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淋巴细胞亚群

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淋巴细胞亚群

T淋巴细胞亚群分析

T淋巴细胞及亚群的检测结果可以解释一些疾病发病机理、对患者的免疫功能和预后做

出判断以及指导治疗。这些疾病主要包括：1.病毒感染性疾病；2.肿瘤性疾病；3.自身免疫性

疾病；4.器官移植患者；5.其他免疫缺陷或异常的患者。

淋巴细胞是白细胞中非常重要的一类。它分为主要参与细胞免疫的T淋巴细胞（CD3+）和

主要参与体液免疫的B淋巴细胞（CD19+）。而T淋巴细胞又分为辅助性T淋巴细胞（CD3

+CD4+）和抑制性/细胞毒性T淋巴细胞（CD3+CD8+）。在正常情况下，各群淋巴细胞的数

目和相对比例都在一定的范围内。

在T淋巴细胞亚群的报告中提供了以下内容：

1. 总T（CD3+）淋巴细胞的绝对计数：

就如白细胞计数一样，该细胞的绝对计数(个/ul)一般也在一定范围内。在一些情况下，如

病毒感染、化学和物理因素、免疫系统的衰竭或其它功能紊乱、造血系统异常等疾病时此值

可能会有异常。

2. 辅助T（CD3（+）CD4（+））细胞的绝对计数和百分比。

3. 抑制T（CD3（+）CD8（+））细胞的绝对计数和百分比。

无论是CD3（+）CD4（+）还是CD3（+）CD8（+）细胞，都可以进一步划分为更进一

步的亚群。

4. CD3(+)细胞中的CD4、CD8双阳性或双阴性细胞：

在淋巴细胞的分化增殖异常时，CD4、CD8双阳性或双阴性细胞的数量和百分比会有相

应的升高和降低。

5. CD4（+）和CD8（+）细胞的比值----T细胞亚群报告中最为简单和明确的指标： 在淋巴细胞的分化中产生的总T细胞的数量是有限的，加之在病变中主要为辅助T或

抑制T的升高或降低，因而CD4（+）和CD8（+）细胞的比值会发生相应的变化，该值就

成为一个简单和明确的指标.

若其比值＞正常值表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应。

CD4／CD8＜正常值一般被称为“免疫抑制”状态，常见于

（1）免疫缺陷病，如艾滋病时的比值常显著小于正常值

（2）恶性肿瘤；

（3）再生障碍性贫血、白血病；

（4）某些病毒感染；

（5）自体免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等的活动期。免疫性不孕不育

自然流产是生殖过程中一种常见的现象,一次流产的发生率时13%~17%。复发性流产(r

ecurrent spontaneous abortion, RSA)是指连续发生2次或2次以上的自然流产，又称习惯

性流产,而流产常发生在同一妊娠月份,约占妊娠总数的1%~3%,是临床上难以处理的不育症,

严重影响广大妇女的生殖健康。临床研究发现,此类患者再次妊娠发生流产的风险高达70%~8

0%。RSA的病因复杂,除了胚胎染色体(孕8周以前流产的胚胎60%为非整倍体)或流产夫妇

染色体异常(常见者为平衡易位、罗伯逊易位、和染色体数目异常)、解剖异常(如先天性苗勒

管发育异常、子宫动脉发育异常、宫腔粘连、子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫腺肌症等)、

内分泌异常(如黄体功能不全、甲状腺功能异常、胰岛素抵抗等)、感染(如弓形虫、巨细胞病

毒、细菌、支原体、衣原体感染等)等经典的四大病因外,其中原因不明的习惯性流产 70% 以上与免疫因素有关，几乎没有疗效肯定的药物和治疗方法。 80 年代以来，开始采用输注淋巴细胞和静脉注射免疫球蛋白两种方法治疗均取得良好的疗效。 免疫学异常亦逐渐被认为是导致RSA发生的重要病因。免疫型RSA有分为自身免疫型RSA和同种免疫型RSA两大类。自身免疫型RSA通

