微生物实验设计
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微生物综合实验设计方案第八小组第八小组 (曹婉仪(曹婉仪 蔡楚萍蔡楚萍 贝锦涛贝锦涛 张韵红)张韵红)一、取样取三个经高压蒸汽灭菌的锥形瓶,取三个经高压蒸汽灭菌的锥形瓶,于华师校园内湖中取水样。
于华师校园内湖中取水样。
为使取样具有代表性和全面性,分别选取三个取样点,取样点1:湖的东面,取样点2:中间湖边,取样点3:湖的西面,分别编号1.2.31.2.3,于水面以下,于水面以下10cm 10cm,取水各,取水各100mL 100mL,,盖好瓶塞。
盖好瓶塞。
器具:三角瓶器具:三角瓶*3*3个二、测水体pH 值为了大致地确定水体微生物的生长适宜pH pH(个人感觉这说法有点奇怪,好(个人感觉这说法有点奇怪,好像暗示测出来的pH 就是适宜生长的pH 似的,至少改为:为了了解华师湖水的pH 吧,或者改为其他更好的说法),取好水样后,分别用pH 计测量三个水样的值,每个水样各测量三次,取平均值。
值,每个水样各测量三次,取平均值。
将三个水样混合均匀,得到混合水样,用pH 计测量pH 三次,取平均值。
三次,取平均值。
器具:器具:pH pH 计 三、分离提纯2种微生物1、材料:混合水样混合水样2、方法操作名称操作名称 具体步骤具体步骤试剂和材料试剂和材料 器具(经器具(经高压高压蒸汽灭菌)蒸汽灭菌) 配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL 1、配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL 400mL,分装于两个三角瓶,分装于两个三角瓶,分装于两个三角瓶2、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌 (灭菌材料:250ml 三角瓶三角瓶*5*5*5,,培养皿*16*16,试管,试管,试管*11*11*11,,1ml 移液管*5,*5,10mll 10mll 量筒*1) 3、倒16个平板个平板 4 4支试管斜面支试管斜面(按(按原来写的也要13个平板,怎么会是10个,而且还没有设置对照的平板;如果要作×10000,还要更多平板。
我觉得做15~20个平板比较好。
空气微生物检测实验设计一、实验背景空气中存在着各种各样的微生物,包括细菌、真菌、病毒等。
这些微生物可能会对人类健康、环境质量和工业生产等方面产生重要影响。
例如,在医院、食品加工厂、实验室等场所,空气中的微生物污染可能导致疾病传播、食品变质和实验结果误差等问题。
因此,对空气微生物进行检测和监测具有重要的意义。
二、实验目的本实验的目的是检测空气中微生物的种类和数量,评估空气质量,并为采取相应的控制措施提供依据。
三、实验原理空气微生物检测通常采用培养法和非培养法。
培养法是将空气中的微生物采集到培养基上,在适宜的条件下培养,然后通过观察菌落形态、数量和特征来鉴定微生物的种类和数量。
非培养法包括基于分子生物学的方法(如 PCR 技术)、显微镜观察法等。
本实验采用培养法,利用空气采样器将空气中的微生物收集到琼脂培养基上,经过一定时间的培养,计算菌落形成单位(CFU)来表示微生物的数量。
四、实验材料和设备1、培养基营养琼脂培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基(用于真菌检测)2、采样器撞击式空气微生物采样器3、培养箱恒温培养箱(设定温度 37℃用于细菌培养,28℃用于真菌培养)4、无菌器材无菌平皿移液器无菌吸管5、其他器材酒精灯记号笔计数器五、实验步骤1、培养基的制备按照培养基的配方准确称取所需的成分,溶解于适量的蒸馏水中。
加热至完全溶解,调节 pH 值至合适范围。
分装到无菌平皿中,约 15-20ml 每皿,待冷却凝固后备用。
2、采样点的选择根据检测场所的特点和目的,选择具有代表性的采样点。
例如,在医院可以选择病房、手术室、走廊等;在食品加工厂可以选择加工车间、包装间、仓库等。
3、采样操作打开撞击式空气微生物采样器,将采样器放置在选定的采样点,距离地面约 15 米的高度。
设置采样时间和流量,通常采样时间为 5-15 分钟,流量为 100-200L/min。
启动采样器,让空气通过采样器撞击到培养基表面,完成微生物的采集。
