药品标准三七总皂苷PNS ( Panax Notoginseng Saponins )
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三七总皂甙资料
三七总皂甙代谢工程
三七总皂苷 ( Panax notoginseng saponins, PNS)
迄今已从三七的根块、根茎、茎叶和花果等各部位分离和鉴 定出70 余种皂苷, 均属于达玛烷型四环三萜皂苷, 按其皂 苷元类型又可细分为2 种:
1. 20( S) -原人参二醇型 [ 20( S) -protopanaxadiol] 2. 20( S) -原人参三醇型 [ 20( S) –protopana-xatriol]
2. IPP和DMAPP通过异戊烯基转移酶和萜类环化酶的催化合成合成 2,3-氧化鲨烯 ( 2,3-Oxido saqualene)
3. 2, 3-氧化鲨烯依次经过环化、羟基化、糖基化修饰, 最终形成达玛 烷型三七皂苷
达玛烯二醇合成酶（DS）
• 达玛烯二醇合成酶( Dammarenediol-Ⅱ-synthase, DS) 是氧化鲨烯 环氧酶中的一种, 催化2,3-氧化鲨烯环化为达玛烯二醇。
• PNS属于达玛烷型四环三萜皂苷, 而达玛烯二醇是达玛烷型皂苷的前 体.DS在三萜皂苷合成中起着重要的调节作用
• DS 广泛存在于具有达玛烷型三萜生物合成功能的植物和微生物中, 已 从人参(Panax ginseng ) ,积雪草(Centella asiatica ) ,粗茎鳞毛蕨 (Dryopteriscrassirhizoma) 等植物中克隆得到编码DS的基因
• 已从盾叶薯蓣( Dioscorea zingiberensis) ，豌豆( Pisum sativum) ，红海 榄( Rhizop horastylosa)和秋茄( Kandelia candel）中克隆得到CAS基因
• 红海榄和秋茄CAS酵母表达（2007） • 人参CAS反义抑制(2009) • 拟南芥CAS等位基因突变（2008）
三七总皂苷 ( Panax notoginseng saponins, PNS)
迄今已从三七的根块、根茎、茎叶和花果等各部位分离和鉴 定出70 余种皂苷, 均属于达玛烷型四环三萜皂苷, 按其皂 苷元类型又可细分为2 种:
1. 20( S) -原人参二醇型 [ 20( S) -protopanaxadiol] 2. 20( S) -原人参三醇型 [ 20( S) –protopana-xatriol]
2. IPP和DMAPP通过异戊烯基转移酶和萜类环化酶的催化合成合成 2,3-氧化鲨烯 ( 2,3-Oxido saqualene)
3. 2, 3-氧化鲨烯依次经过环化、羟基化、糖基化修饰, 最终形成达玛 烷型三七皂苷
达玛烯二醇合成酶（DS）
• 达玛烯二醇合成酶( Dammarenediol-Ⅱ-synthase, DS) 是氧化鲨烯 环氧酶中的一种, 催化2,3-氧化鲨烯环化为达玛烯二醇。
• PNS属于达玛烷型四环三萜皂苷, 而达玛烯二醇是达玛烷型皂苷的前 体.DS在三萜皂苷合成中起着重要的调节作用
• DS 广泛存在于具有达玛烷型三萜生物合成功能的植物和微生物中, 已 从人参(Panax ginseng ) ,积雪草(Centella asiatica ) ,粗茎鳞毛蕨 (Dryopteriscrassirhizoma) 等植物中克隆得到编码DS的基因
• 已从盾叶薯蓣( Dioscorea zingiberensis) ，豌豆( Pisum sativum) ，红海 榄( Rhizop horastylosa)和秋茄( Kandelia candel）中克隆得到CAS基因
• 红海榄和秋茄CAS酵母表达（2007） • 人参CAS反义抑制(2009) • 拟南芥CAS等位基因突变（2008）
三七总皂苷质量标准
三七总皂苷质量标准
三七总皂苷是一种重要的药用成分，具有多种药理活性，因此其质量标准对于药品的生产和质量控制具有重要意义。
三七总皂苷的质量标准主要包括外观性状、含量测定、杂质和纯度等方面。
首先，对于三七总皂苷的外观性状要求，应为白色或类白色结晶性粉末，无明显异物。
这一点是因为外观性状直接关系到药品的品质和纯度，对于三七总皂苷的应用效果有着重要的影响。
其次，对于含量测定的要求，三七总皂苷的含量应不低于95%，这是保证药品有效成分含量的重要指标，也是保证药品疗效的基础。
此外，对于杂质的要求，三七总皂苷中的杂质含量应不超过1%，其中重金属杂质的含量更是要求极其严格，因为这些杂质对人体健康有着潜在的危害。
最后，对于纯度的要求，三七总皂苷的纯度应不低于98%，这是保证药品纯净度和安全性的重要指标。
综上所述，三七总皂苷的质量标准直接关系到药品的质量和疗效，严格按照质量标准进行生产和质量控制，才能保证药品的安全有效。
只有在不断提高生产工艺水平和质量控制手段的同时，才能更好地满足人们对于药品质量和疗效的需求。
希望各生产企业在生产过程中严格按照三七总皂苷的质量标准进行生产，确保药品质量，保障人民群众的用药安全和健康。
三七总皂苷及其主要成分对脑细胞保护作用的机制研究进展_王钢
师，博士，研究方向： 药物防治心脑血管疾病的研究与开 发。E-mail： xiufenyang@ 163． com。
白 Bax、Bak、Bad、Bim 和抗凋亡蛋白 Bcl － 2、Bcl － w 等。血 栓通粉针（ PNS） 能够促进 Bcl － 2 的表达，能够减轻脑缺血 再灌注所致的海马神经元细胞损伤［3］。PI3K / Akt 是一信 号转导通路，在 促 进 细 胞 存 活 和 抗 凋 亡 方 面 具 有 重 要 作 用，并且可以调节细胞的变形和运动。糖氧剥夺（ Oxygen － Glucose Deprivation，OGD） 可以损伤神经细胞 PC12，PNS 可 以通过激活此条通路而保护 PC12 细胞，保护大脑［4］。血 管紧张素Ⅱ（ AngⅡ） 是心血管疾病的一种重要致病因子， 具有调节血管张力、调节细胞增生及凋亡、影响细胞迁移及 细胞外基质的沉积、刺激其他生长因子及缩血管物质的产 生等作用。在脑血管疾病方面，其可以导致内皮细胞的损 伤，PNS 可以有效的控制 Ang Ⅱ 的表达，从而保护内皮细 胞［5］。此外，氧化性低密度脂蛋白（ ox － LDL） 可以致使人 脐静脉内皮细胞（ HUVEc） 死亡，动脉硬化闭塞症（ ASO） 是 一种具有溶血活性的蛋白质，有抗原性，可刺激机体产生相 应的抗体。细胞间黏附分子 － 1 （ intercellular cell adhesion molecule － 1 ，ICAM － 1） 在内皮细胞中介导黏附反应，是重 要的炎症因子。PNS 可以通过对 ASO 和 ICAM － 1 的调控， 降低 ox － LDL 所致 HUVEc 的凋亡［6］。 2 三七皂苷 Ｒ1
