线栓法大鼠脑缺血再灌注模型改良与评价

线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型）的经验本人现在正在做线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型），这方面的资料我查了一些，这个实验我也作了一段时间，不敢说很专业了，不过现在基本上我能在15min左右完成手术，而且手术过程中不出一滴血，造模后缺血程度基本一致。

虽然前面有很多前辈发了很多MCAO的很专业的贴子，不过我觉得比较凌乱，现在我把我的心得体会和以前的贴子的精华部分奉献给大家，希望这会对将要做这个实验的朋友有一丝的帮助。

虽然做实验总会有郁闷的时候，不过风雨之后总会见到彩虹的，这可以也是我的心得体会。

衷心祝福大家能把实验做的成功、完美！实验前准备麻醉剂：水合氯醛（应较好的控制大鼠体温）保温：60W白炙灯高度为37cm直接照射能使肛温保持在 37℃栓线的制备：1.取熔点为56℃的固体石蜡一块，在瓷杯中加热熔化。

直径为0.24mm、长5cm的鱼线一端5mm长的一段，垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面，其直径为0.26mm。

就这样，普通的鱼线即可变成规相一致头端光滑圆钝的栓线。

2.在鱼线18mm的位置用涂改液标记一个白色点。

TTC的配制：用0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS）配成2%TTC溶液（pH7.5），避光保存体重与栓线直径：线栓直径0.24mm采用的SD大鼠，体重250-300g。

实验方法：动物用10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。

仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），在CCA远心端和近心端与ECA处挂线备用。

用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。

然后在距CCA分叉部4mm处剪一小口，将拴线插入到ICA，这时用绕在CCA远心端的细线轻轻系牢拴线。

（不可过紧，否则进线困难，但松了又会出血。

）用眼科镊轻推拴线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度在18 mm时（一定要将血管放松至原来状态, 且保证标记点在分叉处,由于标记的是白色的所以很容易看的），紧紧系牢CCA远心端的细线，此时的关键是动作轻柔，不要使ICA有任何的牵拉，否则栓线会脱出ACA，可能会造成缺血失败。

第一部分 线栓模型制作1、实验器材（从左到右）：第一行：干棉球、酒精棉球、10％水合氯醛＋注射器、碘伏＋棉签第二行：三种不同粗细的鱼线（鱼线最好在2.0、2.5mm处各用记号笔作好标记，便于观察进入距离）、弯盘内为手术器材第三行：记号笔、自制拉钩（皮筋+曲别针＋大头针）2、麻醉：可用饮料瓶自制捕鼠器（适用于不敢手抓大鼠的），用于打麻药，根据大鼠的重量选择不同粗细的饮料瓶（太粗了大鼠可在瓶中回头）。

效果图3、麻倒后绑在手术台上。

4、剪去颈前的鼠毛，碘伏消毒。

5、沿经部正中切开皮肤。

说明：切开皮肤前最好将结扎动脉的线事先剪好（后面会用到）。

6、钝性分离皮下组织。

如图：大鼠腹侧可见事先剪好的结扎线。

7、分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，见到颈动脉鞘后可上拉钩。

8、分离动脉鞘。

如图：分离好后见光滑的颈总动脉。

9、分离出颈总、颈外、颈内动脉，结扎颈总、颈外动脉，注意中间那根线不要系紧，用来插鱼线时防止出血的。

10、夹闭颈内动脉，用眼科剪将颈总动脉剪一小口。

11、插入鱼线，鱼线进入颈内动脉后按图中注释方法插（成功率在90%以上）。

说明：（1）这一步鱼线选择是关键，根据大鼠重量（作的多了后根据动脉粗细就可选择了）选鱼线。

我们的经验是：250g以下的选0.26mm的线，250-300g的选0.26mm蘸腊的或0.28的都可以。

（2）如果遇到鱼线怎么也查不进去的情况，可让大鼠休息一会，换细点的鱼线再试，这种情况不一定都是进到翼腭动脉了，我曾解剖过4例这种情况的大鼠，有三例都是在如颅的地方卡住了，可惜我们手里没有0.24mm的鱼线。

（3）通过实践，我们认为结扎或夹闭翼腭动脉没有必要，按我们的方法，熟练的话，从切开到缝合完毕也就是15分钟，算上准备工作（如麻醉、消毒等）半小时也可以搞定了，这样一上午两人作10只大鼠不成问题。

