步 骤。
• 主要用于：
• 显示细胞或组织的酶、蛋白质、糖类、脂类、 无机盐（如铁）等化学成分的含量及分布状况；
• 研究细胞组织来源及分化程度；为疾病的诊断、 鉴别诊断及治疗提供重要的依据。
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中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （NAP）
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• ㈢.临床意义：
• ⒈类白血病反应与慢性粒细胞白血病的鉴别诊断：前 者显著增高，阳性率常达90%以上，积分常高于200分； 后者显著减低，积分可感染 时多为正常或稍低。
• ⒊淋巴细胞白血病时常增高；单核细胞白血病时正常 或增高；慢性中性粒细胞白血病时增高，其它各型粒 细胞白血病时减低；白血病伴感染时增高。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
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Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• 2. 也可用新鲜配制的六偶氮副品红为重氮盐，配方为： 10ml a-磷酸萘酚钠溶液中加六偶氮副品红50μl，其 NAP阳性反应呈红色颗粒状。六偶氮副品红：4%副品 红（2N盐酸）溶液与4%亚硝酸钠溶液1∶1混合，静置 1min。
• 3. 重氮盐应适量，过量会导致染色失败，出现假阴性； 量不足，则阳性反应较弱。
• ㈠.原理： • 方法一（偶氮偶联法）：在PH9.2~9.8的碱性溶

样本的保存
样本应保存在适当的温度 和湿度条件下，以确保其 质量和稳定性。
结果的准确性
操作的规范性
在细胞化学染色检验中，应遵循正确的操作步骤和规范，以确保 结果的准确性。
仪器设备的校准
使用的仪器设备应在有效期内进行校准，以确保其准确性和可靠性 。
结果的解读
检验结果应由专业人员进行解读，避免误判或漏判。同时，应定期 对结果进行复核和验证，以确保结果的准确性和可靠性。
目的
细胞化学染色检验主要用于诊断疾病、研究细胞生物学特性、评估治疗效果等 。
历史与发展
历史
细胞化学染色检验技术自19世纪末开始发展，经历了多个阶段，包括手工染色、 半自动染色和全自动染色等。
发展
随着科技的不断进步，细胞化学染色检验技术也在不断改进和完善，如免疫组织 化学染色、荧光染色等新技术的应用，使得检测的灵敏度和特异性得到了显著提 高。
04
结果报告
将分析结果整理成报告，向相 关人员或机构提供准确的实验 数据和结论。
04
细胞化学染色检验应用
在疾病诊断中的应用
肿瘤诊断
通过细胞化学染色检验，可以观 察肿瘤细胞的形态、染色特征和 组织结构，有助于肿瘤的早期发
现和诊断。
感染性疾病诊断
某些细菌、病毒等感染性疾病会导 致细胞发生特异性改变，通过细胞 化学染色检验可以辅助诊断。
染色完成后，进行充分 的洗涤和复染，以提高
染色效果和对比度。
结果观察与解读
01
显微镜观察
使用显微镜观察染色后的样本 ，观察细胞形态、染色情况等 。
02
结果记录
对观察到的染色结果进行详细 记录，包括细胞形态、染色强 度、分布等。
03

BMSC
(bone marrow stromal cells 骨髓基质细胞 )
Anip973 （肺癌细胞）
二、细胞计数
• 计数方法有
– 血细胞计数板人工计数； – 细胞计数器自动计数法
三、细胞生长曲线
• 细胞生长曲线(cell growth curve) 是观测细胞在一代生存期内的增生过 程的重要指标,可用来分析细胞的增 殖速度，确定细胞进行传代及冻存操 作的最佳时间。
How to make cell growth curve?
• 1.培养细胞 • 首先在培养板的21个孔内分别接种相
同数量的细胞。计数并记录接种的细 胞悬液之密度。接种时间记为0h
• 2.计数细胞密度
• 每隔24h计数3孔(瓶)内的细胞密度， 算出平均值。如此操作至第七天结束 。
• 3.绘制曲线
一、活细胞的观察检测方法
细胞在体外培养过程中需要每天观察，以便及时 了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有 无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄、是 否更换等。
细胞常规检查的方法为：
• 肉眼观察 • 相差显微镜观察
肉眼观察
一般常规检查用肉眼即可观察，主要
看培养液的颜色和透明度的变化。
• 二.名词解释 • 细胞生长曲线 • 三.简答题 • 1．简述制作细胞生长曲线的过程。 • 2．简述活体染料的染色步骤 • 3．简述活细胞的染料排除检测法的原理及台盼蓝排除检测法的操
作过程
• 4．简述用细胞计数板计数细胞的操作程序及注意事项：
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• 以培养时间为横坐标、细胞密度为纵 坐标，将结果在坐标纸上绘图，即得

▪ 苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感， 但特异性不如过氧化物酶染色（极少数急 性淋巴细胞白血病可为阳性）。
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M1-SBB(+)
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M2-SBB(+3)3
三、过碘酸一雪夫（PAS)染色
▪ 【原理】
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖 、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇 基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO ），与雪夫(Schiff )试剂中的无色品红结 合，形成紫红色染料而沉积于胞浆中。该 反应称为过碘酸一雪夫(PAS)阳性反应。
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▪ 血细胞化学染色的基本要求是在原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物，具有一定的稳定性。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、 酶、蛋白质等。
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血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 ▪ 固定有物理法与化学法， ▪ 物理法为干燥和火焰固定， ▪ 化学法最常用的是甲醛、乙醇、
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（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性 反应，颗粒细小，弥散分布。
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（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可 作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
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【临床意义】
（1）M6与巨幼贫的鉴别
M6的幼红细胞PAS可呈强阳性，积分明 显增高，巨贫、再障、溶贫时PAS反应为阴 性。
（2）急性白血病的类型鉴别