学 刊
第 35 卷 第 7 期 2017 年7 月
中华中医药学刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
白 Bax、Bak、Bad、Bim 和抗凋亡蛋白 Bcl － 2、Bcl － w 等。血 栓通粉针（ PNS） 能够促进 Bcl － 2 的表达，能够减轻脑缺血 再灌注所致的海马神经元细胞损伤［3］。PI3K / Akt 是一信 号转导通路，在 促 进 细 胞 存 活 和 抗 凋 亡 方 面 具 有 重 要 作 用，并且可以调节细胞的变形和运动。糖氧剥夺（ Oxygen － Glucose Deprivation，OGD） 可以损伤神经细胞 PC12，PNS 可 以通过激活此条通路而保护 PC12 细胞，保护大脑［4］。血 管紧张素Ⅱ（ AngⅡ） 是心血管疾病的一种重要致病因子， 具有调节血管张力、调节细胞增生及凋亡、影响细胞迁移及 细胞外基质的沉积、刺激其他生长因子及缩血管物质的产 生等作用。在脑血管疾病方面，其可以导致内皮细胞的损 伤，PNS 可以有效的控制 Ang Ⅱ 的表达，从而保护内皮细 胞［5］。此外，氧化性低密度脂蛋白（ ox － LDL） 可以致使人 脐静脉内皮细胞（ HUVEc） 死亡，动脉硬化闭塞症（ ASO） 是 一种具有溶血活性的蛋白质，有抗原性，可刺激机体产生相 应的抗体。细胞间黏附分子 － 1 （ intercellular cell adhesion molecule － 1 ，ICAM － 1） 在内皮细胞中介导黏附反应，是重 要的炎症因子。PNS 可以通过对 ASO 和 ICAM － 1 的调控， 降低 ox － LDL 所致 HUVEc 的凋亡［6］。 2 三七皂苷 Ｒ1
学 刊
第 35 卷 第 7 期 2017 年7 月
中华中医药学刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
三七总皂苷对佐剂性关节炎大鼠的抗炎及免疫调节作用
三七总皂苷对佐剂性关节炎大鼠的抗炎及免疫调节作用蔡辉;姚茹冰;郭郡浩;赵智明;商玮【期刊名称】《安徽中医学院学报》【年(卷),期】2009(28)4【摘要】目的:研究三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对佐剂性关节炎(rheumatoid arthritis,AA)大鼠的抗炎及免疫调节作用.方法:大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠AA模型,进行多发性关节炎评分,放射免疫法检测大鼠血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量,同时对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的AA大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages, PM)产生的TNF、IL-1β进行检测.结果:大鼠免疫后2周,PNS腹腔注射给药2周,可降低AA大鼠多发性关节炎指数(P<0.05),抑制血清TNF(P<0.01)、IL-1β(P<0.05)产生;PNS体外分别给药0.8,0.4,0.2 mg/ml,作用24 h,可不同程度抑制LPS诱导的AA大鼠PM产生TNF(P<0.05,P<0.01)和及IL-1β(P<0.05).结论:PNS可能通过抗炎及抑制血清、PM释放炎性细胞因子TNF、IL-1β对AA大鼠发挥治疗作用.【总页数】4页(P57-60)【作者】蔡辉;姚茹冰;郭郡浩;赵智明;商玮【作者单位】中国人民解放军南京军区南京总医院中西医结合科,江苏,南京,210002;中国人民解放军南京军区南京总医院中西医结合科,江苏,南京,210002;中国人民解放军南京军区南京总医院中西医结合科,江苏,南京,210002;中国人民解放军南京军区南京总医院中西医结合科,江苏,南京,210002;中国人民解放军南京军区南京总医院中西医结合科,江苏,南京,210002【正文语种】中文【中图分类】R593.22【相关文献】1.佐剂性关节炎大鼠炎性细胞因子与核因子-κB变化及三七总皂苷的干预影响 [J], 姚茹冰;赵智明;郭郡浩;商玮;蔡辉2.奇士乐对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用 [J], 姜辉;李俊;胡成穆;陈纪军3.野菊花总黄酮体外对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用 [J], 张骏艳;李俊;张磊;金涌;程文明;彭磊4.红花注射液对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用 [J], 商宇;王建杰;马淑霞;杨玉;王晓灵5.三七总皂苷对佐剂性关节炎大鼠的保护作用及机制研究 [J], 姜辉;高家荣;汪永忠;薛雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三七总皂苷抑制星形胶质细胞活化改善脂多糖导致的小鼠抑郁样行为