微生物实验设计-产蛋白酶菌株的筛选产蛋白酶菌株的筛选级分离一、实验原理自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后,其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈,水解圈与菌落直径的比值,常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。
将腐烂的大豆浸泡液中的细菌接种在含有酪素的培养基上进行培养。
由于产蛋白酶菌株能在干酪素的培养基上形成无色透明圈,因此能将产蛋白菌株分离出来,分离出来的菌株经再次培养,就可获得纯种产蛋白酶的菌株。
二、实验器材1.菌种:从大豆浸泡液中获得2.培养基:(1)PDA斜面培养基:马铃薯200g,蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml.马铃薯去皮,切成块,煮沸半小时后用纱布过滤,再加糖及琼脂,溶化后补水至1000ml,121℃灭菌30min备用。
(2)干酪素琼脂培养基:干酪素4.0g,用20ml 0.1mol/L NaOH溶液溶解后再加20g琼脂,加蒸馏水煮沸加水至1000ml 121℃灭菌30min备用。
3.试剂:无菌水。
4.仪器:天平,电磁炉,烧杯,无菌试管,无菌培养皿,高压灭菌锅,锥形瓶,接种环,涂布棒,酒精灯,恒温培养箱。
三、实验步骤1.将腐烂的大豆放入无菌水中浸泡,制成细菌悬浮液。
2.用涂布棒蘸取菌液接种于PAD培养基中,26℃培养48h。
3.倒置于酪素琼脂培养基平板上,37℃培养24h。
4.挑取培养好的菌落接种于平板上,28℃培养48h。
5.观察各菌落周围形成的透明圈的情况。
6.选取透明圈较大的三个菌落分别接种在干酪素琼脂培养基上,28℃培养48h。
7.观察受否为单菌落,若为单菌落且有透明圈,则为纯种产蛋白酶菌株。
若有杂菌,则需要重复步骤6,直到培养出纯菌为止。
参考文献[1]代玉梅.蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究[D].青岛:青岛大学,2008.[2]黄志强,林白雪,谢联辉.产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定[J].福建农林大学学报:自然科学版,2006,35(4):416-420.。
微生物实验设计方案土壤中分离产生α-淀粉酶的菌种一、实验目的1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。
2、学习、掌握微生物的鉴定方法。
3.对提取的土壤样品进行分离、纯化和培养,并进行简单的形态鉴定二.实验原理α-淀粉酶是一种液化淀粉酶。
其产生菌芽孢杆菌广泛分布于自然界,尤其是在含有淀粉的土壤样品中。
从自然界筛选菌种的具体做法,大致可以分成以下四个步骤:采样、增殖培养、纯种分离和性能测定。
1.采样:采集含有细菌的样本采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多,然后才可着手做各项具体工作。
在土壤中几乎各种微生物都可以找到,因而土壤可说是微生物的大本营。
在土壤中,数量最多的当推细菌,其次是放线菌,第三霉菌,酵母菌最少。
除土壤以外,其他各类物体上都有相应的占优势生长的微生物。
例如枯枝、烂叶、腐土和朽木中纤维素分解菌较多,厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多,果实、蜜饯表面酵母菌较多;蔬菜牛奶中乳酸菌较多,油田、炼油厂附近的土壤中石油分解菌较多等。
2、增殖培养(又称丰富培养)增殖培养是在采集的土壤和其他含有细菌的样本中添加一些物质,并创造一些其他有利于待分离微生物生长的条件,以便能够分解和利用这些物质的微生物能够大量繁殖,以便我们从中分离出这些微生物。
因此,增殖培养实际上是选择性培养基的实际应用。
3.纯种分离在生产实践中,一般都应用纯种微生物进行生产。
通过上述的增殖培养只能说我们要分离的微生物从数量上的劣势转变为优势,从而提高了筛选的效率,但是要得到纯种微生物就必须进行纯种分离。
纯种分离的方法很多,主要有:平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。
