高胰岛素-正常血糖钳夹试验

高胰岛素-正常血糖钳夹试验1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。

1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。

根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。

高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。

该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。

在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。

目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。

2、关注要点2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。

2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。

2.2.2 监测血糖间隔时间每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。

胰岛素钳夹实验技巧胰岛素钳夹实验技巧背景介绍胰岛素是一种重要的激素，能够调节血糖水平。

胰岛素钳夹实验是用来研究胰岛素对血糖水平的影响的常用实验方法。

本文将介绍一些胰岛素钳夹实验的技巧，帮助你顺利进行此实验。

实验前准备在进行胰岛素钳夹实验之前，需要做一些准备工作：•动物模型的选择：根据实验的目的和动物种类的特点，选择合适的动物模型（如小鼠或大鼠）。

•实验仪器的准备：确保实验仪器（如钳夹仪、采血针等）处于良好工作状态。

•试剂的准备：准备好胰岛素溶液和其他相关试剂，确保其纯度和浓度符合实验要求。

实验步骤1.动物麻醉：根据实验需要，使用适量的麻醉剂使动物处于麻醉状态，确保操作过程安全无虞。

2.控制血糖水平：在实验开始前，测量动物的空腹血糖水平，并确保其在正常范围内。

如有需要，进行必要的调整（如胰岛素注射或葡萄糖注射等）。

3.建立动脉和静脉通路：使用适当的方法建立动脉和静脉通路，以便进行胰岛素钳夹实验时的血液采样和胰岛素注射。

4.基础血样采集：在实验开始前，收集一定量的基础血样，用于后续血糖测量。

5.胰岛素注射：根据实验设计，进行定量的胰岛素注射，并确保注射技术准确。

6.钳夹实验：在胰岛素注射后，使用钳夹仪逐渐提高血糖水平，监测血糖动态变化，并记录相关数据。

7.血样采集与血糖测量：根据实验设计，在不同时间点采集血样，并使用合适的方法测量血糖水平。

8.数据处理与分析：对实验得到的数据进行统计分析，并根据需要进行图表展示。

实验注意事项在进行胰岛素钳夹实验时，需要注意以下事项：•操作精确：实验过程中的所有操作都需要准确、精细。

特别是胰岛素注射和钳夹操作，都需要严格控制药物和力度的大小。

•实验时间安排：根据实验的需要和动物的特性，合理安排实验的时间和顺序，以减少动物的压力和疲劳。

•安全措施：在实验过程中，严格遵守实验室的安全规范，包括佩戴好防护手套、眼镜等，并妥善处理实验废弃物。

•数据记录：及时、准确地记录实验中得到的数据和观察结果，以备后续分析和讨论。

高胰岛素—正常血糖钳夹技术的护理及改进分析DOI：10.16658/ki.1672-4062.2017.05.007目的分析研究高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进。

