鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其灭活油乳剂疫苗的制备
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２Ｏ Ｏ ８年 第 ３期
重 廖沾三峡 掌 院 掌 报
Ｎｏ ２ ｏ ３．ｏ ８ ｖｏ ＿ ｌ ２４Ｎｏ． １ １０
第２ ４卷 （ １０期 ） １
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｈ ＮＧ Ｉ 脉 Ｅ Ｏ Ｇ ＳＵ Ｖ Ｒ ＩＹ Ｏ Ｒ Ａ ＦＣ Ｏ Ｏ ＮＧＴ ＥＧ Ｒ Ｅ ＮＩ Ｅ ＳＴ
鸭疫里默 氏杆菌 的分离鉴定及其灭活 油乳剂疫苗 的制备
胡仁建 蔡家利 张 宇
４ ０５） ０００
（ 重庆工 学院生物 工程 学院 ，重庆
摘
要 ：鸭传 染性浆膜 炎 （ｎｅ ｔｏｓｓｒｓｔ ｉ ｕｋ ｉｇ是 由鸭疫 里默 氏杆 菌 弓起 的 Ｉｆｃ ｉｕ ｅｏ ｉｉ ｎｄｃ ｌｎ） Ｓ ｌ
１ ． 鸭浆膜炎油乳剂疫苗 的制备 ．２ ２ （） １ 油相的制备 ： 以下配方配油相： 按 司本一Ｏ ８， ３ ，白油 ４ ０ ，硬脂酸铝 ８ ，１ １ １６Ｃ Ｏ ｍｌ ７ ｍｌ ｇ ２ ７ ２ ￣灭菌 ２ 分钟 ，趁热摇匀． Ｏ
（ ）水相的制备 ２ ①纯培养及增菌 取无溶血平板上 的乳白色单个菌落 ，接种 于 ６
吲哚试验 、尿素酶试验、硫化氢试验 、硝酸盐还原
试验 等 ．
象 ，外观和性状有无氏杆 菌的形 态特 征 ．
１ 支试管中的液体均混浊 ， ６ 阴性对照管清亮． １ ６ 个全血平板中只有一个平板中的细菌的菌落细小无
色素 ，呈圆型 、微突起 、表面光滑 、奶油色 ，直径 １ ２ ｍ． ￣ ｍ 在全 血 平板 上无 溶血 现象 ． 革兰 氏染 色 阴
性，两端纯圆，菌体单个散在，少数成双或短链排
列 ；菌体 呈杆状或 椭圆型 ， 小为 ０ ～Ｏ５－ 大 ＿ ．ｌｍ× ３ ｔ
０７ ．ｌ ． ～６ － ５ｔ ｍ，偶见个别呈长丝状 ，达 ｌ～２ ｌ １ ４－ ｔ ｍ＿
２２ 鸭疫里默 氏杆菌 的培 养特点 ．
鸭、 火鸡 等多 种禽类 的一种接触性传 染病 ． 多种抗生素对该菌都有效 ， 但长期用 药会 产生耐药菌株 ， 因此药物 防治该菌有局 限性． 因该菌血清型较多 ， 离鉴定该 菌并制备针对本地血 清型的疫苗具有 分
重要意义． 本实验采用安徽宣城寄来的死鸭病料分离鉴定出一株鸭疫里默氏杆菌， 并制备 了 针对该 株鸭疫里默 氏杆菌的灭活油乳剂疫苗 ，该疫苗 直接用 于 当地 鸭群 以预防鸭浆膜 炎． 关键词 ：鸭疫里默 氏杆菌；疫苗； 鸭浆膜 炎；家禽
药菌株 ，因此药物防治该菌有局限性． 由于鸭疫 巴氏杆 菌有多种血清群 ，各血清 群之间不能产生完全 的交叉
