真菌检验

酵母型真菌的微生物学检验1．检验程序深部真菌检验程序见图23-8。

2. 标本采集根据感染部位的不同，采集不同的标本。

采集标本时应避免病灶周围正常菌群污染。

对于疑似隐球菌性脑膜炎患者，以腰椎穿刺术无菌采集脑脊液3～5ml，特殊情况可采用小脑延髓池或脑室穿刺术，标本采集后应立即送检。

3．标本直接检查(1)直接显微镜检查：取标本直接涂片，革兰染色后镜检，显微镜下见到革兰阳性、圆形或卵圆形菌体或孢子及假菌丝(图23-6)，可确认为念珠菌感染。

克柔念珠菌可见假菌丝成对称分枝，有细长的芽生孢子。

光滑念珠莳镜下可见卵圆形芽生孢子，细胞尖端单芽，无真假菌丝，不产生厚壁孢子。

用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速的方法。

常规细胞染色可发现隐球菌，但易误诊和漏诊。

如用PAS染色后新生隐球菌呈红色。

(2)G试验：也称螯试验，可测定1-3-β-D-葡聚糖，后者是多种不同种类真菌细胞壁的共有成分，部分可激活马蹄蟹的协同凝集酶-G因子，用显色反应经分光光度计可测定其浓度。