方法随机选取该院2016年10月—2017年1月期间收治的60例代谢综合征（MS）患者，按照入院顺序，分为实验组与常规组，各30例。

所有患者，均行高胰岛素-正常血糖钳夹试验，其中，常规组，行常规护理，实验组，实施经改进的护理方式，对比分析护理效果。

结果对比不良反应，实验组发生率为3.3%，常规组为16.7%，实验组显著低于常规组（P＜0.05）。

对比护理满意度，实验组显著高于常规组（P ＜0.05）。

结论高胰岛素-正常血糖钳夹试验中，采用经改进的护理方式，效果显著，值得推广。

标签：高胰岛素；正常血糖钳夹试验；护理；改进Analysis of Nursing and Improvement of Hyperinsulinism-Hyperinsulinemic-Euglycemic ClampZHENG Xiao-yanDepartment of Endocrinology，Jinan Central Hospital，Jinan，Shandong Province，260013 China[Abstract] Objective To analyze the nursing and improvement of hyperinsulinism- hyperinsulinemic-euglycemic clamp. Methods 60 cases of patients with metabolism syndrome admitted and treated in our hospital from October 2016 to January 2017 were randomly selected and divided into two groups with 30 cases in each according to the admission order，and all patients were treated with hyperinsulinism-hyperinsulinemic-euglycemic clamp，and the routine group adopted the routine nursing，while the experimental group adopted the improved nursing method，and the nursing effect was compared and analyzed. Results The incidence rate of adverse reactions in the experimental group was obviously lower than that in the routine group（3.3% vs 16.7%）（P＜0.05），and the nursing satisfactory degree in the experimental group was obviously higher than that in the routine group（P＜0.05）. Conclusion The effect of the improved nursing method in the hyperinsulinism-hyperinsulinemic-euglycemic clamp is obvious，which is worth promotion.[Key words] Hyperinsulinism；Hyperinsulinemic-euglycemic clamp；Nursing；Improvement胰岛素抵抗（insulin resistance ，IR）是導致代谢综合征（Metabolic syndrome，MS）的重要病因，目前，就国外内而言，高胰岛素—正常血糖钳夹技术是评价IR公认的“金标准”[1]。

胰岛素钳夹实验技巧实验步骤：1.试样准备：首先准备标准品的稀释溶液和样品的提取液。

将标准品按照一定的比例稀释至所需浓度。

对于样品，首先将胰腺组织等样品切成小块，并添加适量的提取缓冲液，然后使用超声波浸提或者机械粉碎等方法提取样品中的胰岛素。

2. 硝酸银试剂的制备：胰岛素钳夹实验主要是通过硝酸银试剂与胰岛素反应生成沉淀来间接测定胰岛素的含量。

制备硝酸银试剂的方法为：将1mol/L的硝酸银溶液缓慢滴加到相对浓度为0.1mol/L的硝酸铜溶液中，同时不断搅拌，直到沉淀停止产生。

然后将沉淀过滤并用水洗涤。

3. 血浆样品的处理：将标准品溶液和样品溶液分别加入不锈钢板槽内，然后加入硝酸钙溶液，使溶液的钙离子浓度为0.1mol/L。

接着，在实验前通过分光光度计测定样品和标准品的吸光度值。

4.实验操作：将溶液中的胰岛素与硝酸银试剂反应，生成测定物质，沉淀后使用胶体银试剂与捕获剂作用形成测定物，最后使用硫代硫酸钠溶液将测定物还原，产生测定物的比色反应。

