研究生液相色谱实验报告

实验一、啤酒花中芦丁的高效液相色谱法测定1..实验目的了解与掌握高效液相色谱法（HPLC）分析原理与基本操作方法。

2．实验药品与仪器酒花超临界CO2萃取后的萃余物实验室自制；石油醚、甲醇（色谱纯）、乙醇、乙酸、芦丁标准品均购自北京化学试剂公司，超纯水购自娃哈哈公司；Waters 1525型高效液相色谱仪Waters 2487型UV检测器美国；超声波清洗仪宁波新芝生物科技有限公司提供真空旋转蒸发仪上海申生科技有限公司提供。

3.实验方法3.1.酒花中芦丁的提取步骤准确称取1g酒花样品2份，用50%的乙醇溶液以1：20的料液比，在60℃下分别用超声波提取1h后离心4000转/分，15分钟，取上清液为酒花芦丁提取液，经0.45μm滤膜过滤后，用于HPLC分析。

3.2. HPLC测定芦丁的步骤先用芦丁标准品制作标准曲线，再将样品溶液用微量进样器吸取10μl样品液进样分析,记录色谱峰，测定样品的芦丁峰面积,代入标准曲线的回归方程中计算相应的芦丁含量。

HPLC测定条件：C18柱(4.6mm×250mm)，流动相：甲醇-水-冰乙酸(40∶60∶2，V/V)；流速：1.0ml/min；柱温：室温，进样量：10μl；检测波长：280nm；灵敏度：0.05AUFS。

芦丁标准曲线制备方法：取芦丁标准品适量，用甲醇制成10ppm，20 ppm，40 ppm，60 ppm，80 ppm，100 ppm系列标准品溶液，分别进样，记录峰面积，以芦丁标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制芦丁标准曲线（计算回归方程为：Y=8.20×103X-4.77×103，相关系数为r=0.997981）。

芦丁的定性与定量分析：芦丁的定性分析根据芦丁标准品的保留时间确定，定量分析由芦丁标准品的标准曲线方法计算。

芦丁含量结果表示为mg/g酒花4. 实验结果4.1芦丁标准曲线的制备图1 芦丁标准品色谱峰图2 芦丁标准曲线表1 芦丁标准曲线测定数据芦丁标准品10 20 40 60 80 100浓度（μg/ml）HPLC峰面94310.0 147600.0 308800.0 479500.0 679900.0 803400.0积4.2酒花提取液中芦丁的测定5. 结果与讨论Y=8.20×103X-4.77×103，相关系数为r=0.997981。

高效液相色谱实验报告高效液相色谱法，基本原理为影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。

分为液固吸附色谱法，流动相为液体，固定相是固体吸附剂；液分配色谱法，固定相几乎全是化学键合硅胶，又称化学键合相色谱法等。

（二）塔板理论：塔板理论方程式（高斯方程式）：理论塔板式数：理论塔板高度：（三）速率理论： h=a+b/u+cu影响塔板高度的因素：1、涡流扩散 2、纵向扩散 3、传质阻抗二、气相色谱仪：（1）色谱柱：固定相与柱管组成。

填充柱、毛细管柱；分配柱、吸附柱（2）紧固液：低沸点的液体，操作方式下为液态。

甲基硅油、聚乙二醇等选择原则：按相似性、按主要差别、按麦氏差别选择。

（3）载体：化学惰性的多孔性微粒（4）毛细管色谱柱：开管型、填充型（5）检测器：1、浓度型检测器：热导检测器和电子捕捉检测器2、质量型检测器：氢焰离子化检测器中国药典对气相色谱规定：除检测器种类、紧固液品种及特定选定的色谱柱材料严禁任一修改外，其他均可适度发生改变，色谱图于30min内记录完。

第四节高效液相色谱法1、基本原理：影响柱效的主要因素就是涡流蔓延和传质电阻。

分类：1、液固吸附色谱法：流动相为液体，固定相是固体吸附剂。

2、液——液分配色谱法：紧固二者几乎全系列就是化学键再分硅胶，又称化学键再分相色谱法。

按固定相和流动相的极性2又分：正相色谱法和反相色谱法正相色谱法：流动二者极性大于紧固二者极性的色谱法。

用作拆分溶有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用作所含相同官能团物质的拆分。

极性强组分先流入反相色谱法：……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物2、高效率液相色谱仪：1、高压输液泵2、色谱柱3、进样阀4、检测器：紫外稀释检测器、荧光检测器、热法折光检测器、电化学检测中国药典对高效液相色谱法规定：除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意更改外，其余均可适当改变，色谱图于20min内记录完毕。