三、实验材料1、器材:小铲和无菌纸或袋(可保存)、8个培养皿、载玻片、盖玻璃、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、5个无菌水试管(每管4.5ml水)、3个烧杯、5个三角瓶、电炉、玻璃棒、接种环、镊子、恒温培养箱、,高温灭菌锅、移液枪(10个枪头)、天平、滤纸、pH试纸等。
微生物实验设计方案
实验目的:通过实验验证微生物的生长条件和抑制条件,探究微生物生长规律和抑制机制,提高对微生物的理解和应用水平。
实验材料:微生物菌种、培养基、试管、移液管、灭菌器、酒精灯、显微镜等。
实验步骤:
1. 筛选并培养微生物菌种。
2. 准备适合微生物生长的培养基,如LB、NA、BHI等培养基。
3. 将微生物菌种分别接种到含有培养基的试管中。
4. 分别设置不同的培养条件和抑制条件的实验组和对照组,如不同温度、不同光照强度、不同pH值等。
5. 观察不同实验组和对照组下微生物生长状态和数量,如采用显微镜观察菌落和细胞形态、使用无菌技术进行菌落计数等。
6. 分析实验结果,探究微生物生长规律和抑制机制。
7. 优化微生物生长条件和抑制条件,提高微生物生长效率和抑制效果。
实验注意事项:
1. 所有实验器材需要在实验前灭菌消毒,以保证实验无菌。
2. 严格按照实验设计的步骤进行操作,避免干扰实验结果。
3. 实验过程中需要注意观察微生物生长状态,及时记录实验数据。
4. 实验结束后需要对实验器材进行无菌处理,避免微生物的传播和污染。
微生物实验方案设计怎么写微生物实验方案设计怎么写微生物实验是生物学研究中重要的一部分,它可以帮助我们深入了解微生物的生物学特性、代谢途径、遗传机制等。
然而,一个好的实验方案设计对于实验的顺利进行和结果的可靠性至关重要。
本文将从六个方面详细阐述微生物实验方案设计的要点和步骤,帮助读者更好地撰写微生物实验方案。
一、研究目的与背景在撰写微生物实验方案之前,首先需要明确研究的目的和背景。
研究目的是指实验的目标和所期望的结果,而背景是指相关文献和已有研究成果。
明确研究目的和背景可以帮助我们了解该实验的意义和价值,从而更好地设计实验方案。
二、实验对象的选择实验对象的选择是一个关键步骤,它直接关系到实验的可行性和结果的可靠性。
在选择实验对象时,需要考虑到实验的目的和背景,并结合实验室条件和实验技术的掌握程度。
常见的微生物实验对象包括细菌、真菌、病毒等。
选择合适的实验对象可以提高实验的成功率和数据的可信度。
三、实验方法和步骤实验方法和步骤是实验方案设计的核心内容。
在设计实验方法时,需要明确实验的操作步骤、使用的试剂和设备、实验条件等。
实验步骤应该具体明确,遵循一定的逻辑顺序,并注意操作的可行性和安全性。
同时,还需要选择适当的实验控制组和实验处理组,以确保实验结果的可比性和可靠性。
四、数据处理和分析实验完成后,还需要对实验数据进行处理和分析。
数据处理和分析是评价实验结果的重要依据,也是验证实验假设和目的的手段。
在数据处理和分析中,可以使用统计学方法进行数据的描述、比较和推断。
此外,还可以使用图表等可视化手段展示实验结果,便于读者理解和解释。
五、实验安全实验安全是实验方案设计中一个重要的方面,它关系到实验人员的个人安全和实验材料的安全。
在实验方案设计中,需要详细列出实验操作中可能存在的危险和风险,并提供相应的安全措施和应急预案。
实验人员在进行实验时应严格遵守实验安全规范,做好个人防护和实验材料的储存、处理和处置。
六、预期结果和讨论在实验方案设计的最后,需要明确预期的实验结果和讨论。
一、实验背景微生物作为自然界中不可或缺的组成部分,在生态系统中的角色至关重要。
它们在物质循环、生物降解、生物制药等方面具有广泛的应用。
为了深入理解微生物的特性及其在环境中的作用,本实验旨在探究不同营养物质对特定微生物生长的影响。
二、实验目的1. 探究不同营养物质对微生物生长的影响。
2. 分析微生物生长与营养物质之间的关系。