根据标准曲线和样品的吸光度值，可以计算出样品中胰岛素的含量。

实验技巧：1.胰岛素钳夹实验需要使用无菌技术，以避免外源性胰岛素的干扰。

在实验操作前，必须充分清洁实验室器材和工作台面，并穿戴好实验手套和口罩等防护措施。

2.样品提取过程要小心轻柔，避免过度振荡或机械破碎。

这样可以避免样品中的酶释放，导致实验结果的偏差。

3.在实验过程中，注意各个试剂的储存和保护，要避免与空气长时间接触，以防止试剂变质。

4.实验操作时要严格按照实验步骤进行，在加入试剂时注意滴加的速度和剂量。

尤其是硝酸银试剂的滴加要缓慢并加入到硝酸铜溶液中，以避免出现不必要的反应。

5.在读取吸光度值时，应在相同的光路和条件下进行测量，并使用去离子水或提取液进行基线校准。

6.在计算胰岛素含量时，需要根据实验所用的标准曲线进行插值，以减少误差。

同时，注意将标准曲线的线性范围内的吸光度值与样品的吸光度值进行比较。

高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进分析
郑晓岩
【期刊名称】《糖尿病新世界》
【年(卷),期】2017(020)005
【摘要】目的分析研究高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进.方法随机选取该院2016年10月—2017年1月期间收治的60例代谢综合征(MS)患者,按照入院顺序,分为实验组与常规组,各30例.所有患者,均行高胰岛素-正常血糖钳夹试验,其中,常规组,行常规护理,实验组,实施经改进的护理方式,对比分析护理效果.结果对比不良反应,实验组发生率为3.3%,常规组为16.7%,实验组显著低于常规组
(P<0.05).对比护理满意度,实验组显著高于常规组(P<0.05).结论高胰岛素-正常血糖钳夹试验中,采用经改进的护理方式,效果显著,值得推广.
【总页数】2页(P7-8)
【作者】郑晓岩
【作者单位】济南市中心医院内分泌科,山东济南 250013
【正文语种】中文
【中图分类】R473
【相关文献】
1.高胰岛素-正常血糖钳夹技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价 [J], 曾敏莉;周远大;何海霞;杨辉
2.高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术的护理 [J], 向桂珍;罗涌;江玉蓉
3.高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究 [J], 张锦娟;孙飞;吴彩斌;戚瑞;任丽丽
4.Wistar大鼠的正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术 [J], 李晨钟;张素华;舒昌达;任伟
5.清醒状态大鼠高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立及其意义 [J], 罗四川;李启富;刘红梅
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关于高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术的建立【摘要】目的：建立能精确测定胰岛素敏感性的高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术. 方法：应用高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术对10名正常体质量、正常糖耐量的健康志愿者进行方法学研究. 结果：钳夹试验开始后，血浆胰岛素浓度迅速上升并维持在100 mU/L左右，空腹血糖维持在正常水平(5.0 mmol/ L)，试验过程中内源性胰岛素和肝糖源输出得到完全抑制，血液升糖激素浓度 (包括皮质醇和生长激素) 与基础值相比无明显上升. 钳夹稳态期，葡萄糖输注率为(11.56±1.74) mg/(kg・min). 结论：高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术已成功建立. 在高胰岛素�舱�常葡萄糖稳态条件下，葡萄糖输注率等于机体的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率可以作为评价组织对外源性胰岛素敏感性的指标.【关键词】胰岛素葡萄糖钳制技术胰岛素抗药性胰岛素敏感性0引言高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术 (hyperinsulinemic��euglycemic clamp) 是目前世界上公认评价机体胰岛素敏感性的金标准，已在基础及临床医学研究领域中得到广泛应用，并且已扩展应用于许多病理状态、药物或非药物防治措施的机制研究中. 建立和开展高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术对于糖尿病基础和临床研究具有重要意义，但由于此方法操作复杂、价格昂贵且费时，国内仅有数家医院开展此技术. 我院内分泌科自2006年引进葡萄糖钳夹系统以来，根据DeFronzo等［1］所建立经典钳夹技术的原理并结合国内外近年来的研究进展，成功建立了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术.1对象和方法1.1对象10 (男5，女5)名正常健康志愿者，年龄27.0 ± 4.4 (23~37)岁，体质量指数20.3 ± 1.2 (19.2~23.2) kg/m2，无糖尿病、高血压病家族史，血脂谱正常，肝、肾功能及血尿酸浓度均在正常范围，未服用任何可能影响胰岛素敏感性的药物，口服75 g葡萄糖耐量试验均为正常糖耐量者 (按2003年ADA标准).试验前3 d受试者每日碳水化合物饮食不少于200 g，体质量保持稳定. 试验前向受试者解释试验的性质、目的及可能发生的不良反应，所有受试者均自愿参加试验并签署知情同意书.1.2方法受试者检查前空腹12 h，早8:00到达检查室，测量身高、体质量，排空小便后清醒静卧于检查床30 min后开始试验. 先分别于受试者双侧前臂行静脉穿刺，利用三通管组成2条静脉通道. 一侧用于输注胰岛素及200 mL/L葡萄糖液 (连接于Injectomat C IS和INCA��ST容积泵，德国Fresenius公司)；另一侧用于试验中采血 (将此侧前臂置于60℃恒温仪中，以保证静脉血动脉化［2］)，不采血时缓慢静滴生理盐水，采血前临时关闭输液器.钳夹开始10 min内以4 mU/（kg・min）速率输注人胰岛素溶液 (诺和灵R，40000 U/L，丹麦Novo Nordisk公司) 使血液胰岛素浓度迅速升高，随后110 min内以2 mU/（kg・min）速率持续输注. 