三七总皂苷抑制星形胶质细胞活化改善脂多糖导致的小鼠抑郁样行为杨惠;罗丹;高明;刘旭东;万炜;陈熙;汤银娟;何洁【摘要】目的:观察三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为以及海马星形胶质细胞(AST)活化的影响.方法:将小鼠随机分为生理盐水(NS)组、LPS组、PNS+LPS组.利用喷糖实验、糖水偏好实验及强迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为,免疫组织化学显色观察胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化,免疫印迹检测海马GFAP、乙醛脱氢酶1蛋白家族L1(ALDH1L1)的表达变化,荧光定量PCR检测海马GFAP和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达.结果:与NS组相比,LPS组舔糖潜伏期延长、糖水偏好百分比下降、强迫游泳不动时间增加,PNS预处理可逆转上述抑郁样行为;与NS组相比,LPS组海马GFAP阳性细胞数目增加,GFAP及ALDH1L1蛋白表达上调,GFAP及TNF-αmRNA表达上调,PNS预处理均可减少GFAP、ALDH1L1及TNF-α的表达;结论:三七总皂苷可能通过抑制星形胶质细胞活化,改善脂多糖导致的小鼠抑郁样行为.【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2019(042)001【总页数】5页(P26-30)【关键词】三七总皂苷;星形胶质细胞;脂多糖;抑郁【作者】杨惠;罗丹;高明;刘旭东;万炜;陈熙;汤银娟;何洁【作者单位】南华大学医学院肿瘤研究所,肿瘤细胞与分子病理学湖南省重点实验室,衡阳421001;南华大学医学院肿瘤研究所,肿瘤细胞与分子病理学湖南省重点实验室,衡阳421001;南华大学医学院解剖学教研室,衡阳421001;南华大学医学院解剖学教研室,衡阳421001;南华大学医学院解剖学教研室,衡阳421001;南华大学医学院解剖学教研室,衡阳421001;湘南学院基础医学院,郴州423000;南华大学医学院肿瘤研究所,肿瘤细胞与分子病理学湖南省重点实验室,衡阳421001【正文语种】中文抑郁症发病率呈逐年上升趋势，已成为国内外学者的研究热点[1-3] 。
三七粉直服饮片介绍
三七粉直服饮片介绍1、药材基源为五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F. H. Chen的干燥根和根茎。
2、加工炮制取三七，洗净，干燥，粉碎成细粉，过筛，即得三七粉。
性状为灰黄色的粉末，气微，味苦回甜。
3、功能主治散瘀止血，消肿定痛。
用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。
4、中医理论及本草考证中医血虚证是由失血过多，或脾胃虚弱，或血液生化之源不足，或因瘀血阻滞新血不生等原因所导致的血液不足或血液营养功能低下，脏腑组织器官失养的病理状态。
《本草纲目》：三七，近时始出，南人军中用为金疮要药，云有奇功。
又云凡杖扑伤损，瘀血淋漓者，随即嚼烂罨之即止，青肿者即消散。
产后服亦良。
大抵此药气味温甘微苦,乃阳明、厥阴血分之药,故能治一切血病,与麒麟竭、紫矿相同。
......止血，散血，定痛。
金刃箭伤，跌扑杖疮，血出不止者，嚼烂涂，或为末掺之，其血即止。
亦主吐血，衄血，下血，血痢，崩中，经水不止，产后恶血不下，血运，血痛，赤目，痈肿，虎咬，蛇伤诸病。
《本草新编》：三七根，止血之神药也。
无论上、中、下之血，凡有外越者，一味独用亦效，加入于补血补气药中则更神。
盖此药得补而无沸腾之患，补药得此而有安静之休也。
《本草求真》：三七，世人仅知功能上血住痛，殊不知痛因血瘀则疼作,血因敷散则血止。
三七气味苦温，能于血分化其血瘀。
《医学衷中参西录》：三七，诸家多言性温，然单服其末数钱，未有觉温者。
善化瘀血，又善止血妄行，为吐衄要药，病愈后不至瘀血留于经络，证变虚劳（凡用药强止其血者，恒至血瘀经络成血痹虚劳）。
兼治二便下血，女子血崩，痢疾下血鲜红久不愈（宜与鸦胆子并用），肠中腐烂，寝成溃疡，所下之痢色紫腥臭，杂以脂膜，此乃肠烂欲穿（三七能化腐生新，是以治之）。
为其善化瘀血，故又善治女子症瘕，月事不通，化瘀血而不伤新血，允为理血妙品。
外用善治金疮，以其末敷伤口，立能血止疼愈。
若跌打损伤，内连脏腑经络作疼痛者，外敷内服，奏效尤捷。
三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、mRNA及蛋白表达的影响
三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、mRNA及蛋白表达的影响研究三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、mRNA及蛋白表达的影响。
将Wistar雄性大鼠随机分为9组，给予受试药后，提取肝脏微粒体，肝脏总RNA 和总蛋白，分别采用底物探针法、荧光定量PCR技术和Western blot，检测三七总皂苷对肝脏药物代谢酶相关亚型酶活性、mRNA和蛋白质表达3个水平的调节作用。
实验的结果是三七总皂苷能显著诱导CYP1A2和CYP2E1酶活性和mRNA表达，同时对CYP2E1的蛋白表达水平也有显著诱导作用；三七总皂苷显著诱导CYP3A mRNA表达，但对CYP3A酶活性水平无明显的影响；三七总皂苷对CYP1A1和CYP2B mRNA表达和酶活性均无明显影响。
三七总皂苷对不同的P450亚型的调节作用具有选择性，主要的调节亚型是CYP1A2和CYP2E1，临床应用时，尤其是与CYP1A2和CYP2E1代谢有关药物合用时，应充分考虑到可能产生的药物相互作用以避免潜在的不良反应和毒副作用，同时对CYP2E1的诱导作用是否与人参皂苷清除自由基作用有关值得进一步研究。
标签：三七总皂苷；细胞色素P450；荧光定量PCR技术由五加科植物三七根中有效成分三七总皂苷（Panax notoginseng saponins，简称PNS）提取物制成的血栓通注射液、注射用粉针血塞通，已广泛应用于临床治疗瘀血阻络、脑血管疾病后遗症、视网膜中央静脉阻塞等疾病[1-2]，与其他药物联合使用也较为常见，如与纳洛酮等药物联合使用用于脑梗死急救[3]。
目前，有关中药注射剂安全性的问题报道日益增多，由药物诱导或抑制细胞色素P450导致的药物间的相互作用日益受到关注，但是有关中药复方及中药复方对CYP450的影响作用的系统研究尚未展开，有关PNS对细胞色素P450的影响的研究还不够全面，本实验将从酶活性水平、mRNA表达和蛋白质表达3个水平研究PNS对P450的多个亚型影响，为完善该药的代谢性相互作用和指导临床合理用药奠定基础。
三七茎叶总皂苷促血管新生抗缺血性脑卒中的作用机制
三七茎叶总皂苷促血管新生抗缺血性脑卒中的作用机制1. 内容概述本文旨在探讨三七茎叶总皂苷(Panax notoginsengsaponins,PNS)促血管新生抗缺血性脑卒中的作用机制。
我们将介绍缺血性脑卒中的发病机制及其对患者生活质量的影响。
我们将详细阐述PNS的药理作用，包括其对血管生成、抗氧化应激、抗炎反应等方面的影响。
在此基础上，我们将探讨PNS在缺血性脑卒中的治疗中的应用及其可能的作用机制。
