羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton微板法)

福建分析测试　Fujian Analysis &Testing 2006,15(3)收稿日期:2006-2-22作者简介:朱琳娜(1981～),女,在读硕士研究生,主要研究方向为水污染控制理论与技术。

E -mail:lina .a manda@NR 光度法测定Fent on 试剂所生成的羟基自由基朱琳娜　何争光　吴超(1、郑州大学环境与水利学院,郑州　450002;2、河南神火集团,永城　476613)摘　要:要提高Fent on 试剂在废水处理中的效率,关键就是要提高羟自由基的生成率和利用率。

本文提出了检测Fent on 试剂反应产生羟自由基的新方法,羟自由基氧化中性红使其褪色,用分光光度法测定其△A 值的变化,可间接测定羟自由基的产生量。

并考查了FeS O 4投加量、H 2O 2投加量、酸度、反应时间等影响羟自由基生成量的主要因素,为Fent on 试剂在废水处理中的应用提供了参数依据。

另外,该法稳定性好,操作简单,测定快速。

关键词:光度法;中性红(NR );羟自由基;Fent on 试剂;废水处理中图分类号:O657.32　文献标识码:A 文章编号:1009-8143(2006)03-0010-03Photom etr i c D eterm i n a ti on of Hydroxyl Free Rad i ca l Produced i n Fen ton ’s Reagen t Reacti on System by Toluylene Red D ecoloura ti onZhu L i n na He Zhengguang W u Chao(1.School of Envir on ment and W ater Conservancy,Zhengzhou University,Zhengzhou,450002,China;2.Shenhuo Gr oup,Henan,Yongcheng,476613,China )Abstract:The key t o enhance the efficiency of Fent on’s reagent in waste water treat m ent is t o enhance the p r oductivity and utilizati on rati o of hydr oxyl radicals in the syste m.I n this paper,for the deter m inati on of the hydr oxyl free radical p r oduced by Fent on reacti on,a ne w phot ometric method based on its oxidati on reacti on with t oluylene red is put f or ward .The col or intensity of t oluylene red will be changed after the oxidati on reacti on,the change of △A is measured phot ometrically,and the a mount of the hydr oxyl free radical can be deter m ined indirectly .The leading fact ors influencing the p r oductivity of the hydr oxyl free radical in the system such as the a mounts of FeS O 4and H 2O 2,reacti on ti m e and reacti on temperature were tested .The useful para meters for Fent on’s reagent in waste water treat m ent were offered .I n additi on,the stability of thismethod is good,its operati on is convenient,and its deter m inati on is fast .Key words:phot ometry;t oluylene red;hydr oxyl free radical;Fent on’s reagent;waste water treat m ent Fent on 试剂在废水处理中的应用主要是利用H 2O 2在Fe 2+的催化作用下所生成的具有强氧化性的・OH 的作用,通过其强氧化性对废水进行预处理以提高废水可生化性,利于其后续处理。

Determination of hydroxyl radical in Fenton reaction by spectrophotometryYANG Ming-hui,HE Li-xian,LI Zhen-gui(College of Life Science and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China〔Abstract 〕A new photometric method was proposed for the determination of the hydroxyl free radical produced by Fenton reaction.The color intensity of neutral red (NR was changed before and after the oxidation reaction.The amount of hydroxyl radical produced in the system was indirectly determined through absorbance c hanged at a wavelength of 520nm (ΔA 520by means of spectrophotom-etry.The optimal experimental condition was studied and obtained.Under the selected conditions,good relationship was obtained be-tween the scavenging effects of the hydroxyl free radical and the concentration of mannitol and thiourea.The resistance to hydroxyl radical oxidation of six antioxidants such as ferulic,rutin was evaluated.The method can be applied for the selection of antioxidants and study of mechanism of hydroxyl radical.〔Key words 〕hydroxyl radical;neutral red;fenton reaction;spectrophotometry随着自由基生物学与自由基医学研究的迅速发展,现已证明多种疾病的发生和发展与自由基对组织细胞的损伤关系密切,羟自由基是生物体内危害最大,活性最强的氧自由基〔1〕。