（4）我们体会最好用蘸腊的鱼线作模型，好处是进线深度控制的好，不容易出现蛛网膜下腔出血。

第一部分 线栓模型制作1、实验器材（从左到右）：第一行：干棉球、酒精棉球、10％水合氯醛＋注射器、碘伏＋棉签第二行：三种不同粗细的鱼线（鱼线最好在2.0、2.5mm处各用记号笔作好标记，便于观察进入距离）、弯盘内为手术器材第三行：记号笔、自制拉钩（皮筋+曲别针＋大头针）2、麻醉：可用饮料瓶自制捕鼠器（适用于不敢手抓大鼠的），用于打麻药，根据大鼠的重量选择不同粗细的饮料瓶（太粗了大鼠可在瓶中回头）。

效果图3、麻倒后绑在手术台上。

4、剪去颈前的鼠毛，碘伏消毒。

5、沿经部正中切开皮肤。

说明：切开皮肤前最好将结扎动脉的线事先剪好（后面会用到）。

6、钝性分离皮下组织。

如图：大鼠腹侧可见事先剪好的结扎线。

7、分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，见到颈动脉鞘后可上拉钩。

8、分离动脉鞘。

如图：分离好后见光滑的颈总动脉。

9、分离出颈总、颈外、颈内动脉，结扎颈总、颈外动脉，注意中间那根线不要系紧，用来插鱼线时防止出血的。

10、夹闭颈内动脉，用眼科剪将颈总动脉剪一小口。

11、插入鱼线，鱼线进入颈内动脉后按图中注释方法插（成功率在90%以上）。

说明：（1）这一步鱼线选择是关键，根据大鼠重量（作的多了后根据动脉粗细就可选择了）选鱼线。

我们的经验是：250g以下的选0.26mm的线，250-300g的选0.26mm蘸腊的或0.28的都可以。

（2）如果遇到鱼线怎么也查不进去的情况，可让大鼠休息一会，换细点的鱼线再试，这种情况不一定都是进到翼腭动脉了，我曾解剖过4例这种情况的大鼠，有三例都是在如颅的地方卡住了，可惜我们手里没有0.24mm的鱼线。

（3）通过实践，我们认为结扎或夹闭翼腭动脉没有必要，按我们的方法，熟练的话，从切开到缝合完毕也就是15分钟，算上准备工作（如麻醉、消毒等）半小时也可以搞定了，这样一上午两人作10只大鼠不成问题。

（4）我们体会最好用蘸腊的鱼线作模型，好处是进线深度控制的好，不容易出现蛛网膜下腔出血。

全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症，常见于心脏骤停、溺水等情况下，出现全脑缺血缺氧，随后通过复苏措施进行再灌注。

建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制，评估治疗方法具有重要意义。

本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。

动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时，主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。

一般情况下，小鼠更为常用，因其易于操作、成本较低，且其脑血管结构与人类相似，因此具有较高的可比性。

对于大鼠，其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况，但操作相对较为复杂。

手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前，需要进行手术操作的准备工作。

首先需要进行动物的麻醉和固定，确保手术操作的安全性。

其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备，包括导管、监测仪器等。

在手术操作前，还需要对实验动物进行术前处理，包括禁食、定时给予抗生素等。

手术操作步骤1. 麻醉和固定：将实验动物置于麻醉箱内，使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。

随后将其固定在手术台上，以确保手术操作的稳定性。

2. 手术部位暴露：在麻醉状态下，对实验动物进行皮肤消毒，随后进行手术部位的切开，暴露出颅骨表面。

3. 血管结扎：通过显微外科手术操作，对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎，以模拟全脑缺血的状态。

4. 缺血时间控制：根据实验设计的需要，控制全脑缺血的时间，一般为15至20分钟。

5. 再灌注：在全脑缺血一定时间后，通过解开血管结扎，使血液重新灌注至大脑。

6. 术后处理：对实验动物进行术后处理，包括给予液体、保暖、饲养等。

检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后，需要对实验动物进行一系列的检测和评价，以评估其神经功能恢复情况。

常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。

通过对这些指标的检测和评价，可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果，为后续的实验研究提供可靠的依据。

线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1（1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；）摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。

②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。

本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。

最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。

③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。

关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal sutureMa Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1(1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious.Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。

线栓法局灶性大鼠脑缺血-再灌模型的制备（The intraluminal thread model of middle cerebral artery occlusion （MCAO））【实验目的】掌握线栓法制备局灶性大鼠脑缺血-再灌注模型的方法。