在此期间每5 min测一次静脉血糖值(BIOSEN5030血糖分析仪，葡萄糖氧化酶电极法，德国)，根据血糖值调整200mL/L葡萄糖液输注率，使受试者血糖值维持在5.0 mmol/L左右. 每10 min采静脉血测定血清胰岛素浓度，每30 min测定血清C肽、皮质醇和生长激素浓度 (化学发光法，药盒购自天津德普诊断产品有限公司). 试验结束时收集试验期间尿标本，测定尿糖值 (测定方法同血糖测定). 所有血标本均经离心分离血清，-80℃冰箱保存至同批测定.统计学处理：试验结束后计算各受试者试验中血糖值均数(x)、标准差(s)及变异系数(CV)，计算试验中每10 min的平均葡萄糖输注率(glucose infusion rate， GIR)、机体总葡萄糖利用率 (钳夹开始 20~120 min内平均GIR) 和最大葡萄糖利用率 (钳夹稳态期最后30 min平均GIR). 全部数据均采用SPSS 13.0软件处理，计量资料以x±s表示，不同性别之间比较采用两独立样本t检验.2结果全部受试者均成功完成钳夹试验，检查结束后均未发生低血糖反应及其他异常反应，静脉穿刺部位未发生感染及静脉血栓形成. 结果显示高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术成功建立.2.1外源性胰岛素�财咸烟谴�谢稳态形成基础血浆葡萄糖浓度为(4.26±0.39) mmol/L，在高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中，血糖稳定在(4.99±0.15)mmol/L，稳态期血糖CV为(3.09±1.29)%. 基础血清胰岛素浓度为(3.81±2.20) mU/L，钳夹试验开始后血清胰岛素浓度迅速升高，于10 min时达到高峰 (133.70±21.91)mU/L，随后维持在(91.57±13.86)mU/L 至试验结束. 基础血清C肽浓度为(1.92±0.34)μg/L，整个钳夹过程中C肽浓度为(1.32±0.35)μg/L，各个时点的C肽浓度与基础状态相比呈逐渐下降趋势 (图1). 钳夹稳态期与基础状态相比较，升糖激素如血皮质醇、生长激素的浓度无明显上升，且均呈逐渐下降的趋势 (图2).2. 2高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中的血糖及葡萄糖输注率变化钳夹试验过程中受试者血糖浓度稳定在(4.99±0.15)mmol/L，试验开始40 min内GIR上升较快，达到(9.45±3.17)mg/（kg·min），此后上升趋于平缓，在90~120 min时均保持在稳态 (图3). 钳夹开始20~120 min内GIR为(10.75±2.38)mg/（kg・min），稳态期GIR为(11.56±1.74)mg/（kg・min），不同性别之间GIR ［男(10.53±1.57)mg/（kg・min），女(12.25±1.59)mg/（kg・min）］差异无统计学意义（P=0.12）.3讨论1966年Andres依据糖代谢特点设计了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术，1979年DeFronzo等［1］对该技术作了详细研究并应用于人体，从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用，成为目前公认评价机体胰岛素敏感性的“金标准”. 本研究按照DeFronzo等［1］的方法进行设计，结果显示形成稳定高胰岛素状态，达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的；血糖钳夹在正常水平，变异系数小于5%；试验中内源性胰岛素分泌被抑制，升糖激素无明显释放，符合高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术成功建立的标准［1］. 正常人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被完全抑制，故钳夹试验中当达到高胰岛素稳态时外源性葡萄糖输注率 (GIR) 等于外周组织的葡萄糖利用率 (M值)，此时GIR可作为评价机体胰岛素敏感性的指标［1］. 贾伟平等［3］建立扩展高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术时稳态期胰岛素浓度为(63.00±4.86) mU/L时肝糖产生为0，故计算M值时可忽略肝糖的产生. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，经典试验中采用的胰岛素输注率所达到的稳态期胰岛素浓度并不能完全抑制肝糖输出［4］.研究表明，无论是糖尿病患者还是其他胰岛素抵抗严重的患者，当采用较快的胰岛素输注率使稳态期胰岛素浓度达到200 mU/L以上时，肝糖输出几乎被完全抑制，可以避免肝糖输出影响试验结果［5- 6］. 本组10名受试者钳夹试验时均采用2 mU/（kg・min)的胰岛素输注率，稳态期胰岛素浓度与DeFronzo经典试验结果类似［1］. 不同实验室采用相同胰岛素输注率时稳态期胰岛素浓度相差较大，可能与试验具体操作、胰岛素测定方法及受试者空腹胰岛素浓度不同等因素有关. 钳夹稳态期胰岛素浓度不同，GIR值也不同，一般稳态期胰岛素浓度越高，GIR值越大［1， 3， 7-10］. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，稳态期胰岛素浓度较高，评价胰岛素敏感性时可采用稳态期胰岛素浓度加以较正［11］.综上所述，高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹试验中达到胰岛素�财咸烟谴�谢稳态后的外源性葡萄糖输注率等于外周组织的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率(GIR) 可作为评价机体胰岛素敏感性的指标. 近年来钳夹试验中微量精确输液泵和计算机技术的应用大大简化了试验操作难度并提高了成功率，高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术将在糖尿病的预测、糖尿病发病机制研究等方面发挥重要作用.【参考文献】［1］ DeFronzo RA， Tobin JD， Andres R. 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HOMA-IR、IAI与正常血糖高胰岛素钳夹试验相关性分析1蒲素余叶蓉王椿索丽霞李宏亮金菊英喻红玲张祥讯四川大学华西医院内分泌科 成都 610041E-mail：yerongyu@摘 要： 目的：主要评价各项胰岛素抵抗指标与正常血糖高胰岛素钳夹试验间的相关性。