羟自由基测定试剂盒使用说明货号：LA1950规格：50管/48样产品内容：试剂一：3%H2O2标准品贮备液0.5mL×1支，4℃保存3个月。

0.03%标准品应用液的配置：3%H2O2标准品贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。

试剂二：底物贮备液1mL×1支，4℃保存3个月。

底物应用液的配制：如果您的样本为抑制羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度低，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。

如果您的样本为产生羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度高，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：299稀释，现用现配。

试剂三：甲液贮备液2mL×1支，4℃保存3个月。

用时用双蒸水稀释至1：9稀释成应用液。

乙液7mL×2支，4℃保存3个月。

试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比列混合，按需配置，剩余的4℃保存。

试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存3个月。

用时加双蒸水稀释至100mL制备应用液，4℃保存。

若有结晶，则放置37℃水浴至全部溶解后再稀释。

试剂五：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。

试剂六：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。

试剂七：分析纯的冰乙酸自备。

显色剂的配制：试剂四应用液：试剂五：试剂六：冰乙酸=8:3:3:2，现用现配。

抑制羟自由基的物质如：血清（浆）、各种组织匀浆液、口服液等产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。

产品简介：Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的OH·量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH·的多少成正比列关系。

操作步骤：以上配制好的应用液，先在37℃水浴中温育3min，一下操作在37℃水浴中进行。

空白管标准管对照管测定管双蒸水（mL）0.40.20.20.03%H2O2标准应用液（mL）0.2底物应用液（mL）0.20.2样本（mL）0.2试剂三应用液（mL）0.40.40.40.4混匀，37℃反应1min（准确以秒表计时），从加完试剂三开始到1min结束，立即加入显色剂终止反应，一次只能做一个管子。

羟自由基清除率测定方法
1. 哎呀呀，你知道吗？有一种羟自由基清除率测定方法叫比色法呢！就好像我们通过眼睛看颜色的变化来判断一样，是不是很神奇？比如在做实验的时候，加入特定的试剂后，颜色一下子就变了，那就能知道羟自由基清除的情况啦！
2. 嘿，还有一种电子自旋共振法呢！这就好像是给羟自由基装上一个追踪器，能清楚地看到它们的动向和变化。

想象一下，在实验室里，我们能这么精准地捕捉到羟自由基的信号，是不是超厉害呀！就像警察抓小偷一样把它们都“逮住”呢！
3. 哇塞，化学发光法也是羟自由基清除率测定的好方法呀！这不就像夜晚的萤火虫一闪一闪地告诉我们它在哪里嘛！比如说当有物质能清除羟自由基时，那光芒就会减弱，多直观呀！
4. 哟呵！荧光分析法也很不错呢！它就像是一道光，照亮羟自由基的“踪迹”。

我们通过观察荧光的变化来了解羟自由基的清除效率，感觉自己就像个侦探一样在寻找线索呢！比如说在某个样品中加入特定试剂后，荧光发生了改变，那就是关键信息呀！
5. 哈哈，脉冲辐解法也能用来测羟自由基清除率哦！这就如同闪电划过，清楚地显示出羟自由基的状态呢。

就像闪电带来的瞬间光明一样，让我们能看清整个过程。

在实验中看到那些数据的变化，可有意思啦！
6. 哇哦！分光光度法也能担此大任呀！这就像用一个神奇的“眼睛”去观测羟自由基的世界。

我们按照步骤一步步操作，就能得到想要的结果啦。

比如说在特定波长下测量吸光度的变化，就知道羟自由基的清除情况如何啦！
我觉得这些羟自由基清除率测定方法都各有千秋，都为我们研究和了解羟自由基提供了有力的手段呀！。

