第三章 烯虫酯的室内生物活性研究
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第三章烯虫酯的室内生物活性研究目录3.1 烯虫酯的室内生物活性研究3.1.1 烯虫酯对烟草甲的生物活性研究3.1.1.1 试验材料3.1.1.1.1 供试药剂3.1.1.1.2 供试靶标3.1.1.2 试验方法3.1.1.2.1 烯虫酯抑制烟草甲虫卵孵化试验3.1.1.2.2 烯虫酯抑制烟草甲幼虫生长发育试验3.1.1.2.3 烯虫酯抑制烟草甲成虫繁殖能力试验3.1.1.2.4 数据统计方法3.1.1.3 试验结果与数据分析3.1.1.3.1 烯虫酯对烟草甲虫卵孵化的影响3.1.1.3.2 烯虫酯对烟草甲幼虫生长发育的影响3.1.1.3.3 烯虫酯对烟草甲成虫繁殖能力的影响3.1.2 烯虫酯对烟草粉螟的生物活性研究3.1.2.1 试验材料3.1.2.1.1 供试药剂3.1.2.1.2 供试靶标3.1.2.2 试验方法3.1.2.2.1 烯虫酯对烟草粉螟幼虫的急性毒性测定方法3.1.2.2.2 烯虫酯对烟草粉螟卵的活性测定方法3.1.2.2.3 烯虫酯对烟草粉螟生长发育的影响研究方法3.1.2.2.4 烯虫酯对烟草粉螟繁殖力的影响研究方法3.1.2.2.5 统计方法3.1.2.3 试验结果与数据分析3.1.2.3.1 烯虫酯对烟草粉螟幼虫的毒力测定结果3.1.2.3.2 烯虫酯对烟草粉螟卵的活性测定结果3.1.2.3.3 烯虫酯对烟草粉螟生长发育的影响3.1.2.3.4 烯虫酯对烟草粉螟繁殖力的影响3.1.3 室内生物活性小结3.1 烯虫酯的室内生物活性研究我们以烯虫酯标准样品为对照，完成了项目合成的烯虫酯对烟草甲和烟草粉螟的室内生物活性测试。
采取浸渍法测定了对供试靶标卵孵化的影响，采取浸叶法测定了对供试靶标生长发育和繁殖力的影响。
3.1.1 烯虫酯对烟草甲的生物活性研究3.1.1.1 试验材料3.1.1.1.1 供试药剂烯虫酯合成品：湖南中烟工业有限责任公司烯虫酯标准品：百灵威公司3.1.1.1.2 供试靶标烟草甲（Lasiodema serricorne (Fabricius)）由国家粮食局科学研究院培养，培养温度为30±1℃，相对湿度为75%±5%，饲料为全麦粉（含5%酵母）。
3.1.1.2 试验方法3.1.1.2.1 烯虫酯抑制烟草甲虫卵孵化试验参照中华人民共和国农业行业标准，农药室内生物测定试验准则，杀虫剂第5部分：杀卵活性试验，浸渍法[91]。
将合成的烯虫酯样品和烯虫酯标准样品分别用无水乙醇溶解，配置成1000 mg/kg的母液，再用含有0.1%的吐温80水溶液稀释，按照等比的方法分别设置5-7个质量浓度。
质量浓度分别见表3-1。
将培养的烟草甲成虫取出，放入适宜的环境中产卵。
每天收集初产卵一次，将（20mm×20mm）载玻片，以双面胶粘贴初产的烟草甲卵，制成卵卡，每卡卵量20粒（如图3-1a,b,所示）。
a,卵卡b,卵卡放大后的情况c,卵卡中卵的孵化情况图3-1 浸卵法测试药剂对于烟草甲虫卵孵化的影响将卵卡浸入上述药液10秒后，转移至温度30±1℃，相对湿度75%±5%的条件下培养，每个样品做3个平行，测试其重复性，并以仅添加0.1%吐温80水溶液作为对照样。
以对照卵完成孵化为基准，分别记载各处理样品的孵化卵数和未孵化卵数（如图3-1c,所示），计算死亡率。
3.1.1.2.2 烯虫酯对烟草甲幼虫生长发育的影响参照中华人民共和国农业行业标准，农药室内生物测定试验准则，杀虫剂第14部分：浸叶法[91]。
将上述3.1.2.1中得到的烟草甲虫虫卵正常培养，让卵孵化为幼虫。
取出经过消毒处理的烟叶片，用孔径1.3cm的打孔器，制作成叶碟（如图3-2a,所示）。
将制作好的烟叶叶碟，浸于待测药剂溶液中10秒，取出晾干，分别置于24孔培养板中，培养板盖中加滤纸保湿，每个处理重复3板。
用小毛笔将烟草甲初孵幼虫，分别接入已经放入浸药叶片的24孔培养板中，每孔1头（如图3-2b,所示）。
将处理的试虫置于温度30±1℃，相对湿度75%±5%的条件下培养和观察。
试虫培养一周后，每隔一日调查试虫发育情况，至死亡或完成生活史（如图3-2c,所示）。
计算试虫的存活率、化蛹率和羽化率等指标。
a,烟片浸药后放入培养皿b,幼虫放入培养皿26d后c，幼虫放入培养皿32d后图3-2 浸叶法测试药剂对于烟草甲幼虫生长发育的影响3.1.1.2.3 烯虫酯对烟草甲成虫繁殖能力的影响在上述方法3.1.2.2的基础上，将取食了浓度为5mg/kg浸药叶片的烟草甲虫蛹取出，分出雌雄分别培养。
烟草甲羽化后，放入100mL烧杯中，并在其中放入烟叶片段收集卵块，置于温度28±1℃，相对湿度70%±5%的条件下培养和观察（如图3-3所示），10天后将烟叶取出并计数烟叶上所有卵粒，将卵粒进行培养，观察卵孵化情况，计算单雌产卵量及卵孵化率（％）。