方法：3组（正常血糖组(NGT)、糖耐量异常组（IGT）和2型糖尿病组（T2DM））共142名受试者均接受体重、身高、腰围、空腹血糖和胰岛素测定，并通过计算得到体重指数（BMI）、腰臀比(WHR)、胰岛素作用指数（IAI）和稳态模型（HOMA-IR）,所有受试者均接受正常血糖高胰岛素钳夹试验。

结果：HOMA-IR、IAI与钳夹试验仅在NGT组具有较好的相关性。

（r = -0.66, P<0.05）结论： 使用常用的胰岛素抵抗评价方法尤其HOMA-IR、IAI要注意其适用条件，避免滥用。

关键词：胰岛素抵抗 正常血糖高胰岛素钳夹试验 稳态模型 胰岛素作用指数引言大量的流行病学资料和临床研究结果均提示很多疾病状态都伴随有不同程度的胰岛素抵抗（IR），而胰岛素抵抗本身又是一些疾病的独立危险因素。

准确评估有无胰岛素抵抗及其程度有利于更全面的了解疾病尤其是与胰岛素抵抗密切相关的疾病的病理生理改变。

目前对胰岛素抵抗的评价方法除了正常血糖高胰岛素钳夹试验这一“金标准”外[1]，还包括体重指数（BMI）、腰围（W）、腰臀比(WHR)、空腹胰岛素（FINS）、空腹血糖/空腹胰岛素（FPG/FINS）、胰岛素作用指数（IAI）和稳态模型（HOMA-IR）等。

这些方法与正常血糖高胰岛素钳夹试验比较，具有简单方便，易于操作的特点，因此更为广泛地运用于科研和临床医疗实践。

但是需要注意的是，与正常血糖高胰岛素钳夹试验不同，这些常用的IR评价方法包括HOMA-IR、IAI等具有一定的适用条件，不恰当的使用会产生不准确甚至是错误的结论，干扰研究者对疾病病理生理变化的正确认识。