羟自由基清除能力检测
羟自由基清除能力（Hydroxy free radical scavenging activity）是一种衡量物质抗氧化能力的重要指标。

目前有关羟自由基的分析测试方法主要有高效液相色谱法、化学发光法、荧光分析法、分光光度法等。

其中测定羟自由基清除能力最常用的是通过分光光度法测定样本抑制显色物邻二氮菲的吸光度的下降，从而反映样品清除羟自由基的能力。

测定原理为：
H2O2/Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测羟自由基清除能力。

此外，我们还提供其他氧化应激类检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定羟自由基清除能力样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 羟自由基清除能力信息。

北京索莱宝科技有限公司羟自由基清除能力检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1325规格：100T/96S 产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体0.16mL×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入9.84mL 蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂4℃保存一周。

产品说明：羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。

它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。

羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+，导致536nm 的吸光度下降，样品536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品：恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：一、样品的制备：（1）组织样品的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

（2）血清、果汁等液体样品可直接测定。

（3）提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。

二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。

2、操作表：在1.5或0.5mLEP管中分别加入下列试剂空白管对照管测定管试剂一（µL）505050试剂二（µL）100100100试剂三（µL）100100100充分混匀，防止颜色不均一。

Fenton反应考察抗坏血酸清除羟基自由基能力及动力学李艳;巩士磊;车影;靳利娥;闫果兰【期刊名称】《应用化学》【年(卷),期】2015(032)008【摘要】自由基的清除对维持正常的生理活动和抗衰老具有重要意义.抗坏血酸(VC)是常用的天然抗氧化剂之一,为了有效合理利用Vc的抗氧化性,实验利用水杨酸捕捉Fenton反应产生的羟基自由基(·OH),加入Vc考察与水杨酸竞争清除·OH 的能力,选择出最佳清除条件;并根据双底物反应特征,拟合出Alberty方程,得到了清除·OH的规律.结果表明,当Vc用量为4.54 mmoL/L、温度为47℃条件下、反应90 min时,Vc对·OH的清除率达到最大,为46.23％;拟合出的反应动力学参数最大反应速率为0.11 mmol/(L·min),水杨酸和Vc的特征常数分别为30.2和1.2×10ˉ3 mmol/L.比较实验结果和拟合方程得到的数据,二者非常接近,相对误差在1.66％～5.40％之间,从而为合理利用抗坏血酸清除羟基自由基提供理论依据.【总页数】7页(P948-954)【作者】李艳;巩士磊;车影;靳利娥;闫果兰【作者单位】太原理工大学化学化工学院太原 030024;太原理工大学化学化工学院太原 030024;太原理工大学化学化工学院太原 030024;太原理工大学化学化工学院太原 030024;太原理工大学化学化工学院太原 030024【正文语种】中文【中图分类】O643.1【相关文献】1.气相色谱法测定Fenton反应产生的羟基自由基及其清除作用 [J], 王炳娟;卢青;邹洪2.荧光动力学分析法测定5种(口山)酮清除超氧自由基和羟基自由基的活性 [J], 赫春香;王杨;曹璨;王世盛3.胶束电动毛细管色谱法测定Fenton反应产生的羟基自由基及其清除作用 [J], 王炳娟;卢青;邹洪4.枇杷核总黄酮的提取及对羟基自由基清除作用的考察 [J], 徐光富;李博5.Fenton反应产生的羟基自由基及其清除的分光光度法测定 [J], 宋艳;邹洪;董瑞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton 微板法)简介：在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基，其中羟自由基·OH 是体内最活跃的活性氧，可介导许多生理变化。

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病，如引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，并损伤膜结构和功能。

羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

Leagene 羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton 微板法)又称羟自由基清除能力检测试剂盒或羟自由基检测试剂盒，其检测原理H 2O 2/Fe 2+ 通过Fenton 反应产生羟自由基，将Fe 2+氧化为Fe 3+，产生的亚磺酸与偶氮染料反应生成偶氮岚，以酶标仪测定吸光度，在一定范围内颜色深浅与产生的羟自由基成正比，求得标准曲线，通过分析捕获产生的羟自由基可计算出自由基清除率或清除能力。