我们将总结PNS在缺血性脑卒中治疗中的研究进展，为其未来的临床应用提供理论依据。
1.1 研究背景随着现代生活节奏的加快和生活方式的改变，脑血管疾病已成为严重威胁人类健康的重大疾病之一。
缺血性脑卒中是脑血管疾病中常见的一种类型，具有高发病率、高死亡率及高致残率等特点。
针对缺血性脑卒中的防治一直是医学研究领域的热点问题。
中药的活性成分因其独特的药理作用而备受关注，三七作为一种传统中药材，在心脑血管疾病的治疗中表现出良好的应用前景。
三七茎叶总皂苷是三七的主要活性成分之一，具有多种药理活性，如抗炎、抗氧化、抗凝血等作用。
这些特性使得三七茎叶总皂苷在抗缺血性脑卒中方面具有潜在的应用价值。
已有研究表明，三七茎叶总皂苷能够促进血管新生，这可能是其抗缺血性脑卒中作用的重要机制之一。
本研究旨在深入探讨三七茎叶总皂苷在促血管新生抗缺血性脑卒中方面的作用机制，为缺血性脑卒中的防治提供新的思路和方法。
1.2 研究目的通过体内和体外实验，我们将系统地评估PNS对血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达、血管形成、血流量的影响，以及其在减轻缺血再灌注损伤、降低炎症反应和氧化应激等方面的作用。
我们还将探讨PNS是否具有神经保护作用，以及其与当前治疗缺血性脑卒中的药物之间的可能协同作用。
通过这些研究，我们期望为缺血性脑卒中的治疗提供新的思路和潜在靶点。
1.3 研究意义三七茎叶总皂苷作为一种传统中草药，具有丰富的药理活性。
研究表明三七茎叶总皂苷具有良好的促血管新生作用，可有效改善缺血性脑卒中的预后。
药品标准三七总皂苷PNS ( Panax Notoginseng Saponins )
PNS (panax notoginseng saponins)WS3-B-3590-2001(Z) This products is extracted from rhizome of Araliaceae plants Panax notoginseng (Burk) F.H.Chen by certain technological[Nature] This product is light yellow amorphous powder, with bitter and gradually sweet taste, soluble in methanol, ethanol and water, insoluble in acetone, ethyl ether and benzene, easy to absorb moisture.[Identification]1．Get a little sample and put it into the test tube,and add 1ml acetic anhydride for dissolving, after that, drop 1 to 2 drops of sulfuric acid along the test tube wall, the solution taking on purplish red, and then turn into purple after shaking evenly.2．Take experiment according to the methods provided in the item of [Content Determination] as below. The chromatographic peak of the sample shall be consistent with that of the control substance of ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1 in retention time.[Test]loss on dryig, get the samples, then dry under temperature 80℃and is dried until no weight loses. Weight loss should be not more than 5.0%( AppendixIX G,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000) Redidue on ignition, not more than 0.5% (AppendixIX J,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000) Undue toxicity, get some sample, add Sodium Chloride Injection and get the solution 5.0mg/1ml solution as sample solution. Get 5 mice weight 17-20g, inject 0.5ml sample solution into tail vein in 4-5seconds.no mouse died within 48 hours; if some died, repeat the test by 10 mice weigh 18-19g, no mouse died within 48 hoursPyrogen, get some sample, dilute the sample with Sodium Chloride Injection to 5.0mg/1ml solution. Test according the law (Appendix X III A,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000).Inject 0.5 ml solution per kg of rabbits’ body weight, should be up to the standard.