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猪大肠杆菌多价油乳剂灭活苗
一、用途
预防大肠杆菌引起的子猪黄、白痢。
二、用量
1、未经本疫苗免疫过的初产母猪，于产前21天注射1次，每头用1毫升。
1周后加强免疫1次，每头用1毫升。
2、经本疫苗免疫过的经产母猪，于产前14～21天注射1次，每头用1毫升。
免疫期猪接种本疫苗后10～14天产生免疫，免疫期为3～4月。
贮藏本疫苗在－18℃环境中保存，有效期为两年；在4℃～10℃环境中保存，有效期为12个月。
三、注意事项
1、本疫苗在运输、使用过程中避免日光直射，环境温度不超过30℃。
2、必须保证使每头子猪吃足初乳。
3、当地应无疾病流行，被接种的猪一定要健康。
4、疫苗启封后一次用完，使用前应仔细检查，如发现有其他异物、变质等现象均不能使用。
5、注射器、针头等用具，用前需经煮沸消毒30分钟，注射部位采用酒精消毒，忌用碘酊。
6、对猪舍应严格监视，早期诊断，早期隔离发病猪，及时消除
传染源，并定期进行带猪消毒和转群消毒。
实验十一鸡大肠杆菌灭活疫苗的制备和检验细菌性灭活疫苗制备的基本程序为菌种的选择和种子的生产、菌液培养、灭活、配苗和分装，在此过程中还包括菌种、半成品以及成品检验。
大量生产的细菌培养方法有：固体表面培养法、液体静置培养法、液体深层通气培养法、透析培养法及连续培养法等。
灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取最适当的灭活条件进行。
灭活疫苗的佐剂不同，所以配苗方法也不相同。
鸡大肠杆菌灭活菌通常采用司盘白油佐剂，经过乳化而成。
一、目的要求1、了解细菌性灭活疫苗制造和检验的基本原理和过程。
2、掌握种子的生产、菌液培养、灭活、配苗和半成品以及成品检验方法。
二、材料与试剂1．材料(1)菌种：鸡大肠杆菌灭活疫苗菌种或临床分离株。
(2)实验动物：1～4月龄健康鸡。
(3)主要器材：超净工作台、恒温培养箱、冰箱、摇床、胶体磨、压盖机、高压锅、显微镜、酒精灯、温度计、普通试管、三角瓶、平皿、1ml注射器、疫苗瓶、瓶盖、记号笔和SPF鸡隔离箱等。
2．试剂蛋白胨营养琼脂培养基、普通肉汤培养基、甲醛溶液、鉴别培养基、甲醛溶液、佐剂等。
三、实验内容1、大肠杆菌培养与细菌的灭活。
2、大肠杆菌油乳剂灭活疫苗的配制。
3、大肠杆菌油乳剂灭活疫苗的成品检验方法。
四、操作步骤1．大肠杆菌茵液培养(1)种子液：将大肠杆菌菌种或临床分离株，分别于普通肉汤培养基中，置36～37℃保温18～24h，经纯检验后作为种子液。
(2)细菌培养：将种子液接于蛋白胨营养琼脂培养基表面，36～37℃保温24h。
加适量灭菌生理盐水将细菌洗下，装入玻瓶中，充分振荡菌液，使细菌分散开。
(3)纯检：将培养的细菌菌液接种于琼脂培养基表面，36～37℃保温24h。
观察菌落大小，应均匀一致。
(4)细菌计数：用麦氏比浊管法测定菌数或用平板计数，将菌数调整为15亿个／ml。
2．细茵灭活按菌液体积加入终浓度为O．3％的甲醛溶液，于37℃温箱中灭活24h，其振荡数次。
灭活后取少量菌液，接种于普通营养琼脂平板，37℃培养24～48h，进行灭活检验。
摘要大肠杆菌自家灭活油乳苗的制备及疫苗质量检验研究结果表明,按乳化剂的亲水亲油平衡值设计4个配方,通过对乳化剂粘度测定、乳剂类型测定、稳定性测定得出最佳乳化剂配方为90%白油、10%司本-80、2.0%吐温-80、1%硬脂酸铝。
以此配方作为免疫佐剂,制备自家灭活油乳苗,并对其质量进行检验。
经检验合格后,采用流行病学方法评价疫苗的免疫接种效果。
结果表明,自家苗对试验动物小白鼠有保护力。