该试剂盒主要用于测定植物组织、血清、血浆等样本中的羟自由基清除率或羟自由基清除能力。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等3、 研钵或匀浆器4、 离心管或试管5、 离心机6、 96孔板7、 酶标仪编号 名称TO1131 100T Storage试剂(A): OH Lysis buffer 500ml RT 试剂(B): OH Assay buffer 50ml RT 避光 试剂(C): H 2O 2基液 1ml RT 试剂(D): OH 显色液 100ml4℃ 避光 使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，样品：OH Lysis buffer的比例，加入OH Lysis buffer后匀浆或研磨，室温静置，离心，上清液即为羟自由基粗提液，4℃保存备用。

fenton法测定羟自由基英文回答：Fenton Reaction for Determining Hydroxyl Radicals.The Fenton reaction is a chemical reaction that generates hydroxyl radicals, which are highly reactive species that can damage DNA, proteins, and lipids. The reaction is commonly used in laboratory settings to study the effects of oxidative stress on biological systems.The Fenton reaction is a two-step process. In the first step, iron(II) ions react with hydrogen peroxide to form hydroxyl radicals and iron(III) ions. In the second step, iron(III) ions react with another molecule of hydrogen peroxide to regenerate iron(II) ions and produce a second molecule of hydroxyl radicals.The rate of the Fenton reaction is influenced by several factors, including the concentration of iron(II)ions, hydrogen peroxide, and pH. The reaction is most efficient at pH values between 3 and 5.The Fenton reaction can be used to determine the concentration of hydroxyl radicals in a solution. This is done by adding a known amount of hydrogen peroxide to a solution containing iron(II) ions. The reaction is then allowed to proceed for a known period of time, and the concentration of hydroxyl radicals is determined using a spectrophotometer.The Fenton reaction is a powerful tool for studying the effects of oxidative stress on biological systems. The reaction can be used to generate hydroxyl radicals in a controlled manner, and the concentration of hydroxyl radicals can be determined using a spectrophotometer.中文回答：芬顿法测定羟自由基。

DPPH 自由基清除能力检测试剂盒说明书微量法货号：BC4755规格：100T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体30mL×1瓶（自备）常温保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：无水乙醇自备；2、试剂二：粉剂置于瓶内EP 管中。

临用前加入4.05mL 试剂一振荡溶解，用不完的试剂可于-20℃保存1个月，建议分装保存，避免反复冻融；临用前根据试验所需量按照试剂二：试剂一（V:V ）=4：21的比例配制成工作液，现配现用，用不完的工作液可于2-8℃保存一周；3、试剂三：10mg 维生素C 。

临用前加入1mL 提取液，充分振荡溶解，配成10mg/mL 的维生素C 溶液，2-8℃保存两周；用于阳性对照。

产品说明：DPPH 自由基一种很稳定的氮中心的自由基，是样本抗氧化能力的重要指标之一，广泛应用于抗氧化类食品、保健品及药品的研究中。

DPPH 自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在515nm 处有强吸收。

当有抗氧化剂存在时，DPPH 自由基被清除，其溶液颜色变浅，515nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。

本试剂盒中，通过吸光度下降的程度来反映样本清除DPPH自由基的能力。

DPPH ·DPPH ·H注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、无水乙醇、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50目筛和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的制备（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）AntioxidantsBeijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:************（1）植物样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛；称取约0.05g样本，加入1mL提取液后置于40℃水浴锅中浸提30min；10000rpm室温离心10min，取上清，置于冰上待测。