[Content Determination] Determine the content by high performance liquid chromatography (HPLC) (AppendixVI D,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000).Chromatographic conditions and its system suitability Octadecylsilane chemically bonded silica was used as filling material; the mobile phase of acetonitrile (represented as A) and water (represented as B) were used for gradient elution, the flow rate was1.0ml/min and the detective wavelength was 203nm. The theoretical plate number calculated for ginsenoside Rg1shall be no less than 6000; the resolution of ginsenoside Rg1 peak and notoginsenoside R1 peak shall be more than 2.0Take proper amount of ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1 which have been dried under decompression at temperature 60℃ for 2 hours, then add 90% methanol. Thus obtain the mixed solution per ml containing 1.5mg ginsenoside Rb1, 1.5mg ginsenoside Rg1 and 0.4mg notoginsenoside R1.Preparation of Sample SolutionTake 50mg the sample, transfer to a 10 ml volumetric flask. Add proper amount of 90% methanolto the level, shake up.Method of Determination10μl of standard solution and sample solution was absorbed and injected into the liquid chromatography respectively, then go through the determination.The sample on the dried basis contains no less than 30% of ginsenoside Rb1 (C54H92O23), 20% of ginsenoside Rg1 (C42H72O14), 5.0% of notoginsenoside R1 (C47H80O18), and the total amount of ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1shall be no less than 60% [Indications] Can promoting blood circulation and removing blood stasis, inhibit blood platelet aggregation and increase cardio-cerebral blood flow.[Storage] Sealed, store in drying place[Dosage] (1)xuesaitong injection (2) xuesaitong for injection。
三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响_刘静
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2016 September，Vol． 27 No． 5
三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响
刘 静，张长城，韩贵芳，刘珍财，袁 摘要：目的 丁，赵海霞 （三峡大学医学院，湖北 宜昌 443002 ） 将 SPF 级
探讨三七总皂苷 （PNS ） 对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响。方法
SD 大鼠随机分为 9 月龄组 （9M ） ，24 月龄组 （24M ） ，PNS 低、中、高剂量组，每组 10 只。大鼠从 18 个月开始， PNS 低 、 中 、 高剂量组分别灌胃给予 PNS 10， 30， 60 mg · kg- 1，灌胃至 24 个月，每周灌胃 6 d，周日停 1 d， 连续灌胃 6 个月。末次给药并禁食不禁水 12 h 后，处死大鼠，迅速取出睾丸组织。苏木精 - 伊红 （HE ） 染色法 观察睾丸组织形态学变化，Western Blot 检测睾丸组织中 P21WAF1/CIP1 （P21 ） 、核转录因子 （NF- κB ） 以及下游炎症因 子白介素 - 1β （IL- 1β ） 、肿瘤坏死因子 - α （TNF- α ） 、环氧化酶 2 （COX2 ） 蛋白的表达和凋亡相关蛋白 Bcl- 2 相 关 X 蛋白 （Bax ） 、 B 淋巴细胞瘤 - 2 基因 （Bcl- 2 ） 的表达，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 （TUNEL ） 检测睾丸生殖细胞凋亡。结果 HE 染色观察发现，与 9M 比较，24M 大鼠睾丸生精小管形态结构发 生明显变化，生精细胞层数减少，细胞稀疏，各级生精细胞脱落 。与 24M 比较，PNS 低、中、高剂量组均能 在一定程度上改善睾丸组织生精小管结构形态。与 9M 比较，24M 大鼠睾丸组织 P21、NF- κB 及其下游炎症因 子 IL- 1β、TNF- α 、 COX2 的表达显著上调 （P＜0.01 ） ， PNS 低 、 中 、 高剂量组可显著下调其表达 （P＜0.05， P＜0.01 ）。24M 大鼠睾丸组织抗凋亡蛋白 Bcl- 2 的表达显著降低 （P＜0.01 ） ，促凋亡蛋白 Bax 显著升高 （P ＜ 0.05 ） ， Bcl- 2/Bax 比值显著降低 （P＜0.01 ） ，PNS 可显著升高 Bcl- 2 的表达，降低 Bax 的表达，升高 Bcl- 2/Bax 比值 （ P＜0.05，P＜0.01 ）；与 9M 比较，24M 大鼠睾丸内凋亡阳性细胞数显著增多，PNS 低、中、高剂量组可 明显减少凋亡的阳性细胞数。