血液及无菌体液中检出1-3-β-D-葡聚糖为深部真菌，如念珠菌、曲霉菌和酵母菌等感染的标志，但不能确定为何种深部真菌感染。

(3)抗原检测：取患者血清做ELISA、免疫印迹法等检测白念珠菌抗原，如烯醇化酶、甘露聚糖抗原及念珠菌热敏抗原。

(4)抗体检测：早期诊断可采用患者血清作ELISA夹心法、免疫酶斑点试验，方法简便、快速。

也可用乳胶凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清中抗白念珠菌抗体。

(5)核酸检测：用PCR法将白念珠菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏感性和特异性。

现有学者提出用短肽噬菌体展示技术与ELISA结合，高分辨率熔解曲线与真菌通用引物PCR结合鉴定白念珠菌及其他念珠菌。

4．分离培养将标本接种在沙保弱培养基上，25℃或37℃培养1～4天后，白念珠菌可在培养基表面出现奶油色类酵母型菌落，镜检可见假菌丝和芽生孢子。

热带念珠菌在沙保弱培养基上形成色暗而干燥的菌落。

检验真菌的方法
1. 直接镜检法：将短柄棉签蘸取患部分泌物、皮屑、毛发等样本，涂于玻璃片上，用40倍至100倍的显微镜下观察，检测真菌的形态和数量。

2. 细胞学检查法：可采用细胞学方法检查骨髓、淋巴结等组织样本中是否存在真菌，包括涂片法、细胞学初筛法、细胞学制片法等。

3. 培养法：将样本接种于含有丰富营养成分的培养基上，利用真菌的生长特点判定是否存在真菌的培养。

4. 核酸检测法：查找真菌的DNA或RNA序列，并使用PCR 技术的手段拓展浓度，最后用电泳技术侦察出真菌的情况。

5. 基于免疫学的检测：包括诸如ELISA和荧光法等方法，主要检测真菌产生的免疫球蛋白或抗原，以用于检测真菌是否存在。

真菌培养检查方法真菌培养检查是医院常用的检查方法，用于检测和鉴定真菌感染。

以下是真菌培养检查的步骤和注意事项：1. 采集标本：根据感染部位的不同，采集不同的标本。

例如，对于皮肤真菌感染，可以从病灶边缘刮取皮屑；对于深部真菌感染，可能需要采集血液、尿液等标本。

采集的标本应该尽快送往实验室进行培养，以免影响检查结果。

2. 培养基选择：根据不同的真菌种类，选择不同的培养基。

常用的培养基有沙保弱培养基、孟加拉红培养基等。

培养基的选择应该根据实验室的具体要求进行选择。

3. 接种：将采集的标本接种在培养基上，接种时要避免污染。

接种后将培养基放入恒温箱中进行培养。

4. 观察：在培养期间，需要定期观察培养基上是否有菌落生长。

一般情况下，真菌在培养基上生长需要几天到几周的时间。

如果发现有菌落生长，需要进行形态学鉴定和生化反应等试验，以确定真菌的种类。

5. 鉴定：通过形态学鉴定和生化反应等试验，可以确定真菌的种类。

有时还需要进行其他检查，如药敏试验等，以确定真菌对不同药物的敏感性。

6. 报告：鉴定完成后，医生会将结果报告给患者。

报告中包括真菌的种类、药敏试验结果等内容。

根据报告，医生可以制定相应的治疗方案。

注意事项：1. 在采集标本前，应该注意个人卫生，避免污染标本。

2. 培养期间，应该保持恒温箱的温度和湿度，以确保培养基上的真菌能够正常生长。

3. 在鉴定真菌时，应该注意观察菌落的形态和颜色等特征，以及进行生化反应等试验，以确保鉴定结果的准确性。

4. 对于深部真菌感染，需要进行多次检查，以排除假阳性的可能。

真菌检验技术在医学领域，真菌检验技术是诊断真菌感染、保障患者健康的重要手段。

真菌作为一类广泛存在于自然界中的微生物，有时会引发各种疾病，从轻微的皮肤感染到严重的系统性感染都有可能。

因此，准确、及时的真菌检验对于疾病的诊断、治疗和预防至关重要。

真菌检验技术多种多样，首先要提到的是直接镜检法。

这种方法相对简单快捷，医生通常会从患者的感染部位采集样本，比如皮肤鳞屑、指甲碎屑、痰液、脑脊液等。

然后将样本制作成涂片，经过染色处理后，在显微镜下直接观察。

如果能看到真菌的孢子、菌丝等结构，就可以初步判断存在真菌感染。

但直接镜检法也有一定的局限性，比如真菌数量较少时可能会漏检，而且不能准确鉴定真菌的种类。

培养法是真菌检验中另一种常用的技术。

将采集到的样本接种在适合真菌生长的培养基上，然后在一定的温度、湿度和氧气条件下培养。

经过一段时间后，如果培养基上长出了真菌菌落，就可以进一步进行鉴定和药敏试验。

培养法的优点是可以获得纯培养的真菌，便于进行更详细的鉴定和药敏分析，但它也有缺点，那就是培养周期较长，一般需要数天甚至数周的时间，而且有些真菌在常规培养基上不易生长，可能导致假阴性结果。