Fenton反应是一种氧化还原反应，用于生成自由基。

这种反应由哈瑞·菲顿和詹姆斯·菲顿在1894年发明。

它是通过将还原剂（如二进制铁盐）和氧气在酸性条件下添加到溶液中来实现的。

比色法测定Fenton反应产生的羟自由基是使用一种化学试剂，称为2，2'-联苯二肼，来检测羟自由基。

当羟自由基存在时，2，2'-联苯二肼会发生颜色变化，变成深蓝色。

通过测量这种颜色变化的强度，可以估算羟自由基的浓度。

Fenton反应的应用包括：
1.环境污染物的氧化：Fenton反应可以用来氧化有机污染物，如废水中的有机废物。

这种方法在净化水和废水方面很有用。

2.生物杀灭剂：Fenton反应产生的羟自由基可以杀死细菌，因此可以用作生物杀灭剂。

3.化妆品的生产：Fenton反应在化妆品的生产中也被广泛使用。

例如，Fenton反应可
以用来制造护肤霜和洗发水。

4.生物医学研究：Fenton反应在生物医学研究中也得到了应用。

例如，Fenton反应可
以用来研究自由基的生物学作用，以及自由基在疾病发展中的作用。

研究人员还可以使用Fenton反应来模拟自由基的影响，以帮助研究自由基的生物学效应。

总的来说，Fenton反应在环境净化、生物杀灭、化妆品生产和生物医学研究中都得到了广泛应用。

抗氧化活性的测定(参考)——测定活性物质对羟自由基的清除率（羟自由基清除试验）采用Fenton 试剂：过氧化氢/亚铁盐。

原理：H 2O 2与亚铁离子反应生成·OH,·OH 自由基一般存活时间比较短，具有较高的反应活性。

当在反应体系中添加水杨酸，便能快速的捕捉·OH 而产生紫色化合物（2,3-二羟基苯甲酸），该有色化合物在510nm 处有较大吸收峰，测其吸光度可表示羟自由基（•OH ）的多少，吸光度与羟自由基（•OH ）的量成正比。

反应体系中若加入羟自由基（•OH ）清除剂后，被氧化的水杨酸减少，则体系颜色变浅甚至消失，吸光度变小。

操作：样品处理：蔬菜水果切分，榨汁（切分后可放在2%的盐酸或草酸溶液中护色）。

将蔬菜汁或果汁放入50ml 离心管中（如有颜色加适量活性炭或白陶土），在3000~ 4000rpm 下离心10min~ 20min 后（若样品蛋白含量较高，需加适量乙酸锌，亚铁氰化钾）快速过滤，滤液备用。

取25ml 比色管2支（样品管、空白管），分别加入5ml 1mmol/L 硫酸亚铁溶液、5ml 3mmol/L H2O2溶液，样品管中加入1ml 样品溶液，空白管中加入1ml 蒸馏水，混合均匀后用3mmol/L 水杨酸溶液定容至刻度，在37℃(0.1±℃)的恒温水中反应15min 后，用分光光度计在510nm 的波长下测定各管的吸光度。

以3mmol/L 水杨酸溶液调零。

其对•OH 自由基的清除率SA （%），可根据下式进行计算：式中：A0—不加样品的吸光度； A1—加入样品的吸光度100A0A1-A0= SA(%)⨯清除率###【以往经验，不一定全适用】：若样品不进行脱色处理，则操作如下：在3支25ml 的比色管中（样品管、空白管、样品本底管）依次加入5ml1mmol/L 硫酸亚铁溶液，空白管和样品管中各加入5ml3mmol/L H 2O 2溶液，本底管中H 2O 2溶液用蒸馏水代替。