结论 中图分类号：R285.5 PNS 能够抑制自然衰老大鼠睾丸炎症反应，显著减少睾丸生殖细胞凋亡。 文章编号：1003- 9783 （2016 ） 05- 0644- 06 关键词：三七总皂苷；衰老；睾丸；炎症反应；细胞凋亡 文献标志码：A doi：10.19378/j.issn.1003-9783.2016.05.010 Effect of Panax Notoginseng Saponins on Testicular Inflammatory Reaction and Apoptosis of Germ Cells in Naturally Aging Rats LIU Jing，ZHANG Changcheng，HAN Guifang，LIU Zhencai，YUAN Ding，ZHAO Haixia （Medical College of China Three Gorge University，Yichang 443002 Hubei，China ） Abstract： Objective To investigate the effect of Panax Notoginseng Saponins（PNS ） on testicular inflammatory reaction and germ cell apoptosis in naturally aging rat model. Methods SPF SD rats were randomly divided into five groups， namely 9- month- aged group， 24- month- aged group， and low- ， middle- and high- dose PNS groups， 10 rats in each group. Rats of PNS groups were given gastric gavage of PNS 10， 30， 60 mg · kg- 1 respectively from the 18th month to the 24th month， 6 days every week， lasting for 6 months. The rats were executed on fasting hour 12 after the last medication， and the testes were immediately removed. The testicular histology was observed by haematoxylin- eosin （ HE ） staining，the protein expression of the P21，nuclear factor kappa B （NF- κB ） ，downstream inflammatory factors of interleukin 1beta （IL- 1β ） ， tumor necrosis factor alpha （TNF- α ） ， cyclooxygenase 2 （COX2 ） ， and apoptosis- related proteins Bax and Bcl- 2 in testicular tissue were detected by Western blotting. Testicular germ cell apoptosis was detected using TUNEL （TdT- mediated dUTP nick- end labeling ） method. Results Compared with 9- month- aged group， 24- month- aged group had obvious changes in the testicular seminiferous tubule morphology，
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2016 September，Vol． 27 No． 5
三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响
刘 静，张长城，韩贵芳，刘珍财，袁 摘要：目的 丁，赵海霞 （三峡大学医学院，湖北 宜昌 443002 ） 将 SPF 级
探讨三七总皂苷 （PNS ） 对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响。方法
SD 大鼠随机分为 9 月龄组 （9M ） ，24 月龄组 （24M ） ，PNS 低、中、高剂量组，每组 10 只。大鼠从 18 个月开始， PNS 低 、 中 、 高剂量组分别灌胃给予 PNS 10， 30， 60 mg · kg- 1，灌胃至 24 个月，每周灌胃 6 d，周日停 1 d， 连续灌胃 6 个月。末次给药并禁食不禁水 12 h 后，处死大鼠，迅速取出睾丸组织。苏木精 - 伊红 （HE ） 染色法 观察睾丸组织形态学变化，Western Blot 检测睾丸组织中 P21WAF1/CIP1 （P21 ） 、核转录因子 （NF- κB ） 以及下游炎症因 子白介素 - 1β （IL- 1β ） 、肿瘤坏死因子 - α （TNF- α ） 、环氧化酶 2 （COX2 ） 蛋白的表达和凋亡相关蛋白 Bcl- 2 相 关 X 蛋白 （Bax ） 、 B 淋巴细胞瘤 - 2 基因 （Bcl- 2 ） 的表达，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 （TUNEL ） 检测睾丸生殖细胞凋亡。结果 HE 染色观察发现，与 9M 比较，24M 大鼠睾丸生精小管形态结构发 生明显变化，生精细胞层数减少，细胞稀疏，各级生精细胞脱落 。与 24M 比较，PNS 低、中、高剂量组均能 在一定程度上改善睾丸组织生精小管结构形态。与 9M 比较，24M 大鼠睾丸组织 P21、NF- κB 及其下游炎症因 子 IL- 1β、TNF- α 、 COX2 的表达显著上调 （P＜0.01 ） ， PNS 低 、 中 、 高剂量组可显著下调其表达 （P＜0.05， P＜0.01 ）。