常可以从患者体内检查出各种自身抗体,主要是抗憐脂抗体。抗磷脂抗体是一组自身免疫性抗

体,包括狼搭抗凝因子及抗心憐脂抗体等,其引起RSA的机制可能为:抗磷脂抗体不仅是一种强

烈的凝血活性物质,激活血小板和促进凝血,导致血小板聚集、血栓形成。同时可直接造成血管

内皮细胞的损伤,加剧血栓的形成,是胎盘循环发生局部血栓栓塞、胎盘梗死、胎死宫内,导致

流产。临床观察研究表明,抗磷脂抗体阳性患者若不予治疗,其自然流产的发生率为15%~20%

。

同种免疫反应,是指同一种属之间针对不同的抗原成分发生的免疫反应,类似于临床上的

同种免疫排斥反应。约50%找不到明确病因的RSA患者属于这个类别,称为原因不明复发性

流产(unexplained re6urrent spontaneous abortion, URSA)。从生殖免疫学观点看来,胎儿

的基因组有一半来自父方,携带1/2异于母体的组织抗原,编码的抗原成分对母体免疫系统而言

是外源性抗原成分,胎儿相对于母体是同种半异体移植物。妊娠是一种成功的半同体移植,而流

产则被设想为半同种移植的失败。正常妊娠需要母体免疫系统对父方来源的胎儿组织发生免

疫识别和产生免疫反应,但这种反应不是杀伤、排斥反应,而是有利于妊娠的,实质上是母体建

立起的一个对胎儿局部免疫耐受环境。而正常的妊娠免疫耐受涉及诸多因素的相互影响和相

互制约,其中任何一个环节出现障碍,都有可能导致妊娠的失败。目前认为,这种免疫耐受的形

成机制复杂,涉及体液免疫、细胞免疫、免疫遗传、子宫免疫防护等方方面面,如母胎间存在解

剖和免疫屏障、胚胎抗原的免疫学特征、胚胎滋养细胞表面人类白细胞抗原(HLA)的表达模式

、孕妇外周血淋巴细胞的分布及Thl、Th2细胞因子的平衡等。一旦某些环节发生异常,胚胎将遭受免疫攻击而流产。正常妊娠需要母体建立起一个对胎儿局部免疫耐受的环境,如果免疫

微环境失调则会导致流产的发生。母体免疫系统不能充分识别胎儿抗原可能会导致流产,在大

多数情况下免疫的异常常体现在外周血中,如自身抗体的一些变化、Thl/Th2型细胞因子的变

化、淋巴细胞各种亚型的变化等。胎儿对母体而言是同种异体移植物,其抗原不可能存在于母

体中枢免疫器官内,因此妊娠免疫耐受的本质是外周免疫耐受。而T淋巴细胞是外周血淋巴细

胞中最主要的角色,是人体主要的免疫反应细胞。根据T淋巴细胞表型即细胞表面的特征性分

子的不同,可将成熟T细胞分为两个亚类,即CD4+T细胞和CD8+T细胞,这些特定T淋巴细胞

亚群的变化决定了人体免疫的活跃或抑制。

研究证明：

CD4+T淋巴细胞在流产后1月中最高,并且随时间的变化逐渐下释趋于平稳，流产后1

月后值较流产后4月、5月、6月及正常人群有明显差别。

CD8+T淋巴细胞也在流产后1月中最高,并且随时间的变化逐渐下降趋于平稳,流产后1月后

值

较流产后4月、5月、6月及正常人群有明显差别。

CD4+/CD8+的比值随时间逐渐下释。

CD16+56淋巴细胞同样在流产后1月中最高,并且随时间的变化逐渐下降趋于平稳,流产后1

月后值较流产后4月、5月、6月及正常人群有明显差别。

URSA机制复杂,可能涉及免疫耐受的异常。细胞免疫功能的变化与URSA发生的关系是

胚胎作为半同种异体移植物,如何逃避母体的免疫监视一直是生殖领域研究的热点。孕期母体

内存在复杂的免疫调节机制,主要表现为免疫耐受或抑制增强,而免疫排斥反应减弱。一旦这种

免疫平衡状态被破坏,将导致病理妊娠,甚至流产。正常情况下CD4+和CD8+T细胞之间保持动态平衡。如果CD4+CD8+比值发生变化,将导致机体免疫功能失衡,从而不利于妊娠的维持