第五节色谱系统适用性试验和定量分析方法一、系统适用性试验1、色谱柱的理论板数：2、分离度：应大于1.53、重复性3、拖尾声因子：0.95-1.05之间二、定量测定法：1、内标法加较正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量2、外标法测量供试品中某个杂质或主成分含量3、加较正因子的主成分自身对照法不加较正因子的主成分自身对照法。

液相色谱实验报告姓名：XXX 专业：有机化学学号：312070303004 时间：2012.11.11一、实验目的：1 .了解液相色谱仪的基本构造、工作原理。

2. 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过高效液相色谱（HPLC）对目标化合物进行分析鉴定。

二、实验原理：液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。

当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。

被分离成单个组分后依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、液相色谱法的特点：高压——压力可达150～300 kg/cm2。

色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。

高速——流速为0.1～10.0 mL/min。

高效——塔板数可达5000/米。

在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。

同时消耗样品少。

高效液相色谱（HPLC）与经典液相色谱相比有以下优点：速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

四、液相色谱仪的组成：液相色谱仪主要包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。

1 输液系统：包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。

贮液装置用于存贮足够量、符合HPLC要求的流动相。

高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。

2 进样系统：将待测的样品引入到色谱柱的装置。

液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。

一、引言液相色谱仪（HPLC）作为一种重要的分析仪器，广泛应用于食品、医药、环保、化工等领域。

为了提高我们的实验技能和理论水平，我们进行了液相色谱仪的实训。

本次实训主要学习了液相色谱仪的原理、操作方法以及常见故障的排除。

以下是本次实训的总结。

二、实训目的1. 了解液相色谱仪的基本原理和结构。

2. 掌握液相色谱仪的操作方法，包括样品前处理、色谱柱的选择、流动相的配置、流速的调节等。

3. 学会液相色谱仪的故障排除，提高实验技能。

4. 培养团队协作精神，提高实验报告撰写能力。

三、实训内容1. 液相色谱仪的基本原理液相色谱仪是一种利用液体作为流动相，通过固定相对样品中各组分的分离、检测和定量的分析仪器。

其基本原理是：将待分析样品溶解在流动相中，通过色谱柱，利用固定相对样品中各组分的吸附、解吸作用，使各组分在流动相中按不同的速度移动，从而实现分离。

2. 液相色谱仪的结构液相色谱仪主要由以下几部分组成：（1）样品进样系统：包括样品瓶、进样阀、样品注射器等。

（2）色谱柱：包括固定相和流动相。

（3）检测器：包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

（4）数据处理系统：包括色谱工作站、计算机等。

3. 液相色谱仪的操作方法（1）样品前处理：根据样品的性质和实验要求，对样品进行适当的预处理，如萃取、离心、过滤等。

（2）色谱柱的选择：根据待分析样品的成分和实验要求，选择合适的色谱柱。

（3）流动相的配置：根据实验要求，配置合适的流动相，包括溶剂的选择、比例、pH值等。

（4）流速的调节：根据实验要求，调节合适的流速，以保证样品在色谱柱中的运行时间。

4. 液相色谱仪的故障排除（1）色谱柱堵塞：检查流动相是否合适，是否含有杂质，必要时更换色谱柱。

（2）检测器故障：检查检测器是否连接正确，是否受到污染，必要时清洗或更换检测器。

（3）数据处理系统故障：检查计算机软件是否更新，硬件设备是否正常，必要时联系专业人员维修。

四、实训收获1. 提高了实验技能：通过本次实训，我们掌握了液相色谱仪的操作方法，学会了故障排除，提高了实验技能。

联苯、甲苯、萘和菲以及它们混样的高效液相色谱分析实验目的1.熟练掌握高效液相色谱相关仪器的操作流程。

3.通过谱图分析，掌握运用谱图数据处理目标物质的方法。

一、实验原理色谱分析是运用物质在固定相和流动相两相间的分配系数不同而达到分离，它是一种分离技术，主要目的是对混合物中目标产物进行分离并定量分析的一种技术。

二、实验内容运用高效液相色谱仪测定联苯、甲苯、萘和菲以及四者混合物的色谱，熟练仪器的相关操作流程，能从检测的谱图中定性的指认四者峰的归属，并能定量的描述四者混合物中各自的相对含量。

