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细胞基础知识

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一．原生质体

英文名称：

protoplast 脱去细胞壁的植物、真菌或细菌细胞

动物细胞就相当于原生质体（但与原生质体有一定区别）。

原生质体由原生质分化形成，具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等，而细菌如核糖体、拟核等。

干细胞干细胞(stem cells, SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent

stem cell,TSC)、多能干细胞（pluripotent stem cell）和单能干细胞（unipotent

stem cell）。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。

DNA序列

部分DNA序列或基因序列使用一串字母表示的真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构。

可能的字母只有A，C，G和T，分别代表组成DNA的四种核苷酸——腺嘌呤，胞嘧啶，鸟嘌呤，胸腺嘧啶。典型的他们无间隔的排列在一起，例如序列AAAGTCTGAC。任意长度大于4的一串核苷酸被称做一个序列。关于它的生物功能，则依赖于上下文的序列，一个序列可能被正读，反读；包含编码或者无编码。DNA序列也可能包含"junk DNA"。

单倍体

科技名词定义

中文名称：

单倍体

英文名称：

haploid

定义1：

只含一组染色体的细胞或生物体。绝大部分动、植物的配子为单倍体，配子未经结合而直接发育起来的生物也是单倍体。

所属学科： 海洋科技（一级学科）；海洋技术（二级学科）；海洋生物技术（三级学科）

定义2：

只有一套未配对染色体的细胞或生物体。以1n表示。

所属学科：

细胞生物学（一级学科）；细胞遗传（二级学科）

定义3：

具有和该物种配子染色体数相同的细胞或个体。

所属学科：

遗传学（一级学科）；细胞遗传学（二级学科）

多倍体：英文名称：polyploid 体细胞中含有三个以上染色体组的个体．多倍体在生物界广泛存在,常见于高等植物中,由于染色体组来源不同,可分为同源多倍体和异源多倍体.

细胞结构图

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Th1-Th2细胞基础知识

Th1-Th2细胞基础知识

Th1/Th2细胞基础知识

1)Th1/Th2 分类：

早在1986年，Mosmann等应用Th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，已发现小鼠CD4阳性细胞群是一个不均一的亚群，可分为Th1和Th2两个功能不同的独立亚群(见表1)。后来在人类的CD4阳性细胞群中也发现了Th1，Th2两 等，个功能细胞亚群(见表2)。Th1细胞主要分泌IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-β/ 介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症的形成，故亦称为炎症性T细胞，可被视为相当于TDTH细胞。Th1细胞在抗胞内病原体(病毒、细菌及寄生虫等)感染中发挥重要作用。在胞内细菌感染时， Th1细胞优先发育并引发吞噬细胞介导的宿主防御应答。Th1细胞持续性强应答，可能与器官特异性自身免疫病、接触性皮炎、不明原因的慢性炎症性疾病、迟发型超敏反应等有关。Th2细胞：Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10,其主要功能为刺激B细胞增殖并产生抗体，与体液免疫相关。在T/B细胞比例较低时，Th1细胞也可能辅助 B细胞产生抗体(IgM、IgG2a和IgA类)。在对蠕虫感染和环境变应原的应答中，主要是Th2细胞参与，以介导体液免疫应答为主。过度的Th2细胞应答可能在遗传易感的过敏性特应症中起重要作用。

两类CD4+Th细胞对细胞因子的反应性各异：IFN-γ可诱导Th1细胞分化，但抑制Th2细胞增殖；IL-4诱导Th2细胞分化，但可与IL-13等一起抑制Th1细胞功能；IL-2则可同时引起Th1和Th2细胞增殖。

，可下调APC和Th1细胞活性，在诱导免疫耐受中起重要作用。除上述的Th1和Th2细胞外，还有一类产生Th1和Th2样混合性细胞因子的Th0细胞。Th0亚群可能是从Th前体向Th1或Th2细胞分化过程中的一个中间阶段。此外，期有人报道还存在CD4+Th3细胞，其主要分泌TGF-

细胞培养基础知识详解-细胞的复苏、传代和冻存

细胞培养基础知识详解-细胞的复苏、传代和冻存

1 细胞培养基础知识详解

细胞的复苏、传代和冻存实验操作指导

整理：江耀伦 李美娣

1 细胞复苏

细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

1.1 实验前准备

（1）将水浴锅预热至37℃

（2）用75％酒精擦拭紫外线照射30min的生物安全柜内部台面。

（3）在生物安全柜中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

1.2 细胞复苏培养

（1）根据细胞冻存记录取出需要复苏的细胞。

（2）迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。

（3）约1-2 min后冻存管内液体完全溶解，取出放入离心机中以1000

rpm/min速度离心3~5 min。

（4）用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入生物安全柜内。吸弃上清液，向离心管内加入1 mL培养液，吹打制成细胞悬液。