和发展。

大量研究证明：

URSA患者流产后T细胞亚群随时间都有不同程度的下降,且流产3月后下降的趋势趋于平缓,

与正常妊娠人群及正常未孕人群无明显差别。外周血在刚流产时CD4+T细胞、CD8+T细胞

均高于正常人群,CD4+/CD8+比值较正常对照组偏高，说明URSA患者总体细胞免疫功能处

于增强状态,母体细胞免疫的平衡状态受到破坏,趋向于免疫排斥。而URSA患者正常妊娠后,

患者体内CD4+T细胞的比例较妊娠前及再次流产者均有明显下降,说明CD4+T细胞的比例的

变化与URSA的发生有关。

CD16+CD56+T细胞是外周血NK细胞的主要亚群,具有非特异性直接杀伤靴细胞的作

用。正常妊娠时母体外周血CD16+CD56+T细胞的比例和活性均处于抑制状态。

研究发现发生自发流产的患者体内CD16+CD56+T细胞亚群比例及其活性均出现上调。

大量研究也证实URSA患者外周血中CD16+CD56+T细胞亚群比例与正常妊娠及正常未孕人

群比较明显增高,从而使机体细胞免疫功能增强,导致胚胎丢失。而URSA患者正常妊娠后,患

者体内CD16+CD56+T细胞的比例较妊娠前及再次流产者均有明显下降,因此,可以预测外周

血中CD16+CD56"T细胞比例的增加与URSA的发生有关,而测定外周血中CD16+CD56+T

细胞的比例可做为监测外周血中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD16+56+T淋巴细

胞及CD4+/CD8+的比值升高与URSA发生有关,提示T淋巴细胞亚群比例的改变是导致流产

的一个重要。

注：T 淋巴细胞亚群 习惯性流产患者 T H 减少， Ts 增加， T H /Ts 比值明显降低， Ts 及其产物可能抑制封闭的抗体的产生，可以导致流产。

综上所述。针对于免疫性不孕人群，我们可以进行主动免疫治疗，有大量对不明原因习

惯性流产患者采取主动免疫治疗的案例，案例结论表明:主动免疫对于不明原因复发性流产患

者是一种有效的治疗方法;主动免疫可提高患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例,

CD4+CD25+调节性T细胞可能是调节母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素。;治疗后

免疫球蛋白、补体以及T淋巴细胞亚群比例均朝有利于妊娠的方向发展;治疗前的有关指标可

以预示治疗结局,有利于指导临床治疗选择。

除此之外。卵巢早衰(PrematureOvarianFallure,POF)也于淋巴细胞亚群息息相关。目前

对自身免疫性POF的研究报道多集中于卵巢中淋巴细胞和浆细胞的浸润!外周血T淋巴细胞

分布异常以及卵细胞或颗粒细胞自身抗体的产生"近年来,越来越多的报道表明细胞免疫在

POF中起着至关重要的作用,而辅助T细胞(Clusterdifferentiation一4,CD4+),抑制T细胞

(Clusterdifferentiation一8,CDS+)等T细胞是细胞免疫中的主要免疫细胞"

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淋巴细胞亚群

淋巴细胞亚群

T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。CD3+细胞代表外周血中总的成熟T细胞，理论上应约等于CD4+细胞和CD8+细胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+，这是因为CD4+细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK细胞）和CD3-CD8+CD16+56-（未知细胞）。由此可见，真正的TH细胞是CD3+CD4+细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。尤其当患者NK细胞明显增加时，会使CD4细胞和CD8细胞的总和远大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T细胞和抑制性T细胞。

首先在淋巴细胞中识别出CD3细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4+和CD8+细胞。NK细胞的表面无T细胞和B细胞表面标志，但有CD16和CD56等标志，用CD16+56抗体能鉴定出NK细胞（一定是CD3阴性），CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK细胞。根据是否表达CD8，又可将NK细胞分为CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响CD8比例）和CD3-CD8-CD16+56+细胞（主要成分）。

B细胞的表面标志是CD19，理论上CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细胞。但CD3+CD19+细胞很少，可忽略不计，所以CD19+细胞就是B淋巴细胞。

在抗肿瘤效应中，CD4和CD8分别是T淋巴细胞的辅助／诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子，增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T细胞，B细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4细胞的减少，导致免疫功能低下。CD4/CD8比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关。

淋巴细胞亚群检测方案

淋巴细胞亚群检测方案

中国医学科学院 北京协和医院 崔巍

写在课前的话

在这一节课中针对淋巴细胞亚群检测做了一个方案性的设计。这个方案是结合国际的CLSI以及国内的检测现状而设置的。它只是针对淋巴细胞亚群，更具有针对性和特异性。目前临床上用流式细胞仪，主要的检测项目就是淋巴细胞亚群，在临床检测中应用比较广泛，技术较成熟，所以，更需要对它进行一个规范。

淋巴细胞是白细胞中非常重要的一类。在正常情况下，各群淋巴细胞的数目和相对比例都在一定的范围内。那么临床常见的淋巴细胞亚群包括哪些项目？

一、淋巴细胞亚群

最常见的淋巴细胞亚群包括T细胞、B细胞、NK细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞。这5个项目具有明确的临床意义，临床应用也很广泛。