关键词大肠杆菌;灭活油乳苗;制备;疫苗质量;检验中图分类号S852.5+2文献标识码A 文章编号1007-5739(2013)05-0274-01大肠杆菌自家灭活油乳苗的制备及疫苗质量检验付兴祥1张忠平2张海琴2刘琼2赵永平2杨贵树3*(1云南省禄劝县九龙镇畜牧兽医服务中心,云南禄劝651500;2四川省南充市高坪区畜牧局动物疫病预防控制中心;3云南农业大学)大肠杆菌为肠杆菌科、埃希菌属,兼性厌氧菌,为革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。
由Echerich 于1885年发现。
在相当长的时期内,一直被视为正常菌群。
直到20世纪中叶,人们才认识到一些特殊血清型对人和动物有致病性。
大肠杆菌血清型较多,各血清型之间没有交叉免疫力,菌株易发生变异,因此市售大肠杆菌疫苗无法覆盖所有致病性大肠杆菌血清型。
自家疫苗针对性强,在未引入外来畜禽前能收到较好的免疫效果。
因此,及时分离到菌株,制取自家灭活疫苗来免疫畜禽是一种经济、效果好的预防致病性大肠杆菌的措施。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1主要试剂。
营养肉汤、Minca 培养基、麦康凯培养基、硫乙醇酸盐(T.G )培养基、酪胨琼脂(G.A )培养基、葡萄糖蛋白胨水(G.P )培养基、白油、司本-80、吐温-80、硬脂酸铝、0.85%生理盐水,甲醛溶液,麦氏浊管。
1.1.2仪器。
胶体磨、电子天平、精密试纸、HY-8大容量振荡器、PGX 型多段可编程光照培养箱、电热恒温培养箱、电热恒温鼓风干燥箱、SW-CJ-1FD 型单人单面净化工作台、TDL-40B 离心机、冰箱、离心管。
大肠杆菌灭活苗的制备实验报告实验目的：1.熟悉大肠杆菌培养和灭活方法；2.学习掌握灭活苗制备的实验技术。
实验原理：实验步骤：1. 大肠杆菌培养：取一块LB平板，用灭菌铁环沾取一点大肠杆菌单克隆菌株，点接在含有LB培养基的离心管中。
将培养管放入恒温摇床中，以37℃、200rpm的条件下培养12-16小时。
2.培养基的制备：将1LLB培养基溶解于适量的蒸馏水中，加入适量的琼脂糖。
将混合溶液调节至pH7.0左右，然后将溶液加热至溶解琼脂糖完全。
将溶液分装入离心管中，每管倒满2/3，然后将倒置固化。
3.灭活实验：将大肠杆菌培养物离心，去除上清液，然后加入对应的化学灭活剂。
常用的化学灭活剂有福尔马林、甲醛以及石灰。
选择合适的灭活剂和浓度，将大肠杆菌悬液与灭活剂混合，混匀后放置室温下静置一段时间。
4.灭活后的处理：灭活结束后，将灭活后的大肠杆菌培养物通过离心使菌体沉淀，去除上清液。
然后用生理盐水洗涤培养物，再次离心使菌体沉淀。
重复洗涤步骤，以去除残留的灭活剂。
5.疫苗的制备：将洗涤后的菌体沉淀用生理盐水稀释至适宜浓度，然后将稀释液分装入疫苗瓶中。
6.储存条件：将制备好的大肠杆菌灭活苗储存在2-8℃的冰箱内。
储存期一般不超过3个月。
实验结果：制备好的大肠杆菌灭活苗应该呈现透明无菌液体。
实验注意事项：1.在培养大肠杆菌时要注意无菌操作，避免外源菌污染。
2.在灭活过程中，要控制好灭活剂的浓度和作用时间，避免对菌体产生过大的损伤。
3.制备疫苗后要储存于低温冰箱中，避免菌体的破坏和变化。
4.实验过程中要注意个人防护，避免与化学灭活剂直接接触。
实验总结：通过本次实验，我们成功地制备了大肠杆菌灭活苗。
制备疫苗的过程需要准确掌握各个步骤和相关技术，以确保疫苗的质量和效果。
此外，实验中还需要注意无菌操作、化学灭活剂的使用和个人防护等安全问题。
通过这次实验，我们不仅熟悉了大肠杆菌的培养和灭活方法，还对灭活疫苗的制备过程有了更深入的了解。
羊大肠埃希氏菌病灭活疫苗制造及检验规程本品系用免疫原性良好的大肠埃希氏菌，接种于适宜的培养基培养，将培养物经甲醛溶液灭活后制成或灭火后加氢氧化铝胶制成。
用于预防羊大肠埃希氏菌病。