24M 大鼠睾丸组织抗凋亡蛋白 Bcl- 2 的表达显著降低 （P＜0.01 ） ，促凋亡蛋白 Bax 显著升高 （P ＜ 0.05 ） ， Bcl- 2/Bax 比值显著降低 （P＜0.01 ） ，PNS 可显著升高 Bcl- 2 的表达，降低 Bax 的表达，升高 Bcl- 2/Bax 比值 （ P＜0.05，P＜0.01 ）；与 9M 比较，24M 大鼠睾丸内凋亡阳性细胞数显著增多，PNS 低、中、高剂量组可 明显减少凋亡的阳性细胞数。结论 中图分类号：R285.5 PNS 能够抑制自然衰老大鼠睾丸炎症反应，显著减少睾丸生殖细胞凋亡。 文章编号：1003- 9783 （2016 ） 05- 0644- 06 关键词：三七总皂苷；衰老；睾丸；炎症反应；细胞凋亡 文献标志码：A doi：10.19378/j.issn.1003-9783.2016.05.010 Effect of Panax Notoginseng Saponins on Testicular Inflammatory Reaction and Apoptosis of Germ Cells in Naturally Aging Rats LIU Jing，ZHANG Changcheng，HAN Guifang，LIU Zhencai，YUAN Ding，ZHAO Haixia （Medical College of China Three Gorge University，Yichang 443002 Hubei，China ） Abstract： Objective To investigate the effect of Panax Notoginseng Saponins（PNS ） on testicular inflammatory reaction and germ cell apoptosis in naturally aging rat model. Methods SPF SD rats were randomly divided into five groups， namely 9- month- aged group， 24- month- aged group， and low- ， middle- and high- dose PNS groups， 10 rats in each group. Rats of PNS groups were given gastric gavage of PNS 10， 30， 60 mg · kg- 1 respectively from the 18th month to the 24th month， 6 days every week， lasting for 6 months. The rats were executed on fasting hour 12 after the last medication， and the testes were immediately removed. The testicular histology was observed by haematoxylin- eosin （ HE ） staining，the protein expression of the P21，nuclear factor kappa B （NF- κB ） ，downstream inflammatory factors of interleukin 1beta （IL- 1β ） ， tumor necrosis factor alpha （TNF- α ） ， cyclooxygenase 2 （COX2 ） ， and apoptosis- related proteins Bax and Bcl- 2 in testicular tissue were detected by Western blotting. Testicular germ cell apoptosis was detected using TUNEL （TdT- mediated dUTP nick- end labeling ） method. Results Compared with 9- month- aged group， 24- month- aged group had obvious changes in the testicular seminiferous tubule morphology，
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PNS (panax notoginseng saponins)
WS3-B-3590-2001(Z) This products is extracted from rhizome of Araliaceae plants Panax notoginseng (Burk) F.H.Chen by certain technological
[Nature] This product is light yellow amorphous powder, with bitter and gradually sweet taste, soluble in methanol, ethanol and water, insoluble in acetone, ethyl ether and benzene, easy to absorb moisture.
[Identification]
1．Get a little sample and put it into the test tube,and add 1ml acetic anhydride for dissolving, after that, drop 1 to 2 drops of sulfuric acid along the test tube wall, the solution taking on purplish red, and then turn into purple after shaking evenly.
2．Take experiment according to the methods provided in the item of [Content Determination] as below. The chromatographic peak of the sample shall be consistent with that of the control substance of ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1 in retention time.