二、抗体组合方案

对于淋巴细胞亚群检测不能通过单一的抗体来检测，必须通过抗体组合来进行检测。比较倡导的方案有以下几种：联合CD45的四色方案、联合CD45三色方案、双色方案、7-氨基放线菌素D（7-AAD），必要时采用7-AAD联合CD45方案。其中联合CD45四色方案在国内的一些大型医院已经开始应用，而且在国际上是一个比较推荐的首选方案。这是因为CD45能标记白细胞，可以去除红细胞，以及其他碎片的干扰。通过45标记后再分析45标记后的淋巴细胞表达，如果不存在CD45，有可能有细胞碎片，无法排除对淋巴细胞的干扰，所以联合CD45，无论是四色还是三色方案都是一个比较倡导的方案。

（一）联合CD45的四色方案

联合CD45的四色方案可以有两种组合抗体的选择。第一种是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色标记，主要可以检测T3细胞、T4细胞、T8细胞这三种不同的亚群。另外，可以用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的标记，用于检测T3细胞、B细胞和NK细胞。

一般四色方案需有两种抗体检测，目前已经有比较稳定的商品化的试剂，推荐有条件的实验室推荐使用。

（二）联合CD45的三色方案

1联合CD45的三色方案主要是有四种不同的试剂。

淋巴细胞亚群分析与临床---陈建林

淋巴细胞亚群分析与临床---陈建林

一、流式淋巴细胞亚群检测的临床意义

1.了解不同情况下机体免疫功能状态

肿瘤 （手术、放化疗患者的免疫功能检测）

感染 （脓毒血症、重症监护患者等）

自身免疫病、免疫缺陷病等

不孕不育

某些血液系统疾病

其他：慢性肾病、骨髓移植恢复期等

2.辅助临床疾病的诊断

3.探索疾病的发病机理、病程及预后

4.观察监测疗效，指导临床建立治疗方案

二、淋巴细胞的分类及功能

B细胞(CD19+)： 体液免疫

辅助/诱导T细胞(Th):介导和增强免疫应答 (CD4+) 淋巴细胞 T细胞(CD3+） 细胞毒性(Tc) /抑制性T细胞(Ts): 抗病毒、抗肿瘤 (CD8+) 调节性 T 细胞(Treg):抑制免疫应答、维持免疫耐受 (CD4+CD25+) NK细胞 ：抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节 (CD16+/CD56+)

三、流式淋巴细胞亚群检测的临床应用

淋巴细胞亚群检测与儿科疾病

（一）评估机体免疫功能状态

淋巴细胞亚群12项报告解读

淋巴细胞亚群12项报告解读

淋巴细胞亚群12项报告可以提供关于机体免疫系统的信息，帮助医生了解机体的免疫状态和诊断相关疾病。以下是关于淋巴细胞亚群的解读：总T淋巴细胞（CD3+）：这是T淋巴细胞的总体标志，正常参考值通常在700-2000/μl之间。增高表示总T淋巴细胞水平较高，机体免疫力好，肿瘤患者的预后较好。降低则表示总T淋巴细胞水平较低，机体免疫力差。辅助/诱导T淋巴细胞（CD4+）：这是辅助性T淋巴细胞，具有免疫调节功能。增高通常表示机体免疫力好，肿瘤患者的预后较好。降低可见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制患者。抑制/细胞毒性T淋巴细胞（CD8+）：这是细胞毒性T淋巴细胞，具有杀伤功能。其水平的变化与CD4+细胞的数量相互影响，形成一个平衡状态。NK细胞（CD16+CD56+）：自然杀伤细胞，不需要抗原预先致敏，即可直接杀伤某些肿瘤细胞和病毒感染细胞，是机体抗肿瘤、抗感染的重要免疫因素。B淋巴细胞（CD19+）：B淋巴细胞可以产生免疫球蛋白，参与体液免疫。增高可能表示B细胞介导的体液免疫亢进，降低则可能表示体液免疫功能缺陷或下降。γδT淋巴细胞（CD3+CD16+CD56+）：这是一种特殊的T淋巴细胞亚群，与NK细胞相似，具有杀伤作用。调节性T淋巴细胞（CD4+CD25+Foxp3+）：这种细胞具有免疫抑制功能，是维持机体免疫耐受的重要因素之一。活化T淋巴细胞（HLA-DR+）：活化T淋巴细胞是T淋巴细胞的活化状态标志，增高表示机体的免疫应答活跃。记忆T淋巴细胞（CD45RO+）：记忆T淋巴细胞是T淋巴细胞的记忆状态标志，可以长期存活并在再次接触相同抗原时迅速增殖分化。