feton法测定清除氧自由基的能力
Fenton法是一种常用的实验方法，用于测定物质对清除氧自由基的能力。

在Fenton法中，通过加入过氧化氢(H2O2)和铁(Fe2+)离子，产生高活性的羟基自由基(OH·)，从而模拟体内的氧化应激环境。

以下是使用Fenton法测定清除氧自由基能力的步骤：
1. 准备试剂：准备过氧化氢溶液和含有铁离子的反应溶液。

2. 反应混合：将待测物质与过氧化氢溶液和铁离子溶液混合在一起。

3. 反应过程：在适当的温度和时间下进行反应，使得羟基自由基生成。

4. 制备控制组：制备一个只含有过氧化氢溶液和铁离子的对照组。

5. 反应停止：通过加入适当的试剂来停止反应。

6. 测定结果：使用适当的分析方法，如抗氧化指示剂或电子自旋共振谱仪，测定待测物质和对照组中自由基的生成量差异。

根据测定结果，可以评估待测物质对清除氧自由基的能力。

如果待测物质能够显著减少自由基的生成，表明其具有较强的清除氧自由基能力。

需要注意的是，Fenton法是一种简单直观的实验方法，但在实际应用中还需结合其他指标和实验方法来全面评估物质的抗氧化能力。

enton 法中羟基自由基测定方法介绍王静阿2014-07-29 14:52:081．引言反应通过H2O2 和Fe2+作用产生羟基自由基（?OH），羟基自由基（?OH）具有极强的氧化能力，能够有效的将有毒有害有机物彻底降解成二氧化碳、水和无机离子。

因此反应在废水处理及难降解废水的预处理中具有重要的意义。

但是羟基自由基（?OH）的反应活性大、寿命短（小于10-4s）、存在浓度低，因此在有关羟基自由基（?OH）的研究中，其测定方法便显得非常重要。

羟基自由基（?OH）存在时间短的特性决定了其检测非常困难，常用的方法是将羟基自由基转化为易于检测的物质，进行间接测定，本文简要介绍几种常用的羟基自由基测定方法：电子自旋共振、化学发光法、荧光法、分光光度法、电化学法、高效液相色谱法[1]。

2．羟基自由基的形成及反应机理2.1 羟基自由基的形成机理Fenton反应的实质是二价铁（Fe2+离子）和H2O2 间的链式催化反应生成?OH。

中国科学院的谢银德等[3]引用美国尤他州立大学研究人员使用顺磁共振的方法捕获到羟基自由基碎片而推导出的结论,得到一个对于Fenton 反应的机理较为综合全面的解释。

在第一个反应中, Fe2+ 与H2O2 之间的反应很快,生成的羟基自由基具有很高的电极电位氧化能力仅次于氟[4]。

2.2 羟基自由基降解有机污染物的反应机理作为高级氧化技术的原理,就是利用其超强氧化性能实现对难以降解物质的深度氧化。

Fenton 法是一种均相催化氧化法，在含有亚铁离子的酸性溶液中投加过氧化氢时，在催化剂作用下，H2O2 能产生两种活泼的氢氧自由基，从而引发和传播自由基链反应，加快有机物和还原性物质的氧化。

反应体系内羟基自由基（?OH）首先与有机污染物RH 反应生成游离基R?, R?进一步氧化生成CO2 和H2O，从而使有机污染物最终得以降解。

羟基自由基比其他常用的氧化剂（如MnO4-,ClO2）具有更高的电极电势，且电子亲和能较高。

1、羟自由基清除能力测定法
试剂：1.865 mmol/L邻二氮菲、无水乙醇溶液、0.2 M的pH 7.4磷酸盐缓冲液、1.865 mmol/L的FeSO4·7H2O溶液、0.03% (v/v) 的H2O2、抗坏血酸
取1.0 mL浓度为1.865 mmol/L邻二氮菲的无水乙醇溶液于带塞试管中，分别加入浓度为0.2 M的pH 7.4磷酸盐缓冲液2 mL和1 mL不同浓度的样品，充分混匀后加入1.0 mL浓度为1.865 mmol/L的FeSO4·7H2O溶液，再次混匀后加入1.0 mL 0.03% (v/v) 的H2O2，于37℃恒温水浴，60 min后，在536 nm下分别测量各组混合溶液的吸光度值得A S，以蒸馏水代替样品作为空白组测吸光度值得A b，以蒸馏水替代H2O2作为损伤组，测其吸光度值A n，以抗坏血酸代替样品作为阳性对照，抗氧化剂的羟自由基清除率按以下公式计算：羟自由基清除率(%)=[(As-A n)/(A b-A n)] × 100。