了解影响模型成功的的某些因素。

【实验原理】建立脑缺血动物模型是开展脑缺血损伤和治疗研究的基础，模型制备的方法较多，线栓法、光敏法、四血管夹闭法等。

本实验采用颈内动脉线栓法（theintraluminal thread model of middle cerebral arteryocclusion，MCAO ）。

由于啮齿类动物脑血管的解剖结构与人类相似，大鼠也由二条颈内动脉（ICA ），二条椎动脉（VA ）提供血运，颅底也有willis 环的吻合。

栓线进入ICA，前行至前交通动脉，阻塞大脑中动脉起始部及对侧血供。

TTC显示CP与背外侧皮质为典型缺血改变。

此模型优点在于：无需开颅，操作简单，动物损伤小。

有明确行为学和病理指标，适于进行运动功能和形态学观察研究。

梗死灶确切，重复性好，利于进行各种相关性研究。

可在无需再次麻醉时拔出栓线进行再灌研究。

现已被广泛应用于制备局灶性脑缺血模型。

MCAO法的难度较大，模型成功率不高。

在模型制作过程中要严格控制动物体重，线栓制备和手术操作过程的标准化。

【实验动物】动物：体重250-300g, SD雄性大鼠8-10只。

【实验器材】75%酒精、4%水合氯醛（或戊巴比妥钠）、1%肝素、氯化三苯基四氮唑（triphe nylte razoliumchloride ,TTC ）、PBS、工业酒精；大鼠板、绑线（线绳）、尼龙鱼线（直径0.28mm）、粗剪刀、手术刀、止血钳、眼科剪、眼科弯镊、外科剪、外科镊，玻璃分针，医用干棉球或纱布块、5ml注射器、酒精灯、石蜡、烧杯、平皿、毛细滴管、剃须刀片、角针、弯盘、自制拉钩、乳胶手套、劳动手套及长皮手套。

金纳多对脑缺血再灌注损伤大鼠MMP-9活性和血脑屏障通透性的影响杨霄鹏李秋芳1杨瑞玲2郭志松3（郑州大学第二附属医院神经内科，河南郑州450014）〔摘要〕目的探讨金纳多对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。

方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，将成模大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、金钠多治疗组，各组按缺血再灌注6、12、24h 三个时间点分为3个亚组，每组10只。

用RT-PCR 方法测定损伤侧脑组织中MMP-9活性变化，用伊文思蓝方法测定同侧脑组织血脑屏障通透性。

结果（1）随缺血再灌注时间延长，MMP-9含量、EB 含量开始逐渐增加，各组之间表达差异均具有统计学意义（P ＜0.05）。

（2）金纳多治疗组MMP-9活性及EB 含量各个时间点明显低于缺血再灌注组（P ＜0.05）。

结论金纳多通过抑制脑缺血再灌注大鼠MMP-9的活性，减轻血脑屏障通透性，可能是其发挥脑保护作用的机制之一。

〔关键词〕金纳多；基质金属蛋白酶；血脑屏障通透性〔中图分类号〕R74〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）10-2105-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.10.0501郑州大学护理学院临床教研室2河南大学第一附属医院药剂科3河南省人民医院ICU通讯作者：郭志松（1974-），男，副主任医师，主要从事脑血管病研究。

第一作者：杨霄鹏（1973-），男，副主任医师，硕士生导师，主要从事脑血管病及神经免疫性疾病研究。

血脑屏障破坏被认为在脑缺血再灌注损伤中起关键作用。

基质金属蛋白酶9（MMP-9）与血脑屏障的通透性密切相关〔1〕，能降解和破坏血脑屏障基底膜的Ⅳ型胶原引起脑水肿〔2〕。

金纳多是一种标准化银杏叶萃取物，能保护细胞膜的结构及功能的完整性，明显减少脑缺血后脑梗死面积，减轻脑缺血后神经功能缺损，对缺血神经细胞有保护作用〔3〕。

本试验进一步探讨其在脑缺血再灌注损伤时脑保护作用的机制。

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKK β/NF-κB 表达的影响赵丹玉王艳杰苗兰英曹阳王德山（辽宁中医药大学基础医学院，辽宁沈阳110847）〔摘要〕目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤（CIRI ）模型大鼠脑皮层组织中I κB 激酶β（IKK β）及核因子-κB （NF-κB ）表达，探讨眼针治疗脑损伤的作用机制。