三、实验步骤1、打开仪器电源开关，让仪器预热一段时间，此时可准备待测样品；2、待仪器运转正常，打开测试软件，先用甲醇清洗柱子（在Load状态下进样，分析时在Inject状态下）；3、进样状态下插入微量注射器，切到装填状态，注入样品，切回到进样状态。

4、点击分析按钮，输入分析的样品名；5、数据分析，通过软件查看积分面积。

五、实验结果液相色谱图0.00.51.01.52.0 2.53.0 3.54.0 4.55.0 5.56.0min0.01.02.03.04.05.06.0mV(x100)Detector A:254nm1.722/156063.034/11168863.383/7097684.037/25429775.046/7069594（2）联苯0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5mV(x100)Detector A:254nm1.7312.5784.1475.2130.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0433.4084.0845.152（4）甲苯0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.00.51.01.52.02.53.03.5mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0565.193（5）菲0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.01.02.03.04.05.06.07.0mV(x100)Detector A:254nm1.7303.4065.075谱图分析：依据各个物种标样的色谱图可以知道他们各自的出峰时间大致为：菲：5.075min ；联苯：4.147 min ；萘：3.408 min ；甲苯：3.032 min ；故此可以判断混样中出峰位置所对应的物种，5.046 min 对应为菲，4.037 min 对应为联苯，3.383 min 对应为萘，3.034 min 对应为甲苯。

一、实验目的1. 熟悉高效液相色谱（HPLC）的基本原理和操作方法。

2. 掌握液相色谱仪的构造及其各部分的功能。

3. 学习并运用高效液相色谱法对样品进行分离和定量分析。

二、实验原理高效液相色谱法是一种利用高压液体作为流动相，通过固定相对样品进行分离和分析的技术。

其原理基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，从而实现分离。

实验中，样品经过高压泵送入色谱柱，在流动相的作用下，不同物质在色谱柱中停留时间不同，从而实现分离。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、流动相过滤器、样品瓶、高压泵、检测器、数据工作站等。

2. 试剂：乙腈、甲醇、水、磷酸、氨水等。

四、实验步骤1. 样品准备：准确称取一定量的待测样品，用适当溶剂溶解，配制成一定浓度的溶液。

2. 流动相配置：根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过滤。

3. 色谱柱准备：将色谱柱安装在色谱仪上，用流动相进行冲洗，去除色谱柱中的杂质。

4. 上样：将配制好的样品溶液注入色谱仪，通过高压泵送入色谱柱。

5. 分离：在流动相的作用下，样品中的各组分在色谱柱中依次流出。

6. 检测：利用检测器对流出物进行检测，记录色谱图。

7. 数据分析：利用数据工作站对色谱图进行分析，计算各组分的含量。

五、实验结果与分析1. 样品分离：实验中，样品中的各组分在色谱柱中得到了有效分离，分离效果良好。

2. 定量分析：根据标准曲线，计算各组分的含量，结果如下：| 组分名称 | 含量（%） || -------- | -------- || 组分1 | 2.5 || 组分2 | 1.8 || 组分3 | 0.9 || 组分4 | 0.5 |3. 误差分析：实验过程中，可能存在以下误差：- 仪器误差：色谱仪、检测器等仪器本身的精度和稳定性对实验结果有一定影响。

- 试剂误差：试剂的纯度和浓度对实验结果有一定影响。

- 操作误差：实验操作不规范、样品处理不当等因素可能导致误差。

水中酚类化合物(液相色谱法)测定实验报告1.进行醇和酚主要化学性质的实验操作。

2.熟练进行水浴加热和点滴板使用的操作。

3.能够较慢地设计出来①伯醇、仲醇与叔醇；②一元醇与多元醇；③醇与酚类物质的辨别方案，并展开实验操作方式。

4.具有严肃和实事求是的科学态度，养成爱护公物，节省试剂的良好品德。

【实验用品】金属钠、无水乙醇、酚酞试剂、仲丁醇、叔丁醇、蒸馏水、卢卡斯试剂、1.5mol/l硫酸、0.17mol/l重铬酸钾溶液、g/l naoh溶液、乙醇、醋酸、48g/l cuso4溶液、甘油、蓝色石蕊试纸、0.1mol/l苯酚溶液、饱和碳酸钠溶液、饱和碳酸氢钠溶液、溴水、0.06mol/l三氯化铁溶液、0.03mol/l高锰酸钾溶液、浓硫酸。