保护． ， 因此 应针对当地 常见的血清群 ， 选用来 自同一群 种的相 同血清型菌株制成 的疫苗进行预防接种． 本实 验是直接 从死鸭脑组织中分离鉴定 出一株鸭疫里默 氏杆菌 ，经过纯培养 、扩大培养和 灭活该菌后，制备了 鸭疫里默 氏杆菌灭活油乳剂疫苗 ，该疫苗有针对性地用于 当地 鸭群 ，避 开了鸭疫里默 氏杆 菌各血清 型之 间 无交叉免疫的缺点 ，能针对性地预防 当地鸭群 的鸭浆膜 炎．
将 灭 菌 后 的 ２０ ４ ｍｌ改 良 肉 汤 培 养 基 冷 却 至
（ ）疫 苗 的稳 定 性观 察 ６
４ ～ Ｏ ，加入兔子全血 ２ｍｌ ５５℃ ５ 充分混匀 ，制成全血
观 察疫苗在室温 下放置 １个月后有无分层现
平板． ⑦平板划线分离培养及生化鉴定 平板划线：用划线法将每个试管中的菌液对应 接种一个全血平板上，３ ￣恒温培养 ２ ７ Ｃ ４小时． 生化鉴定 ：将乳 白色 的单菌落接种于含 １％血 ５ 清 的改 良肉汤 中培养 ２ ４小时， 并将 该菌液接种于碳 水化合物 ， 靛基质 、 过氧化氢酶试验、氧化酶试验、
１ 材料 与方 法
１１ 材 料 ．
１ ． 病料 的来源 ：安徽宣城鸭场病死 鸭 ８只，立即存放于一０ ．１ １ ２ ℃保存备用．
１ ． 改 良肉汤培养基 ：葡萄糖 ｌｇ ．２ １ Ｏ 、蛋 白胨 ｌｇ Ｏ 、牛 肉浸膏 ５ 、水解 乳蛋 白 ５ 、Ｎ Ｃ３ 、去离子水 ｇ ｇ ａ １ｇ
１ 、用 ｌ １ Ｎａ Ｈ调 ｐ Ｌ ｍｏ／ Ｏ Ｌ Ｈ值到 ７２ ７６ ． ． — ．
①全血平板 的制作
收稿 日期 ：２ ０ — ４ Ｏ ０８０一８
作者简介：胡仁健 （ ９８ ） １６－ ，女，重庆合川人，重庆工学院实验师，主要从事疫苗与诊断技术研究．
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胡 仁 建
蔡 家 利
张 宇 ： 鸭 疫 里 默 氏 杆 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 灭 活 油 乳 ５１ ． 的 制 备 ９ｆ ． ． 苗 ｔ
中图分 类号 ：￥ ５． ８１３ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ — １５（ ０８ ３Ｏ １一 ３ ０ ９ ８ ３ ２ ０ ）０一 １９ Ｏ
鸭传染性浆膜炎又名鸭疫 里默 氏杆菌 （ ｉ ｒｌ ｎ ｔ ｅｔｅ ）病、鸭疫 巴氏杆菌病 、新鸭病 、鸭败 Ｒｅ ｅ ａ ａａ ｐ ｓｆｒ ｍｅ ｌ ｉ ｉ 血症、鸭疫综合征． 该病主要 引起 ２ ～３周龄雏鸭发 生缩颈 、眼鼻出现大量分泌物、绿 色下痢、关节 炎所致 的站立不稳及死时的角 弓反张 ，是危害雏鸭养殖业 的重要传染病 ． 本病的病原体为鸭疫里默 氏杆菌 ，到 目前 为止共有 ２ 个血清型 ，ｌ ４各血清型之间缺乏交叉免疫 ． １ 【 ６ 】 ） 多种抗生素对该菌都有效 ， 但长期用药会产 生耐
１ 实验方法 ． ２
１ ． 鸭疫里默 氏杆菌 的分 离鉴定 ．１ ２
（ ）鸭疫里默 氏杆菌 的分 离 １ 无菌取鸭头和鸭肝组织接种 于含 １ ％ｄ 牛血清的改 良肉汤 ５ 中，共接种 １ ０ ｘ ｍ１ ６管改 良肉汤试管 ，放于