随着科技的不断发展，分子生物学技术在真菌检验中也得到了越来越广泛的应用。

聚合酶链反应（PCR）技术就是其中之一。

通过设计针对真菌特异性基因片段的引物，对样本中的真菌 DNA 进行扩增，然后通过检测扩增产物来判断是否存在真菌感染。

这种方法具有高度的敏感性和特异性，能够快速检测出微量的真菌 DNA，而且还可以对真菌进行种属鉴定。

此外，还有一些基于核酸杂交和基因测序的技术，也为真菌的准确鉴定提供了有力的手段。

血清学检测也是真菌检验的重要组成部分。

例如，检测患者血清中针对特定真菌的抗体或抗原。

当人体感染真菌后，免疫系统会产生相应的抗体。

通过检测这些抗体的水平，可以辅助诊断真菌感染。

但血清学检测也存在一些问题，比如在感染的早期，抗体可能还未产生，或者在某些免疫功能低下的患者中，抗体反应可能不明显。

真菌临床检验技术真菌临床检验在诊断和治疗真菌疾病中扮演着至关重要的角色。

由于真菌感染菌种构成的变化，新的条件致病真菌的出现，以及真菌感染率的提高，我们需要更为精细和深入的检测工作，以便确定真菌种类和其对抗真菌药物的耐药性。

对真菌进行精确的识别和耐药性分析，可以为临床治疗提供重要依据，从而有助于患者的快速恢复。

这里就带大家一起来了解常见的真菌临床检验技术。

1.标本采集标本采集是检验的基础，需根据病人的具体情况和疾病种类，选择合适的采集方法。

如果疑似浅表真菌感染，例如体癣，可刮取病变部位的边缘痂皮。

对于疑似深部真菌感染，需要采集的标本包括脓液、痰液、脑脊液、血液等。

无论何种情况，标本的采集都需要在尚未使用药物治疗前完成。

如果已经用药，需要停药一周后才能再次采集标本。

另外，标本的采集必须足量，一般情况下，活体组织需要两份（一份用于显微检查和培养，一份送给病理科进行检查），皮屑需要两块，胸腔液为20毫升，脑脊液和血液为5毫升。

在操作过程中，需要保证无菌，避免二次感染。

采集完成后的标本要尽快送检，保存时间不超过两小时，特别是对于深部真菌标本。

2.直接检查法真菌直接检验主要在显微镜下进行。

首先，取一部分患者的标本，放置在玻璃载片上，加入适量的载液。

在平均分布标本后，用另一块玻片覆盖。

待片刻，利用火焰迅速烘烤载玻片，但不可持续加热以避免结晶。

随后，轻压盖玻片，除去气泡的同时使标本尽可能压薄。

清理周围的溢液后，可以用显微镜观察。

初步选择低倍镜，观察是否存在孢子或菌丝。

确定存在后，使用高倍镜进行细致观察，描绘出孢子和菌丝的排列、大小、位置、特征和形态等。

真菌直接检查是一种较为快速和直接的检测方法，其结果可以明确患者是否被真菌感染。

如果结果为阳性，可以确诊患者的真菌感染；如果结果为阴性，仍不能排除真菌感染的可能性。

通过显微镜，我们可以明确部分病原菌种，如花斑癣菌、新型隐球菌等，也能够确定某些特定的菌属，如念珠菌属。

真菌检验操作生物安全要求真菌检验是一项涉及到生命科学和生物安全的重要实验。

在进行真菌检验操作时，实验人员需要遵守一定的生物安全要求，以保障自身安全并避免对环境造成负面影响。

实验人员生物安全要求1. 培训在进行真菌检验操作之前，实验人员应接受培训，掌握真菌实验操作、生物安全基本知识以及应急处理措施。

2. 个人防护实验人员在进行真菌检验操作时，应穿戴适当的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩等。