试管、烧杯、酒精灯、玻璃棒、点滴板、广为ph试纸、表面皿。

【实验原理】羟基就是醇的官能团、o－h键和c－o键难脱落出现化学反应；同时，α-h和β-h存有一定的开朗性，使醇能够出现水解反应、消解反应等；而邻多元醇除了具备通常醇的化学性质，由于它们分子中相连羟基的相互影响，具备一些特定的性质，例如甘油能够与cu(oh)2促进作用。

酚类化合物分子中所含羟基，o－h键已出现脱落，在水溶液中能电离出来少量氢离子，并使酚溶液表明弱酸性；－oh受到苯环上大π键的影响，使c－oh键表明一定的活性，极易出现水解反应；而苯环也受到－oh的影响，使苯环上的h的活性进一步增强，极易出现替代反应。

【实验指导】（实验内容、步骤、操作事项）一、醇的化学性质1. 醇钠的生成及水解在潮湿试管中，重新加入无水乙醇1ml，并提一小粒艾盖佩的、用滤纸擦拭的金属钠，观测反应释出的气体和试管与否咳嗽。

随着反应的展开，试管内溶液变小仁和。

当钠全然熔化后，加热，试管内溶液逐渐凝固成液态。

然后几滴搅拌直至液态消失，再提一滴酚酞试液，观测并表述出现的变化。

2. 醇的氧化挑4两支试管，分别重新加入5几滴仲丁醇、叔丁醇和蒸馏水，然后各重新加入10几滴1.5mol/l硫酸和0.17mol/l重铬酸钾溶液，振摇，观测并及时记录发生变化快慢的时间。

高效液相色谱实验报告高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。

本实验旨在通过HPLC技术分析某种药物中的有效成分，并探讨其分析方法的可行性和准确性。

实验方法：1. 仪器及试剂准备：本实验采用Agilent 1200系列高效液相色谱仪，色谱柱为C18反相色谱柱。

试剂准备包括纯化水、甲醇、乙腈等有机溶剂，以及待测药物样品。

2. 样品制备：取待测药物样品10mg，加入10ml甲醇中，超声处理10分钟，离心沉淀，取上清液备用。

3. 色谱条件设置：流动相采用甲醇-水（60:40）的混合溶液，流速为1.0ml/min，柱温设定为25℃，检测波长为254nm。

4. 样品注射及分析：将样品注入进样器，设定注射体积为10μL，进行分析。

结果与讨论：通过HPLC分析，我们得到了待测药物中的有效成分的峰图，并计算出了其相对峰面积。

根据标准曲线的结果，可以进一步计算出待测药物中有效成分的浓度。

在本实验中，我们发现HPLC技术对于药物分析具有较高的准确性和灵敏度。

通过优化色谱条件，我们可以获得清晰的峰形和较低的噪音，从而提高分析结果的可靠性。

此外，我们还对样品的稳定性进行了研究。

将样品在不同温度下保存一段时间后，再进行HPLC分析，结果显示样品在低温下保存稳定性较好，而高温和阳光暴晒会导致有效成分的降解。

在实际应用中，HPLC技术可用于药物质量控制、环境监测和食品安全等领域。

例如，通过HPLC分析药物中的杂质含量，可以确保药物的质量符合标准；通过HPLC分析环境中的有害物质，可以及时发现和监测环境污染情况；通过HPLC分析食品中的添加剂和残留物，可以保障食品的安全性。

然而，HPLC技术也存在一些局限性。

首先，分析过程中需要一定的操作技巧和经验，对于初学者来说可能存在一定的困难。

高效液相色谱法测量葡萄糖浓度实验报告一、实验目的本实验旨在利用高效液相色谱法（HPLC）准确测量样品中的葡萄糖浓度，熟悉并掌握高效液相色谱仪的操作流程和数据分析方法，为相关领域的研究和应用提供可靠的检测手段。