３￣ ７ Ｃ摇床摇晃培养约 ２ ０小 时． （ ）鸭疫里默 氏杆菌纯培养 ２
２Ｏ Ｏ ８年 第 ３期
重 廖沾三峡 掌 院 掌 报
Ｎｏ ２ ｏ ３．ｏ ８ ｖｏ ＿ ｌ ２４Ｎｏ． １ １０
第２ ４卷 （ １０期 ） １
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｈ ＮＧ Ｉ 脉 Ｅ Ｏ Ｇ ＳＵ Ｖ Ｒ ＩＹ Ｏ Ｒ Ａ ＦＣ Ｏ Ｏ ＮＧＴ ＥＧ Ｒ Ｅ ＮＩ Ｅ ＳＴ
鸭疫里默 氏杆菌 的分离鉴定及其灭活 油乳剂疫苗 的制备
胡仁建 蔡家利 张 宇
４ ０５） ０００
（ 重庆工 学院生物 工程 学院 ，重庆
摘
要 ：鸭传 染性浆膜 炎 （ｎｅ ｔｏｓｓｒｓｔ ｉ ｕｋ ｉｇ是 由鸭疫 里默 氏杆 菌 弓起 的 Ｉｆｃ ｉｕ ｅｏ ｉｉ ｎｄｃ ｌｎ） Ｓ ｌ
１ ． 鸭浆膜炎油乳剂疫苗 的制备 ．２ ２ （） １ 油相的制备 ： 以下配方配油相： 按 司本一Ｏ ８， ３ ，白油 ４ ０ ，硬脂酸铝 ８ ，１ １ １６Ｃ Ｏ ｍｌ ７ ｍｌ ｇ ２ ７ ２ ￣灭菌 ２ 分钟 ，趁热摇匀． Ｏ
（ ）水相的制备 ２ ①纯培养及增菌 取无溶血平板上 的乳白色单个菌落 ，接种 于 ６
吲哚试验 、尿素酶试验、硫化氢试验 、硝酸盐还原
试验 等 ．
象 ，外观和性状有无氏杆 菌的形 态特 征 ．
１ 支试管中的液体均混浊 ， ６ 阴性对照管清亮． １ ６ 个全血平板中只有一个平板中的细菌的菌落细小无
色素 ，呈圆型 、微突起 、表面光滑 、奶油色 ，直径 １ ２ ｍ． ￣ ｍ 在全 血 平板 上无 溶血 现象 ． 革兰 氏染 色 阴
性，两端纯圆，菌体单个散在，少数成双或短链排
列 ；菌体 呈杆状或 椭圆型 ， 小为 ０ ～Ｏ５－ 大 ＿ ．ｌｍ× ３ ｔ
０７ ．ｌ ． ～６ － ５ｔ ｍ，偶见个别呈长丝状 ，达 ｌ～２ ｌ １ ４－ ｔ ｍ＿
２２ 鸭疫里默 氏杆菌 的培 养特点 ．
鸭、 火鸡 等多 种禽类 的一种接触性传 染病 ． 多种抗生素对该菌都有效 ， 但长期用 药会 产生耐药菌株 ， 因此药物 防治该菌有局 限性． 因该菌血清型较多 ， 离鉴定该 菌并制备针对本地血 清型的疫苗具有 分
重要意义． 本实验采用安徽宣城寄来的死鸭病料分离鉴定出一株鸭疫里默氏杆菌， 并制备 了 针对该 株鸭疫里默 氏杆菌的灭活油乳剂疫苗 ，该疫苗 直接用 于 当地 鸭群 以预防鸭浆膜 炎． 关键词 ：鸭疫里默 氏杆菌；疫苗； 鸭浆膜 炎；家禽
药菌株 ，因此药物防治该菌有局限性． 由于鸭疫 巴氏杆 菌有多种血清群 ，各血清 群之间不能产生完全 的交叉
保护． ， 因此 应针对当地 常见的血清群 ， 选用来 自同一群 种的相 同血清型菌株制成 的疫苗进行预防接种． 本实 验是直接 从死鸭脑组织中分离鉴定 出一株鸭疫里默 氏杆菌 ，经过纯培养 、扩大培养和 灭活该菌后，制备了 鸭疫里默 氏杆菌灭活油乳剂疫苗 ，该疫苗有针对性地用于 当地 鸭群 ，避 开了鸭疫里默 氏杆 菌各血清 型之 间 无交叉免疫的缺点 ，能针对性地预防 当地鸭群 的鸭浆膜 炎．