[Test]
loss on dryig, get the samples, then dry under temperature 80℃and is dried until no weight loses. Weight loss should be not more than 5.0%( AppendixIX G,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000) Redidue on ignition, not more than 0.5% (AppendixIX J,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000) Undue toxicity, get some sample, add Sodium Chloride Injection and get the solution 5.0mg/1ml solution as sample solution. Get 5 mice weight 17-20g, inject 0.5ml sample solution into tail vein in 4-5seconds.no mouse died within 48 hours; if some died, repeat the test by 10 mice weigh 18-19g, no mouse died within 48 hours
Pyrogen, get some sample, dilute the sample with Sodium Chloride Injection to 5.0mg/1ml solution. Test according the law (Appendix X III A,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000).Inject 0.5 ml solution per kg of rabbits’ body weight, should be up to the standard.
[Content Determination] Determine the content by high performance liquid chromatography (HPLC) (AppendixVI D,China Pharmacopoeia, 1st edition, 2000).
Chromatographic conditions and its system suitability Octadecylsilane chemically bonded silica was used as filling material; the mobile phase of acetonitrile (represented as A) and water (represented as B) were used for gradient elution, the flow rate was1.0ml/min and the detective wavelength was 203nm. The theoretical plate number calculated for ginsenoside Rg1shall be no less than 6000; the resolution of ginsenoside Rg1 peak and notoginsenoside R1 peak shall be more than 2.0
Take proper amount of ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1 which have been dried under decompression at temperature 60℃ for 2 hours, then add 90% methanol. Thus obtain the mixed solution per ml containing 1.5mg ginsenoside Rb1, 1.5mg ginsenoside Rg1 and 0.4mg notoginsenoside R1.
Preparation of Sample Solution
Take 50mg the sample, transfer to a 10 ml volumetric flask. Add proper amount of 90% methanol
to the level, shake up.
Method of Determination
10μl of standard solution and sample solution was absorbed and injected into the liquid chromatography respectively, then go through the determination.
The sample on the dried basis contains no less than 30% of ginsenoside Rb1 (C54H92O23), 20% of ginsenoside Rg1 (C42H72O14), 5.0% of notoginsenoside R1 (C47H80O18), and the total amount of ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1shall be no less than 60% [Indications] Can promoting blood circulation and removing blood stasis, inhibit blood platelet aggregation and increase cardio-cerebral blood flow.
[Storage] Sealed, store in drying place
[Dosage] (1)xuesaitong injection (2) xuesaitong for injection。