二、实验原理高效液相色谱法是一种基于混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异，实现分离和定量分析的技术。

在本实验中，采用反相色谱模式，使用 C18 色谱柱，以适当的流动相（通常为含一定比例有机溶剂的水溶液）携带样品通过色谱柱。

葡萄糖分子在色谱柱中的保留时间取决于其与固定相和流动相的相互作用，通过与已知浓度的葡萄糖标准品的保留时间和峰面积进行对比，可实现对样品中葡萄糖浓度的定量分析。

三、实验仪器与试剂1、仪器高效液相色谱仪（配备紫外检测器）色谱柱：C18 柱（250mm×46mm，5μm）微量进样器超声波清洗器离心机容量瓶（100mL、50mL）移液器2、试剂葡萄糖标准品（纯度≥99%）甲醇（色谱纯）超纯水磷酸（分析纯）四、实验步骤1、溶液配制标准储备液：准确称取适量的葡萄糖标准品，用超纯水溶解并定容至 100mL 容量瓶中，配制成浓度为 1000mg/L 的标准储备液。

标准工作液：用移液器分别吸取一定体积的标准储备液，用超纯水稀释成一系列不同浓度（如 10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L）的标准工作液，备用。

样品溶液：将待测样品经过适当的预处理（如离心、过滤等）后，用超纯水稀释至适当浓度。

2、色谱条件设置流动相：甲醇水（体积比 15:85），其中含 01%磷酸。

流速：10mL/min柱温：30℃检测波长：245nm进样量：20μL3、仪器调试与平衡打开高效液相色谱仪的电源，按照仪器操作手册设置各项参数。

用流动相冲洗色谱柱，直至基线稳定。

4、标准曲线绘制依次进样不同浓度的标准工作液，记录各浓度下葡萄糖的峰面积。

以葡萄糖浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

液相色谱工作情况汇报一、液相色谱概述液相色谱是一种广泛运用于化学、药学、环境监测等领域的分析技术。

它利用固定相与液相之间的亲和性差异，将被分析物分离出来，再通过检测方法进行分析。

我所在的实验室主要是利用液相色谱技术来进行药物分析、环境监测和化学物质检测等工作。

在过去的一段时间里，我深入研究了液相色谱的原理和仪器操作技术，并成功应用于实际工作中。

二、工作内容及进展1. 药物分析在药物分析方面，我主要开展了对常见药物的含量测定、纯度检测和杂质分析等工作。

通过液相色谱技术，我成功开展了对多种药物的分析工作，并取得了良好的分析结果。

其中，我针对一批抗生素类药物进行了含量测定和杂质分析的工作。

在这一方面，我通过液相色谱技术的测定，对其含量进行了准确的分析，并成功检出了部分杂质，为企业生产提供了重要的技术支持。

此外，我还针对一些中药制剂进行了液相色谱分析，对其中的有效成分进行了定量分析和质量控制工作。

这些工作为中药制剂的研发和生产提供了重要的技术支持。

2. 环境监测在环境监测方面，我将液相色谱技术应用于水质、大气和土壤等不同环境中的化学物质分析工作。

通过液相色谱技术，我成功开展了对水体中污染物的检测和定量分析，并取得了令人满意的分析结果。

我还开展了对大气和土壤中的有机物和无机物的分析工作。

通过液相色谱技术，我可以准确地测定这些物质的含量和种类，为环境保护和治理提供了重要的技术支持。

3. 新技术研究在液相色谱领域，我还开展了一些新技术的研究工作，尝试应用于实际工作中，为分析结果的提高和工作效率的提升做出了努力。

其中，我尝试了一种新的柱填料和分离方法，对比传统的方法，这种新方法具有更高的分辨率和更短的分析时间，而且对于复杂样品的分离效果更好。

通过这些工作，我不仅提高了自身的技术水平，也为实验室的工作质量和效率作出了贡献。

三、存在问题及解决方案在实际的工作中，我也遇到了一些问题，主要集中在以下几个方面：1. 样品提取和准备阶段存在一定的不确定性，需要进一步优化提取方法和准备技术，以保证样品的准确性和可靠性。