3. 了解微生物在环境中的适应能力。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:- 微生物菌种:大肠杆菌(Escherichia coli)- 营养基:牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖培养基、乳糖培养基、淀粉培养基- 实验器材:培养皿、移液器、酒精灯、显微镜等2. 实验试剂:- 酚红指示剂- 1mol/L NaOH- 0.1mol/L HCl- 生理盐水四、实验方法1. 配制不同营养物质培养基:- 牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂15g,蒸馏水1000ml。
- 葡萄糖培养基:葡萄糖10g,牛肉膏蛋白胨培养基1000ml。
- 乳糖培养基:乳糖10g,牛肉膏蛋白胨培养基1000ml。
- 淀粉培养基:淀粉10g,牛肉膏蛋白胨培养基1000ml。
2. 分离微生物:- 将大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃培养24小时。
- 用无菌移液器取少量菌液,涂布于不同营养物质培养基平板上,37℃培养24小时。
3. 观察并记录结果:- 使用显微镜观察菌落生长情况,并记录菌落形态、大小、颜色等特征。
- 使用酚红指示剂检测培养基pH值变化,观察微生物生长对培养基pH值的影响。
五、实验结果与分析1. 不同营养物质对微生物生长的影响:- 在牛肉膏蛋白胨培养基上,菌落生长良好,呈圆形、光滑、湿润、粉红色。
- 在葡萄糖培养基上,菌落生长良好,呈圆形、光滑、湿润、粉红色。
- 在乳糖培养基上,菌落生长良好,呈圆形、光滑、湿润、粉红色。
- 在淀粉培养基上,菌落生长良好,呈圆形、光滑、湿润、粉红色。
病原微生物实验设计病原微生物实验是指在实验室条件下,对病原微生物进行观察、研究和实验的过程。
通过合理的实验设计和操作,可以深入了解病原微生物的特性、传播途径以及影响因素,为疾病的预防和治疗提供科学依据。
本文将就病原微生物实验的设计要点进行详细论述。
一、实验目的病原微生物实验的目的通常是为了以下几个方面:1)研究病原微生物的生物学特性,如生长特点、代谢途径等;2)研究病原微生物的致病机制,如毒力因子、感染途径等;3)探索病原微生物的传播途径,如空气传播、食物传播等;4)评估药物对病原微生物的抗菌活性。
二、实验设计1. 选择病原微生物在开始实验之前,需要明确研究对象是哪种病原微生物。
根据实验目的和所关注的疾病类型,选择合适的病原微生物进行研究。
常见的病原微生物包括细菌、病毒、真菌等。
2. 实验设备与试剂根据病原微生物的生长需求和实验要求,选择合适的实验设备和试剂。
常见的实验设备包括培养皿、恒温箱、离心机等;常见的试剂包括琼脂、培养基、抗生素等。
3. 实验操作步骤实验操作步骤应该详细、准确,确保实验可重复。
具体步骤如下:步骤一:准备实验样品和培养基。
将需要研究的病原微生物分离培养,并制备适量的培养基。
步骤二:接种和培养。
将病原微生物接种到培养基上,进行培养。
在培养过程中,需注意温度、湿度和氧气浓度等条件,以促进病原微生物的生长。
步骤三:观察和记录。
定期观察培养皿中的菌落的形态和颜色。
记录菌落的数量和大小等信息。
步骤四:测定毒力。
根据实验目的,可以通过体外或体内的方法测定病原微生物的毒力。
例如,可以通过小白鼠进行毒性试验来评估病原微生物对宿主的损害程度。
三、实验结果和分析实验结果应该详细、准确地呈现,包括实验数据、实验观察和实验分析等。
需要根据实验目的和实验设计,对实验结果进行科学、合理的分析和解释。
四、实验控制和安全在病原微生物实验过程中,需要严格控制实验环境和操作过程,确保实验的准确性和安全性。
具体控制和安全措施如下:1. 严格遵守实验室规章制度和操作规程,正确佩戴实验室防护装备。
一、实验原理肠道杆菌的细菌为革兰氏阴性菌,大多数有鞭毛,能运动。
少数无鞭毛不能运动,不产生芽孢,需氧或兼性厌氧,在普通培养基上,一般都生长良好,均能发酵葡萄糖产酸或产气,触酶试验阳性,氧化酶试验阴性,还原硝酸盐。
这类细菌是人类和动物肠道中的细菌,有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。
有的为条件致病菌,有时也可引起身体各个部位的感染。