更换实验服、洗手、戴好手套等操作时都应注意生物安全。

3. 安全操作实验人员在进行真菌检验操作时，应遵循规范的实验操作流程，如操作要求仔细阅读实验手册，操作前应先确认所需试剂和设备齐全。

4. 废弃物处理实验人员在进行真菌检验操作后，应妥善处置废弃物，并避免将实验室中的废弃物外带，避免对环境造成污染。

实验室生物安全要求1. 实验室设置真菌检验的实验室应配备通风设备、安全柜等设备，保证室内循环空气。

实验室的温度、湿度等也需要严格控制，符合实验要求。

2. 实验室管理实验室管理人员需要对实验人员进行生物安全及实验操作规范知识培训，监督实验人员的操作，保证实验室安全、卫生环境良好。

3. 实验室清洁实验室应每日定期清洁，特别是实验室表面、设备表面、实验台等需要定期清洁、消毒，遵循规范的操作流程。

4. 实验室设备维护实验室里的设备应在定期进行维护，保证设备的完好性，避免操作中出现设备失效等问题，影响实验过程。

总结实验人员在进行真菌检验操作时，应注意生物安全要求，遵循规范的实验操作流程，保障自身安全并避免对环境造成负面影响。

实验室管理人员需要对实验室进行管理，定期进行清洁、维护、培训等，确保实验室环境安全、卫生、稳定。

真菌感染的常规检验方法真菌的临床实验室检查一般包括标本采集、直接镜检、染色镜检、分离培养、生化反应及免疫学试验等。

以直接镜检和分离培养最重要。

1标本采集不同真菌感染应采用不同的临床标本。

浅部真菌感染可以采集毛发、皮屑、指(趾)甲、痂等，标本在分离前常先用75％的乙醇消毒。

深部真菌感染的检查可取痰、尿液、口腔或阴道分泌物、脑脊液、各种穿刺液和活检组织等。

采集标本时应注意无菌操作。

采集标本后应及时转运至实验室进行检查，一般不超过1～2h，以免标本变质污染。

标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。

2检查方法2.1 直接检查法直接镜检是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。

其优点在于简便、快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。

但是，除了少数真菌外，多数不能确定其种类。

由于阳性率较低，阴性结果亦不能排除诊断，有时需反复检查或做其他方法检查以进一步确定。

直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。

2.1.1 不染色标本检查取皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本置于载玻片中央，滴加100～200g／L KOH溶液1～2滴，以盖玻片覆盖后在火焰上微微加热，使组织或角质溶解、透明后，先于低倍镜检查有无真菌菌丝或孢子，再以高倍镜检查其特征，可初步诊断真菌感染。

2.1.2 染色标本检查有些真菌如深部真菌需要染色后才能更清楚地观察，常用的染色方法如下。

(1)革兰染色法：多用于白假丝酵母菌、孢子丝菌和新近感染的组织胞浆菌等。

所有真菌均为革兰阳性。

(2)乳酸酚棉蓝染色法：取标本于载玻片上，滴加染液，加上盖玻片后于镜下观察，真菌被染成蓝色。

该法适用于各种真菌的直接检查，培养物涂片检查及小培养标本保存等。

(3)荧光染色法：用0.1％吖啶橙对标本涂片和组织切片进行染色，在荧光显微镜下观察，白假丝酵母菌、皮炎芽生菌、球孢子菌为黄绿色，新型隐球菌、鼻孢子菌为红色，组织胞浆菌为红黄色，曲霉菌为绿色。

2.2 分离培养法真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。

检验科真菌学常见检测与分析方法在检验科真菌学中，常见的检测与分析方法有多种，本文将详细介绍其中的几种方法。

一、直接镜检法直接镜检法是最常用的真菌检测方法之一。

该方法通过将待检样品直接放置在显微镜下观察，利用显微镜放大功能，检测并鉴定真菌的存在。

该方法操作简便，可以迅速获取初步结果，但其只能观察到菌丝、孢子等大型的真菌结构，对于微小的真菌可能存在漏检的情况。

二、培养法培养法是真菌学研究中较为常用的方法之一。

通过将待检样品放置于培养基上，促使真菌生长繁殖，从而观察和鉴定真菌的种类和数量。

培养法可以提供更多的细节信息，如真菌的形态、颜色、生长速度等，有助于进一步分析和鉴定。

然而，培养法需要较长的时间，一般需要数天至数周，且对于一些难以培养的真菌无法得到准确的结果。

三、PCR技术PCR（聚合酶链反应）是一种在分子生物学中广泛应用的技术。

在真菌学中，PCR技术可以用来检测和分析真菌DNA，从而确定真菌的存在和种类。

该方法的优势在于其高度敏感性和快速性，能够快速检测到微量真菌，并且可以对样品中的复杂菌群进行分析。

然而，PCR技术需要专门的实验设备和试剂，且对实验操作要求较高。

四、质谱分析质谱分析是一种基于质荷比的分析方法，可以用于真菌学中的检测和鉴定。

通过将待检样品进行质谱分析，可以得到真菌的分子质谱图谱，进一步进行真菌的鉴定和分类。

质谱分析具有高灵敏性和高分辨率的特点，可以准确地确定真菌的种类。

然而，质谱分析设备昂贵且操作复杂，需要专业的技术人员进行操作和解读结果。

综上所述，真菌学的常见检测与分析方法包括直接镜检法、培养法、PCR技术和质谱分析。

每种方法都有其优势和局限性，选择合适的方法需要根据具体情况和实验目的进行综合考虑。

在真菌学研究和检测过程中，通过运用这些方法，可以对真菌进行准确的检测和分析，为疾病的防控和治疗提供重要的科学依据。