（5）将细胞悬液分装入培养瓶或者培养皿内，将培养瓶/培养皿放入37℃，5％ CO2的培养箱内过夜后换液继续培养，换液的时间由细胞情况而定。

1.3 初学者易犯错误

（1）水浴锅未预热或者未预热到37℃。

（2）水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。

（3）离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。

（4）一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。

1.4 细胞传代

1.4.1 传代前准备

（1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶2 子放入37℃水浴锅内预热。

（2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的生物安全柜内台面和双手。

（3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。

1.4.2 细胞传代

（1）取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入生物安全柜内。

实验基础知识细胞因子

实验基础知识细胞因子

一、TNF-

肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）可分为TNF α和TNFβ两种，前者来自单核巨噬细胞，后者由活化T细胞产生，是具有重要生物活性的细胞因子。存在于细胞上的TNF

受体主要有两种：TNFRⅠ和TNFRⅡ，血清中存在的是可溶性的TNFR（s TNFRⅠ, s TNFRⅡ），它们的相互作用不仅对多种肿瘤细胞有细胞毒作用，还与炎症和发热反应、关节炎、败血症及多发性硬化等疾病有密切关系。

1.TNF的产生

（1）TNF-α是一种单核因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，LPS是较强的刺激剂。IFN-γ、M-CSF、GM-CSF对单核细胞/巨噬细胞产生TNF-α有刺激作用，而PGE则有抑制作用。前单核细胞系U937、前髓细胞系HL-60在PMA刺激下可产生较高水平的TNF-α。T淋巴细胞、T细胞杂交瘤、T淋巴样细胞系以NK细胞等在PMA刺激下也可分泌TNF-α。SAC、PMA、抗IgM可刺激正常B细胞产生TNF-α。此外，中性粒细胞、LAK、星状细胞、内皮细胞、平滑肌细胞亦可产生TNF-α。

（2）TNF-β是一种淋巴因子，抗原和丝裂原均可刺激T淋巴细胞分泌TNF-β。PMA刺激RPMI1788B淋巴母细胞可分泌高水平TNF-β。

3.TNF的受体

（1）TNF-R的分型：TNF-R可分为两型：Ⅰ型TNF-R，55kDa，CD120a，439氨基酸残基，此型受体可能在溶细胞活性上起主要作用；Ⅱ型TNF-R，75kDa CD120b，426氨基酸残基，此型受体可能与信号传递和T细胞增殖有关。两型TNF-R均包括胞膜外区、穿膜区和胞浆区三个部分，胞膜外区有28%的同源，但在有包浆区无同源性，可能与介导不同的信号转导途径有关。TNF-R属于神经生长因子受体（NGFR）超家族。TNF-α和TNF-β的受体可能是同一的。TNF-R存在于多种正常及肿瘤细胞表面，一般每个细胞受体数目有103～104，如ME-180肿瘤细胞系TNF-αR约2000/个细胞，Kd为2*10-10M。不同细胞表面TNF-αR的数目和亲和力似乎与细胞对TNF-α的敏感性并不平行。TNF-α与相应受体结合后信号传递的机理尚不清楚，可能与活化蛋白激酶C（PKC），催化受体蛋白磷酸化有关。

细胞增殖基础知识判断带答案

细胞增殖基础知识判断带答案

细胞增殖基础知识判断

（ ）1、基因型Aa的个体，基因A与A的分离，是因为着丝点分裂，姐妹染色单体的分离，发生在有丝分裂后期或减数第二次分裂后期，在减数第一次分裂不发生基因A与A的分离。

（ ）2、基因型Aa的个体，基因A与a的分离，只发生在减数第一次分裂后期，有丝分裂不能发生基因A与a的分离。

（ ）3、孟德尔遗传定律发生在减数第二次分裂。（ ）

（ ）4. 盐酸在“观察植物细胞的有丝分裂”和“低温诱导植物染色体数目的变化”中的作用不同（ ）

（ ）5. 用显微镜观察小麦根尖成熟区表皮细胞，可观察到有丝分裂的图像，从而判断出每个细胞中有42条染色体（ ）

（ ）6. 经碱性染料染色的洋葱表皮细胞，镜检时可看到每个染色体被染成深色（ ）

（ ）7. 基因分离定律和基因自由组合定律主要在减数第一次分裂后期完成（ ）

（ ）8. 如果癌细胞体内的HSP90基因的表达受到抑制，则因细胞会因缺少HSP90而无法抵御因化疗产生的体内“恶劣环境”，使细胞死亡（ ）

（ ）9. 分裂期的染色体上的基因由于翻译过程受阻而不能表达（ ）

（ ）10. 有丝分裂间期DNA复制使后染色体数目加倍（ ）

（ ）11. 在细胞分裂过程中，染色体数目的增加与DNA数量的增加不可能发生在细胞周期的同一个时期；DNA数目的减半与染色体数目的减半可以发生在细胞周期的同一时期。（ ）

（ ）12. 在动植物细胞有丝分裂的中期都会出现赤道板，但只有在植物细胞有丝分裂的末期才会出现细胞板。（ ）

（ ）13. 一个处于细胞周期中的细胞，如果碱基T与U被大量利用，则该细胞不可能处于细胞周期的分裂期。（ ）

（ ）14. 某一处于有丝分裂中期的细胞中，如果有一染色体上的两条染色单体的基因不相同，如分别为A与a，则该细胞在分裂过程中很可能发生了基因突变。