二、实验材料1.病鸡:怀疑被大肠杆菌或沙门氏菌感染2.培养基:半固体培养基麦康凯平板三糖铁高层斜面蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水3.革兰式染色试剂:草酸铵结晶紫溶液、革兰氏碘溶液、95%酒精,沙黄水溶液4. 生化管:葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸橼酸盐、H2S、尿素5. 生化试剂:吲哚试剂, MR 、VP 试剂7.药敏实验试剂:青霉素、复方新诺明、氯霉素三、实验内容及其安排(一)、制备培养基:麦康凯、半固体、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水。
(二)、解剖实验动物,细菌分离培养:病料抹片,染色镜检。
划线接种麦康凯或S·S琼脂平板。
(三)、观察细菌培养性状,选择可疑菌落进行纯培养。
普通琼脂平板、伊红美兰琼脂平板、三糖铁琼脂斜面。
(四)、观察细菌纯培养结果,细菌抹片,革兰氏染色镜检,观察细菌抹片及纯培养情况,。
(五)做生化试验、药敏试验。
(六)观察实验结果,写实验报告。
第一天:制备培养基解剖实验动物、病料抹片、细菌分离培养1.S.S培养基:50g S·S培养基+800ml蒸馏水,煮沸溶化浇平板(15ml/块平板),无需高压2.麦康凯培养基3.三糖铁琼脂4.葡萄糖蛋白胨水:1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水,加热溶解,调pH至7.6,分装40根短试管高压(3指半高,约5-8ml)5.蛋白胨水:1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水,调pH至7.6,分装40根短试管,捆扎,高压,121℃15分钟(2指高,约2-4ml)6.半固体:分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml,加热溶解,调pH7.6,过滤称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸,待琼脂粉完全溶化,分装短试管(2指高,约2-4ml)病鸡剖检的方法和步骤一、剖检要求:剖检鸡最好在死前或濒死期进行。
麻黄中生物碱的鉴定及其抑菌作用
前言
麻黄(herba ephedrae)为麻黄科草麻黄(Ephedra sinica Stapf.)、中麻黄(Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey.)或木贼麻黄(Ephedra equisetina Bge.)的干燥草质茎。
具有发汗解表、宣肺平喘、利水消肿的作用。
麻黄中含有多种生物碱,因产地和品种的不同有一定的差异,一般以麻黄碱和伪麻黄碱为主,此外还含少量甲基麻黄碱、甲基伪麻黄碱和去甲基麻黄碱、去甲基伪麻黄碱。
一、实验目的
1. 掌握培养基的制备,无菌接种等基本手段;
2. 掌握麻黄中生物碱类化学成分的的提取、分离及鉴定技术;
3. 研究及鉴定麻黄体生物碱外抑菌作用。
二、实验原理
根据中药化学成分与溶剂间“极性相似相溶”的原理,依据各类成分溶解度的差异,选择对所提成分溶解度大、对杂质溶解度小的溶剂,依据“浓度差”原理,将所提成分从药材中溶解出来的方法。
离子交换树脂法:利用生物碱盐能够交换到强酸型阳离子树脂柱上,将麻黄
草的酸性水提液通过离子交换柱,用酸性液洗脱,由于麻黄碱的碱性比伪麻黄弱,可先从树脂柱上洗脱下来,从而使两者达到分离。
三、实验仪器与材料
1. 材料:麻黄、阳离子交换树脂、平皿、接种环、恒温干燥箱、定性滤纸、
试管、镊子、棉拭子蘸、移液管、高压锅、生化培养箱等
2. 菌种:金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、志贺氏痢疾杆菌
3. 所需培养基:营养肉汤培养基、营养琼脂培养基及牛肉膏汤琼脂培养基。
四、实验步骤
1. 麻黄中生物碱的提取、分离、鉴定
1.1麻黄中生物碱提取、分离
2.1麻黄中生物碱鉴定
(l)氯化汞沉淀反应麻黄中生物碱在氯化汞的乙醇溶液中发生反应生成黄色沉淀,加热后沉淀变为红色。
在同样条件下,与氯化汞反应生成白色沉淀。
这是因为甲基麻黄碱的碱性较强,加热时能使氯化汞转变成氧化汞(砖红色),而去甲基麻黄碱生物的碱性较弱,与氯化汞反应只能生成白色的分子复盐沉淀。
(2)Vitali反应麻黄中生物碱以甲基麻黄碱和去甲基麻黄碱生物碱分子结构为主,当用发烟硝酸处理时,发生硝基化反应,生成三硝基衍生物(黄色),若再与醇钠溶液反应,发生分子内双键重排,生成醌型结构的衍生物而呈深紫色,渐转暗红色,最后颜色消失。