图3-3测试药剂对于烟草甲成虫繁殖能力的影响3.1.1.2.4 数据统计方法运用SAS统计软件进行数据的统计分析，同一药剂不同浓度或同一浓度不同药剂对烟草甲卵的孵化抑制率、幼虫的死亡率、发育历期、化蛹率等指标之间采用PROC ANOV A进行方差分析，差异显著性测验采用邓肯新复极差法。
毒力回归曲线采用PROC PROBIT计算，求出LC50和LC95及其置信限。
3.1.1.3 试验结果与数据分析3.1.1.3.1 烯虫酯对烟草甲虫卵孵化的影响将供试药剂按3.1.2.1的方法对烟草甲虫卵的测试活性结果列于表3-1中，抑卵毒力回归曲线LC50和LC95的比较见表3-2。
结果表明：合成样品在低浓度下对烟草甲卵的毒力较烯虫酯标准品低；但在较高浓度情况下，合成样品对烟草甲卵的毒力较烯虫酯标准品高。
与未加杀虫剂的对照样相比，两个样品对烟草甲虫卵均具有抑制杀灭效果，合成样品与烯虫酯标准品在相同浓度下对烟草甲虫卵的抑制孵化效果相当，当浓度为5 ppm时烟草甲卵死亡率均高于80％，表明两个样品对烟草甲虫卵的孵化具有明显的杀灭效果。
表3-1 药剂对烟草甲虫卵的抑制效果药剂浓度（ppm）校正死亡率（%±SE）标准品合成样品CK 5.1±0.1 5.0±1.20.5 31.5±2.4 7.9±2.41 46.3±3.1 11.4±3.82.5 82.4±3.6 60.5±3.1 5 87.4±5.3 82.5±1.4 50 91.2±2.7 100.0±0.0 100 100.0±0.0 100.0±0.0表3-2 药剂抑制烟草甲虫卵的LC50与LC95的比较药剂名称毒力回归方程（y=）LC50(95%置信区间)LC95(95%置信区间)标准品0.1201+0.0926X 0.7770(0.0327-2.1314) 24.5738(6.5782-23473.9314) 合成样品-0.6933+2.3523X 1.9712(1.5113-2.6322) 9.8628(6.1611-22.9890)3.1.1.3.2 烯虫酯对烟草甲幼虫生长发育的影响试验结果（表3-3和表3-4）表明：合成样品和烯虫酯标准品对烟草甲幼虫的存活率无明显影响，但显著延长烟草甲幼虫的生长发育历期，与对照相比，用合成样品和烯虫酯标准品处理过的烟草甲幼虫的化蛹时间增长14d；当烟草甲幼虫取食高于或等于5ppm药量处理的烟叶片，烟草甲幼虫化蛹的数量显著低于对照，经56d发育，对照已全部完成羽化，取食5ppm药量处理的烟叶片的幼虫有很少量的羽化，而取食50ppm药量处理的烟叶片的幼虫，未有成虫出现。
表3-3 药剂对烟草甲化蛹的影响试剂种类试剂浓度(ppm)化蛹率(%)±SE35d 42d 49d 56dCK / 76.4±6.1 80.6±7.7 / /标准品0.05 60.4±10.4 72.9±6.3 / /0.5 22.9±2.1 43.8±2.1 50.0±8.347.9±6.3 5 6.3±2.1 16.7±4.2 27.1±6.3 35.4±6.3 50 0.0±0.0 2.1±2.1 10.4±6.3 12.5±12.5合成样品0.05 73.6±2.8 77.8±1.4 / / 0.576.4±6.984.7±5.0// 534.7±8.568.1±6.179.2±2.481.9±3.7 50 0.0±0.0 1.4±1.4 33.3±0.0 55.6±7.7备注：/ 表示化蛹已完成。
从表3-4中可以看出，合成样品和烯虫酯标准品的浓度对烟草甲幼虫的发育的影响效果一致，当浓度低于0.5ppm时，对烟草甲幼虫的化蛹及羽化抑制效果不明显；但当高于0.5ppm时，对烟草甲幼虫的化蛹及羽化表现出显著的抑制效果。
根据试验结果，如果在实际生产中应用合成样品，5ppm是较为合适的浓度。
表3-4 药剂对烟草甲羽化的影响试剂种类试剂浓度(ppm)羽化率(%)35d 42d 49d 56dCK / 0.0±0.0 44.4±6.1 70.83±9.62 /标准品0.05 0.0±0.0 29.2±12.5 70.8±8.3 72.9±6.3 0.5 0.0±0.0 14.6±2.1 25.0±4.2 41.7±0.0 5 0.0±0.0 0.0±0.0 2.1±2.1 2.1±2.1 50 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0合成样品0.05 0.0±0.0 44.4±6.9 77.8±1.4 / 0.50.0±0.029.2±7.272.2±9.776.4±8.5 5 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 1.4±1.4 50 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.03.1.1.3.3 烯虫酯对烟草甲成虫繁殖能力的影响按3.1.1.2.3的方法观察供试药剂对烟草甲繁殖力的影响，见表3-5。