将 灭 菌 后 的 ２０ ４ ｍｌ改 良 肉 汤 培 养 基 冷 却 至
（ ）疫 苗 的稳 定 性观 察 ６
４ ～ Ｏ ，加入兔子全血 ２ｍｌ ５５℃ ５ 充分混匀 ，制成全血
观 察疫苗在室温 下放置 １个月后有无分层现
平板． ⑦平板划线分离培养及生化鉴定 平板划线：用划线法将每个试管中的菌液对应 接种一个全血平板上，３ ￣恒温培养 ２ ７ Ｃ ４小时． 生化鉴定 ：将乳 白色 的单菌落接种于含 １％血 ５ 清 的改 良肉汤 中培养 ２ ４小时， 并将 该菌液接种于碳 水化合物 ， 靛基质 、 过氧化氢酶试验、氧化酶试验、
１ 材料 与方 法
１１ 材 料 ．
１ ． 病料 的来源 ：安徽宣城鸭场病死 鸭 ８只，立即存放于一０ ．１ １ ２ ℃保存备用．
１ ． 改 良肉汤培养基 ：葡萄糖 ｌｇ ．２ １ Ｏ 、蛋 白胨 ｌｇ Ｏ 、牛 肉浸膏 ５ 、水解 乳蛋 白 ５ 、Ｎ Ｃ３ 、去离子水 ｇ ｇ ａ １ｇ
１ 、用 ｌ １ Ｎａ Ｈ调 ｐ Ｌ ｍｏ／ Ｏ Ｌ Ｈ值到 ７２ ７６ ． ． — ．
①全血平板 的制作
收稿 日期 ：２ ０ — ４ Ｏ ０８０一８
作者简介：胡仁健 （ ９８ ） １６－ ，女，重庆合川人，重庆工学院实验师，主要从事疫苗与诊断技术研究．
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胡 仁 建
蔡 家 利
张 宇 ： 鸭 疫 里 默 氏 杆 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 灭 活 油 乳 ５１ ． 的 制 备 ９ｆ ． ． 苗 ｔ
中图分 类号 ：￥ ５． ８１３ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ — １５（ ０８ ３Ｏ １一 ３ ０ ９ ８ ３ ２ ０ ）０一 １９ Ｏ
鸭传染性浆膜炎又名鸭疫 里默 氏杆菌 （ ｉ ｒｌ ｎ ｔ ｅｔｅ ）病、鸭疫 巴氏杆菌病 、新鸭病 、鸭败 Ｒｅ ｅ ａ ａａ ｐ ｓｆｒ ｍｅ ｌ ｉ ｉ 血症、鸭疫综合征． 该病主要 引起 ２ ～３周龄雏鸭发 生缩颈 、眼鼻出现大量分泌物、绿 色下痢、关节 炎所致 的站立不稳及死时的角 弓反张 ，是危害雏鸭养殖业 的重要传染病 ． 本病的病原体为鸭疫里默 氏杆菌 ，到 目前 为止共有 ２ 个血清型 ，ｌ ４各血清型之间缺乏交叉免疫 ． １ 【 ６ 】 ） 多种抗生素对该菌都有效 ， 但长期用药会产 生耐
１ 实验方法 ． ２
１ ． 鸭疫里默 氏杆菌 的分 离鉴定 ．１ ２
（ ）鸭疫里默 氏杆菌 的分 离 １ 无菌取鸭头和鸭肝组织接种 于含 １ ％ｄ 牛血清的改 良肉汤 ５ 中，共接种 １ ０ ｘ ｍ１ ６管改 良肉汤试管 ，放于
３￣ ７ Ｃ摇床摇晃培养约 ２ ０小 时． （ ）鸭疫里默 氏杆菌纯培养 ２