2. 麻黄生物碱外抑菌作用
2.1 抑菌环直径大小的测定(琼脂扩散法)
2.1.1 麻黄溶液配制称取麻黄10 g,加注射用生理盐水至20 mL
配制成0.5 g/mL的药液,然后稀释成1∶2、1∶4的药液,冰箱保存备用。
2.1.2 药敏纸片的制备将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片,直径为6.0 mm,置于干燥洁净的试管内,放入高压锅中经122.2 ℃、15 min 高压灭菌后,取出放入恒温干燥箱内进行干燥。
取经干燥后的纸片一定数量,每片吸取不同浓度的麻黄溶液20 μL,置于37℃恒温箱中,待干,备用。
2.2.2 菌悬液制备供试菌种经传代纯培养后,取一接种环菌接种于营养肉汤培养基中,37℃恒温培养6 h,菌液浓度相当于9亿个菌体/mL,1∶1000稀释后备用。
2.1.4 纸片琼脂扩散法取直径12 cm平皿,倾入营养琼脂培养基15 mL,冷凝后用灭菌的棉拭子蘸取供试菌菌液均匀涂抹在培养基表面,室温放置2~3 min,用无菌镊子将在不同浓度的药液中浸润的纸片均匀间隔贴于各琼脂培养基表面,轻压纸片使接触良好,放入37℃恒温培养箱中,24 h后取出,观察抑菌圈,测量并记录结果。
每个浓度的药物抑菌实验重复3次,抑菌结果为3次实验平均值。
※判定标准:抑菌圈直径小于9 mm为低度敏感,9.1~11 mm为中度敏感,11.1~15 mm为高度敏感。
2.2 最低抑菌浓度( MIC)的测定(平皿法)
2.2.1 牛肉膏汤琼脂培养基的制备100 mL蒸馏水内加入牛肉膏0.3 g, 蛋白胨1.0 g, 氯化钠0.5 g, 琼脂2.0 g, 加热溶解, 用氢氧化钠调pH 值至7.2~7.6, 双层纱布过滤, 分装, 高压灭菌。
2.2.2 药物平板培养基的制备取灭菌试管6支, 依次编号, 按无菌操作法,用移液管吸取无菌生理盐水加入各试管,每管 3 mL, 然后吸取麻黄溶液(1 g/mL)3 mL, 加入第1管, 并反复吹匀, 接着从第1管吸出3 mL, 放入第2管, 吹匀, 再从第2管吸出3 mL放入第3管。
依此法按二倍稀释法稀释到第6管, 第1管至第6管依次被稀释成2、4、8、16、32和64倍, 分别为0.50、0.25、0.125、0.062 5、0.031 3和0.015 6 g/mL。
取7个无菌平皿编号, 2~7号平皿分别加入上述1~6管试管已稀释的药液2 mL, 1号平皿加入未稀释的药液2 mL, 然后向平皿内倒入已溶化并冷却至40℃左右的牛肉膏汤琼脂培养基18 mL,立即摇动平皿,使培养基和药液充分混匀,待琼脂凝固后,即为含药物的平板培养基,
其含药液的浓度分别为0.1、0.05、0.025、0.012 5、0.006 25、0.031 3和0.015 6 g/mL。
2.2.3 细菌的接种和培养将保存的各实验菌种分别接种在营养肉汤培养基内, 37 ℃生化培养箱中培养16 h,经比浊法判定菌量后,再用营养肉汤培养基稀释至含菌量为1×105 cfu/mL的菌悬液,将浓度为1×105cfu/ml菌液5μL点种于系列浓度含药平板上,并以不含药的平板点种做空白对照。
接种好后放37℃生化培养箱中培养24 h取出,观察不同细菌在不同浓度的药物平板上的生长情况, 平板上有菌落生长用“+”表示,无菌落生长用“-”表示,使细菌不生长的最低浓度为药物对该菌MIC。
五、实验预期结果
预期麻黄体外对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌、绿脓杆菌有明显的抑制作用,抑菌作用的强弱随药物浓度的增加而变化,对4种菌的MIC依次为:0.062 5、0.031 3、0.062 5、0.031 3 mg/mL。
六、实验分析
本实验采用离子交换树脂法对麻黄中生物碱的提取、分离,应用体外抗菌实验来考察麻黄的抗菌作用,该方法简便经济。
采用纸片琼脂扩散法、平皿稀释法同时进行体外抗菌实验研究。
实验的结果容易受外界因素影响,如药物的种类、颜色、浓度等。
参考文献
1 卢芳国,朱应武,田道法,等.12个中药复方体外抗菌作用的研究[J].湖南中医学院学报,2004,24(4):9 11.
2 沈萍,陈向东,等微生物学. 第二版,2006,5.
3 沈萍,陈向东,等微生物学实验. 第四版,2007,11.。