方法健康雄性SPF 级Wistar 雄性大鼠60只，随机分为正常组、假手术组、CIRI 模型组和眼针组。

CIRI 模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血（MACO ）再灌注动物模型。

Western blot 检测大鼠缺血侧脑皮层IKK β、NF-κB 蛋白表达的变化。

结果与正常组及假手术组比较，模型组大鼠缺血侧脑皮层组织IKK β及NF-κB 蛋白水平均显示出高表达（P ＜0.01），眼针组同模型组相比，IKK β及NF-κB 蛋白表达则下调（P ＜0.01）。

结论眼针抑制脑皮层组织中IKK β及NF-κB 的表达，可能是眼针治疗CIRI 的主要作用机制之一。

〔关键词〕眼针；脑缺血再灌注；IKK β；NF-κB〔中图分类号〕R285.16〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）20-4419-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.20.030Influences of eye acupuncture on the expressions of IKK βand NF-κB in rat brain after acute cerebral ischemia /reperfusionZHAO Dan-Yu ，WANG Yan-Jie ，MIAO Lan-Ying ，et al .College of Basic Medical ，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine ，Shenyang 110847，Liaoning ，China【Abstract 】Objective To evaluate the expressions of IKK βand NF-κB in cerebral ischemia-reperfusion injury （CIRI ）in rat brain cortex and eye acupuncture therapy on it.Methods Healthy male Wistar rats were randomly divided into normal ，sham ，CIRI model andeye acupuncture groups.Model of middle cerebral artery occlusion （MACO ）was established by improved suture method.Western blot meth-ods was performed to examine the protein expressions of IKK βand NF-κB in the ischemic brain cortex.Results Expressions of IKK βandNF-κB in CIRI model group were increased significantly （P ＜0.01）compared with those of normal group and sham group ，and which were decreased significantly （P ＜0.01）in eye acupuncture group.Conclusions Eye acupuncture therapy could reduce the expressions of IKK βand NF-κB in CIRI ，which may be one of mechanisms of eye acupuncture therapy for CIRI.【Key words 】Eye acupuncture ；Cerebral ischemia and reperfusion ；IKK β；NF-κB基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）（No.2007CB512700）；辽宁省教育厅课题（No.L2010349）通讯作者：王德山（1951-），男，硕士，教授，主要从事中医药对消化道神经内分泌影响机制的研究。

线栓法大鼠MCAO模型制作的要点及经验总结林军;李艳芳;李冲;蒙兰青【摘要】大鼠大脑中动脉闭塞模型接近于人体活体局灶脑缺血的动物模型而被广泛用于局灶性脑缺血的科学研究,线栓法具有不开颅、易操作、创伤小、重复性好、可准确控制缺血及再灌注时间等优点,是广大研究者制作大鼠局灶性脑缺血模型首选的方法,线栓法大鼠大脑中动脉闭塞模型是目前研究局灶性脑缺血的理想模型.但其成功率仍受很多要素的影响,如大鼠的选择、麻醉剂的选用、线栓的制备、术前准备、手术流程及术后护理等要素均可影响造模成功.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2018(024)017【总页数】6页(P3398-3402,3408)【关键词】大脑中动脉闭塞模型;线栓法;经验总结【作者】林军;李艳芳;李冲;蒙兰青【作者单位】右江民族医学院,广西百色533000;右江民族医学院,广西百色533000;右江民族医学院,广西百色533000;右江民族医学院,广西百色533000【正文语种】中文【中图分类】R743.32脑卒中是一种急性脑血管病，具有高发病率、高病残率及高病死率的特点，严重危害患者身心健康，同时给社会造成巨大的负担，临床上分为缺血性和出血性，其中缺血性脑血管病占80%[1]。

因此，建立一种理想的脑缺血动物模型对脑缺血的发病机制、治疗途径等研究具有重要意义。

大鼠因具有与人类相近似的脑血管解剖结构、功能等特点，常被用于复制脑缺血的实验动物模型[2]，由于大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)为缺血性脑血管病的易患部位，故MCA 闭塞(MCA occlusion,MCAO)模型被广泛用于大鼠局灶性脑缺血的研究[3-5]。

线栓法具有不开颅、损伤小、易操作、可重复、可准确控制缺血及再灌注时间等优点，是制作大鼠脑缺血模型首选的方法[5-6]。

线栓法MCAO模型是目前研究局灶性脑缺血的理想模型[7]。

影响线栓法MCAO模型成功率的要素很多，但制模各要素目前尚未能达到统一标准，现就线栓法造模的制作要素予以综述和探讨。