1 菌种1.1 制造和检验用菌种为C83-1、C83-2、C83-3菌株，由中国兽医药品监察所鉴定、保管和供应。
1.2 菌种标准1.2.1 形态和生化特性为革兰氏阴性杆菌。
生化特性符合细菌分类学中本菌的特性。
1.2.2 培养特性接种普通琼脂平板，36~37℃培养24小时，菌落光滑圆整；普通肉汤培养24小时，呈均匀浑浊。
用吖啶黄作玻片凝集实验为阴性。
1.2.3 血清学特性用O、K血清鉴定为O78:K80。
1.2.4 毒力以含0.2%葡萄糖和2%蛋白胨肉汤12~18小时的培养菌液1~5mL，皮下注射3~8月龄健康易感绵羊，应在8~48小时内死亡。
否则，课连续通过羊体以增强毒力。
剂量由大到小，直至达到上述毒力标准。
1.2.5 免疫原性按本规程分别制成单苗后进行鉴定。
免疫3~8月龄健康易感羔羊4只，每只皮下注射1ml,对照羔羊至少死亡2只，免疫羊全部健活为合格；或用体重300~400g豚鼠4只，每只皮下注射疫苗0.5ml，14日后，连同条件相同的对照豚鼠2只，各腹腔注射1ml强毒菌液，观察10日，对照豚鼠全死，免疫豚鼠至少保护3只为合格。
1.2.6 纯粹用适宜培养基检查，应纯粹。
1.2.7 基础种子代数1~10代1.3菌种保存在2~8℃，保存期为10年。
2疫苗制造及半成品检验2.1 生产用种子制备2.1.1 一级种子繁殖将冻干菌种接种于普通肉汤，置36~37℃培养20小时，然后划线结婚纵欲普通琼脂平板，36~37℃培养20小时，选取光滑圆整菌落若干个，混合接种于鲜血琼脂斜面若干支，36~37℃培养20小时，作为一级种子。
在2~8℃保存，使用期不超过14日。
继代不超过5代。
2.1.2 二级种子繁殖取一级种子，分别接种于小瓶肉汤中，36~37℃培养12~18小时，经检验纯粹后，作为二级种子。
鸡大肠杆菌灭活疫苗制备2.西藏山南扎囊县农牧综合服务中心摘要:随着规模化养鸡业的迅速发展，鸡大肠杆菌病的发生和流行日益严重，几乎遍布所有的商业鸡场，给养鸡业带来很大的经济损失。
为了预防该病的传染，作者制备了鸡大肠杆菌病灭活疫苗。
制备了氢氧化铝胶佐剂和培养基，鸡大肠埃希氏菌的菌液培养、纯粹检验、活菌计数、灭活及无菌检验。
鸡大肠埃希氏菌病灭活疫苗:经无菌检验为阴性;经物理性状检验为:静置后上层是淡黄色的澄明液体，下层为灰白色沉淀，振荡后呈均匀混浊液;经鸡安全检验结果为安全;经鸡效力试验有效。
本病无论是药物预防还是疫苗的生物防治，都不是防治此病的根本方法。
要想减少或者杜绝大肠杆菌病的发生率，必须采取加强饲养管理、搞好环境卫生、严格消毒等综合防治措施才行。
鸡大肠埃希氏菌病灭活疫苗的制备，以及疫苗的无菌检验、物理性状检验、安全检验、效力检验等，其结果符合兽用生物制品检验的有关规程。
该疫苗是安全有效的。
鸡大肠杆菌灭活疫苗为免疫预防该病打下了良好的基础。
关键词:鸡，大肠杆菌，灭活疫苗鸡大肠杆菌病是由病原性大肠埃希氏杆菌引起的禽类传染病,由于大肠杆菌在自然界广泛分布，也是禽肠道的正常菌群[3]。
经常可从健康鸡的肠道中分离出致病性大肠杆菌血清型，表明大肠杆菌是条件致病菌或引起继发感染。
禽舍中的粪便和灰尘是致病性大肠杆菌的重要来源，细菌经呼吸道、消化道、种蛋等途径使禽发生感染。
各种年龄的家禽对大肠杆菌都能感染，但多发生于幼龄家禽，特别是雏鸡的发病率和病死率均较高。
近年来，随着规模化养鸡业的迅速发展，鸡大肠杆菌病的发生和流行日益严重，几乎遍布所有的商业鸡场，给养鸡业带来很大的经济损失。
同时，由于血清型众多和滥用抗生素导致耐药菌株的大量出现，使药物控制的难度越来越大，疫苗免疫接种成为有效的预防途径。
从西藏农牧学院实习牧场分离出的致病性鸡大肠埃希氏菌产生肠毒素。
将产肠毒素大肠杆菌称为(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)[1]。
